临床常见皮肤癣菌的分子生物学鉴定

目的应用任意引物聚合酶链反应(AP-PCR)鉴定临床常见皮肤癣菌。方法用引物AP3(5-′TCAC-GATGCA-3′)、任意引物ATG(5-′ATGGATCGGC-3′)、任意引物TCA(5-′TCACCACGGT-3′)和任意引物TCT(5-′TCTGTGCT-GG-3′)对常见皮肤癣菌进行任意引物聚合酶链反应。46株须癣毛癣菌采用引物ATG和引物AP3进行AP-PCR,并对扩增产物进行电泳分析。结果扩增产物电泳分析发现不同菌种间产生的DNA带型存在明显差异,尤其用引物AP3和引物ATG扩增产生的DNA带型的种间差异最明显。46株须癣毛癣菌的表型,全部为粉型,且均产生具有明显的电泳带型,可分为2型。结论AP-PCR可作为常见皮肤癣菌的种间及种内鉴定的简单、快速、可靠的方法。     

任意引物聚合酶链反应鉴定皮肤癣菌研究

目的探讨任意引物聚合酶链反应(AP-PCR)和引物OPD18、OPAA11对常见皮肤癣菌进行分子水平鉴定的意义.方法用任意引物OPD18(5'-GAGAGCCAA-3')和OPAA11(5'-ACCCGACCTG-3')对常见皮肤癣菌进行AP-PCR,并对扩增产物的DNA带型进行分析.结果皮肤癣菌所试的7个菌种之间均产生具有明显差异的DNA带型.结论用AP-PCR和引物OPD18、OPAA11可对常见皮肤癣菌进行分子水平鉴定.     

应用AP-PCR鉴定浅部真菌病病原菌菌种

目的研究应用任意引物聚合酶链反应(AP-PCR)对浅部真菌病病原菌进行分子生物学鉴定的意义。方法应用OPAA11(5′-ACCCGACCTG-3′),OPAA17(5′-GAGCCCGACT-3′),OPD18(5′-GAGAGC-CAAC-3′)和OPU15(5′-ACGGGCCAGT-3′)四种随机引物,随机扩增从浅部真菌病患者的皮屑或甲屑标本中提取的真菌DNA。结果从各标本提取所得的红色毛癣菌、许兰毛癣菌、紫色毛癣菌、犬小孢子菌、絮状表皮癣菌及石膏样小孢子菌DNA经OPAA11,OPAA17,OPD18或OPU15扩增后,产生的电泳带型在不同菌种间存在明显差异。结论 AP-PCR对于浅部真菌病病原菌的鉴定具有诊断价值。     

麻风菌基因扩增试验条件的优化及其影响因素

通过模板ＤＮＡ制备方法和循环参数的优化，使ＰＣＲ的敏感性从２０条菌／μｌ提高到０．２条菌／μｌ。对１６份鼠足垫标本，２６份麻风病人活检组织和刮取液进行检测并分析了对ＰＣＲ的影响，讨论了该方法在麻风菌检测和鉴定中的应用前景。     

用任意引物聚合酶链反应进行皮肤癣菌的分子生物学研究

目的 探讨任意引物聚合酶链反应（AP-PCR）方法对皮肤癣菌的分子生物学鉴定和分型的意义。方法 用随机引物OPAA115′-ACCCCACCTG-3′,OPD185′-GAGAGCCAAC-3′对皮肤癣菌的3个属9个种和孢子丝菌及白念珠菌共64个菌株进行AP-PCR,并对扩增产物进行电泳分析。结果 皮肤癣菌所试验的9个菌种之间均产生具有明显差异的电泳带型,来自不同地区的红色毛癣菌丝多次实验均出现主带相同的电泳带型,同时存在株间差异。结论 以OPAA11和OPD18为引物,用AP-PCR可对皮肤癣菌从基因分子水平上进行鉴别。并为分型提供依据。     

用任意引物聚合酶链反应进行皮肤癣菌的子生物学研究

目的探讨任意引物聚合酶链反应(AP-PCR)方法对皮肤癣菌的分子生物学鉴定和分型的意义。方法用随机引物OPAA115'-ACCCGACCTG-3',OPD185'-GAGAGCCAAC-3'对皮肤癣菌的3个属9个种和孢子丝菌及白念珠菌共64个菌株进行AP-PCR,并对扩增产物进行电泳分析。结果皮肤癣菌所试验的9个菌种之间均产生具有明显差异的电泳带型。来自不同地区的红色毛癣菌经多次实验均出现主带相同的电泳带型,同时存在株间差异。结论以OPAA11和OPD18为引物,用AP-PCR可对皮肤癣菌从基因分子水平上进行鉴别,并为分型提供依据。     

深部真菌病快速诊断的新实验方法

深部真菌感染增加较快，早期诊断对及时用药，改善预后有关键性意义。本文综述了四种方法，定量测定血浆（清）（１－３）－β－Ｄ－葡聚糖含量、聚合酶链反应扩增真菌特异性ｒＤＮＡ序列、发光剂Ｃａｌ－ｃｏｆｌｕｏｒｗｈｉｔｅ、Ｂｌａｎｋｏｐｈｏｒ、Ｕｖｉｔｅｘ染色和危险指数评分法，这些方法简便，迅速，敏感性和特异性高，能帮助临床医生迅速判断患者有无深部真菌感染，有良好应用前景。     

PCR检测部分病原真菌的实验研究

为探讨和评价ＰＣＲ技术在检测和鉴定病原真菌方面的作用,重点是引物的选择。首先比较了来自ｒＤＮＡ基因序列的通用引物的通用性,并用３对种特异性引物进行２次套式扩增。结果表明３对通用引物均能扩增出预期的靶ＤＮＡ带,平均大小分别为６２０ｂｐ,４８５ｂｐ和５８０ｂｐ;３对种特异性引物分别扩增出白念珠菌、新生隐球菌和烟曲霉ＤＮＡ,并提高了敏感性。说明用通用引物和种特异引物进行ＰＣＲ扩增可以用于病原真菌的检测和     

应用PCR技术快速鉴定申克孢子丝菌的实验研究

采用Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA,用申克孢子丝菌种特异性引物分别对21株申克孢子丝菌的基因组DNA进行PCR扩增.成功提取21株申克孢子丝菌基因组DNA,并用申克孢子丝菌种特异性引物分别从21株申克孢子丝菌基因组DNA中获得长度为320 bp的扩增产物.以申克孢子丝菌特异引物为基础的聚合酶链反应法鉴定申克孢子丝菌简便、快捷、特异,可用于临床诊断.     

麻风菌基因扩增试验条件的优化及其影响因素

通过模板DNA制备方法和循环参数的优化,使PCR的敏感性从20条菌/μ1提高到0.2条菌/μ1(100倍)。对16份鼠足垫标本(其中5份镜检阳性,11份阴性),26份麻风病人活检组织(19份镜检阳性,7份阴性)和刮取液(镜检19份阳性,7份阴性)进行检测并分析了对PCR的影响。讨论了该方法在麻风菌检测和鉴定中的应用前景。     

任意引物聚合酶链反应对致病性地霉株间分型的鉴定

目的采用任意引物聚合酶链反应(AP-PCR)对部分致病性地霉进行分子生物学方面的鉴定。方法用E.Z.N.A.YeastDNA Kit提取地霉菌基因组DNA,采用任意引物S034(5′-TCTGTGCTGG-3′),S040(5′-GTTGCGATCC-3′),S167(5′-CAGCGACAAG-3′),S368(5′-GAACACTGGG-3′)对临床上致病性白地霉、林生地霉皮损株和血液株的基因组DNA进行扩增,对各病原菌的DNA指纹的特征进行分析。结果扩增产物电泳分析发现不同种真菌的DNA经扩增后显示不同的DNA带型,尤其是使用引物S040,S167和S368扩增产生的DNA带型种间差异较明显;分离自不同感染部位的同种不同株真菌的DNA经扩增后显示的主要DNA带型也有明显差异,如使用引物S040和S368扩增产生的DNA带型种内差异较明显。结论以任意引物S034,S040,S167,S368为基础的AP-PCR技术可作为临床上致病性地霉的种间及种内鉴定的简单、快速、可靠的方法。     

Identification of Dermatophytes Using Multiplex Polymerase Chain Reaction

Background

Multiplex polymerase chain reaction (PCR) allows more than two target DNA molecules to be amplified with more than two primers. This method is also useful for detecting various other organisms simultaneously within a single test tube, and the scope of its use has been expanding widely in the field of clinical microbiology in recent years.

Objective

To assess the value of multiplex PCR in identification of dermatophytes.

Methods

Using three specially-designed primers which contained the ITS1-2, 18S rRNA, and 28S rRNA regions, three cycles of PCR were performed on 11 standard strains and scales were collected from 73 patients with fungal infection.

Results

The 11 standard strains were successfully identified with analysis of band patterns of ITS1-2, 18S rRNA, and 28S rRNA, obtained from PCR. Based on this information, the causative organisms in 73 patients with fungal infection were revealed to be T. rubrum in 69 cases, T. menta in 1 case, T. tonsurans in 2 cases, and M. gypseum in one case.

Conclusion

With three cycles of PCR using three sets of primers, 11 standard strains and the clinical strains from 73 patients with fungal infection were successfully identified.     

PCR检测石蜡包埋尖锐湿疣组织中人乳头瘤病毒

应用ＰＣＲ从１００％（４０／４０）石蜡包埋尖锐湿疣组织中检测出ＨＰＶＤＮＡ。扩增ＨＰＶＤＮＡ显著地提高了检测速度及敏感性，以致从数张５～１０μｍ厚的石蜡切片中３～４ｈ即能得到结果；且ＰＣＲ扩增产物具有高度的特异性。因此，ＰＣＲ不失为检测ＨＰＶ简便、快速、敏感、特异的方法。     

聚合酶链反应检测角化型手癣的病原菌DNA

目的为了研究ＰＣＲ技术应用检测浅部真菌病鳞屑中病原真菌的可能性。方法我们应用二次ＰＣＲ技术对２３例角化型手癣进行了检测。结果真菌直接镜检及培养阳性率之和为６９．６％,与二次ＰＣＲ阳性率相同。其中４例真菌直接镜检及培养均阴性者二次ＰＣＲ阳性,４例直接镜检阳性者二次ＰＣＲ阴性。结论二次ＰＣＲ可作为角化型手癣的辅助诊断指标之一。     

聚合酶链反应检测解脲支原体

我们根据已知的解脲支原体尿素酶基因序列，设计了一对聚合酶链反应引物，该组引物对解脲支原体１４个血清型均能扩增出２８６ｂｐ片段，但对实验所用的其它支原体或细菌不能扩增出任何片段，该２８３ｂｐ片段能被限制性内切酶ＨｉｎｃⅡ降解为１５１，１３２ｂｐ两条片段，使用３５个ＰＣＲ循环，可检测出１０＾－１４ｇ的模板ＮＤＡ，约相当于２０个解脲支原体。通过梯度稀释试验证明４０个ＰＣＲ循环时，ＰＣＲ的敏感性与培养法的