肝纤维化动物模型的研究概况

为探讨理想的肝纤维化动物模型，本文主要综述了采用四氯化碳、二甲基亚硝胺、免疫性肝纤维化、乙醇及复合因素等造模方法，同时讨论了每一种模型的肝脏病理性变化。     

二甲基亚硝胺致肝纤维化动物模型研究进展

肝纤维化是许多肝病发展至肝硬化、肝脏疾病终末期的最后共同通路.近几年,每年全世界死于肝硬化的人数已增加到50万.西欧因肝硬化致死居死亡原因第5位,美国则居第4位.化学性肝损伤所引起的肝纤维化在其中占较大比例.长期接触小剂量的二硝基亚硝胺（DMN）可引起癌症,而高剂量则可引起肝脏坏死及纤维化.在肝纤维化的研究中,肝纤维化动物模型的制备非常重要.本文对DMN致肝纤维化动物模型的制备方法及影响因素作一综述.     

猪血清致大鼠免疫性肝纤维化的动态观察

[目的]通过对猪血清致大鼠免疫性肝纤维化模型的动态观察，探讨免疫性肝纤维化的形成机制。[方法]采用腹腔注射猪血清0．5ml，每周2次；大鼠按体重随机分为正常对照组和模型组，在1、2、4、8和12周分别处死大鼠并取材，观测肝组织病理学、肝功能、羟脯氨酸（Hyp）水平。[结果]苏木精-伊红染色，随着刺激因素持续时间的延长，汇管区炎性细胞浸润增多和肝细胞损伤，肝星状细胞（HSC）数量增多并部分活化；天狼猩红染色，4周模型组纤维间隔明显，假小叶初步形成，8和12周模型组胶原增生明显，肝小叶形成；血清总蛋白（TP）和球蛋白（Glb）水平，1、2、4、8和12周模型组均较正常组显著升高（P〈0．01）；血清清蛋白（Alb）水平，与正常组相比，1、2、4、8周无差异，12周模型组显著降低（P〈0．01）；血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性，与正常组相比，2、4周模型组差异有统计学意义（P〈0．05），1、8和12周模型组无差异；Hyp水平，与正常组相比，1、2周模型组差异无统计学意义，4、8和12周模型组均有显著升高（P〈0．01）。[结论]①腹腔注射猪血清4周时，肝纤维化初步形成，8周模型复制已经成功；②猪血清作为异种抗原侵入，刺激机体产生免疫反应，免疫球蛋白增加，是主动性的肝纤维化；③免疫反应激活HSC的活化，分泌合成胶原增生明显，从而形成肝纤维化。     

肝纤维化动物模型制备的研究进展

肝纤维化是肝损伤后的修复反应,涉及复杂的细胞及分子机制,是肝硬化的必经阶段。选择与人类相似的肝纤维化动物模型不仅是深入研究肝纤维化发病机制的重要基础,也是筛选防治肝纤维化药物的有效手段。随着人们对肝纤维化的认识不断深入,有效的防治肝纤维化已成为可能。该文就肝纤维化动物模型的建立方法作一综述,并对各种模型特点进行比较。     

肝纤维化动物模型的造模方法

肝纤维化动物模型的造模方法马学惠肝纤维化指各种病因作用下肝内纤维增生，可伴有纤维隔形成。当肝小叶结构破坏，肝细胞结节状再生，增生的胶原包绕形成假小叶则称肝硬化。肝纤维化为肝硬化早期阶段，在此一并讲述。为深入研究肝纤维化的病因与发病，筛选防治肝纤维化的...     

实验性肝纤维化动物模型研究述评

肝纤维化是指肝细胞发生坏死及炎性刺激时,肝脏内纤维结缔组织异常增生的病理过程。肝纤维化是各种慢性肝病病理学的共同基础,因此,肝纤维化动物模型的复制是研究肝纤维化的前提之一。目前肝纤维化动物模型概括起来有以下6种,笔者就动物模型研究中存在的问题进行评述,并提出创建肝纤维化证候动物模型的设想。1中毒性肝损伤模型1.1四氯化碳(CCl4)造模CCl4是经典的诱发肝纤维化的一种选择性肝毒性药物,可引起脂质过氧化增强,从而损伤肝细胞。一般将其溶于甘油等溶剂中,经口服、腹腔或皮下注射,其中皮下注射最常用。造模方法分为单纯性和复合…     

二甲基亚硝胺致大鼠肝纤维化的造模研究

采用二甲基亚硝胺对大鼠进行急性小剂量间歇性腹腔注射,制作实验性肝纤维化模型。结果发现,在染毒期间大鼠肝内小叶中央出血性变性坏死的炎性浸润持续存在,肝细胞外基质进行性增加,染毒4周末在肝内形成中心—中心性和/或中心—门脉性纤维间隔。停止染毒后4周末肝内出血性病变基本消失,炎性浸润明显减轻,但纤维化仍然明显。血清和肝脏生化检测等结果与肝内病理改变相一致.本模型造模周期短,大鼠死亡率低,肝纤维化形成相对稳定,值得在中医药抗肝纤维化研究中使用。     

肝纤维化分期和血清生化学关系的研究

目的：探讨肝纤维化程度与血清纤维化标志物的关系。方法：67例肝炎患者均作肝脏活组织检查,标本行苏木精伊红染色（HE）和免疫组化染色,用光镜确定肝组织纤维化分期。采用放 射免疫法测定血清透明质酸（HA）,Ⅲ型前胶原（PCⅢ）,层粘连蛋白（LN）、Ⅳ型胶原（ⅣC）含量。结果：随着肝组织纤维化程度增加（S1→S4）,血清HA、PCⅢ、LN、ⅣC水平呈同步升高,在纤维化分期为S4时,含量最高。血清HA、PCⅢ、LN、ⅣC含量与慢性肝炎疾病进展呈一致性,随疾病加重而升高,在肝硬化阶段处于最高水平。结论：肝组织纤维化分期与血清HA、PCⅢ、LN、ⅣC有较好的相关性,血清纤维化指标可作为反映肝纤维化程度的指标之一。     

免疫性大鼠肝纤维化模型血清促进肝星形细胞TGFβ1的表达

我们制备正常大鼠血清和免疫性肝纤维化大鼠３、５周模型的血清,培养肝星形细胞（ＨＳＣ）,观察其ＴＧＦβ１的表达。 １．材料与方法：（ｌ）Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠２４只,体重１４０～１６０ｇ。动物分为正常组和模型组;模型动物分成３周、５周造模（造模组大鼠腹腔注猪血清,０．５ ｍｌ／只、每周两次）。制备正常和３周、５周纤维化模型血清,经５６℃灭活,备ＨＳＣ的培养用。用５００ｇ Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠。剥离门静脉插管。灌注Ｐｒｏｎａｓｅ－Ｅ和ⅣＣｏｌｌａｇｅｎａｓｅ。将液化的肝脏放入Ｐｒｏｎａｓｅ－Ｅ、Ⅳ Ｃｏｌ…     

血清肝纤维化标志物研究进展

肝纤维化持续发展可演变为不可逆的肝硬化。然而,肝纤维化是可以通过药物、基因等干预措施而逆转的,因此早期准确诊断肝纤维化对于临床判断疾病预后和确定治疗策略具有重要的价值。本文重点介绍了各种直接和间接生物标记的血清学指标在肝纤维化诊断方面的应用和进展情况。探讨各种血清学指标的诊断价值,以期获得诊断早期肝纤维化的最佳指标,为制定治疗方案和判断疗效提供参考。     

复方牛胎肝提取物对二甲基亚硝胺致大鼠肝纤维化的干预作用

目的:观察复方牛胎肝提取物(安珐特)对二甲基亚硝胺(DMN)诱导大鼠肝纤维化的干预作用。方法:雄性Wistar大鼠29只,随机分为正常组(9只)、模型组(10只)、安珐特组(10只)。后两组大鼠行腹腔注射4周DMN复制肝纤维化模型。造模结束后,安珐特组大鼠按照成人用药量的8倍剂量灌胃,共4周,正常组和模型组大鼠灌胃等剂量的0.5%羧甲基纤维素钠(CMC)。8周末处死大鼠,留取标本。全自动生化仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBil)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、血清白蛋白(Alb);检测各组大鼠肝组织羟脯氨酸Hyp的含量;采用HE染色和天狼猩红染色法观察肝组织形态学。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清TBi L、ALT、AST、γ-GT水平明显升高(P0.05),Alb水平明显下降(P0.05);大鼠肝组织HE染色可见肝脏内有大量炎性细胞浸润,肝窦狭窄,汇管区扩大,肝细胞排列紊乱,出现肿胀、变性坏死,肝组织内有明显出血现象;天狼猩红染色可见大鼠肝脏胶原增生明显,大量纤维间隔,向肝小叶伸展,分割包绕肝组织,形成假小叶;肝组织Hyp含量明显升高(P0.05)。与模型组比较,安法特组大鼠血清TBi L、ALT、AST均显著降低降低(P0.05),γ-GT水平有所降低,Alb水平有所升高,但差异无统计学意义;肝组织HE染色可见肝细胞变性坏死、出血、炎症细胞浸润等病理变化有不同程度的改善;天狼猩红染色可见纤维化程度有明显改善;肝组织Hyp含量明显降低(P0.05)。结论:安珐特对DMN诱导的大鼠肝纤维化形成有显著的抑制作用。     

复方牛胎肝提取物片治疗肝纤维化的多中心研究

目的观察研究复方牛胎肝提取物片治疗肝纤维化在扩大人群中的临床疗效。方法采用多中心、自身对照的研究设计。筛选肝纤维化患者共115例,所有病例给予口服复方牛胎肝提取物片治疗24周,治疗前均行肝穿刺做肝活体组织检查,其中有38例患者住治疗后再次做肝活体组织检查。患者均在治疗前、治疗后12、24周和36周,应用放射免疫法检测患者血清肝纤维化标志物HA、LN、Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）,观察用药前后各项指标及肝组织病理学变化。结果口服复方牛胎肝提取物片治疗前（0周）,治疗后24周和36周,患者血清肝纤维化标志物HA值分别为（279.2±81.4）ng/ml、（136.8±56.7）ng/ml、（86.9±40.7）ng/ml,LN值分别为（170.8±73.0）ng/ml、（112.5±39.5）ng/ml、（60.8±31.8）ng/ml;Ⅳ-C值分别为（153.7±60.1）ng/ml、（112.4±43.1）ng/ml、（96.3±44.1）ng/ml,治疗后血清肝纤维化标志物较治疗前显著降低（P〈0.05）。肝活体组织病理检查显示,治疗后肝组织纤维化分期比治疗前有明显降低（P〈0.01）。结论复方牛胎肝提取物片具有改善肝纤维化的作用,对于治疗慢性肝病肝纤维化具有较好的疗效。     

α1b-干扰素对白蛋白诱导大鼠免疫性肝纤维化的抑制作用

目的观察干扰素对白蛋白诱导的大鼠肝纤维化形成的影响。方法采用人血白蛋白诱导大鼠肝纤维化模型,并随机给予大剂量、小剂量干扰素、秋水仙碱处理。观察血清ALT和AST活性、总蛋白(TP),白蛋白(Alb)含量和球蛋白和白蛋白比值。放射免疫分析法测定层连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、IV型胶原(Ⅳ-C)的含量,化学法测定肝脏羟脯氨酸(HyP)的含量。光镜观察肝纤维化程度。结果干扰素能明显降低人血白蛋白诱导的肝纤维化大鼠血清ALT、AST活性(P<0.05),提高Alb、TP含量和A/G比值(P<0.05),降低血清LN、HA和Ⅳ-C含量(P<0.05)。病理学观察发现,干扰素能使大鼠胶原纤维沉积明显减轻,假小叶结构明显减少,并明显降低纤维化计分(P<0.05)。结论干扰素可抑制人血白蛋白诱导的大鼠肝纤维化形成和发展。     

血清肝纤维化指标诊断价值的初探

为评价血清肝纤维化指标的诊断价值，肝病患者103例采血透明质酸（HA）、层粘素（LN）、Ⅳ型胶原C末端（Ⅳ－C）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）和脯氨酸肽酶（PLD），同时肝穿行组织学检查；采用似然比（LR）和受试者工作特征曲线下面积（AUC^ROD）分析法，以病理诊断为金指标对上述血清指标的诊断价值进行分析。结果表明 在诊断肝纤维化时，PCⅢ、HA和PLD的AUC^ROD分别为0．939、0．829和0．815，该三项指标对肝纤维化具有较高的诊断价值，其临界值分别为PCⅢ≥170ng/ml（LR22．049），HA≥80ng/ml（LR3．458），PLD≥1800IU／L（LR5．048）；除HA外其他指标鉴别肝纤维化与肝硬化的价值有限，HA≥250ng/ml（AUC^ROC0．1917，LR14．319），提示肝硬化的形成。     

复方牛胎肝提取物片抗肝纤维化的实验研究

目前市场已获国家食物与药品监督管理局批准的抗肝纤维化药物，如复方鳖甲软肝片(简称软肝片)和复方牛胎肝提取物片(商品名安珐特)等，两药的抗肝纤维化疗效缺乏比较研究，现用四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化模型，对两药进行研究。     

肝纤维化患者血清差异蛋白质的筛选

目的: 对比分析肝纤维化患者和健康人血清中差异表达的蛋白质, 筛选与肝纤维化发生密切相关的血清蛋白质.方法: 肝纤维化患者和健康人空腹血清标本各6例分别等量混合成2个样本, 去除血清中的白蛋白和IgG. 利用双向凝胶电泳(2-DE)分离肝纤维化血清和健康人血清总蛋白质后, 硝酸银染色, 经图像分析筛选差异表达的蛋白点. 应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDITOF-MS)鉴定差异表达的蛋白点, 并用ELISA法对其中部分差异蛋白的表达水平进行验证.结果: 筛选出2组间的差异蛋白点共517个, 对其中表达量差异3倍以上的24个蛋白点进行MALDI-TOF-MS分析, 鉴定出包括触珠蛋白、载脂蛋白A-Ⅳ、转铁蛋白、T细胞受体b链、血清白蛋白及血清白蛋白前体等8个蛋白质, 其中3个蛋白质在肝纤维化血清中表达上调, 5个蛋白质在肝纤维化血清中表达下调. 与健康人血清比较, ELISA法检测肝纤维化血清中触珠蛋白、载脂蛋白A-Ⅳ表达均下调, 结果与双向凝胶电泳一致.结论: 肝纤维化血清与健康人血清的蛋白质表达谱表现出一定差异, 这些差异表达的血清蛋白质有望成为肝纤维化诊断与判定预后的血清标志物.     

肝纤维化血清标志的评价

判断慢性肝病的纤维化程度及其活动度，最可靠的仍属肝活检标本的组织学图象。目前常用的组织学活动指数(Histological activity index，IHA)，Knodell等及Seheuer的慢性肝炎记分系统均对肝纤维化半定量研究颇有帮助。但是肝活检有一定危险性，不易为患者接受．亦难以重复比较，而且不同病理类型的肝硬化存在取材误差．故虽属“金标准”，在实际应用中确有相当大的局限性。肝     

血清肝纤维化指标诊断价值的评价

一、资料与方法肝病患者103例,男89例、女13例,年龄21岁～52岁,均采用16号肝脏穿刺针行肝穿活检,肝组织固定于10%甲醛溶液,石蜡包埋,切片行H.E染色和Masson染色,病理医师集中读片,按1995年北京会议制定的“病毒性肝炎防治方案”标准,进行慢性肝炎分级和肝纤维化分期（0至4期）,再将0、1期归为无肝纤维化组;2、3期归为肝纤维化组;4期和肝硬化者为肝硬化组。上述患者近期内采血查肝功能和血清肝纤维化指标,血清透明质酸（HA）、层粘蛋白（LN）、Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）、Ⅲ型胶原（PCⅢ）测定采用放免法,血清脯氨酸肽酶（PLD）测…     

复方牛胎肝提取物联合丹参注射液对慢性乙型肝炎血清肝纤维化指标的影响

我们采用复方牛胎肝提取物片（安珐特,黑龙江江世药业有限公司生产）联合复方丹参注射液治疗慢性乙型肝炎（慢乙肝）102例,对治疗前后血清肝纤维化指标的变化及与对照组进行了观察。