S期激酶相关蛋白2与胃癌关系的研究

胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,其死亡率一直居恶性肿瘤的第一位。细胞周期失控与肿瘤发生密切相关。细胞周期的调控是个复杂的过程,主要有两个调控点。一个是G1/S转折点,控制细胞进入S期(G1期检测点);另一个处于G2/M转折点,控制细胞进入M期(G2期检测点)。细胞周期是在细胞周期蛋白(Cyclin)、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(CKI)共同调节下进行的。泛素蛋白酶体(SCF)途径具有降解细胞周期调控因子作用,而S期激酶相关蛋白2(Skp2)是泛素连接酶复合物的底物识别序列,对细胞周期关卡起调控作用。近几年…     

SKP2、p27kip1与人类消化系统肿瘤的研究现状

细胞周期的调控是一个及其复杂的过程,涉及到多因子在多层次上的作用.在细胞周期的调节过程中,细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)及与细胞周期蛋白(cyclin)复合物(cyclin-CDK)在细胞周期进程中能促使细胞突破R点,由G1期进入S期,起正性调控作用.细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(cyclin-dependent kinase inhibitors,CDKI)通过与cyclin-CDK复合物结合抑止了CDK活性,使细胞周期停留在G1期,起着负性调节作用.通过近几年研究发现,p27kip1是细胞周期负性调控因子的典型代表,作为一种候选的抑癌基因已受到广泛重视.细胞S期激酶相关蛋白2(S-phasekinase associated protein 2,SKP2)因能降解p27kip1,使之成为人类肿瘤发生、发展以及治疗决策研究的热点.下面就SKP2、p27kip1与人类消化系统肿瘤的研究做综述如下.     

Skp2在口腔颌面部恶性肿瘤中的作用机制

细胞S期激酶相关蛋白2(Skp2)是泛素连接酶复合物(SCF)的底物识别序列,在细胞周期G1期向S期转化过程中起重要作用,Skp2能通过泛素-蛋白酶体途径调控细胞周期因子的泛素化降解而参与细胞周期的调控。研究发现,Skp2与许多恶性肿瘤的发生发展及预后有一定关系,其中也包括口腔颌面部恶性肿瘤。     

SCF-Skp2与肿瘤关系的研究

肿瘤的发生与细胞周期的失控密切相关，泛素蛋白酶体(SCF)途径降解细胞周期调控因子、而S期激酶相关蛋白2(Skp2)是泛素连接酶复合物的底物识别序列，对细胞周期G1期关卡起调控作用，在多数恶性肿瘤中表达增高。研究发现SCF—Skp2与肿瘤的进程、治疗、预后均有密切关系。     

细胞周期素A与肿瘤的发生及预后

细胞周期素A基因定位在染色体4q27上,为S期的特征性细胞周期蛋白,并且是一种具有癌基因性质的细胞周期蛋白,是G1期向S期转移的限速因素。细胞周期素A含有一个周期素盒,还含有一个降解盒。参与调节细胞DNA合成和有丝分裂的作用,在人类多种肿瘤中都过度表达,其过度表达与肝脏、颅脑、血液系统、子宫、软组织等肿瘤预后呈负相关。     

细胞周期调控与表皮细胞增殖

细胞周期是细胞生命活动的基本过程。细胞周期调控机制中，以细胞周期素、细胞周期素依赖性激酶以及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白为核心的细胞周期调控因子通过复杂有序的调控，保证细胞周期的正常运行。细胞周期素与细胞周期素依赖性激酶的结合是启动细胞周期，并使其顺利运行的关键；而细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白在细胞周期中发挥主要的负调控作用。这一机制在表皮细胞增殖调控中起重要作用。     

血管平滑肌细胞不同细胞周期中Mfn2的表达变化

目的 探讨血管平滑肌细胞不同细胞周期中线粒体融合蛋白 2(mitofusin 2,Mfn2)表达水平的变化.方法 通过血清饥饿法、胸腺嘧啶核苷(thymidine)和诺考达唑(nocodazole)干预,使血管平滑肌同步化在不同的细胞周期(G0/G1期、G1/S期、S期、G2/M期);流式细胞仪鉴定细胞周期;Western blot检测Mfn2在不同细胞周期中的表达水平.结果 (1)流式细胞仪鉴定各组DNA含量百分比显示G0/G1期、G1/S期、S期、G2/M期均已同步化,符合本次实验要求.(2)Western blot示:同步化干预后,Mfn2在G0/G1期(静止期)的表达量显著高于G1/S期及S期(增殖期);自然状态下,Mfn2在G0/G1期表达量亦明显高于S期.结论 Mfn2表达量随细胞周期的变化而变化,Mfn2在细胞周期的静止期的表达量明显高于增殖期.     

过量胸苷对细胞周期素表达的影响

目的 :探讨过量胸苷干扰细胞周期素细胞周期时相表达的特点 ,为进一步研究细胞周期转化以及细胞周期素与DNA合成的关系奠定基础 .方法 :应用二次过量胸苷阻断法进行新生猪肾小管上皮细胞体外同步化培养 ,采用流式细胞术进行鉴定 ;然后分别进行G1/S,S及G2 期细胞CyclinA ,B ,D1mAb免疫细胞化学染色并进行图像分析 .结果 :二次过量胸苷阻断法可获取G1/S界面细胞为 (99 5± 0 8) % ,S期细胞为(90 5± 0 7) % ,G2 期细胞为 (93 5± 2 2 ) % ,G2 /G1=2 2 0 .G1/S ,S,G2 细胞CyclinA表达特点为G2 期大于G1/S和S期 (目标灰度值 :13 6 3± 2 7,14 5 0± 1 4 ,14 7 5± 1 8,P <0 0 1) ,CyclinB表达特点为G1/S期小于S和G2 期 (目标灰度值 :15 5 6± 1 6,14 8 8± 2 2 ,13 6 6± 2 6,P <0 0 1) ,CyclinD1的表达特点为G2期大于G1/S期 (目标灰度值 :13 2 .6± 1.9,14 6.7± 1.3 ,P <0 .0 1) ,S期小于G1/S期 (目标灰度值 :15 8 8± 1 1,14 6 7± 1 3 ,P<0 0 5 ) .结论 :二次过量胸苷阻断细胞DNA合成可能与细胞周期素表达的改变相关     

p21WAF1/CIP1的功能研究新进展

细胞周期由周期蛋白和周期蛋白依赖激酶(cyclin2dependent kinase,CDK)的相互作用而完成.尤其是G1期过渡到S期受细胞周期负调节因子家族周期蛋白依赖激酶抑制因子(eyclin-dependent kinase inhibitots,CDKI)的调节,其在体外通过与CDKs,cyclins或cyclin-cdks复合物的结合达到抑制CDK催化外源性底物的活性.两个家族:CIP家族和INK4家族.p21WAF1是CIP家族中的一员.转化细胞中p2lWAF1/CIP1的表达对增长停滞起关键性作用[1].     

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂在眼科的研究进展

0引言在对细胞周期的研究中发现,细胞周期受多种调控因子调节,根据作用不同分为正相(刺激性)调节剂和负相(抑制性)调节剂。刺激性调节剂包括细胞周期素(Cyclin)和细胞周期蛋白依赖性激酶(CD K),Cyclin与CDK通过Rb蛋白及其相关蛋白p107、p130的磷酸化,形成活性Cyclin-CDK复合物促进细胞周期的进展;抑制性细胞周期调节剂为细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(CKI),当DNA损伤或存在抑制性信号时,CKI抑制CD K和Cyclin-CDK复合物的活性,使细胞周期在G1/S转化前停止犤1犦。其中细胞周期蛋白依赖性激酶是细胞周期调控的中心环节,Cyclin和C…     

实时荧光定量PCR检测非小细胞肺癌中cdk4基因表达

肺癌的病死率在我国位于恶性肿瘤的前列.细胞增殖周期调控异常是恶性肿瘤的一个重要特征[1],调控细胞周期进程分子机制的核心是细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependenet kinases,CDK)的活性表达与调控,CDK与细胞周期蛋白 1(cyclin D 1)等相结合而激活蛋白激酶活性推动细胞从G1期向S期过渡[2],启动DNA合成,使细胞从G1期进入S期,使细胞分裂加速.     

去甲斑蝥素干扰 HL-60 肿瘤细胞周期及其机制研究

目的 明确去甲斑蝥素 (norcantharidin, NCTD) 对肿瘤细胞周期的影响,进一步阐明 NCTD 的抗肿瘤作用机制。方法 体外培养 HL-60 细胞,NCTD 作用后采用3H-TdR 掺入实验检测 DNA 复制;流式细胞术检测细胞周期进程;Western blotting 检测细胞周期调控蛋白 Cdk1、Cyclin B1、Cdc 25c 表达变化。结果 不同浓度 (16～128 μmol/L) NCTD 作用于 HL-60 细胞 12 h 后,DNA 复制受到抑制,细胞周期出现明显的 S 期累积,并呈剂量依赖性趋势;同时观察到 G2/M 的阻滞,且调控 G2/M 周期进程的调节蛋白 Cdk1、Cyclin B1 及 Cdc 25C 蛋白表达下调。结论 NCTD 可抑制 HL-60 细胞 DNA 复制、下调周期调控蛋白从而干扰肿瘤细胞的周期进程。     

Cdc2激酶与肿瘤的相关性研究进展

细胞周期蛋白依赖性激酶Cdc2在细胞周期调控中起着调控G2至M期的作用.在G2后期Cdc2与周期蛋白B(Cyclin B)结合形成Cdc2-Cyclin B激酶复合物,称有丝分裂促进因子(MPF),促使细胞从G2期进入M期.MPF是真核细胞有丝分裂G2~M期转换所必需的蛋白激酶,是调节细胞进入有丝分裂期最关键的蛋白酶[1].当Cdc2过表达时往往会导致细胞恶性增殖,形成肿瘤.     

血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶3在小鼠不同细胞周期1-细胞期受精卵中的表达水平及其亚细胞定位

目的：检测血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶3 (SGK3)在小鼠不同细胞周期1-细胞期受精卵中的表达水平及其亚细胞定位,初步阐明SGK3对哺乳动物受精卵早期发育的调控机制。方法：通过超排卵技术和受精卵体外培养收集小鼠1-细胞期受精卵,分别采用实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)和Western blotting法检测小鼠不同细胞周期1-细胞期受精卵中SGK3 mRNA和蛋白表达水平,采用免疫荧光法观察SGK3在小鼠不同细胞周期1-细胞期受精卵中的亚细胞定位情况。结果：在小鼠不同细胞周期1-细胞期受精卵中均有SGK3 mRNA和蛋白表达;与G1期、S期和M期比较,G2期小鼠1-细胞期受精卵中SGK3 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。免疫荧光法检测,在G1期和S期SGK3 (红色荧光)定位于小鼠1-细胞期受精卵细胞质,在G2期部分SGK3进入细胞核,在M期SGK3广泛分布于小鼠1-细胞期受精卵中。结论：SGK3在小鼠不同细胞周期1-细胞期受精卵中动态表达,SGK3在受精卵细胞分裂过程中存在核浆穿梭,SGK3的定位改变可能推动小鼠1-细胞期受精卵G2/M转换和有丝分裂进...     

塞来昔布与吉西他滨合用对胰腺癌的抑制作用及其机制

目的探讨环氧合酶2(COX2)选择性抑制剂塞来昔布和吉西他滨抑制胰腺癌生长的影响及其机制。方法观察塞来昔布与吉西他滨联合作用对裸鼠SW1990胰腺癌细胞移植瘤生长的影响,并与两者单独应用作比较,免疫组织化学染色观察肿瘤组织增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期蛋白D1表达的变化;四唑蓝法、克隆形成试验观察塞来昔布和吉西他滨体外对SW1990细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期变化;Western印迹检测细胞周期蛋白D1、A和B1表达的变化。结果药物作用于裸鼠移植瘤32d后,对照组、吉西他滨组、塞来昔布组和联合组肿瘤体积分别为(2.31±0.41)cm3、(0.41±0.12)cm3、(1.56±0.17)cm3、(0.05±0.04)cm3,塞来昔布和吉西他滨联合可明显抑制胰腺癌移植瘤的生长,对照组PCNA、细胞周期蛋白D1呈强阳性表达,吉西他滨组PCNA、细胞周期蛋白D1阳性细胞数明显减少,塞来昔布组PCNA阳性细胞数较对照组略有减少,细胞周期蛋白D1阳性细胞数则无明显减少,而联合组中PCNA、细胞周期蛋白D1阳性细胞数较前3组明显减少。塞来昔布和吉西他滨剂量依赖性抑制SW1990细胞增殖,两药联合应用,对细胞增殖的抑制有增强作用。药物作用24h或72h后,塞来昔布组和联合组凋亡细胞数较对照组及吉西他滨组明显增加(P<0.05)。药物作用24h后,塞来昔布组和联合组G0/G1期细胞比例明显增加,G2/M期细胞明显减少,吉西他滨组G0/G1期细胞明显减少,而S期和G2/M期细胞明显增加,药物作用72h后,塞来昔布组和联合组G0/G1期细胞进一步增加,S期细胞明显减少,G2/M期细胞进一步减少,而联合组在作用24h和72h,G2/M期细胞比例均为0。细胞周期素的表达与细胞周期的分布相一致。结论COX2选择性抑制剂塞来昔布可增强吉西他滨对胰腺癌增殖的抑制作用,其机制可能部分通过调节细胞周期素的表达,诱导细胞周期阻滞和胰腺癌细胞凋亡而实现的。     

益气解毒方通过Wnt/β-catenin信号通路对鼻咽癌CNE2细胞增殖的影响

目的探讨益气解毒方对鼻咽癌CNE2细胞增殖及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法将CNE2细胞用不同浓度(0.25、0.50、1.0 g/L)的益气解毒方水提物和阳性对照药(顺铂,4 mg/L)分别处理24、48、72 h,采用MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测药物作用48 h后细胞周期分布情况;Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白Wnt5a/b、β-catenin及细胞周期蛋白CyclinD1的表达情况。结果MTT结果显示,益气解毒方对鼻咽癌CNE2细胞增殖具有明显抑制作用,且其抑制作用与作用时间、药物浓度呈正相关(P<0.05)。细胞周期结果显示,处理48 h后,G0/G1期比例降低,S期和G2/M期比例增加(P<0.05,P<0.01)。Western blot结果显示,水提物处理48 h后,Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白Wnt5a/b、β-catenin及细胞周期蛋白CyclinD1的表达量明显下降(P<0.01)。结论益气解毒方可通过下调Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白Wnt5a/b、β-catenin及细胞周期蛋白CyclinD1的表达,阻滞细胞周期,抑制人鼻咽癌CNE2细胞的增殖。     

大肠癌细胞周期状态与临床病理因素及细胞周期蛋白水平的相关性

目的研究大肠癌组织的细胞周期分布状态与临床病理因素的关系,以及和细胞周期调节蛋白的表达水平是否相关。方法应用流式细胞术检测45例大肠癌临床标本细胞周期中G0/G1、S、G2/M期所占的比例,并检测每例标本的细胞周期蛋白CyclinD1、CyclinE、CyclinA、CyclinB1的表达水平。结合临床病理因素进行统计分析。结果肿瘤细胞G0/G1、S、G2/M期所占的比例和患者性别、年龄、肿瘤部位、病理分级、浸润深度、淋巴结转移、Dukes分期均无明显相关性,均P>0.05。G0/G1期的比例与CyclinD1、CyclinE,S期与CyclinE、CyclinA,G2/M期与CyclinA的表达水平均不相关,均P>0.05;但是G2/M期的比例与CyclinB1的表达水平正相关,r=0.335,P=0.035。结论大肠癌肿瘤细胞的周期分布和临床病理因素无关,肿瘤细胞周期蛋白的表达特点与体外培养的细胞系不同,表现得更加复杂多样。     

六亚甲基二乙酰胺体外对白血病细胞株的抗增殖作用及其机理研究

目的　研究抗肿瘤药物六亚甲基二乙酰胺 (HMBA)在体外对人白血病细胞株U937,K5 6 2增殖和凋亡的作用 ,初步从细胞周期调控的角度探讨其作用机理。方法　应用MTT比色法和锥虫蓝拒染法观察HMBA对细胞增殖的抑制作用。用细胞周期素A/DNA双染色法检测不同浓度HMBA(1、2、4mmol/L)实验组细胞胞浆内细胞周期素A蛋白表达水平 ,并进行DNA含量分析。用异硫酸盐荧光素标记的膜联蛋白V/碘化丙啶双染色法 ,DNA片段变化和亚G1峰检测细胞凋亡。结果　 (1)HMBA能明显地抑制K5 6 2 ,U937细胞增殖 ,呈剂量依赖性 (K5 6 2细胞经HMBA干预后第六天 ,对照组、1、2、4mmol/L组MTT法的 5 95nm吸光度值分别为 1 0 3、0 81、0 5 8、0 36 )。 (2 )HMBA能剂量依赖性地下调胞浆内细胞周期素A表达水平 ,(K5 6 2细胞经HMBA干预后 ,对照组 ,1、2、4mmol/L组细胞周期素A阳性率分别为 34 4 %± 5 2 % ,16 1%± 2 5 % ,9 9%± 1 7% ,7 6 %± 2 0 % ) ,S期细胞比例与细胞周期素A的改变趋势是一致的。 (3)各实验组均未检测到有凋亡发生。结论　HMBA通过下调S G2期周期素A表达而打破了K5 6 2 ,U937细胞增殖的环节 ,是其发挥抑制白血病细胞增殖的机理之一     

ORC1在大鼠血管平滑肌细胞G1/S和S期的表达

目的检测大鼠血管平滑肌细胞(VASCULAR SMOOTH MUSCLE CELLS,VSMCS)G1/S、S期中起始识别复合物(ORIGINRECOGNITION COMPLEX1,ORC1)的表达。方法采用组织块贴壁法培养大鼠胸主动脉原代培养VSMCS。利用胸苷双阻断法造成细胞同步,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术、流式细胞仪检测分别测定G1/S、S期VSMCS的ORC1MRNA及蛋白表达。结果经光镜、免疫组化鉴定证实分离培养的细胞为VSMCS。ORC1MRNA在GO期的VSMCS无明显表达、G1/S期达到高峰,到S、G2/M期明显减少。流式细胞仪检测的VSMCS ORC1蛋白质表达与MRNA变化相似。结论ORC1可能在VSMCS细胞周期调节过程中起重要作用。     

蛋白磷酸酶2A参与孕激素对子宫内膜上皮细胞增殖的负调控作用

目的探讨蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)是否参与孕激素对子宫内膜上皮细胞增殖的负调控作用,以进一步揭示孕激素作用的分子机制。方法分离培养原代小鼠子宫内膜上皮细胞,在细胞生长汇合时将其分为4组:以1μmol/L孕激素为对照组(P4组),其他3组分别给予1μmol/L孕激素和5nmol/L、10nmol/L、20nmol/L 3种不同剂量的PP2A抑制剂冈田酸(OA)作为实验组,分别为A、B和C组。各组细胞在上述实验因素作用24h后,采用流式细胞术检测细胞周期各时相分布的细胞百分数。结果与P4组相比,A组分布在细胞周期各时相的细胞百分数差异没有统计学意义;B组处于G1期和G2/M期的细胞百分数降低,而S期的细胞百分数增加;C组处于G1期和S期的细胞百分数增加,但G2/M期细胞百分数降低(P均<0.05)。结论适当剂量PP2A抑制剂OA可明显解除孕激素对子宫内膜上皮细胞增殖的抑制作用,使细胞周期进程加快,从而证实PP2A参与了孕激素对子宫内膜上皮细胞增殖的负调控作用。