加味五子衍宗方含药脑脊液对β淀粉样蛋白诱导海马神经元损伤的保护作用

目的研究加味五子衍宗方及其总多糖、总黄酮含药脑脊液对β淀粉样蛋白诱导的原代大鼠海马神经元损伤的保护作用。方法体外原代培养大鼠胎鼠海马神经元,并将加味五子衍宗方的提取物(总方、总多糖、总黄酮)对大鼠进行灌胃给药,然后抽取含药脑脊液,将含药脑脊液与20μmol/L的Aβ25-35共同作用海马神经元24h后,分别检测正常对照组、Aβ25-35损伤组、空白脑脊液保护组、加味五子衍宗方含药脑脊液(总方、总多糖、总黄酮)保护组的海马神经元活力、凋亡率以及凋亡相关蛋白(caspase-3,PARP,Bcl-2,Bcl-XL,JNK1/2,p38MAPK)的变化情况。结果加味五子衍宗方不同提取物(总方、总多糖、总黄酮)的含药脑脊液对Aβ25-35所诱导的海马神经元毒性均有保护作用,且总黄酮、总多糖含药脑脊液的保护作用明显高于总方含药脑脊液(P0.05或P0.01),但是加味五子衍宗方不同组分(总方、总多糖、总黄酮)的含药脑脊液对凋亡相关蛋白的调控机制并不一致。结论加味五子衍宗方中的部分黄酮类和多糖类成分可以透过血脑屏障并进入脑脊液,同时这些成分对β淀粉样蛋白所致的神经损伤有一定的保护作用。     

加味五子衍宗方对记忆障碍小鼠空间学习记忆成绩的影响

[目的]初步探讨加味五子衍宗方改善学习记忆障碍的物质基础及其作用机制。[方法]以东莨菪碱建立小鼠记忆获得障碍模型,以Morris水迷宫系统检测模型小鼠空间辨别性学习记忆成绩。[结果]模型组小鼠定位航行实验搜索策略、空间探索实验穿越目标区域次数成绩较空白对照组明显减退(P<0.05),而加味五子衍宗方及其总黄酮、总多糖组分处理的动物上述成绩显著优于模型组(P<0.05),其中总多糖组分的作用有优于原复方的趋势。[结论]提示加味五子衍宗方及其总黄酮、总多糖组分对中枢胆碱能系统损伤的学习记忆障碍有保护作用。该复方总黄酮、总多糖组分是其促智的有效组分,其中总多糖组分的作用更为突出。     

五子衍宗方的临床运用及现代研究

目的：综述近年来五子衍宗方的临床运用、药理、质控等研究概况。方法：对10余年来该方的临床运用和药理研究文献进行了回顾和总结。结果：该方现代临床用于治疗生殖泌尿、内科及抗衰老、轻度认知障碍等多种疾病;药理研究表明具有提高生殖器官重量、增加雄性激素分泌,降低血糖,提高机体免疫功能,抗衰老及增强学习记忆能力等作用,长期毒性研究证实安全无毒;初步建立五子衍宗丸质量控制标准。结论：五子衍宗方具有多种临床用途,其中促进学习记忆的作用机制仍需进一步研究。     

五子衍宗方对环磷酰胺致小鼠DNA损伤的影响

目的观察五子衍宗方对环磷酰胺(CTX)致小鼠DNA损伤的影响,并探讨其作用机制。方法将BalB/c小鼠随机分为正常组、模型组、五子衍宗方低剂量组、五子衍宗方高剂量组。五子衍宗方低、高剂量组预给药1周后,除正常组外,其余各组腹腔注射CTX 100 mg/kg造模,隔日1次,共3次,同时五子衍宗方低、高剂量组继续给药,末次给予CTX后12 h处死小鼠,分离血清,ELISA检测血清中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含量,应用单细胞凝胶电泳技术检测骨髓细胞DNA损伤。结果五子衍宗方低、高剂量组能够降低血清中8-OHdG的含量,使小鼠骨髓细胞彗星图像的Olive尾矩、尾距、尾长和尾部DNA含量降低。结论五子衍宗方对CTX致小鼠DNA损伤具有较好的保护作用。     

加味五子衍宗方的神经保护作用机制研究现状

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种以进行性记忆认知障碍、行为异常、人格改变为主要特征的神经退行性疾病,目前全球对AD的治疗效果不佳,其原因主要在于AD发病因素复杂,干预过晚,越来越多的学者提出治疗AD应及早着手,多靶点干预。本课题组在中医"补肾益精促智"和"未病先防"原则的指导下,采用现代生物医学技术,对补肾益精促智方"加味五子衍宗方"防治阿尔茨海默病前期——轻度认知功能障碍(mild cognitive impairment,MCI)的作用及机制进行了深入研究。临床研究证实该方可改善MCI患者的临床症状,延缓MCI患者向AD发展。高效液相色谱-光电二极管阵列检测器-串联质谱分析方法共检出58种复方主要成分,并对其饮片来源进行了归属。鉴定或推测了其中51种成分的结构,建立了加味五子衍宗方的HPLC指纹图谱。整体及离体药理研究证实加味五子衍宗方及其有效组分可有效改善AD大鼠的行为学症状,并可从多条通路、多个靶点发挥调节中枢胆碱能系统,拮抗Aβ神经毒性、氧化应激损伤及炎症损伤等AD致病因素的作用,这为该方的科学应用及开发提供了实验室依据。     

五子衍宗方对生精障碍模型大鼠睾丸TGF-β_1/Smads信号转导通路的影响

目的:观察五子衍宗方对生精障碍模型大鼠睾丸TGF-β1/Smads信号转导通路的影响,探讨其治疗男性不育症的作用机制。方法:采用随机数字表法将50只雄性SD大鼠分为正常对照组、模型组、甲基睾酮组和五子衍宗方低、高剂量组,每组10只。除正常对照组外,其余各组大鼠按醋酸棉酚50mg/kg体质量灌胃给药,制备生精障碍模型。正常组和模型组大鼠灌服蒸馏水,甲基睾酮组大鼠灌服甲基睾酮混悬液,五子衍宗方低、高剂量组大鼠分别给予低、高浓度(含1.75g、3.5g生药/mL)五子衍宗方混悬液灌胃,每天1次,连续30天。光镜下观察大鼠睾丸组织结构变化,免疫组化法检测大鼠睾丸组织TGF-β1、Smad2、Smad4蛋白表达量。结果:棉酚可造成大鼠睾九曲细精管萎缩、退化,管壁变薄,生精细胞减少,排列紊乱,精子发生障碍;睾丸组织TGF-β1表达上调(P0.01),Smad2、Smad4表达下调(P0.01)。五子衍宗方能显著下调大鼠睾丸TGF-β1表达(P0.01),上调Smad2、Smad4表达(P0.01),拮抗棉酚造成的大鼠睾丸组织结构损伤。结论:通过调控TGF-β1/Smads信号转导通路,改善大鼠睾丸的生精功能,可能五子衍宗方治疗不育症的作用机制之一。     

五子衍宗方对实验性隐睾小鼠生精功能的保护作用

目的:研究五子衍宗方对实验性隐睾小鼠生精功能的保护作用。方法:取5～6周龄BALB/c小鼠,手术建立小鼠隐睾模型,分为假手术组,模型组,五子衍宗方低、高剂量(100,200 mg.kg-1)组,手术14 d后给药,用药14 d,于末次给药24h后检测小鼠的睾丸质量、精子密度、活率,光、电镜观察睾丸组织学结构的变化,检测小鼠睾丸内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的变化。结果:五子衍宗方能够显著增加模型小鼠的睾丸质量(P<0.01),明显增加精子密度(P<0.05),提高精子活率(P<0.01),改善隐睾小鼠睾丸组织的病理性变化,显著升高SOD和GSH-Px活性(P<0.05或P<0.01),显著降低MDA含量(P<0.01)。结论:五子衍宗方提高睾丸组织内抗氧化损伤能力,从而减轻隐睾对小鼠睾丸生殖功能的损害。     

加味五子衍宗方有效部位对β-淀粉样肽致大鼠行为学改变的影响

目的:观察加味五子衍宗颗粒及其有效组分对β-淀粉样肽所致老年性痴呆(AD)模型鼠空间学习记忆能力的影响。方法:采用大鼠侧脑室立体定向注射Aβ_25-35的方法建立AD动物模型,服用加味五子衍宗颗粒及其总黄酮、总多糖15d后以全自动Morris水迷宫实验检测大鼠定位航行试验及空间探索试验,来评价大鼠空间学习记忆功能。结果:加味五子衍宗颗粒及其有效组分总黄酮、总多糖均能明显缩短模型大鼠在Morris水迷宫定位航行试验中的逃避潜伏期和搜索距离(P<0.05),显著增加空间探索试验中原平台所在象限搜索时间和距离占总时间和总距离的百分比(P<0.05,P<0.01)。结论:加味五子衍宗颗粒及其总黄酮、总多糖能改善由β-淀粉样肽所致AD模型鼠的空间学习记忆能力。     

基于内质网应激研究五子衍宗方对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞凋亡的保护作用

基于内质网应激(ERS)研究五子衍宗方对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞凋亡的保护作用。将16月龄SPF级SD雄性大鼠随机分为3组,自然衰老组(Ageing),五子衍宗方低剂量组(WZ,1 g·kg^-1)和五子衍宗方高剂量组(WZ,4 g·kg^-1),另购买2月龄SD雄性大鼠作为青年对照组(Adult),每组10只。给予普通饲料或含药饲料喂养4个月后,处死大鼠,取出睾丸组织备用。苏木素-伊红(HE)染色观察睾丸组织形态;Western blot法检测睾丸组织中内质网应激相关蛋白GRP78,p-PERK,p-eif2α,ATF4,p-IRE1,XBP1,ATF6及其介导的凋亡相关蛋白CHOP,caspase 12,p-JNK的表达水平。HE结果显示,五子衍宗方能明显改善自然衰老所致的睾丸组织形态变化。Western blot结果显示,与自然衰老组相比,五子衍宗方能显著升高自然衰老大鼠睾丸组织内质网应激相关蛋白GRP78,p-PERK,p-eif2α,ATF4,p-IRE1,XBP1,ATF6的表达水平;显著降低内质网应激介导的凋亡相关蛋白CHOP,caspase 12,p-JNK的表达水平。综上所述,五子衍宗方可通过调节内质网应激减轻自然衰老大鼠睾丸生殖细胞凋亡。     

五子衍宗方对环磷酰胺致小鼠肝脏细胞DNA损伤的保护作用

目的研究五子衍宗方对环磷酰胺(CTX)诱导的小鼠肝脏细胞DNA损伤的保护作用。方法将BALB/c小鼠随机分为正常对照组,模型组,五子衍宗方低、高剂量组,每组10只。五子衍宗方组预给药一周之后,除正常对照组之外,其余各组注射CTX(100 mg/kg)隔天给药共3次,末次注射CTX 12 h后处死小鼠。检测小鼠的肝脏指数,血清中丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)活力。硫代巴比妥酸法检测肝脏中丙二醛(MDA)的量,ELISA检测肝脏中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)的量,单细胞凝胶电泳技术检测肝脏细胞的DNA损伤。结果五子衍宗方能够升高小鼠的肝脏指数,降低ALT、AST的活力,降低肝脏中的8-OHd G、MDA的量,五子衍宗方组均可以使小鼠Olive尾矩、尾长、尾距和尾部DNA%降低。结论五子衍宗方能拮抗CTX造成的小鼠肝脏细胞的DNA损伤,提高肝脏的抗氧化能力。     

加味五子衍宗方及其有效部位对 H2O2损伤PC12细胞的保护作用

目的:比较加味五子衍宗方及其有效部位总黄酮和总多糖对H₂O₂诱导的PC12细胞损伤的影响。方法:噻唑蓝(MTT)法和乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞存活率和细胞毒性,酶标仪测定丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT)的活性,流式细胞仪检测细胞凋亡,激光共聚焦显微镜检测细胞内Ca²⁺的浓度。结果:预先给予500μg·mL^-1加味五子衍宗方,总黄酮和总多糖处理细胞2h,可显著提高细胞存活率及SOD和CAT活性,降低LDH,MDA水平;加味五子衍宗方及总黄酮还可有效抑制凋亡的发生,并可明显降低细胞内Ca²⁺浓度,总黄酮的效果强于五子衍宗方及总多糖。结论:加味五子衍宗方能显著抑制H₂O₂诱导的PC12细胞氧化应激状态及凋亡发生,其主要活性成分是总黄酮,其神经细胞保护作用可能与其降低细胞脂质过氧化水平,提高抗氧化酶活力和抑制细胞内Ca²⁺浓度升高有关。     

五子衍宗方通过调节miR-let-7-Imp轴对老龄大鼠精原干细胞增殖的影响

目的:通过miR-let-7-Imp轴探讨五子衍宗方(WZ)对老龄大鼠精原干细胞增殖的作用及其机制。方法:将40只18月龄SPF级SD雄性大鼠随机分为老龄模型组,WZ低、中、高剂量组,每组10只,另以10只2月龄大鼠作为青年组。WZ低、中、高剂量组分别灌胃给药0. 4,0. 8,1. 6 g·kg~(-1),青年组、老龄模型组分别灌胃给予生理盐水,每周停药2 d,持续给药4个月。末次给药后麻醉处死大鼠,快速取出睾丸组织。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测miR-let-7,Imp mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)和免疫荧光检测睾丸精原干细胞增殖相关信号通路磷酸化(p)-两面神激酶2(JAK2)/JAK2,p-信号传导及转录激活因子3(STAT3)/STAT3蛋白的表达与定位,免疫荧光检测精原干细胞数量及增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,苏木素-伊红(HE)染色观察睾丸组织形态学变化。结果:Real-time PCR结果显示,与青年组比较,老龄模型组miR-let-7 mRNA表达水平显著升高(P 0. 01),Imp mRNA表达水平显著降低(P 0. 01),而给予WZ干预后,miR-let-7 mRNA水平明显降低(P 0. 05,P 0. 01),Imp mRNA表达水平明显升高(P 0. 05); Western blot和免疫荧光结果显示,精原干细胞增殖相关信号通路蛋白p-JAK2,p-STAT3表达降低(P 0. 01),WZ处理后,p-JAK2,p-STAT3表达明显增多(P 0. 05,P 0. 01);免疫荧光结果显示,与青年组比较,老龄模型组中精原干细胞数量减少,PCNA表达下降,WZ处理后,精原干细胞数量增多,PCNA表达上调; HE结果也显示,WZ能够明显改善自然衰老所致的睾丸组织形态结构变化。结论:WZ能够促进老龄大鼠精原干细胞的增殖,其作用机制可能与调节睾丸内miR-let-7-Imp轴有关。     

五子衍宗方对H22荷瘤小鼠环磷酰胺化疗的减毒作用

目的研究五子衍宗方对H22荷瘤小鼠环磷酰胺(环磷酰胺)化疗的减毒作用。方法建立H22荷瘤小鼠模型,实验小鼠接种H22后,随机分为4组,即荷瘤对照组、环磷酰胺组、环磷酰胺加五子衍宗方高剂量组(840mg/kg)、环磷酰胺加五子衍宗方低剂量组(420 mg/kg)。检测各组小鼠外周血红细胞、白细胞、血小板数量和骨髓有核细胞数量变化,观察各组荷瘤小鼠瘤质量的变化以及抑瘤率,流式细胞术分析小鼠脾脏中CD4+、CD8+、CD19+、CD69+CD4+绝对数量和CD4+/CD8+比例变化。结果环磷酰胺化疗小鼠出现红细胞、白细胞、血小板数量下降,脾脏淋巴细胞CD4+、CD8+、CD19+亚群绝对数量显著减少,并且CD69+CD4+绝对数量和CD4+/CD8+比例下降。与环磷酰胺单用组相比,五子衍宗方联合环磷酰胺组红细胞、白细胞、血小板数量明显恢复;小鼠瘤质量降低,抑瘤率升高;小鼠脾脏淋巴细胞CD4+、CD8+、CD19+亚群绝对数量显著增加,并且CD69+CD4+绝对数量和CD4+/CD8+比例明显上升。结论五子衍宗方可减轻环磷酰胺对H22荷瘤小鼠化疗的毒副作用,其机制可能与改善机体免疫功能有关。     

五子衍宗方对环磷酰胺致小鼠睾丸细胞DNA损伤的影响

目的探讨五子衍宗方(枸杞子、菟丝子、覆盆子、车前子、五味子)对环磷酰胺致成年雄性小鼠睾丸细胞DNA损伤的影响。方法将50只成年雄性Balb/C小鼠中40只腹腔注射环磷酰胺后随机均分为模型对照组(生理盐水)以及五子衍宗方低、中、高剂量组(100、200、400 mg/kg),10只另设正常对照组(生理盐水),乙醚麻醉小鼠后颈椎脱臼处死。检测小鼠精子数量、精子活率及精子畸形率,酶联免疫吸附测定法(ELISA)法检测血清中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含有量,单细胞凝胶电泳技术检测睾丸细胞DNA损伤程度,Western blot检测睾丸组织中磷酸化的肿瘤抑制蛋白53(p-P53)、γ位磷酸化的组蛋白(γ-H2AX)蛋白表达。结果相较于模型对照组,五子衍宗方各组可显著升高小鼠精子数量、精子活率,显著降低精子畸形率、血清8-OHdG水平,显著降低睾丸组织中p-P53与γ-H2AX蛋白表达。结论五子衍宗方能通过下调p-P53、γ-H2AX蛋白表达来显著减轻环磷酰胺致小鼠睾丸细胞DNA损伤。     

加味五子衍宗方对Aβ25-35所致的 PC12细胞tau蛋白高度磷酸化的抑制作用及机制

目的:研究加味五子衍宗方对β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ25-35)所致的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株(PC12)中的微管相关蛋白(tau蛋白)高度磷酸化的抑制作用和潜在机制。方法:将PC12细胞分为正常对照组、模型组、给药组,使用Aβ25-35(30μmol.L-1)诱导PC12细胞的tau蛋白高度磷酸化,并同时加入加味五子衍宗方提取物(50～400 mg.L-1)作用细胞24 h,然后考察加味五子衍宗方对PC12细胞tau蛋白高度磷酸化的抑制作用。结果:加味五子衍宗方单独作用细胞后,无明显毒性作用。但是加味五子衍宗方可以显著的抑制Aβ25-35所诱导的神经毒性,细胞存活率由损伤组的70%±4.9%提高到治疗组的98%±6.5%(P<0.01);且凋亡相关蛋白Caspase-3和PARP的表达也受到了显著性的抑制,分别从损伤组的378.15%±34.65%和985.12%±45.32%降低到治疗组的127.65%±12.65%和543.61%±39.07%(P<0.01)。此外,PC12细胞中tau蛋白的高度磷酸化也出现了显著下调,Ser396位点的磷酸化水平从损伤组的130.01%±5.83%降低到治疗组的113.75%±6.34%(P<0.01),Ser404位点的磷酸化水平从损伤组的150.17%±10.28%降低到治疗组的105.37%±4.57%(P<0.01),其机制可能是通过抑制糖原合酶激酶(glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β)在Ser9位点的磷酸化以及促分裂素原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)的磷酸化来实现的。结论:加味五子衍宗方可以有效的抑制Aβ25-35所致的PC12细胞中tau蛋白的高度磷酸化,具有潜在的治疗阿尔茨海默病的作用。     

五子衍宗方对衰老大鼠睾丸支持细胞紧密连接损伤的保护作用及机制

目的 探究五子衍宗方对衰老大鼠睾丸支持细胞紧密连接损伤的保护作用及其分子机制.方法 将30只16月龄SD雄性大鼠随机分为衰老模型组、五子衍宗方低剂量组(1g/kg)和五子衍宗方高剂量组(4 g/kg),另取2月龄SD雄性大鼠作为青年对照组,每组10只.给予含药饲料或普通维持饲料喂养4个月后,麻醉处死大鼠,取睾丸组织,H...     

五子衍宗方对生精障碍模型大鼠附睾精子参数及血清抑制素B的影响

目的:观察五子衍宗方对生精障碍模型大鼠附睾精子参数及血清抑制素B水平的影响。方法:采用随机数字表法将50只雄性SD大鼠分为正常对照组、模型组、甲基睾酮组和五子衍宗方低、高剂量组,每组10只。除正常对照组外,其余各组大鼠按醋酸棉酚50mg/kg体质量灌胃给药,制备生精障碍模型。正常组和模型组大鼠灌服蒸馏水,甲基睾酮组大鼠灌服甲基睾酮混悬液,五子衍宗方低、高剂量组大鼠分别给予低、高浓度(含1.75g、3.5g生药/mL)五子衍宗方混悬液灌胃,每天1次,连续1个月。观察各组大鼠睾丸湿重、睾丸指数及间质细胞数,按WHO标准,采用WLJY-9000荧光染色精子动(静)态图像分析系统检测附睾精子参数,ELISA法检测大鼠血清抑制素B水平。结果:棉酚可造成大鼠睾丸减轻、睾丸指数减小、间质细胞数减少(P0.01);附睾精子密度降低,活动率和前向运动率(a+b%)下降(P0.05,P0.01),血清抑制素B水平降低(P0.01);五子衍宗方能显著改善大鼠睾丸重量及睾丸指数,增加间质细胞数,改善附睾精子参数(P0.05,P0.01),上调血清抑制素B水平(P0.01),拮抗棉酚造成的大鼠睾丸生精功能损伤。结论:通过上调抑制素B水平,改善睾丸生精功能,可能五子衍宗方治疗不育症的作用机制之一。     

加味五子衍宗方抑制脂多糖诱导的BV-2小胶质细胞炎症反应及机制研究

目的： 研究加味五子衍宗方（MWP）对脂多糖（LPS）诱导的BV-2小胶质细胞炎症反应的抑制作用及潜在机制。方法： 体外培养BV-2小胶质细胞系,用LPS（1 mg·L^-1）诱导炎症模型,将细胞分为空白对照组,炎症模型组和MWP药物组,药物组MWP设置50,100,200 mg·L^-13个质量浓度。LPS和药物处理细胞后分别检测各组细胞炎症因子一氧化氮（NO）的表达、诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）,环氧合酶-2（COX-2）的表达、核转录因子-κB（NF-κB）核转位以及还原型辅酶Ⅱ（NADPH）氧化酶活性和活性氧（ROS）的表达。结果： MWP可剂量依赖性降低LPS激活的BV-2小胶质细胞内iNOS,COX-2的蛋白表达和NO的释放,抑制NF-κB的核转位,此外还可剂量依赖性降低NADPH氧化酶活性并明显降低ROS的产生。结论： MWP可有效抑制LPS诱导的BV-2小胶质细胞炎症反应,可能是通过抑制NF-κB信号通路介导的炎症反应以及NADPH氧化酶介导的氧化应激实现的。     

马居里运用五子衍宗方加减治疗男科疾病

马居里教授擅于运用五子衍宗方治疗男科疾病,尤其对于男性的少精症,无精症,精子畸形,活动力差等病证效果为佳.认为:五子衍宗 方取药皆为植物草药的种子,其寓意在于繁衍子嗣,且五种药物相配伍,补中有泻,使补而不易壅滞,温补肾气以填精益髓,滋阴潜阳以固精缩尿.马教授在灵活运用本方的同时,随症加减,尤以善用蜈蚣.指出蜈蚣具有搜剔虚邪贼风,走窜畅经通络之功,对于弱精、死精均有良好的治疗效果,可用于治疗阳痿、早泄及不育.故每方必加蜈蚣,由1条加至3条,视病情轻重而定.