端粒酶反义寡核苷酸对宫颈癌HeLa细胞端粒酶活性的影响

目的　探讨端粒酶反义寡核苷酸 (ASON)对宫颈癌HeLa细胞体外生长抑制的作用机制。方法　针对端粒酶RNA的ASON作用于HeLa细胞 ,台盼蓝排斥法测定细胞存活力 ,以PCR为基础的TRAP法测定端粒酶的活性 ,流式细胞仪 (FCM)检测细胞凋亡及细胞周期。结果　ASON连续治疗 5d ,HeLa细胞的存活力无明显下降 ;在FuGENE6的介导下 ,ASON对端粒酶活性的抑制与ASON的浓度和治疗时间呈正相关。FCM未检测到特征性的亚G1 峰 ,ASON组中G2 /M期的DNA含量显著增多。结论　针对端粒酶RNA的ASON能抑制HeLa细胞的端粒酶活性 ,并将细胞阻滞在分裂期达到抑制细胞生长的目的     

Effect of telomerase antisense oligodeoxynucleotide on endometrial carcinoma cell strain

目的 观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对癌细子宫内膜癌细胞株的作用.方法 用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与子宫内膜细胞株共同温育一定时间后,观察细胞形态变化,检测细胞Bcl-2蛋白表达情况,测定端粒酶活性.结果 端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导子宫内膜癌细胞凋亡,抑制端粒酶活性,在形态学上表现为出现细胞质浓缩,变圆,核染色不均匀,核物质边聚成新月形或块壮;电泳呈凋亡特征性Ladder带;流式细胞仪分析显示,反义寡核苷酸在细胞进入DNA合成期前引起DNA 损伤,使细胞停滞在G0~G1期,并诱导细胞凋亡.结论 端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能抑制端粒酶活性,诱导子宫内膜癌细胞凋亡,从而抑制子宫内膜癌的增殖.     

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对子宫内膜癌细胞株的影响

目的观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对癌细子宫内膜癌细胞株的作用。方法用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与子宫内膜细胞株共同温育一定时间后,观察细胞形态变化,检测细胞Bcl-2蛋白表达情况,测定端粒酶活性。结果端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导子宫内膜癌细胞凋亡,抑制端粒酶活性,在形态学上表现为出现细胞质浓缩,变圆,核染色不均匀,核物质边聚成新月形或块壮;电泳呈凋亡特征性Ladder带;流式细胞仪分析显示,反义寡核苷酸在细胞进入DNA合成期前引起DNA损伤,使细胞停滞在G0～G1期,并诱导细胞凋亡。结论端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能抑制端粒酶活性,诱导子宫内膜癌细胞凋亡,从而抑制子宫内膜癌的增殖。     

端粒酶反义RNA转染逆转膀胱癌T24恶性表型的研究

为了研究端粒酶反义RNA对膀胱癌T24细胞恶性表型的抑制及促进其凋亡的作用,采用脂质体转染法将能转录出端粒酶反义RNA质粒导入膀胱癌T24细胞,应用PCR－ELISA法测定转染后T24细胞的端粒酶活性;光镜、电镜、MTT法及流式细胞检测（FCM）等方法观察端粒酶反义RNA对T24细胞的生长及凋亡的影响。结果显示,端粒酶反义RNA能显著抑制T24细胞的端粒酶活性,使其生长受抑制。形态学观察转染后T24细胞出现典型的凋亡现象。FCM检测发现细胞周期G1期前出现亚2倍体峰－凋亡峰。结论：转染端粒酶反义RNA能抑制膀胱癌T24细胞的恶性表型,并促进其凋亡,从而为 以端粒酶作为膀胱肿瘤基因治疗的新靶点提供实验依据。     

慢病毒载体介导的针对端粒酶的RNA干扰技术对HepG2细胞的体外效应

目的 观察针对hTERT的siRNA对肝癌HepG2细胞的体外抑制效应.方法 将逆转录表达载体中的针对hTERT的siRNA序列亚克隆至慢病毒表达载体pWPT-GFP中,经293T细胞包装,收集病毒上清,感染肝癌细胞株HepG2.采用半定量RT-PCR法、TRAP法及MTT法,分别检测hTERT基因表达、端粒酶活性、肿瘤细胞生长抑制情况等.结果 限制性内切酶酶切分析表明成功构建了靶向人端粒酶逆转录酶的干扰RNA的慢病毒表达载体;以293T包装的重组慢病毒能够高效感染肝癌细胞,感染效率可达99%以上;在稳定表达pWPT-hTERT-siRNA的肝癌细胞中,hTERT mRNA表达水平、肿瘤细胞的体外增殖受到抑制.结论 慢病毒介导的siRNA转染能明显抑制恶性肝癌细胞的生长.     

10—羟基喜树碱对人肝癌Hep G2细胞的分化诱导作用

目的:研究羟基喜树碱HCPT对人肝癌Hep G2细胞分化诱导作用的机制。方法:用免疫细胞化学染色检测增殖细胞核抗原表达;流式细胞仪检测细胞周期和野生型p53蛋白表达;端粒重复扩增法检测端粒酶活性。结果:以诱导分化剂量(5-20μg·L~(-1))的HCPT处理6 d,人肝癌Hep G2细胞明显受阻于G_2/M期,PCNA阳性表达率降低。经HCPT 5μg·L~(-1)处理6 d,Hep G2细胞的野生型p53蛋白表达明显增强,但端粒酶活性没有改变。结论:HCPT诱导人肝癌Hep G2细胞分化的作用与细胞阻滞于G_2/M期、PCNA表达降低及野生型p53蛋白表达增强有关。     

全硫代反义寡核苷酸对卵巢癌细胞生长抑制作用

目的采用针对人端粒酶hTR基因的反义寡聚脱氧核苷酸,探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸（antisense oligodeoxy nucleotides,ASODN）对卵巢癌HO-8910细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法将实验分为空白对照组、脂质体对照组、端粒酶全硫代正义寡聚脱氧核苷酸（Phosphorathioatesense oligodeoxy nucleotides,PS-SODN）组和不同剂量的全硫代反义寡聚脱氧核苷酸（Phosphorat-hioate an-tisense oligodeoxy nucleotides,PS-ASODN）组;②脂质体介导的细胞转染后,PS-ASODN和PS-SODN分别作用于卵巢癌HO-8910细胞后并培养24、48、72h,分别采用酶联免疫吸附法（ELISA）、吖啶橙染色法、四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）、流式细胞术检测HO-8910细胞的端粒酶活性、细胞形态、体外增殖、细胞凋亡和细胞周期的改变。结果ELISA法检测结果显示端粒酶PS-ASODN作用卵巢癌HO-8910细胞72h后端粒酶活性表达为阴性,说明端粒酶PS-ASODN能够抑制端粒酶活性;②吖啶橙染色观察细胞形态：PS-ASODN作用的卵巢癌HO-8910细胞有明显凋亡现象,凋亡细胞体积缩小,染色质浓缩,说明PS-ASODN能够促进卵巢癌HO-8910细胞凋亡;③MTT实验：PS-ASODN明显抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖（P〈0.0l）,并呈一定剂量和时间依赖关系;④流式细胞仪检测细胞凋亡和周期：与空白对照组比较,PS-ASODN组G0/G1期细胞明显增多,差异显著（P〈0.01）;在G0/G1期前出现亚二倍体凋亡峰,表明细胞被阻止在G1/S期。结论PS-ASODN作用于卵巢癌HO-8910细胞后,卵巢癌HO-8910细胞增殖受到明显抑制,并出现凋亡;②PS-ASODN对端粒酶活性的抑制率与PS-ASODN的浓度和作用时间呈依赖关系,即抑制率随着反义寡核苷酸的浓度和作用时间的增加而增大;③以端粒酶RNA模板区为靶点的PS-ASODN明显抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖,其机制可能是通过降低细胞的端粒酶活性而诱发细胞的凋亡,PS-ASODN对卵巢癌的治疗具有重要价值。     

槲皮素对肝癌HepG2细胞生长影响的体外研究

目的 观察槲皮素对肝癌HepG2细胞生长及hTERT基因表达的影响.方法 以台盼蓝拒染法计数肝癌细胞的生长抑制率,用透射电镜从形态变化方面了解凋亡的发生,流式细胞术检测细胞周期变化,Western-blot检测hTERT基因表达改变,PCR-TRAP法检测端粒酶活性.结果 槲皮素抑制肝癌HepG2细胞增殖的作用明显,且呈浓度和时间依赖性,槲皮素处理48 h后的半数抑药浓度（IC5o）为25.5μmol/L;形态学检测显示出了细胞凋亡的特征变化,经10-20 μm/L的槲皮素处理,肝癌HepG2细胞周期阻滞于G0/G1期,且HepG2细胞hTERT蛋白降低,端粒酶活性被抑制.结论 槲皮素能呈时间、剂量依赖性地抑制肝癌细胞的生长,能诱导HepG2细胞发生凋亡,其抑制增生与诱导凋亡的机制可能与下调hTERT基因表达、抑制端粒酶活性、破坏端粒稳定性有关.     

端粒，端粒酶与肝癌

端粒酶存在于绝大多数的恶性肿瘤中，而正常组织，体细胞中却检测不到，这就为恶性肿瘤的早期诊断，治疗和预后开辟了一条新的思路。端粒是真核生物线性染色体末端一种特殊结构，由简单重复的富含G的DNA序列及相关蛋白组成。端粒酶是由小分子RNA和蛋白质组成的一种核糖和蛋白酶，Tahara等首先对105例肝癌，慢性肝病和正常肝组织进行端粒酶活性的检测发现，端粒酶阳性率在肝癌组织中为85％，其中HBV阳性的肝癌组织的端粒酶阳性率为100％，在慢性肝炎为50％，而在正常肝组织全部为阴性，本文就端粒，端粒酶与肝癌的关系作一综述。     

Geron公司的端粒酶研究取得进展

美国的研究者发现，结合于端粒酶RNA部分的反义分子在体外能杀死癌细胞。参与这项研究的Geron公司认为这是重要的进展，这将促使将端粒酶抑制剂开发成有效的抗癌药。端粒酶由RNA和蛋白质两部分组成，功能是在染色体末端添加核着酸形成端粒。通常端粒酶只在增殖细胞中有活性；在非癌细胞中，每个复制周期之后端粒缩短；当端粒缩短至临界长度时，该细胞死亡。然而，在癌细胞中，端粒酶的活性被重新激活，使癌细胞无限增殖。Geron公司以往的研究工作已经表明，端粒酶在12种不同类型肿瘤的90％的组织样品中被表达。在最近的研究中，Geron公…     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的体内体外抗人肝细胞癌的作用

目的：研究Bcl-2蛋白的过表达对Trail诱导肝癌细胞凋亡的影响,以及Trail蛋白体内和体外对人肝癌细胞的杀伤作用。方法：克隆Trail基因并在大肠杆菌中表达Trail重组蛋白。检测Trail重组蛋白在体内和体外对肿瘤的杀伤作用。用台盼蓝拒染法检测细胞的凋亡率。将真核细胞表达质粒pcDNA3-Bcl-2转染到人肝癌细胞BEL－7404细胞中,并通过G418 400mg/L筛选得到Bcl-2蛋白稳定表达的细胞株。结果：重组蛋白Trail能够有效地杀死人肝癌细胞（包括BEL－7404,SMMC－7721,和BEL－7402等细胞）。在体外,过量表达的Bcl-2蛋白能抑制Trail重组蛋白对人肝癌细胞BEL－7404的杀伤作用。重组蛋白Trail能够有效地抑制人肝癌细胞BEL－7404在裸鼠中形成实体瘤。结论：在体内和体外,Trail重组蛋白能够杀死肝癌细胞,Bcl-2蛋白过表达可以抑制Trail重组蛋白对肝癌细胞BEL－7404的杀伤作用。Trail蛋白是一种潜在的肝癌治疗剂。     

吡唑啉酮铜配合物通过内外信号途径诱导人肝癌细胞BEL-7404凋亡

目的探讨新型吡唑啉酮铜配合物(P-FAH-Cu-bpy)对人肝癌细胞BEL-7404的诱导凋亡机制。方法通过溶液法制备得到吡唑啉酮铜配合物P-FAH-Cu-bpy。X-射线单晶衍射实验测定晶体结构。MTT法检测P-FAH-Cu-bpy体外对BEL-7404细胞活性的影响。倒置显微镜和Hoechst 33258染色法观察细胞及核形态变化。流式细胞术检测P-FAHCu-bpy对BEL-7404细胞凋亡、周期、ROS、线粒体膜电位的影响。划痕实验检测细胞迁移。Western blot检测P-FAHCu-bpy对BEL-7404细胞凋亡、迁移及侵袭相关蛋白表达的影响。结果 P-FAH-Cu-bpy是一个具有扭曲的四方锥构型的五配位铜(Ⅱ)配合物;呈浓度和时间依赖性地抑制了BEL-7404细胞增殖,诱导了细胞凋亡,将细胞周期阻滞在G2/M期,降低了细胞线粒体膜电位,增加了胞内ROS水平;上调了细胞Bax、细胞色素C、Cleaved-caspase-3/9/8和Cleaved-PARP表达量,而下调了caspase-7、Bcl-2表达水平;抑制了细胞的迁移和侵袭。结论 P-FAH-Cu-bpy通过内外凋亡信号途径抑制了人肝癌细胞BEL-7404生长。     

蟾酥注射液诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的观察蟾酥注射液对人肝癌细胞凋亡的诱导作用。方法选择不同浓度蟾酥注射液分别与人肝癌BEL-7404细胞共同孵育24、48h,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期变化：琼脂糖凝胶电泳测定DNA Ladder；均与空白组做对照。结果流式细胞仪检测可见,各实验组细胞_1G、S期下降,G_2/M期升高,产生凋亡峰(sub-G_1期)；孵育48h,可见DNA Ladder出现。结论蟾酥注射液可以诱导人肝癌细胞BEL-7404凋亡。     

茶多酚对人肝癌BEL- 7404细胞端粒酶的抑制作用及诱导细胞凋亡的能力(英文)

目的　探讨茶多酚诱导肝癌BEL 740 4细胞凋亡作用和在体外对端粒酶活性的影响。方法　MTT法和活细胞计数法测定茶多酚对人肝癌细胞的生长抑制作用 ,PCR ELISA试剂盒测定细胞的端粒酶活性。细胞形态学变化和DNA凝胶电泳观察细胞凋亡现象。结果　茶多酚体外对肝癌BEL 740 4细胞有明显的抑制作用 ,且这种抑制作用呈浓度和时间依赖性。采用浓度为 0 2和 0 1g·L- 1 的茶多酚作用 48h后的细胞出现DNA梯度条带和典型的凋亡形态学变化如核固缩、胞膜皱缩、胞核碎裂 ,凋亡小体形成等。茶多酚作用后 ,肝癌BEL 740 4细胞中端粒酶活性明显下降。结论　茶多酚在一定浓度下能诱导肝癌BEL 740 4细胞凋亡 ,其抗癌机制与抑制端粒酶活性有关。     

广西瑶药鸡爪风提取物抑制4种人肝癌细胞株体外增殖作用的研究

目的探讨广西瑶药鸡爪风(Desmos chinensis Lour.)体积分数85%乙醇提取物在体外对HCC-LM3、BEL-7404、SMMC-7721、HepG2等4种人肝癌细胞株增殖的影响。方法用体积分数85%乙醇渗漉法提取鸡爪风中组分,采用MTT法评价鸡爪风体积分数85%乙醇提取物对体外培养4种人肝癌细胞株生长的影响情况。结果给予不同质量浓度(0.8,0.4,0.2,0.1和0.05mg·mL-1)体积分数85%乙醇提取物培养HCC-LM3、BEL-7404细胞24和48h,不同质量浓度(0.5,0.25,0.125,0.075和0.037 5mg·mL-1)体积分数85%乙醇提取物培养SMMC-7721、HepG2细胞24和48h,均表现出一定的抑制细胞增殖作用,且作用随药物质量浓度增加而增大、随作用时间的延长而升高,最高抑制率达90%以上。结论鸡爪风体积分数85%乙醇提取物对体外培养的4种不同人肝癌细胞株的增殖均有抑制作用,呈剂量与时间依赖性。     

红鱼眼叶化学成分对人肝癌BEL-7404细胞株增殖的影响

目的：观察红鱼眼叶不同提取物及其化学成分对人肝癌BEL-7404细胞增殖的影响。方法：采用MTT法,观察红鱼眼叶不同提取物的含药血清对人肝癌BEL-7404细胞的体外抑制作用并从有效部位分离出单体成分,观察各化学成分对肝癌BEL-7404细胞的影响。结果：与20%空白血清对照组比较,红鱼眼叶乙酸乙酯提取物20%含药血清对人肝癌BEL-7404细胞有明显的体外抑制作用（P<0.05）;红鱼眼叶乙酸乙酯提取物中没食子酸、柯里拉京、短叶苏木酚酸乙酯对人肝癌细胞BEL-7404的增殖具有明显抑制作用,其IC₅₀分别为46.81,32.40,41.15 μg·mL^-1,没食子酸乙酯对人肝癌细胞BEL-7404的增殖基本无抑制作用,其IC₅₀为-6.67 μg·mL^-1。结论：红鱼眼叶乙酸乙酯提取物能抑制人肝癌BEL-7404细胞的增殖;从红鱼眼叶乙酸乙酯中分离的没食子酸、柯里拉京、短叶苏木酚酸乙酯对人肝癌细胞BEL-7404的增殖具有抑制作用。     

格尔德霉素与抗肿瘤药物的协同作用

目的　研究格尔德霉素(Geldanamycin ,GDM)对人肝癌BEL-7402细胞周期的影响及顺铂和丝裂霉素C等药物联用GDM后的体外体内抗肿瘤作用。方法　用MTT法检测药物对肝癌BEL-7402细胞的生长抑制作用;流式细胞术分析细胞周期;小鼠移植性肝癌22模型研究药物的体内抗肿瘤作用。结果　MTT法测得GDM对BEL7402细胞的生长抑制作用IC₅₀为0.28μmol·L^-1。GDM 0.1,1.0和10μmol·L^-1处理BEL-7402细胞,引起S期细胞比例下降和G2/M期的明显阻断。在较低浓度,GDM 0.1μmol·L^-1和0.2 μmol·L^-1均增强一系列化疗药物包括顺铂、丝裂霉素C、阿霉素和阿糖胞苷对BEL-7402细胞的细胞毒作用。小鼠移植肝癌22模型中,GDM 0.38mg·kg-1增强顺铂和丝裂霉素C的抗肿瘤作用。协同作用十分显著,CDI<0.7。结论　这些结果提示GDM作为以抑制热休克蛋白90 (Hsp90 )功能为靶点的生化调节剂可能应用于肿瘤联合化疗的前景。     

FUT2基因参与人肿瘤细胞系BEL-7404、SGC-7901和SPC-A-1上H血型抗原的表达

目的:调查H血型抗原在人肿瘤细胞系BEL-7404、SPC-A-1和SGC-7901上的表达.方法:免疫组织化学和流式细胞术分析细胞上H抗原在体内外的表达.RT-PCR,Southern印迹和限制性酶切分析确定FUT2基因在细胞中的表达.结果:SGC-7901,BEL-7404和SPC-A-1细胞表面H抗原表达的平均荧光强度分别为162±43,81±25和28±17.并且用RT-PCR从这些细胞中扩增出(?)约1.0 kb DNA条带,此条带能被FUT2特异核酸探针检出.结论:人肿瘤细胞系BEL-7404,SPC-A-1和SGC-7901于体内外在细胞表面均表达H抗原,但表达水平在细胞之间变化显著.FUT2基因的表达在细胞膜上产生这些抗原.     

苦参碱对人肝癌细胞及正常肝细胞增殖和粘附功能影响的比较

目的观察苦参碱对人肝癌细胞BEL-7404及正常肝细胞QSG-7701增殖和粘附能力的影响。方法采用MTT法测定苦参碱对BEL-7404和QSG-7701的增殖;倒置相差显微镜观察细胞形态学变化;粘附实验检测细胞粘附率。结果苦参碱1.0～4.0g/L能有效抑制BEL-7404细胞的增殖。0.5～1.0g/L浓度的苦参碱能有效地诱导BEL-7404分化。当苦参碱的浓度低于0.5g/L时,其对QSG-7701细胞的增殖有一定的促进作用。0.25、0.5、0.75、1.0g/L苦参碱处理72h后,BEL-7404细胞黏附抑制率分别为18.6%、24.4%、30.3%、44.7%,与对照组比较差异均有显著性（P〈0.01）;而QSG-7701细胞黏附抑制率分别为1.7%、3.5%、6.1%、37.8%,只有1.0g/L浓度的苦参碱与对照组比较有差异显著性（P〈0.01）。结论苦参碱能有效抑制肝癌细胞BEL-7404的增殖,且抑制作用具有时间、剂量依赖性;低浓度能有效地诱导肝癌细胞分化;高浓度的苦参碱有较强的抑制人正常肝细胞增殖作用,低浓度具有一定的生长刺激作用;苦参碱抑制BEL-7404细胞粘附。     

正常人肝细胞和肝癌细胞对力达霉素诱导的有丝分裂性细胞死亡的差异

[摘要]目的：探讨力达霉素（lidamycin, LDM）诱导人肝癌BEL-7402和正常人肝L-02细胞出现的有丝分裂性细胞死亡的差异。方法：采用MTT法观察LDM对BEL-7402和L-02细胞生长曲线的影响;使用Giemsa染色和流式细胞术观察有丝分裂性细胞死亡特征;用Western blot法检测蛋白表达变化。结果：LDM抑制BEL-7402和L-02细胞的生长,二者均表现出有丝分裂性细胞死亡的特征,即细胞体积增大、G2/M期阻滞、出现多核化,但BEL-7402细胞对LDM更敏感。在LDM处理的BEL-7402和L-02细胞中,与凋亡相关的Bax和Smac的蛋白表达水平没有增加,caspase-3和caspase-9未被活化,但L-02细胞的Akt通路被激活。结论：人正常L-02细胞对LDM引起的有丝分裂性细胞死亡明显低于人肝癌BEL-7402细胞,对LDM的反应敏感性存在差异的原因可能与Akt信号通路有关。