人肾间质纤维母细胞培养及血管紧张素Ⅱ2型受体转染表达

目的：体外培养人肾间质纤维母细胞（hRIF)并用腺病毒介导转染表达血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）2型受体（AT2R）。方法：用肾穿刺活检法取慢性肾小球肾炎病人肾组织,以常规组织块贴壁法培养hRIF;构建带AT2R基因的重组复制缺陷型腺病毒载体（AdCMV-AT2R),体外转染hRIF;用RT-PCR方法检测AT2RmRNA表达,免疫组织化学法及蛋白免疫印迹法检测AT2R蛋白表达,流式细胞仪检测AT2R表达0率,同时检测AT1R的表达变化。结果：用肾活检组织成功培养出hRIF,构建的AdCMV-AT2R体外转染培养hRIF表达率为90.57%,以免疫组化、免疫印迹和RT-PCR检测AT2R表明,转染后AT2R表达明显增强。并随表达时间延长而增加,48h为表达峰值。AT2R转染表达不影响AT1R表达,结论：腺病毒载体可较高效率介导AT2R在hRIF的转染表达,ATIR表达不受其影响。转染表达AT2R的hRIF可作为研究AngⅡ在肾间质纤维化中作用的良好细胞模型。     

全反式维甲酸对5/6肾大部切除大鼠肾素-血管紧张素系统的影响

目的 观察全反式维甲酸（atRA）对残余肾肾素-血管紧张素系统（RAS）的影响。 方法 采用5/6肾大部切除大鼠模型，分别给予5 mg·kg-1·d-1（n＝8）、10 mg·kg-1·d-1（n＝8）、20 mg·kg-1·d-1（n＝8）的atRA灌胃。单纯肾大部切除非干预组（NX组，n＝8）和假手术组（sham组，n＝8）为对照。放射免疫法检测大鼠肾皮质肾素、血管紧张素水平。Western印迹检测肾组织血管紧张素1型受体（AT1R）水平。实时定量PCR方法检测激活蛋白1（AP-1）亚单位c-jun和c-fos mRNA的表达水平。 结果 atRA 灌胃10周时， 3种剂量atRA组收缩压明显低于NX组（P < 0.05），但不同剂量atRA组间差异无统计学意义。NX组大鼠肾皮质肾素和血管紧张素Ⅱ水平均显著高于sham组（P < 0.05）。atRA治疗组肾皮质肾素和血管紧张素Ⅱ水平均显著低于NX组，其中20 mg·kg-1·d-1组二者水平显著低于其他两个剂量组。atRA抑制残肾皮质AT1R表达约30％，而20 mg·kg-1·d-1剂量组AT1R表达水平最低。atRA组AP-1亚基c-jun和c-fos mRNA表达显著低于NX组（P < 0.05）。 结论 atRA能明显抑制5/6肾大部切除大鼠肾皮质RAS主要成分的高表达。     

5／6肾切除大鼠细胞增殖和凋亡的动态变化及意义

目的 了解细胞增殖与凋亡在肾小球硬化和肾间质纤维化中的意义。方法 动态观察5／6肾切除大鼠模型第1～40周中不同时段肾脏增殖细胞核抗原（PCNA）的表达和细胞凋亡（TUNEL）情况并计算增殖和凋亡指数、检测肾组织Bax、Bcl-2蛋白的表达水平。结果 5／6肾切除大鼠残肾组织增殖和凋亡指数均升高；肾小球、肾小管的增殖和凋亡指数先升高后下降；肾间质的增殖和凋亡指数一直高居不下。Pax蛋白（促凋亡基因）在病变过程中呈波浪式变化，高峰分别在第4周和第40周。而Bcl-2（抑制凋亡因子）表达轻度增加。结论 增殖和凋亡的平衡紊乱在5／6肾切除大鼠的发病中起着重要的作用肾小球、肾小管实质细胞的凋亡持续增加，肾间质的过度增殖最终导致肾小球硬化、肾小管萎缩和间质纤维化。     

DJ-1癌基因在肾间质纤维化中表达的实验研究

目的 观察DJ-1癌基因在肾纤维化过程中表达水平、细胞内定位及高表达 DJ-1基因对人肾小管上皮细胞E钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（vimentin）蛋白表达和β连环素（β-catenin）酪氨酸磷酸化水平的影响。 方法 体外实验以人肾小管上皮细胞为研究对象,10 μg/L TGF-β1刺激72 h诱导人肾小管上皮细胞转分化;Western印迹法检测正常组和TGF-β1干预组细胞内E-cadherin、vimentin和DJ-1蛋白表达;RT-PCR法检测两组细胞内DJ-1 mRNA表达水平;应用激光共聚焦显微镜观察DJ-1在细胞内的定位。体内实验以SD大鼠为研究对象,5/6肾切除法制作慢性肾纤维化模型;常规检测BUN和Scr水平;Masson染色检测肾组织纤维化水平;免疫组化法检测肾组织内DJ-1蛋白的表达和分布。脂质体法介导含野生型DJ-1基因的重组真核表达质粒pEGFP-N1-DJ-1或空载体转染人肾小管上皮细胞,倒置荧光显微镜和Western 印迹法鉴定转染效率后,Western 印迹法检测正常组、pEGFP-N1-DJ-1转染组和空载体转染组细胞内E-cadherin、vimentin蛋白的表达及各组β-catenin酪氨酸磷酸化水平。 结果 正常组细胞表达E-cadherin和DJ-1,几乎不表达vimentin;TGF-β1干预组细胞表达vimentin,表达较少E-cadherin,DJ-1 mRNA和蛋白表达均较正常组细胞显著增多（P < 0.05）。DJ-1在正常细胞内大多分布在细胞质,部分分布在细胞核;在转分化细胞内胞质和胞核内表达均有增加,且胞核内增加更显著。假手术组大鼠肾功能正常,肾组织内未见纤维组织,DJ-1主要表达于肾小管,肾小球内几乎没有表达。模型组大鼠肾功能不全,肾组织内可见明显纤维化结构,肾小管内DJ-1表达明显增加。pEGFP-N1-DJ-1转染组较正常组和空载体转染组细胞内DJ-1和vimentin蛋白表达明显增加且β-catenin酪氨酸磷酸化水平升高, 而 E-cadherin蛋白表达减少。 结论 DJ-1基因高表达可能促进了肾间质纤维化。     

黄葵胶囊对5/6肾切除大鼠肾间质纤维化中炎性因子表达的影响

目的：本文拟观察黄葵胶囊对慢性肾间质纤维化中炎性因子表达的影响。方法：以5/6肾切除方法建立肾间质纤维化模型作为研究对象,随机分为模型组、黄葵治疗组及假手术组,经治疗后检测24h尿蛋白定量、血清肌酐（Scr）;测定细胞间黏附分子1（ICAM-1）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）的表达与变化情况;通过肾组织Masson染色进行病理形态学观察等。结果：经黄葵胶囊治疗后,其肾功能显著改善,肾小球硬化程度、系膜区增生程度、小管萎缩、扩张、蛋白管型形成及间质纤维化范围等均较模型组明显减轻,提示黄葵胶囊对5/6肾切除大鼠的肾脏有保护作用（P〈0.01）。结论：黄葵胶囊可能通过调节ICAM-1、MCP-1炎性因子的表达,从而延缓肾间质纤维化的进展。     

甘草酸二胺对输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的治疗作用及机制

目的：探讨甘草酸二胺对肾间质纤维化的作用及其机制。方法：以Wistar大鼠单侧输尿管梗阻（UUO）为模型，在不同的时间点（7d、14d、28d）观察梗阻侧肾间质纤维化指数；致纤维化的转化生长因子β1（TGF-β1）的表达情况；肾皮质中与肾脏纤维化相关的Smurf2、Smad7信号蛋白等的mRNA及蛋白表达。结果：（1）随着梗阻时间的延长，肾间质纤维化程度逐渐加重，Smurf2基因和蛋白质明显上调，呈时间依赖性（P〈0．01）；Smad7蛋白呈时间依赖性下调（P〈0．01），Smad7基因在各个时间点无明显变化；TGF-β1基因在UUO后第7d达高峰，此后逐渐下降，但仍然高于假手术组（P〈0．01）。（2）甘草酸能改善UUO所致的肾间质纤维化程度（P〈0．01），下调肾脏组织TGF-β1基因的表达（尸〈0．01）；减少Smurf2基因和蛋白质的表达，同时上调TGF-β1信号传导中抑制性因子Smad7的表达（P〈0．01）。结论：甘草酸二胺能保护UUO所致的肾间质纤维化损伤。其可能的作用机制为减少Smurf2核酸和蛋白质的表达，增加抗纤维化作用的Smad7蛋白表达；减少TGF-β1表达，阻止TGF-β1信号传导，从而阻断肾间质的纤维化。     

CIP4在肾间质纤维化中的表达及作用

目的 观察骨架调节蛋白CIP4（Cdc42 interacting protein-4）在肾纤维化过程中表达水平、细胞内定位及高表达的CIP4基因对人肾小管上皮细胞E钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（vimentin）的表达和β连环素（β-catenin）酪氨酸磷酸化水平的影响。 方法 体外实验以人近端肾小管上皮细胞（HK-2细胞）为研究对象,10 μg/L TGF-β1刺激72 h诱导HK-2细胞转分化; Western 印迹法检测各组细胞内CIP4、E-cadherin、vimentin蛋白的表达;RT-PCR法检测细胞内CIP4 mRNA表达水平;激光共聚焦显微镜观察CIP4在细胞内定位。体内实验以SD大鼠为研究对象,5/6肾切除法制作慢性肾纤维化模型;常规检测BUN和Scr水平;Masson染色检测肾组织纤维化水平;免疫组化法检测肾组织内CIP4蛋白的表达和分布。脂质体法介导含野生型CIP4的重组真核表达质粒pcDNA3.1-CIP4或pcDNA3.1-Zeo（空载体）转染HK-2细胞,Wetern 印迹法检查转染的效率。稳定转染成功后,Wetern 印迹法检测正常组、pcDNA-CIP4转染组和空载体转染组细胞内E-cadherin、vimentin蛋白的表达和β-catenin酪氨酸磷酸化水平。 结果 正常HK-2细胞表达E-cadherin和少量的CIP4,几乎不表达vimentin。TGF-β1干预组细胞vimentin蛋白表达增加（P ＜ 0.05）,E-cadherin蛋白表达减少（P ＜ 0.05）,CIP4 mRNA和蛋白表达均显著增多（P ＜ 0.05）。CIP4在正常细胞内大部分在细胞膜,少量在细胞质,在转分化的HK-2细胞表达显著增多,并向细胞质和细胞核聚集。假手术组大鼠肾功能正常,肾组织内未见明显纤维化组织,CIP4在肾小管表达较少,肾小球内几乎不表达;模型组大鼠BUN和Scr增高,肾组织内可见明显纤维化组织,CIP4在肾小管表达明显增加。pcDNA3.1-CIP4转染组较正常组和空载体转染组细胞内CIP4表达增多（P ＜ 0.05）,β-catenin酪氨酸磷酸化水平和vimentin蛋白表达增加（P ＜ 0.05）,而E-cadherin蛋白表达减少（P ＜ 0.05）。 结论 CIP4高表达可能参与肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化,促进肾间质纤维化。     

洛沙坦对肾大部分切除肾功能衰竭大鼠心脏的保护作用

目的探讨洛沙坦对肾大部分切除肾功能衰竭(肾衰)大鼠心脏的保护作用。方法肾大部切除制备肾衰模型(RF组),治疗组(RF Los组)洛沙坦剂量为10mg·kg-1·d-1灌胃,对照组(Sham组)用生理盐水灌喂。第12周观察实验动物心脏的有关变化。结果RF组大鼠动脉收缩压显著升高,心肌细胞肥大,心肌间质纤维化,而RF Los组收缩压得到控制,心肌细胞肥大和心肌间质纤维化程度明显减轻。RF Los组血管紧张素Ⅱ-1型受体(AT1R)mRNA的表达则较RF组显著下调(P<0.05)。结论洛沙坦通过阻断AT1R抑制肾素-血管紧张素系统(RAS)而具有明显的降压及防治肾大部分切除肾衰大鼠左心室肥厚和心肌间质纤维化的作用。     

肥大细胞参与蛋白负荷肾病大鼠肾间质的纤维化

目的 观察肥大细胞（MC）在蛋白负荷肾病肾间质纤维化大鼠模型肾脏的分布并探讨其与蛋白尿所致肾间质纤维化、肾间质转化生长因子β1（TGF-β1）及干细胞因子（SCF）表达的关系。 方法 60只SD大鼠行右肾全切术后，模型组腹腔注射牛血清白蛋白（BSA）复制蛋白负荷肾病大鼠的模型（n=30），对照组腹腔注射生理盐水（n=30），分别于模型成功后第3、7和11周，随机处死10只大鼠，检测尿蛋白和血生化指标。采用甲苯胺蓝组织化学和糜蛋白酶（chymase）免疫组化的方法观察肥大细胞在肾脏的浸润。采用免疫组化法检测TGF-β1、SCF在肾组织的表达，并分析它们之间及与蛋白尿所致肾间质纤维化的相关性。 结果 模型组大鼠随着BSA注射量的增加, 尿蛋白量（24 h）增加，第7周达到高峰[(199.1±98.4) mg], 以后开始下降，第11周为(133.7±67.8) mg。在模型组大鼠的肾皮质、髓质均可见甲苯胺蓝染色阳性及chymase阳性的肥大细胞, 以间质纤维化区域最为多见。随着肾间质纤维化的加重, 肥大细胞数目增多，各时间点模型组大鼠与对照组差异均有统计学意义（P < 0.05）。TGF-β1及SCF主要在肾小管、间质、部分系膜细胞及壁层上皮细胞表达，随时间的延长表达量增加，各时间点模型组大鼠与对照组差异均有统计学意义（P < 0.05）。肥大细胞的数量与肾间质纤维化的程度、TGF-β1和SCF的表达均呈正相关(r分别为0.722、0.521、0.916, 均P < 0.01)。 结论 肥大细胞浸润与蛋白负荷肾病大鼠肾间质纤维化程度密切相关。蛋白尿可能通过SCF介导肥大细胞到肾脏，释放chymase，促进肾组织TGF-β1表达，介导蛋白尿所致的肾间质纤维化。     

血管紧张素Ⅱ2型受体基因转染对肾间质纤维化的防治意义

目的 探讨血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)基因体外转染人肾间质成纤维细胞(hRIF)后对肾间质纤维化进程的影响。方法 构建AT2R基因腺病毒载体(AdCMV-AT2R),体外转染hRIF,用流式细胞仪、BrdU掺入法检测hRIF增殖。用改良Boyden趋化小室、激光共聚焦显微镜查F-actin检测hRIF迁移。用原位末端标记(TUNEL)、bcl-2和bax mRNA表达检测hRIF凋亡。结果 hRIF转染表达AT2R。S期与G_2、M期细胞比例受血管紧张素(Aug)Ⅱ作用后无明显变化(8.1%对13.9%,P>0.05)。BrdU平均掺入量降低54.2%(P<0.05)。迁移细胞数抑制比例达62.2%(P<0.01)。F-actin表达明显受抑制。TUNEL染色法显示大量凋亡细胞、bcl-2表达无明显变化、bax表达增加76.3%(P<0.05)。结论 hRIF体外转染表达AT2R基因后,明显抑制了细胞的增殖与迁移,促进了细胞凋亡,对肾间质纤维化的防治有积极的作用。     

Effect of candesartan cilexetil (TCV-116) in rats with chronic renal failure.

BACKGROUND: Inhibition of the renin-angiotensin system by both angiotensin II type 1 receptor antagonists (AT1As) and angiotensin I-converting enzyme inhibitors (ACEIs) shows renoprotective effects in rats with chronic renal failure when treatment is started in the early phase of renal injury. In this study, we examined the renal protective effects of candesartan cilexetil (TCV-116), an AT1A, and enalapril, an ACEI, in the progressive phase of renal injury in 5/6 nephrectomized rats. METHODS: Candesartan cilexetil (1 mg/kg/day) and enalapril (10 mg/kg/day) were orally administered once a day for 4 weeks (the short-term experiment) or 16 weeks (the long-term experiment) to 5/6 nephrectomized rats beginning 15 weeks after the nephrectomy, that is, after they had already showed marked proteinuria. RESULTS: In vehicle-treated rats, proteinuria, glomerulosclerosis, and interstitial fibrosis developed. Moreover, enhanced expression of transforming growth factor-beta1 (TGF-beta1) in the injured glomeruli was observed. These adverse changes progressed with time, and in the short-term experiment, both drugs inhibited them. In the long-term experiment, the progressive proteinuria and the elevation of blood pressure were similarly attenuated by both drugs. However, candesartan cilexetil significantly inhibited the progression of glomerulosclerosis, the expression of TGF-beta1, and interstitial fibrosis, whereas enalapril did not. CONCLUSION: These results indicate that candesartan cilexetil shows potent and long-term preventive effects against the progression of previously developed renal injury.     

Erbin在肾间质纤维化中的表达和作用

目的 探讨Erbin在肾脏间质纤维化中表达量的变化及上调Erbin对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK52E）转分化的影响。 方法 体内实验采用SD大鼠5/6肾切除法建立肾纤维化动物模型,收集并检测各组血清中Scr、BUN水平;Masson染色观察肾间质纤维化程度;免疫组化及Western印迹检测Erbin的分布与表达。 体外实验采用TGF-β1（10 μg/L）刺激NRK52E细胞72 h建立上皮细胞-间充质转分化（EMT）细胞模型;免疫荧光及Western印迹法检测E钙黏蛋白（E-cadherin）和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达变化;RT-PCR及Western 印迹法检测Erbin的表达变化。用脂质体2000将质粒 Prk5-myc-Erbin瞬时转染至NRK52E细胞,Western印迹法观察上调Erbin表达后对上述各种指标的影响。 结果 （1）假手术组大鼠肾功能正常[Scr（33.96±7.28） μmol/L、BUN（8.11±2.55） mmol/L],Masson染色未见肾间质纤维化,Erbin在肾小管表达较少;模型组大鼠Scr [（140.52±61.11） μmol/L]、BUN[（34.23±7.66） mmol/L] 均显著高于假手术组（均P < 0.05）,肾间质可见明显纤维化,Erbin 在肾小管表达也明显增加,是假手术组的2.9倍（P < 0.01）。（2）正常NRK52E 细胞表达E-cadherin,少量表达Erbin和α-SMA。TGF-β1刺激后,NRK52E细胞E-cadherin表达显著减少,Erbin和α-SMA则表达增加（均P < 0.05）;而转染质粒Prk5-myc-Erbin可逆转TGF-β1诱导的NRK52E细胞E-cadherin表达下调,并可抑制α-SMA表达上调（均P < 0.05）。 结论 Erbin在肾间质纤维化中表达增加,上调Erbin表达可抑制TGF-β1诱导NRK52E发生EMT, 提示Erbin在肾脏纤维化中可发挥保护作用。     

内质网应激相关凋亡途径参与单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化

目的 探讨内质网应激（ERS）相关凋亡途径在单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾间质纤维化发生、发展中的作用。 方法 健康雄性Wistar大鼠25只,按随机数字表法分为UUO模型组（n=18）和假手术组（n=7）,UUO模型组行左侧输尿管结扎术,假手术组仅分离输尿管不结扎,分别于术后3 d、7 d、14 d处死各组大鼠,行HE和Masson染色,观察肾脏病理变化;比色法测定肾组织羟脯氨酸（HYP）含量;免疫组化法检测α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）;原位末端标记法（TUNEL）与DNA电泳观察肾小管间质细胞凋亡情况;RT-PCR法检测梗阻侧肾组织ERS相关分子葡萄糖调节蛋白78（GRP78）mRNA表达变化;Western印迹法分析凋亡相关蛋白半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）和GRP78的蛋白表达变化。 结果 与假手术组比较,UUO模型组肾脏病理改变加重,肾间质纤维化程度随梗阻时间延长逐渐加重,肾组织HYP含量显著升高（P < 0.05）,肾组织α-SMA也在肾小管间质细胞广泛表达,TUNEL染色及DNA琼脂糖凝胶电泳提示大量的肾小管间质细胞凋亡。UUO模型组GRP78 mRNA表达于术后3 d即发生显著上调,而蛋白表达在术后7 d开始出现显著变化,与假手术组差异均有统计学意义（均P < 0.01）;在此后观察期间内GRP78 mRNA和蛋白均持续高水平表达。模型组大鼠肾组织caspase-3的蛋白表达在UUO术后3 d即有显著上调（P < 0.05）,且随着梗阻时间延长进行性升高,于术后7 d、14 d增多更为显著,与假手术组差异均有统计学意义（P < 0.05）。相关分析显示GRP78蛋白表达与肾组织HYP含量和caspase-3蛋白表达均呈正相关（r = 0.657,P < 0.01;r = 0.714,P < 0.01）。 结论 UUO早期即可诱导ERS标志蛋白表达变化,触发ERS。长期ERS可诱导肾小管间质细胞凋亡;caspase-3介导的ERS相关凋亡途径可能参与了肾间质纤维化过程。     

参附注射液对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏肝细胞生长因子表达的影响

目的：探讨单侧输尿管梗阻后大鼠肾间质纤维化发生过程中肝细胞生长因子（HGF）的表达及中药参附注射液对其的影响。方法：采用单侧输尿管结扎（UUO）制造梗阻性肾病模型，将56只大鼠随机分为对照组（假手术组）、手术组（UUO组）和治疗组（UUO＋参附），术后7d、14d观察肾组织病理改变，应用免疫组织化学方法检测肾组织中HGF的表达。结果：与对照组相比，手术组肾间质出现了明显的纤维化，HGF的表达在术后第7天明显增加，第14天较第7天减弱，与手术组相比，治疗组肾间质纤维化明显减轻，而且HGF的表达在术后第7天明显上调，第14天较第7天上调更明显，有统计学差异（P〈0．05）。结论：参附注射液可以上调肾组织HGF的表达，减轻肾小管一间质纤维化，发挥肾保护作用。     

六味地黄丸对5/6肾切除大鼠肾组织中HIF-1α、PAI-1和TIMP-1表达的影响

目的：探讨缺氧诱导因子1α（HIF-1α）在肾间质纤维化中的表达及作用,观察六味地黄丸对其表达的影响.方法：用5/6肾切除大鼠制作肾间质纤维化模型,分假手术组,模型组和六味地黄丸组.术后8周,常规HE染色观察肾脏组织病理变化,用Masson染色法检测胶原在肾脏的沉积;免疫组化法检测HIF-1α、PAI-1和TIMP-1在肾组织中的表达;Western blot法检测HIF-1α蛋白的表达.结果：与假手术组比较,模型组肾组织中HIF-1α、PAI-1和TIMP-1蛋白水平均明显升高（P＜0.01）.与模型组比较,六味地黄丸组肾组织中HIF-1α、PAI-1和TIMP-1蛋白水平均明显降低（P＜0.05或P＜0.01）.结论：HIF-1α通过调节PAI-1和TIMP-1的表达,抑制细胞外基质降解而导致肾间质纤维化,六味地黄丸可通过减少HIF-1α蛋白水平来减轻肾间质纤维化.     

人组织型激肽释放酶基因对大鼠糖尿病肾病的影响及其机制

目的：探讨人组织型激肽释放酶基因（human tissue kallikrein,HK）对糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）的影响及其机制。方法：48只雄性Wistar大鼠随机分为普通饲料组（即正常组）和高脂高糖饲料组。高脂高糖饲料组以小剂量链脲佐菌素加高脂高糖饮食诱导2型糖尿病（diabete mellitus,DM）模型,造模后随机分为两组,分别经尾静脉导入重组腺相关病毒（recombinant adeno-associated viruses,rAAV）介导的HK基因（HK组）以及报告基因beta-半乳糖苷酶（beta-galac-tosidase,LacZ）（LacZ组）,观察12周后处死实验动物,留取心、肝、肾等组织。Western blot检测HK在各组织的表达。PAS染色观察肾小球硬化情况,天狼猩红染色观察肾脏纤维化情况。24h尿微量白蛋白（microalbuminuria,mAlb）与尿渗透压检测评定肾功能,免疫组织化学以及Western blot检测肾脏转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）的表达。结果：rAAV介导的HK可在2型DM大鼠的肝脏、肾脏、心脏表达,而且相较于LacZ组且表达增强;PAS染色显示：LacZ组肾脏出现中度的肾小球系膜细胞及基质增生,血管周围间质细胞浸润,血管壁增厚,以及肾小囊滴状病变和毛细血管纤维帽。另外肾小管大量的空泡变性,肾小管腔内出现较多蛋白质管型,HK组较LacZ组明显好转;天狼星红染色显示：LacZ组肾脏间质、血管壁胶原沉积,肾小球细动脉管壁增厚,而HK组病变较轻（P〈0.05）;24hmAlb排泄量LacZ组比正常组明显增加（P〈0.05）,HK组较LacZ组排泄量显著下降（P〈0.05）。LacZ组与正常组比较,尿渗透压明显下降（P〈0.05）,HK组较LacZ组显著上升（P〈0.05）;TGF-β1主要表达于LacZ组的肾小管上皮细胞,HK组较LacZ组TGF-β1明显下调（P〈0.05）。结论：HK基因明显改善DN,保护肾功能,原因可能与下调肾脏TGF-β1的表达有关。     

核因子κB受体活化因子及其配体在5/6肾切除大鼠肾脏中表达及缬沙坦对其影响

目的 探讨核因子κB受体活化因子(RANK)及其配体(RANKL)在5/6肾切除大鼠(STNx)残肾中表达的意义,以及血管紧张素受体拮抗剂(ARB)缬沙坦对其表达的影响。方法 制备5/6肾切除的SD大鼠动物模型, 分为未给药组、治疗组及假手术组。治疗组在5/6肾切除后即给予缬沙坦治疗,大鼠分别于第4、8、12 周杀检。第12 周时用ELISA方法检测大鼠血清中骨保护蛋白(OPG)及RANKL水平;显微镜观察肾脏病理变化;免疫组化方法及Western印迹方法分析RANK/RANKL/OPG蛋白表达;RT-PCR检测RANK/RANKL/OPG的mRNA表达。结果 (1)第12周时假手术组尿蛋白量为(6.1±0.6) mg/24 h;未给药组为(19.0±1.5) mg/24 h;治疗组为(13.4±1.2) mg/24 h,3 组间的差异有统计学意义(P均 < 0.01)。(2)第12周时未给药组及治疗组肾脏均有明显硬化,但治疗组硬化程度较未给药组轻。(3)未给药组RANK及RANKL蛋白及mRNA的表达均高于治疗组及假手术组,3 组间的差异有统计学意义(P均 < 0.01)。OPG蛋白及mRNA的表达在3 组间无显著性差异。(4)血清中OPG及RANKL含量在3 组间的差异亦无统计学意义。结论 在5/6肾切除大鼠残肾中表达上调的RANK和RANKL可能参与了肾小球硬化的发生发展。抑制RANK和RANKL的表达可能是缬沙坦延缓肾小球硬化的原因之一。     

低氧诱导因子1α／结缔组织生长因子在肾间质纤维化中的表达及关系

目的探讨低氧诱导因子1α与结缔组织生长因子致肾间质纤维化的作用及关系。方法应用单侧输尿管结扎手术建立单侧输尿管结扎模型,将32只健康成年的雄性SD大鼠随机分为2组,假手术组（Sham组,n=16）、模型组（n=16）。分别于术后第7天、第14天处死大鼠,留取肾组织行HE染色并观察病理变化。应用原位杂交检测低氧诱导因子1a、结缔组织生长因子在肾小管间质中的表达,并检测二者之间的相关性。结果与7天对照组比较,7天模型组肾间质面积明显增加（P〈0．01）。与14天对照组比较,14天模型组肾问质面积也明显增加（P〈0．01）。与7天模型组比较,14天模型组大鼠肾脏间质纤维化显著增加（P〈0．05）,肾间质面积（0．51±0．04）、（0．82±0．06）,表明梗阻性肾病大鼠肾脏组织形态学呈进行性损害。7天模型组肾间质HIF1α及CTGFmRNA的表达较7天对照组均显著增加（均P〈0．01）。14天模型组肾间质HIF1αmRNA的表达明显增加（P〈0．05）,为（19．69±4．11）、（30．45±6．27）,CTGFmRNA的表达亦明显增加（P〈0．05）,分别为（21．38±4．26）、（37．18±7．52）,且HIF1αmRNA的表达与CTGFmRNA的表达在第7天、14天均呈正相关（分别为r=0．697,P〈0．01;r=0．715,P〈0．01）。结论低氧诱导因子1α及结缔组织生长因子促进了肾间质纤维化发生和发展的过程,二者之间相关性显著。