姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠Aβ及Aβ寡聚体表达的影响

目的运用免疫组织化学方法和蛋白质印迹(Western-blot)方法观察淀粉样前体蛋白/早老素1(APP/PS1)双转基因小鼠治疗前后β淀粉样蛋白42(Aβ42)、β淀粉样蛋白40(Aβ40)和可溶性Aβ寡聚体(ADDLs)的变化,判断姜黄素(curcumin)对Aβ级联反应的影响。方法将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、阳性对照组(罗格列酮组)及姜黄素大、中、小剂量组。灌胃3个月后,以免疫组织化学方法和Western blot方法检测Aβ42、Aβ40和ADDLs蛋白表达量的变化。结果免疫组织化学检测模型组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs阳性细胞均较正常组增加,Aβ40和Aβ42相比,阳性细胞计数增加以Aβ42更加明显,各干预组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs阳性细胞明显降低。Western blot检测模型组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs蛋白表达比正常对照组明显增加(P<0.01);与模型组小鼠相比,虽然各干预组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs蛋白表达均减少,罗格列酮组和姜黄素中剂量组小鼠海马Aβ40和Aβ42的蛋白表达显著减低(P<0.01);罗格列酮组小鼠海马ADDLs的蛋白表达减低显著(P<0.01),姜黄素大、中剂量组小鼠海马ADDLs的蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论姜黄素给药3个月能显著减少APP/PS1双转基因小鼠脑内海马CA1区Aβ40、Aβ42和ADDLs的表达,对Aβ42减低更为明显。其潜在的神经保护机制是否通过下调Aβ42和ADDLs的产生,增强Aβ42和ADDLs的降解影响Aβ级联反应,有待进一步研究。     

姜黄素对阿尔茨海默双转基因小鼠海马超微结构的影响

目的 应用电子显微镜,观察β-淀粉样前体蛋白swe基因/早老蛋白1dE9基因(APPswe/PS1dE9)双转基因小鼠海马CA1区神经元以及突触的变化,评价姜黄素对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠认知功能的影响.方法将3月龄的APPswe/PS1dE9双转基因小鼠随机分为模型组、罗格列酮组(0.92 mg/kg)...     

姜黄素对APPswe/PSEN1dE9双转基因小鼠海马神经元SR-BⅠ和ABCA1表达的影响

目的：观察姜黄素对β-淀粉样前体蛋白swe基因/早老蛋白1dE9基因（APPswe/PSEN1dE9）双转基因小鼠海马神经元B类Ⅰ型清道夫受体（scavenger receptor class B typeⅠ, SR-BⅠ）和三磷酸腺苷结合盒A1（ATP-binding cassette transporter,AB－CA1）表达的影响,探讨姜黄素在阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）防治中的机制。方法：将10只6月龄的APPswe/PSEN1dE9双转基因小鼠随机分为对照组和姜黄素饲喂组,每组5只。姜黄素饲喂组每天饲喂500 ppm姜黄素,6个月后采用免疫组化法检测小鼠海马神经元SR-BⅠ和ABCA1表达的变化。结果：与对照组相比,姜黄素饲喂组小鼠海马神经元ABCA1表达明显增加（t=-10.805,P=0.000）,但2组小鼠海马神经元中均未见SR-BⅠ表达。结论：姜黄素能提高APPswe/PSEN1dE9双转基因小鼠海马神经元ABCA1的表达,而SR-BⅠ在神经元中未见表达。     

姜黄素对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠Aβ生成和降解的影响

目的 观察姜黄素对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠B淀粉样蛋白(β amyloid,Aβ)生成酶早老素2(presenilin 2,PS2)和Aβ降解酶胰岛素降解酶(insulin degrading enzyme,IDE)表达的影响,探讨姜黄素在AD防治中的机制.方法 将3月龄的APPswe/PS1dE9双转基因小鼠随机分为模型组、阳性对照组[罗格列酮组,0.92 mg/(kg·d)]、姜黄素大[400 mg/(kg·d)]、中[200 mg/(kg·d)]、小[100 mg/(kg·d)]剂量组,每组10只;并以同月龄遗传背景相同的C57BL/6J小鼠作为正常对照组10只.每天灌胃给药1次,模型组和正常对照组用等体积0.5%羧甲基纤维素(carboxymethyl cellulose,CMC)灌胃.灌胃3个月后,应用Morris水迷宫、免疫组织化学等方法,检测动物的学习记忆能力、海马Aβ生成酶PS2和降解酶IDE表达变化.结果 行为学检测,模型组小鼠的游泳轨迹多为边缘型,而正常对照组、阳性对照组、姜黄素各组小鼠的游泳轨迹多为趋向型和直线型.Aβ生成酶PS2和降解酶IDE的免疫组织化学染色结果,模型组小鼠海马CA1区PS2阳性细胞较正常对照组明显增加(P<0.01),与模型组相比,姜黄素各组小鼠海马CA1区PS2阳性细胞减少(P<0.01).模型组小鼠海马CA1区PS2阳性细胞平均灰度值较正常对照组降低(P<0.05),姜黄素小剂量组阳性细胞平均灰度值同模型组相比明显增加(P<0.01).模型组小鼠海马CA1区IDE阳性细胞较正常对照组明显减少(P<0.01),与模型组相比,姜黄素中剂量组小鼠海马CA1区IDE阳性细胞明显增加(P<0.05).模型组小鼠海马CA1区IDE阳性细胞平均灰度值较正常对照组明显增加(P<0.01),姜黄素各组小鼠海马CA1区IDE阳性细胞平均灰度值同模型组相比均明显降低(P<0.01).结论 姜黄素能通过减少Aβ生成酶和增加Aβ降解酶的表达,降低Aβ蛋白的表达进而改善APPswe/PS1dE9双转基因小鼠的学习记忆能力.     

动态观察姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠尿液AD7C-NTP浓度的影响

目的 通过动态检测小鼠尿液中AD7C-NTP的浓度变化,了解姜黄素在阿尔茨海默病治疗方面的作用.方法 3月龄APP/PS1双转基因小鼠35只,随机分为5组,每组7只,分别为模型组,阳性对照组(罗格列酮组),姜黄素大、中、小剂量组;另选用同月龄同背景的C57BL/6J小鼠7只作为正常对照组.以上6组连续灌胃3个月,分别于灌胃前、灌胃30 d、灌胃60 d和灌胃90 d收集小鼠尿液,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测尿AD7C-NTP浓度的变化.结果 不同时间点各组小鼠尿AD7C-NTP浓度的动态存在波动,各治疗组治疗2个月与治疗1个月相比,AD7C-NTP浓度均有所下降(P＜0.05,P＜0.01);同一时间点小鼠尿AD7C-NTP浓度组间比较:治疗2个月后,西药组,姜黄素大、小剂量组与模型组相比AD7C-NTP浓度有所下降(P＜0.05,P＜0.01).结论 姜黄素可降低AD模型小鼠尿液内AD7C-NTP浓度,延缓AD的进展.     

金思维提取物对APPswe/PS1dE9转基因小鼠海马淀粉样前体蛋白表达水平的影响

目的观察金思维提取物(GAPT)对APPswe/PS1d E9双转基因小鼠海马内APP表达水平的影响。方法将3月龄的APPswe/PS1d E9转基因小鼠随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组及GAPT大、中、小剂量组,并以同月龄遗传背景相同的C57BL/6J小鼠作为正常组,每组12只,灌胃给药6个月后,以蛋白印迹法(Western blot)检测海马内淀粉样前体蛋白(APP)表达变化。结果模型组小鼠海马中APP表达水平显著高于正常组(P0.01);各治疗组与模型组相比,APP蛋白表达水平均显著降低,其中GAPT小剂量组(P0.01)、GAPT中剂量组(P0.01)、GAPT大剂量组(P0.01)、多奈哌齐组(P0.01);各GAPT组与多奈哌齐组比较结果 APP表达水平均高于多奈哌齐组,其中GAPT小剂量组(P0.01)、GAPT中剂量组(P0.01)有显著性差异,而GAPT大剂量组(P0.05)无明显差异。结论GAPT可能具有抑制APPswe/PS1d E9双转基因小鼠海马内APP蛋白过度表达的作用。     

姜黄素对9月龄APPswe/PS1dE9双转基因小鼠行为学的影响

目的 应用Morris水迷宫,测试AD模型APPswe/PS1dE9双转基因小鼠定位航行及空间搜索等学习记忆和记忆保持能力,评价姜黄素对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠认知功能的影响。方法 将3月龄的APPswe/PS1dE9双转基因小鼠随机分为模型组、罗格列酮组(10 mg?kg-1?d-1)、姜黄素高(400 mg?kg-1?d-1)、中(200 mg?kg-1?d-1)、低剂量组(100 mg?kg-1?d-1),每组6只;并以同月龄遗传背景相同的C57/BL6J小鼠作为对照组。每天灌胃给药1次,连续灌胃6个月。应用Morris水迷宫进行行为学检测。结果 姜黄素对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠空间学习记忆能力障碍有改善作用,尤以姜黄素中剂量组效果比较明显。结论 姜黄素能改善APPswe/PS1dE9双转基因小鼠的认知功能。     

二苯乙烯苷对APP/PS1双转基因小鼠海马区病理形态学及脑BACE1表达的影响

目的观察二苯乙烯苷(TSG)对APP/PS1双转基因小鼠海马区病理形态学变化和脑组织中β-淀粉样前体蛋白裂解酶-1(BACE1)表达的影响,探讨其作用的可能机制,为临床应用提供实验依据。方法 50只3月龄APP/PS1双转基因小鼠,随机分为TSG低剂量(0.033g·kg-1·d-1)组、TSG中剂量(0.1g·kg-1·d-1)组、TSG高剂量(0.3g·kg-1·d-1)组、石杉碱甲(阳性对照)组及模型组,正常对照组为10只同龄C5B7L/6J小鼠。各组给予60d相应药物后,苏木精-伊红(HE)染色法观察海马区病理形态学变化;用Western blotting法检测小鼠脑组织BACE1蛋白表达水平。结果与模型组相比,各治疗组小鼠海马区形态均有不同程度的改善;BACE1表达水平均显著降低(P<0.01)。TSG各剂量组BACE1的表达量与石杉碱甲组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TSG治疗阿尔茨海默病的机制可能与降低BACE1表达水平,减少β淀粉样蛋白(Aβ)产生,改善神经元损伤等有关。     

5月龄APP/PS1双转基因小鼠行为学及老年斑病理改变

目的 评价5月龄APP/PS1双转基因小鼠学习记忆功能及脑部病理改变。方法 5月龄APP/PS1（+/-）小鼠,采用Morris水迷宫实验评价空间学习记忆功能,免疫组织化学和刚果红染色观察淀粉样斑块沉积情况。结果 Morris水迷宫实验显示APP/PS1（+）小鼠逃避潜伏期明显长于APP/PS1（-）小鼠,表明5月龄APP/PS1（+）小鼠已经出现了空间学习记忆功能的损害。新物体识别实验中5月龄APP/PS1（+）小鼠对新物体的分辨指数无显著降低,免疫组化、刚果红染色显示5月龄APP/PS1（+）小鼠海马及皮质均出现斑块沉积。结论 5月龄APP/PS1双转基因小鼠出现空间学习记忆功能损害,小鼠脑内已经出现相应的病理改变。     

姜黄素对APPswe/PS1△9转基因小鼠空间学习与海马HSP70蛋白表达的影响

目的 探讨姜黄素对APPswe/PS1△9转基因小鼠海马热休克蛋白70(HSP70)表达及对APPswe/PS1 A9转基因小鼠空间学习能力的影响,为AD治疗提供新的理论依据.方法 实验动物分为野生小鼠组、APP/PS1转基因小鼠组、姜黄素干预组、槲皮素(HSPs抑制剂)和姜黄素共同干预组.5月龄转基因小鼠腹腔注射姜黄素150 mg·kg-1·d-1,连续4周,槲皮素和姜黄素共同干预组采用给予150mg· kg-1·d-1姜黄素腹腔注射,同时给予槲皮素50mg· kg-1 ·d-1腹腔注射,连续4周.Western blot测定APP/PS1小鼠海马区HSP70蛋白的表达,Morris水迷宫测试APP/PS1小鼠学习记忆能力,主要观察指标为小鼠找到平台的潜伏期和穿越平台次数.结果 Western blot结果显示,APP/PS1转基因小鼠海马中HSP70蛋白的表达与WT小鼠相比明显降低(OD值:APPswe/PS1△9:0.31±0.14;WT:1.14±0.51,P＜0.01).小鼠腹腔注射给予姜黄素后HSP70的表达较APP/PS1转基因鼠明显升高(OD值:姜黄素:0.91±0.20,P＜0.05).腹腔注射姜黄素或同时给予槲皮素,连续4周后,Morris水迷宫测试结果显示,与WT小鼠相比,APP/PS1小鼠找到平台的潜伏期明显延长[APPswe/PS1 △9:(82.3±6.8)s;WT:(29.5±4.4)s]、穿越平台的次数显著降低[APPswe/PS1 △9:(2.7±1.1)次;WT:(5.2±2.1)次].姜黄素给药后小鼠找到平台的潜伏期较APP/PS1小鼠明显缩短[(47.7±7.6)s],穿越平台的次数增多[(4.5±1.9)次],而小鼠同时给予姜黄素和HSPs抑制剂槲皮素后,找到平台的潜伏期较姜黄素单独给药明显延长[(69.7±9.1)s],穿越平台的次数减少[(3.2±1.6)次].结论 姜黄素可促进APP/PS1转基因小鼠海马HSP70蛋白的表达,同时可提高APP/PS1转基因小鼠的空间学习能力,这可能与姜黄素提高HSP70表达有关,结果提示姜黄素对于AD可能具有潜在的治疗价值.     

不同月龄APP/PS1双转基因AD小鼠海马神经元线粒体的动态变化

目的:检测不同月龄APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型小鼠海马神经元中线粒体自噬的动态变化,并探讨其意义.方法:选取20只雄性APP/PS1双转基因AD小鼠为研究对象,分为3月龄组、6月龄组、9月龄组和12月龄组,以C57小鼠为对照组.获取海马组织,通过电镜观察海马区神...     

EGCG对 APP/PS1 双转基因小鼠神经突触损伤的保护作用

目的：研究表没食子儿茶素没食子酸酯（epi-gallocatechin-3-gallate,EGCG）对APP/PS1 双转基因小鼠中神经突触损伤的保护作用及其可能机制。方法：实验采用APP/PS1 双转基因小鼠,随机分为模型组（0.1 mL/10 g,生理盐水灌胃）、EGCG组[20 mg/（kg?d）,EGCG灌胃],每组 10 只,另以同窝同性别阴性小鼠10只设立正常组（0.1 mL/10 g,生理盐水灌胃）,共 3组。Morris 水迷宫实验测试各组小鼠逃避潜伏期和跨越平台变化,电镜观察各组小鼠海马神经元损伤情况,免疫组化法检测小鼠海马PSD95、GAP43 表达,RT-PCR检测小鼠海马PSD95 mRNA、GAP43 mRNA含量。结果：模型组逃避潜伏期明显延长,海马神经元损伤严重,PSD95表达下降、GAP43表达增高。免疫组化结果表示,EGCG组PSD95平均光密度高于模型组[（0.11±0.03） vs. （0.05±0.02）,P=0.001],EGCG组GAP43平均光密度低于模型组[（0.10±0.03） vs. （0.16±0.04）,P=0.002]。RT-PCR检测结果再次验证,EGCG组PSD95 mRNA表达高于模型组[（0.82±0.11） vs. （0.50±0.06） ,P=0.000],EGCG组GAP43 mRNA表达低于模型组[（1.12±0.11） vs. （1.56±0.16）,P=0.000]。结论：EGCG对 APP/PS1 转基因小鼠的空间学习记忆和突触损伤具有明显的改善作用,其机制可能与影响小鼠海马突触结构,提高PSD95表达、下调GAP43 表达有关。     

梓醇对APP/PS1双转基因小鼠焦虑行为和脑内神经元的影响

目的：观察梓醇对APP/PS1双转基因小鼠焦虑行为和脑内神经元的影响。方法：将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠按随机数字表法分为梓醇治疗组和生理盐水对照组,每组10只,用梓醇[（5 mg/（kg·d）]和等量生理盐水腹腔注射阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）模型小鼠3周,应用高架十字迷宫检测两组小鼠的焦虑情绪的变化;应用免疫组织化学染色和Western blot检测脑内神经元及突触相关蛋白的表达变化。结果：与生理盐水对照组比较,梓醇治疗组小鼠进入开放臂的次数（P=0.000 2,t=4.742）和时间（P=0.001,t=3.936）显著增加,神经元数量（P=0.028 4,t=2.872）及突触蛋白表达（P=0.002,t=5.265）明显增多。结论：梓醇治疗能显著缓解AD模型小鼠的焦虑情绪,这种改善作用可能是通过改善神经元及突触的丢失来实现的。     

姜黄素对APP/PS1双转基因鼠海马ABCA1、apoA1的表达和血清TC、HDL含量的影响

目的：探讨姜黄素对APP/PS1双转基因鼠海马组织中三磷酸腺苷结合盒转运子A1（ATP binding cassette transport pro－tein A1,ABCA1）和载脂蛋白A1（apolipoprotein A1,apoA1）的表达及血清中总胆固醇（total cholesterol,TC）和高密度脂蛋白（high-density lipoprotein,HDL）含量的影响。方法：用APP/PS1双转基因鼠建立阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）模型,不同浓度姜黄素饲料喂养6个月。免疫组化SP法检测转基因鼠的海马组织CA1区ABCA1和apoA1的表达变化。胆固醇酶法比色法检测血清中TC和HDL的含量。结果：经过不同浓度姜黄素饲喂转基因鼠后,其海马组织CA1区ABCA1和apoA1的表达增加（P=0.005和0.003;P=0.025和0.001）,且血清中HDL的含量也随之增加,TC的含量逐渐减少,其差异均有统计学意义（P=0.041和0.010;P=0.046和0.002）。结论：ABCA1在AD的发生发展中起着重要的作用,姜黄素可能是通过增加ABCA1表达和升高apoA1和HDL含量降低胆固醇水平。     

丙戊酸钠对APP/PS1双转基因小鼠脑内星形胶质细胞和神经营养因子的影响

目的：观察丙戊酸钠（valproic acid sodium salt,VPA）对阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）模型小鼠脑内星形胶质细胞、脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）和胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neu－rotrophic factor,GDNF）的影响。方法：取3月龄的APP/PS1双转基因小鼠AD模型小鼠24只,按随机数字表法平均分为治疗组和对照组。VPA治疗组小鼠腹腔注射VPA 30 mg/（kg·d）,对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水,采用免疫组化学法观察2组小鼠皮质和海马区星形胶质细胞数量的变化,Western blot检测2组小鼠皮质和海马BDNF 和GDNF的表达水平。结果：与对照组比较,VPA治疗组小鼠皮质和海马区星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）的阳性细胞数量均明显减少（t=5.476、8.793,P均＝0.00０）,BDNF 和GDNF 表达水平均明显升高（t=4.303,P=0.001;t=2.376,P=0.032）。结论：VPA可抑制星形胶质细胞增生,提高神经营养因子的表达水平。     

小鼠胚胎神经干细胞海马移植对APP/PS1双转基因AD小鼠的治疗作用

目的 在APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer disease, AD)小鼠观察神经干细胞(nerual stem cells, NSCs)移植后细胞的存活、迁移以及对小鼠记忆功能的影响.方法 增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)质粒转染培养胚胎NSCs,小鼠海马内移植,水迷宫实验检测小鼠认知功能.结果 EGFP转染NSCs海马内移植2个月后可观察到GFP阳性细胞,大部分分布在针道附近,部分向同侧皮层迁移,亦有部分通过胼胝体向对侧大脑迁移,同时小量细胞发出类似于神经元的长突起.AD小鼠的记忆功能明显改善.结论 胚胎NSCs海马内移植后能存活、迁移并分化为神经组织细胞,并能显著改善APP/PS1双转基因AD小鼠的认知功能障碍.     

异氟醚对缺锌APP/PS1转基因阿尔茨海默病模型小鼠海马神经元凋亡的影响

目的：研究吸入麻醉药异氟醚对缺锌APP/PS1转基因小鼠海马神经元凋亡的影响,探讨其相关作用机制。方法：8和9月龄APP/PS1转基因小鼠随机分为常锌组、常锌+异氟醚组、缺锌组和缺锌+异氟醚组,每组24只。常锌组小鼠给予正常锌含量饮食2个月;常锌+异氟醚组小鼠给予正常锌含量饮食2个月后接受1.4%异氟醚麻醉2 h;缺锌组小鼠给予低锌饮食1个月;缺锌+异氟醚组小鼠给予低锌饮食1个月后接受1.4%异氟醚麻醉2 h。分别在麻醉后6和24 h杀鼠取海马组织,采用免疫荧光双染法检测海马神经元凋亡率,Western blotting法检测海马β淀粉样蛋白（Aβ）、活化型半胱氨酸天门冬氨酸特异性蛋白酶3（Cleaved caspase-3）表达水平和Bax/Bcl-2比值。结果：与常锌组比较,常锌+异氟醚组小鼠麻醉后6 h海马神经元凋亡率、Cleaved caspase-3表达水平和Bax/Bcl-2比值升高（P<0.05或P<0.01）,麻醉后24 h海马神经元凋亡率总Aβ、Aβ40和Aβ42表达水平无明显改变（P>0.05）;缺锌组和缺锌+异氟醚组小鼠麻醉后6和24 h海马神经元凋亡率、Aβ42表达水平、Cleaved caspase-3表达水平和Bax/Bcl-2比值升高（P<0.05或P<0.01）。与缺锌组比较,缺锌+异氟醚组小鼠麻醉后6和24 h海马神经元凋亡率、Aβ42和Cleaved caspase-3表达水平及Bax/Bcl-2比值进一步升高（P<0.05或P<0.01）。结论：10月龄常锌APP/PS1转基因小鼠给予1.4%异氟醚麻醉2 h能够短暂加重其海马神经元凋亡;1.4%异氟醚麻醉2 h能够明显加重缺锌APP/PS1转基因小鼠海马神经元凋亡,其作用机制可能与促进海马Aβ42聚集、增强Bax表达、抑制Bcl-2表达和激活Caspase-3有关。