三型酸敏感离子通道在大鼠OAB模型膀胱组织中表达的意义

目的 探讨大鼠膀胱组织中三型酸敏感离子通道（ASIC3）的表达与大鼠膀胱过度活动症（OAB）的关系。方法 成年雌性大鼠膀胱造瘘后,随机分为对照组（0.9%氯化钠盐水腹腔注射）、OAB组（环磷酰胺腹腔注射）、干预组（OAB组基础上加入ASIC3抑制剂阿米洛利）,每组20只。24 h后对各组大鼠进行尿流动力学检测;取3组大鼠的膀胱组织,进行病理学检查;并通过免疫组织化学染色、RT-PCR和Western blot方法检测其ASIC3的表达。结果 尿流动力学检测结果显示:对照组大鼠储尿期及排尿期未见明显不稳定收缩;与对照组相比,OAB组及干预组在储尿期可见不稳定收缩,即排尿间隔缩短（ P<0.01）,排尿次数增加（ P<0.01）。干预组与OAB组相比,排尿间隔延长（ P<0.05）,排尿次数减少（ P<0.05）。病理学检测提示:OAB组、干预组中大鼠膀胱黏膜破坏;免疫组化染色提示:大鼠膀胱组织有ASIC3表达,主要分布于膀胱黏膜;RT-PCR及Western blot提示:OAB组中膀胱黏膜上 ASIC3基因及蛋白表达较对照组升高（ P<0.01）,加入ASIC3抑制剂后,干预组 ASIC3基因及蛋白表达低于OAB组（ P<0.05）,但仍高于正常组（ P<0.01）。结论 大鼠膀胱组织有 ASIC3基因及蛋白表达, OAB大鼠膀胱组织 ASIC3基因及蛋白表达增高, ASIC抑制剂可抑制其表达,干预后,大鼠OAB症状减轻,说明膀胱组织ASIC3表达升高与膀胱逼尿肌反射亢进相关。     

酸敏感离子通道阻断剂对大鼠脑缺血/再灌注的保护效应观察

目的:探讨酸敏感离子通道(ASICs)阻断剂阿米洛利(amiloride)对大鼠脑缺血氧化应激性损伤的影响。方法:参照Zea Longa线栓法建立SD大鼠脑局灶性缺血/再灌注(I/R)模型。将32只大鼠随机分为4组,即假手术组、缺血/再灌注(I/R)模型组a、milorideⅠ组和amilorideⅡ组,每组8只。分别于局灶性脑缺血2 h再灌注24 h时间点取冰冻脑片一张进行组织细胞HE染色,其余脑组织制作匀浆,采用生化试剂测定其组织中髓过氧化物酶(MPO)和一氧化氮(NO)的含量。结果:I/R模型组MPO和NO的含量均高于amilorideⅠ组和amilorideⅡ组(P<0.05),amilorideⅠ组高于amilorideⅡ组(P<0.05)。结论:ASICs通道阻断剂amiloride通过抑制脑缺血氧化应激而发挥神经保护作用,其作用机制可能主要为amiloride阻断ASICs通道而抑制Ca2 超载。amiloride药理作用具有剂量-效应关系。     

酸敏感离子通道的特性及其调控

酸敏感离子通道(ASICs)是一类由胞外酸化所激活的阳离子通道,在中枢和外周广泛分布。已经克隆出由4个基因编码ASICs的6个亚单位,ASICs的拓扑结构也得到证实。ASICs的功能与组织酸化引起的痛觉和触觉等有关,近年来认为ASICs可能在中枢发挥重要作用,具有中枢神经突触传递调节等方面的作用。目前,对ASICs亚基调控的研究有了很大的进展,尤其是发现了几种特异性的ASICs阻断剂后,为ASICs的研究提供有效的工具药。文章主要介绍ASICs的特性及在调控方面的研究进展。     

COS-7细胞上转染的人类三型酸敏感离子通道的生理学和药理学特性

目的研究人类三型酸敏感离子通道(hASIC3)的生理学和药理学特性。方法应用全细胞电压钳技术检测转染在COS-7细胞上的hASIC3通道的生理学和药理学特性。结果hASIC3通道能通过迅速降低胞外pH值而被激活,并在酸性环境中迅速脱敏。脱敏后的hASIC3通道恢复到50%备用状态时所需的时间为(618±21)ms。胞外pH值在(6.40±0.05)时可使50%的hASIC3通道激活。pH值低于8时hASIC3通道的利用率降低,在生理状态pH值条件下,通道利用率降低了大约50%。阿米洛利能特异性阻断快速激活快速失活hASIC3通道且半数抑制浓度为(12.5±3.0)μmol/L。hASIC3通道的电流电压(I-V)关系曲线在很宽广的电压范围内呈线性关系(-80~ 80 mV),翻转电位为( 43±5)mV。结论hASIC3通道作为一种酸感受器,可能对感受人体pH值的变化起很重要的作用。     

酸敏感离子通道在偏头痛中的作用研究进展

偏头痛是一种严重的神经内科疾病,其频繁发作会给患者带来极大痛苦.因此,预防性治疗对提高偏头痛患者的生活质量具有重要意义,但其发病机制目前尚未完全明确.酸敏感离子通道(ASICs)作为可被酸性微环境激活的氢离子门控阳离子通道,在疼痛的调节中具有重要作用,尤其是中枢敏化性疼痛.而ASICs抑制剂可减少偏头痛模型小鼠行为学异...     

高通量筛选酸敏感离子通道1a抑制剂研究

目的 建立体外稳定过表达酸敏感离子通道1a（ASIC1a）的Fisher大鼠甲状腺上皮细胞（FRT细胞）,采用Ca2+敏感荧光染料Fura-2/AM和细胞毒性检测〔乳酸脱氢酶（LDH）释放法〕测定ASIC1a活性,探讨高通量筛选ASIC1a抑制剂的可行性。方法 2014年1月-2016年2月,利用分子生物学方法,构建ASIC1a过表达载体pcDNA3.1/myc-His-mASIC1a,通过细胞转染技术建立了稳定过表达ASIC1a的Fisher大鼠FRT细胞。将细胞分成两组,对照组（FRT细胞）和实验组（稳定过表达ASIC1a的FRT细胞）,并分别未负载和负载Ca2+敏感荧光染料Fura-2/AM,采用酶标检测仪测定双波长（340 nm和380 nm）的值,计算F340/F380。对照组和实验组细胞经不同pH值酸液（pH值7.5、7.0、6.5、6.0、5.5）刺激后,采用酶标检测仪测定450 nm波长处LDH释放量。结果 对照组与实验组未负载Fura-2/AM细胞F340/F380比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;实验组负载Fura-2/AM细胞F340/F380较对照组升高（P＜0.05）;对照组和实验组负载Fura-2/AM细胞F340/F380较未负载Fura-2/AM细胞升高（P＜0.05）。pH值6.5、6.0、5.5时,实验组细胞LDH释放量大于对照组（P＜0.05）;对照组和实验组细胞不同pH值时LDH释放量比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 本研究成功建立稳定过表达ASIC1a的FRT细胞,Ca2+敏感荧光染料Fura-2/AM和细胞毒性检测（LDH释放法）两种方法测定ASIC1a活性,使高通量筛选ASIC1a抑制剂成为可能,为发现高选择性和高活性的天然小分子ASIC1a抑制剂奠定了基础。     

胃肠道酸敏感离子通道的研究进展

胃液中H 最大浓度可迭150mmol/L,比血液中H 浓度高三、四百万倍,因此,H 可沿着巨大的浓度梯度由胃腔向组织间质逆向弥散,其过度分泌可对人体产生不利的影响.它可以导致疼痛,并使传入神经致教造成炎性痛觉过敏,它也能降低胃腔内机械感受器的阁值而引起胃一食管反射、消化不良以及消化性溃疡等.然而,机体通过各种保护因素组成复杂的网络保护体系和食管-胃-十二指肠隔离机制使胃酸在正常生理范围内发挥作用,从而维持胃肠道内环境稳定.这些保护机制都需要一个反应快速的监测系统,酸敏感传入神经在其过程中起到至关重要的作用.     

酸敏感离子通道在DRG的表达与调控

目的:酸敏感离子通道(acid sensing ion channels,ASICs)为H -门控的阳离子通道,是一类新的配体门控性离子通道,属于钠通道超家族的新成员.ASICs具有许多重要的生物学功能,在痛觉和触觉调制中具有重要作用.近来,ASICs各个亚基已被克隆,并且所有亚基在背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元均有表达.本文主要介绍ASICs在DRG的表达与调控.     

雌激素对切口痛大鼠痛行为的影响

目的 探讨雌激素对急性疼痛的调节作用.方法 ①雌激素的慢性处理:A组大鼠在去卵巢术5周后行切口痛造模(16只),B组大鼠在去卵巢假手术5周后行切口痛造模(14只),采用von Frey法测定去卵巢前、后基础值以及切口痛术后2、4 h和1、3、7、10 d的机械刺激缩足阈值(PWT值).②雌激索的急性处理:C组为正常雌鼠在切口痛术后第1天鞘内注射1 nmol/L雌二醇10μL(8只),D组为正常雌鼠在切口痛术后第1天鞘内注射0.9%氯化钠溶液10μL(8只).采用von Frey法测鞘内给药前及给药后20、60,120、180 min的PWT值.结果 ①慢性处理:A组去卵巢后基础PwT值及术后1、3、7、10 d的PWT值均显著低于B组(P值均<0.05).②急性处理:C组给药20和60 min的PwT值显著低于给药前(P值均<0.05),而D组给药后各时间点的PWT值与给药前的差异均无统计学意义(P值均>0.05).结论 体内雌激素水平慢性降低的大鼠对于急性疼痛更加敏感,而对于处于急性疼痛状态的大鼠,中枢雌激素水平增加能引起短期痛阈的降低.     

大鼠鞘内阿米洛利合用吗啡的抗骨癌镇痛作用

目的：探讨鞘内阿米洛利合用吗啡对大鼠骨癌的镇痛作用。方法：将walker256乳腺癌细胞注入SD雌性大鼠胫骨内形成骨癌痛模型,再行蛛网膜下腔置管。随机将大鼠分成对照组、阿米洛利组、吗啡组、混合药物组。鞘内给药前后测定大鼠机械性缩足反应阂值。采用线性回归的方法计算各药物的半数有效剂量（ED50）及95％的可信区间（c195）。使用Isobolographic评价药物的相互作用。结果：鞘内单独注射阿米洛利可产生剂量依赖性的抗骨癌痛作用,其半数有效剂量（ED。）及95％可信区间ck分别是：63．8μg和53．2—74．5μg。鞘内阿米洛利和吗啡合用可以产生协同镇痛作用。结论：鞘内单独注射阿米洛利、吗啡可以产生明显剂量依赖性的抗骨癌痛作用;鞘内注射阿米洛利可以增强吗啡的抗骨癌痛作用。     

Effects of Chinese herbs on multiple ion channels in isolated ventricular myocytes

Background Shensong Yangxin (SSYX) is one of the compound recipe of Chinese materia medica. This study was conducted to investigate the effects of SSYX on sodium current (I(Na)), L-type calcium current (I(Ca,L)), transient outward potassium current (I(to)), delayed rectifier current (I(K)), and inward rectifier potassium currents (I(K1)) in isolated ventricular myocytes. Methods Whole cell patch-clamp technique was used to study ion channel currents in enzymatically isolated guinea pig or rat ventricular myocytes. Results SSYX decreased peak I(Na) by (44.84±7.65)% from 27.21±5.35 to 14.88±2.75 pA/pF (n=5, P&lt;0.05). The medicine significantly inhibited the I(Ca,L). At concentrations of 0.25, 0.50, and 1.00 g/100 ml, the peak I(Ca,L) was reduced by (19.22±1.10)%, (44.82±6.50)% and (50.69±5.64)%, respectively (n=5, all P&lt;0.05). SSYX lifted the I-V curve of both I(Na) and I(Ca,L) without changing the threshold, peak and reversal potentials. At the concentration of 0.5%, the drug blocked the transient component of I(to) by 50.60% at membrane voltage of 60 mV and negatively shifted the inactive curve and delayed the recovery from channel inactivation. The tail current density of I(K) was decreased by (30.77±1.11)% (n=5, P&lt;0.05) at membrane voltage of 50 mV after exposure to the medicine and the time-dependent activity of I(K) was also inhibited. Similar to the effect on I(K), the SSYX inhibited I(K1) by 33.10% at the test potential of –100 mV with little effect on reversal potential and the rectification property. Conclusions The experiments revealed that SSYX could block multiple ion channels such as I(Na) I(Ca,L), I(k), I(to) and I(K1), which may change the action potential duration and contribute to some of its antiarrhythmic effects.     

钠离子通道与疼痛的发生和发展

钠离子通道在体内分布广泛,是细胞动作电位的产生和传播的离子基础。其中电压门控性钠离子通道Nav1．3、Nav1．7、Nav1．8、Nav1．9在疼痛的发生和发展中有重要作用。本文从电压门控性钠离子通道的结构、与疼痛性疾病的关系,以及临床相关治疗的研究进展综述如下。     

大鼠纹状体边缘区神经元中乙酰胆碱激活的离子通道特性

用细胞贴附式膜片钳技术研究了急性分离的新生SD大鼠纹状体边缘区神经元中乙酰胆碱激活的离子通道的特性。发现通道有25PS和60PS两种电导状态,25PS通道为主要类型,因此,本文主要报道25PS通道的特性。ACh激活的单通道电流为快速内向电流,随着超极化程度增加而增加,反转电位约为0mV。通道开放具单个开放和簇状开放,其开放时间均可权指数拟和,单个开放时间常数为0．29ms和1.84ms,簇状开放时间常数为1．96ms和18.24ms。平均关闭时间也可双指数拟和,两个时间常数为1．70ms和54．00ms。通道开放概率为0．012,未表现出电压依赖性。提示纹状体边缘区神经元上存在乙酸胆碱受体离子通道。根据特性证实为烟碱型离子通道。     

大鼠关节软骨酸敏感离子通道的表达

目的探讨大鼠关节软骨酸敏感离子通道(ASICs)的表达及其意义。方法利用RT-PCR和Western blot检测ASICs在大鼠关节软骨的表达。结果大鼠关节软骨存在ASIC1a、ASIC2a和ASIC3 mRNA及其蛋白的表达。结论ASICs在大鼠关节软骨组织的表达,其有望成为关节炎治疗的新靶点。     

背根神经节在疼痛机制和治疗中的作用

背根神经节作为痛觉传入的第一级神经元在痛觉的外周机制中起着极为重要的作用。对背根神经节中特有的或者主要在背根神经表达的受体、离子通道的认识,对于阐明疼痛的机制和治疗有重要意义。本文对感觉神经元特有的Nav1.8通道,主要在背根神经节表达的Nav1.7,Nav1.9,TRPV1,TRPA1,TRPM8通道及P2X₃受体的分布、生理特点及在疼痛机制和治疗中的作用进行了详细的阐述。     

The effects of paeoniflorin monomer of a Chinese herb on cardiac ion channels

Background  Because of the potential proarrhythmic effect of current antiarrhythmic drugs, it is still desirable to find safer antiarrhythmic drugs worldwide. Paeoniflorin is one of the Chinese herb monomers that have different effects on many ion channels. The present study aimed to determine the effects of paeoniflorin on cardiac ion channels.

Methods  Whole-cell patch-clamp technique was used to record ion channel currents. L-type calcium current (I_Ca-L), inward rectifier potassium current (I_K1), and transient outward potassium current (I_to1) were studied in rat ventricular myocytes and sodium current (I_Na), slow delayed rectifier current (I_Ks), and HERG current (I_Kr) were investigated in transfected human embryonic kidney 293 cells.

Results  One hundred μmol/L paeoniflorin reduced the peak I_Ca-L by 40.29% at the test potential of +10 mV (from (–9.78±0.52) pA/pF to (–5.84±0.89) pA/pF, n=5, P=0.028). The steady-state activation curve was shifted to more positive potential in the presence of the drug. The half activation potentials were (–11.22±0.27) mV vs. (–5.95±0.84) mV (n=5, P=0.007), respectively. However, the steady-state inactivation and the time course of recovery from inactivation were not changed. One hundred μmol/L paeoniflorin completely inhibited the peak I_Na and the effect was reversible. Moreover, paeoniflorin inhibited the I_K1 by 30.13% at the test potential of –100 mV (from (–25.26±8.21) pA/pF to (–17.65±6.52) pA/pF, n=6, P=0.015) without effects on the reversal potential and the rectification property. By contrast, 100 μmol/L paeoniflorin had no effects on I_to1, I_Ks or I_Kr channels.

Conclusions  The study demonstrated that paeoniflorin blocked I_Ca-L, I_Na, and I_K1 without affecting I_to1, I_Ks, or I_Kr. The multi-channel block effect may account for its antiarrhythmic effects with less proarrhythmic potential.

     

钠离子通道在神经病理性疼痛中的作用研究进展

多种钠离子通道亚型在初级感觉神经元中的表达及动态调节,影响神经病理性疼痛的发生、发展及维持过程。SCN9A基因(编码Nav1.7)的多个位点突变被认为与人类多种可遗传的疼痛疾病密切相关。转基因技术和特异性敲除技术的应用发现,Nav1.3、Nav1.8和Nav1.9在神经病理性疼痛的发生和维持方面起到重要的作用。因此,研究电压依赖性钠离子通道在神经病理性疼痛中的作用,有利于揭示该种疾病的发生和维持机制,也可为开发新一代镇痛药物提供理论依据。