细胞凋亡和PCNA在早孕绒毛滋养细胞及蜕膜中的表达与自然流产的关系

目的 :研究细胞凋亡与细胞增殖在早孕绒毛滋养细胞和蜕膜中的表达及与自然流产的关系。方法 :对孕 3月内 2 0例正常妊娠、2 0例第 1次自然流产 (SA)和 15例反复自然流产 (RSA)的绒毛和蜕膜组织应用TdT介导的dUTP缺口原位末端标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡 ,应用免疫组织化学SP法检测增殖细胞核抗原 (PCNA)。结果 :正常早孕绒毛细胞滋养细胞、合体滋养细胞和蜕膜中的凋亡指数分别为 7.2 1± 1.2 4、8.89±2 .5 2和 7.70± 0 .82 ;SA组为 15 .4 0± 6 .5 9、2 5 .83± 6 .83和 32 .0 3± 3.2 7;RSA组为 18.77±8.2 2、34.0 2± 13.4 9和 34.96± 5 .4 6。增殖指数在正常早孕绒毛细胞滋养细胞、合体滋养细胞和蜕膜中为 6 4 .13± 5 .90、0和 6 2 .0 8± 4 .76 ;SA组为 6 7.0 2± 6 .79、36 .13± 3.5 6和 6 4 .94± 4 .6 0 ;RSA组为 6 8.6 7± 8.4 5、33.6 7± 4 .0 8和 6 3.99± 5 .5 4。即孕 3月内正常妊娠的绒毛和蜕膜组织中均有一定量的细胞凋亡与细胞增殖存在。SA与正常早孕相比绒毛和蜕膜中的细胞凋亡均明显增加 (P <0 .0 1) ,RSA合体滋养细胞凋亡也较SA明显增加 (P <0 .0 5 ) ;细胞滋养细胞和蜕膜中的细胞增殖在自然流产与正常妊娠间无明显差异 (P >0 .0 5 )。结论 :细胞凋亡和增殖的平衡与妊娠维持?     

早期自然流产患者绒毛KiSS-1、MMP-9和MMP-2基因及其蛋白表达

目的研究早期自然流产患者绒毛肿瘤转移抑制基因KiSS-1与基质金属蛋白酶(MMP-9、MMP-2)mRNA及蛋白的表达,探讨其与自然流产的关系。方法采用半定量RT-PCR、免疫印迹法检测30例正常早期妊娠和30例早期自然流产患者绒毛KiSS-1、MMP-9和MMP-2的mRNA及蛋白水平,用明胶酶谱分析法检测上述样本孵育液MMP-9、MMP-2的酶活性。结果(1)自然流产患者绒毛组织中MMP-9及MMP-2mRNA表达水平低于正常早期妊娠组(P<0.05),KiSS-1mRNA的表达高于正常早期妊娠组差异有统计学意义(P<0.05);(2)Westernblotting分析显示自然流产患者绒毛MMP-9、MMP-2蛋白表达低于正常早期妊娠差异有统计学意义(P<0.05),KiSS-1蛋白表达高于正常早期妊娠差异有统计学意义(P<0.05);(3)明胶酶谱分析结果显示,自然流产患者绒毛MMP-9、MMP-2酶活性低于正常早期妊娠者差异有统计学意义(P<0.05)。结论自然流产患者绒毛促浸润基因MMP-9、MMP-2mRNA及其蛋白表达水平降低,同时抑制浸润基因KiSS-1mRNA及其蛋白表达增加,造成滋养细胞浸润能力下降,可能与自然流产的发生有关。     

早期自然流产患者TNF-α及TGF-β1的异常表达

目的:探讨自然流产患者外周血单个核细胞和胎盘组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及转化生长因子-β(TGF-β1)的异常表达。方法:采用RT-PCR技术,检测30例早期自然流产患者(自1然流产组)、25例正常妊娠妇女(正常妊娠组)、25例正常未妊娠妇女(未孕对照组)外周血单个核细胞内TNF-αmRNA和TGF-β1mRNA表达水平;采用免疫组织化学技术检测绒毛和蜕膜组织内TNF-α及TGF-β1表达强度。结果:三组研究对象外周血单个核细胞表达TNF-αmRNA相对含量分别为21.1±9.4%、68.6±14.1%、97.0±11.6%,组间比较有显著性差异(P<0.05);TGF-β1mRNA相对含量分别为21.5±9.4%、95.7±12.9%、87.0±13.8%,组间比较也均有显著性差异(P<0.05)。自然流产组细胞滋养层细胞及合体滋养层细胞表达TNF-a均显著强于人工流产组(P<0.01);自然流产组合体滋养层细胞表达TGF-β1显著低于人工流产组(P<0.01)。结论:①早期自然流产患者外周血单个核细胞TNF-αmRNA表达水平显著下降,而细胞滋养层细胞及合体滋养层细胞表达TNF-α均显著强于人工流产组,提示TNF-α可能在母胎界面局部发挥作用并导致流产。②正常早期妊娠妇女外周血单个核细胞TGF-β1mRNA表达水平较正常未妊娠妇女显著升高,提示TGF-β1对妊娠维护起重要作用。早期自然流产患者外周血单个?     

早期自然流产患者绒毛Notch受体mRNA和蛋白表达及与妊娠关系的初步探讨

目的:初步探讨早期自然流产患者绒毛Notch受体(Notch1、Notch2、Notch3、Notch4)mRNA及蛋白表达及对滋养细胞的调控作用。方法:用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应技术和免疫印迹法检测6例自然难免流产患者和12例正常早期妊娠妇女绒毛Notch1、Notch2、Notch3、Notch4的mRNA和蛋白的表达水平。结果:(1)自然流产组绒毛Notch1和Notch3 mRNA表达水平高于正常早期妊娠组(P<0.05);(2)Western-blot检测显示早期自然流产患者绒毛中Notch1、Notch2、Notch3受体蛋白的表达水平高于正常早期妊娠组(P<0.05)。结论:Notch受体蛋白在早期自然流产患者绒毛中表达上调,可能与自然流产的发病原因有关。     

复发性自然流产患者子宫蜕膜及绒毛组织白血病抑制因子基因表达的研究

目的 :探讨白血病抑制因子 (LIF)基因在子宫蜕膜及绒毛组织中的表达与反复自然流产 (RSA)的关系。方法 :采用逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术 ,对 2 0例RSA患者和 30例正常妊娠妇女子宫蜕膜和绒毛组织进行LIFmRNA检测。结果 :RSA组蜕膜组织中LIFmRNA的表达水平为 0 5 12± 0 32 6 ( x±s,下同 ) ,正常妊娠组为 1 345± 0 885 ,RSA患者蜕膜组织中LIFmRNA表达显著性降低 (P <0 0 5 ) ;RSA组绒毛组织中LIFmRNA的表达水平为 0 6 0 1± 0 10 5 ,正常妊娠组为 1 75 9± 0 318,前者较后者明显降低 (P <0 0 1)。结论 :LIF对妊娠的维持可能起一定的作用。LIF基因表达减弱可能是导致复发性自然流产的原因之一     

抑癌基因PTEN和抗氧化蛋白PeroxiredoxinⅡ在自然流产患者绒毛组织的表达及意义

目的:分析并探讨绒毛组织中抑癌基因PTEN和抗氧化蛋白PeroxiredoxinⅡ(Prx2)与自然流产的关系。方法:应用RT-PCR法及免疫组织化学SP法检测PTEN和Prx2蛋白及mRNA在30例自然流产患者(实验组)绒毛组织中的表达,并以同期非意愿妊娠要求人工流产的30例正常妊娠患者为对照组。结果:①实验组绒毛组织中PTEN和Prx2蛋白阳性表达率(70.0%,36.7%)明显低于对照组(93.3%,93.4%),差异有统计学意义(P<0.05)。②实验组绒毛组织中PTEN和Prx2 mRNA的表达(0.929±0.100,1.131±0.125)明显低于对照组(0.059±0.010,0.222±0.029),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PTEN和Prx2在自然流产患者绒毛组织中表达明显下降,说明可能与自然流产的发生有一定关系。     

复发性流产患者绒毛和蜕膜中NLRP3炎症小体的差异性表达研究

目的:研究NLRP3炎症小体与复发性流产(RSA)发生之间的相关性。方法:收集RSA患者和正常人工流产妇女的绒毛和蜕膜组织,实时荧光定量PCR、Western blot和免疫组化法检测各组织中蛋白表达。结果:绒毛及蜕膜组织中均可见NLRP3和IL-1β表达,绒毛组织中两者表达较为丰富且分布集中,主要分布于滋养细胞胞浆内;而蜕膜组织中两者表达较绒毛少且分布广泛,无明显特征性。与正常组相比,RSA组各组织中NLRP3和IL-1β基因及蛋白表达量显著升高,差异均有统计学意义(P0.05);与蜕膜组织相比,RSA组绒毛组织中NLRP3和IL-1β表达更显著,差异有统计学意义(P0.05)。结论:RSA患者绒毛组织中NLRP3炎症小体表达明显增加,绒毛滋养细胞可能通过NLRP3炎症小体参与RSA的发生与发展。     

cFLIP在早期自然流产绒毛组织的表达及意义

目的:检测早期正常妊娠及自然流产绒毛组织中细胞凋亡抑制蛋白cFLIPmRNA及其蛋白产物的表达,分析并探讨cFLIP与自然流产的关系。方法:应用RT-PCR法及免疫组化SP法检测cFLIP mRNA及其蛋白产物在20例自然流产患者(研究组)绒毛组织的表达,以同期正常妊娠要求人工流产20例为对照组。结果:研究组绒毛组织中cFLIP mRNA及蛋白表达明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:细胞凋亡抑制蛋白cFLIP参与维持正常妊娠,绒毛组织中其表达下降可能在自然流产的发生中起重要作用。     

血管生成素在妊娠滋养细胞疾病中表达的临床意义探讨

目的:通过检测血管生成素(ANG)在人正常早孕绒毛组织、葡萄胎及妊娠滋养细胞肿瘤中表达的差异性,探讨ANG在妊娠滋养细胞疾病(GTD)表达的意义。方法:采用免疫组化(En Vision)法检测人正常早孕绒毛组织28例、葡萄胎组织26例、妊娠滋养细胞肿瘤组织14例(其中侵蚀性葡萄胎1例、绒毛膜癌12例、胎盘部位滋养细胞肿瘤1例)中ANG蛋白的表达以及定位情况。结果:ANG蛋白在人正常早孕绒毛组织、葡萄胎及妊娠滋养细胞肿瘤组织中均有表达且主要定位于细胞质和细胞膜、少量表达于细胞核;ANG阳性表达率葡萄胎组(100.0%)高于正常早孕绒毛组(60.7%)(P0.05)和妊娠滋养细胞肿瘤组(85.7%)(P0.05),妊娠滋养细胞肿瘤组高于正常早孕绒毛组(P0.05)。在妊娠滋养细胞肿瘤中,ANG阳性表达率在年龄≥40岁组(83.3%)高于年龄40岁组(75.0%)(P0.05);临床分期晚期组(Ⅲ、Ⅳ期)(88.9%)高于早期组(Ⅰ期、Ⅱ期)(80.0%)(P0.05);FIGO预后评分高危组(87.5%)高于低危组(83.3%)(P0.05)。结论:ANG在GTD组织中的表达明显高于在正常早孕绒毛组织,且在妊娠滋养细胞肿瘤晚期、高危患者表达增高,表明ANG的过表达可能参与了GTD的发生过程。     

自然流产蜕膜及绒毛组织中钙网蛋白的表达及意义

目的:检测早期自然流产蜕膜及绒毛组织中钙网蛋白(CRT)和凋亡蛋白酶Caspase-3的表达及定位,初步探讨其在早期自然流产过程中的作用及相关性。方法:正常早孕者和早期自然流产者(先兆流产组、稽留流产组)行负压吸引人工流产术,取蜕膜及绒毛组织,HE染色比较其形态学变化,免疫荧光法检测CRT及Caspase-3的表达,统计学分析其相关性。结果:(1)CRT及Caspase-3在早期自然流产蜕膜及绒毛组织中表达高于正常早孕组;(2)稽留流产组蜕膜及绒毛组织中CRT及Caspase-3的表达均高于先兆流产组;(3)CRT与Caspase-3呈正相关。结论:CRT及Caspase-3异常表达可能参与早期自然流产的发生机制。     

米非司酮药流时整合蛋白β3和细胞间粘附分子-1在蜕膜与绒毛内的表达

为了解米非司酮与米索前列醇对早孕流产的蜕膜、绒毛中整合蛋白 (Integrin)β3和细胞间粘附分子 1 (Intercellular adhesion molecule,ICAM 1 )的影响 ,应用流式细胞定性定量分析技术测定了 1 0例采用米非司酮与米索前列醇终止早孕妇女的蜕膜与绒毛组织中整合蛋白β3和 ICAM 1水平 ,并以 1 0例负压吸引人工流产者为对照。结果显示 :蜕膜与绒毛组织整合蛋白 β3和 ICAM 1均较对照组明显降低。实验组蜕膜组织整合蛋白 β3与 ICAM 1分别为 1 9.1± 5.0 1 %和 2 0 .6 1± 6 .51 % ,对照组分别为 2 9.3 1± 5.2 6和 2 6 .6 9± 6 .1 1 ;实验组绒毛组织整合蛋白β3与 ICAM 1分别为 2 1 .3 2± 4 .3 8%和 2 0 .2 9± 6 .4 9% ,而对照组则为 3 1 .3 1± 7.85和 2 8.6 9± 7.98。结果提示整合蛋白β3及 ICAM 1可能与维持早孕有关 ,米非司酮影响蜕膜、绒毛组织中整合蛋白 β3及 ICAM 1的表达 ,可能参与药物抗早孕机制。     

转化生长因子β1及其受体与体外受精-胚胎移植后流产关系的研究

目的　了解转化生长因子β1(TGF- β1)及其受体(TβR)在绒毛及蜕膜组织中的表达,初步探讨TGF- β1与体外受精胚胎移植(IVF- ET)后流产及自然流产的关系。方法　应用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶(SP)连接法,检测10例IVF -ET后流产患者(IVF- ET组)和20例早期自然流产患者(自然流产组)的绒毛及蜕膜组织中的TGF -β1及TβR(Ⅰ、Ⅱ型)表达情况,其表达水平以阳性染色部位的吸光度(A)值表示,并与20例人工流产者(对照组)进行比较。结果　TGF- β1及TβR在早孕绒毛滋养细胞、蜕膜组织腺体及间质细胞中均有阳性染色, 3组表达部位相同。TGF β1在IVF ET组蜕膜及绒毛组织中表达水平(A值,中位数,下同)分别为0 167、0 .199,自然流产组为0 .198、0 .201,对照组为0 .277、0 .274;TβR Ⅰ在IVF- ET组蜕膜及绒毛组织中表达水平为0 144、0 150,自然流产组为0 .202、0. 201,对照组为0 .238、0 .281;TβR Ⅱ在IVF ET组蜕膜及绒毛组织中的表达水平为0 .199、0 .145,自然流产组为0. 153、0 .156,对照组为0 .300、0 .301。上述指标,IVF -ET、自然流产组分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0. 01)。结论　TGF -β1及TβR在IVF- ET后流产及自然流产患者绒毛及蜕膜组织中的表达下降,在IVF- ET后流产发病中起重要作用,     

细胞因子信号抑制因子3(SOCS3)在先兆流产绒毛和蜕膜组织中的表达

目的:初步探讨早孕母胎界面细胞因子信号抑制因子3(SOCS3)的作用。方法:26例妊娠35-49d先兆流产患者,采用RT-PCR法及Western blotting法、免疫组化法检测绒毛、蜕膜组织SOCS3的表达,并以30例正常早孕者作对照。结果:①绒毛、蜕膜组织均表达SOCS3,但先兆流产组SOCS3表达明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。②绒毛中的SOCS3表达于滋养细胞和绒毛间质,蜕膜中的SOCS3主要位于蜕膜腺体及间质细胞,二组SOCS3表达定位一致。结论:母胎界面SOCS3可能在早期妊娠的维持中起重要作用,其表达水平降低可能与先兆流产的发生、发展有关。     

凝集素受体WGA、RCA和ECL在米非司酮流产绒毛及蜕膜组织中表达的研究

目的:通过麦胚凝集素(WGA)受体、蓖麻凝集素(RCA)受体和鸡冠珊瑚树凝集素(ECL)受体在米非司酮流产的绒毛及蜕膜组织中的表达,探讨米非司酮的抗早孕机理。方法:以生物素标记的凝集素WGA、RCA和ECL为探针,应用亲和组织化学染色法检测3种凝集素受体在米非司酮流产组(实验组)和人工流产组(对照组)早孕绒毛及蜕膜组织上皮细胞及其间充质细胞的分布。结果:实验组WGA受体、RCA受体和ECL受体在蜕膜组织上皮细胞的表达比对照组均显著降低(P0.01)。实验组ECL受体在绒毛上皮的表达显著低于对照组(P0.01),实验组WGA和RCA受体在绒毛上皮细胞的表达与对照组无显著差异(P0.05)。实验组3种凝集素受体在绒毛及蜕膜的间充质细胞的表达,与对照组无显著差异(P0.05)。结论:米非司酮可能通过下调蜕膜上皮组织中WGA受体、RCA受体和ECL受体的表达,阻碍胚胎发育而导致流产。     

自然流产与绒毛中维甲酸X受体α基因突变关系的研究

目的 :探讨人类自然流产与绒毛中维甲酸X受体α(RXRα)基因突变的关系。方法 :用PCR SSCP 银染法和DNA测序法检测了自然流产 5 0例和正常早孕要求人工流产4 0例的胚胎绒毛组织中RXRα基因的外显子 2～ 10的突变。结果 :4 9例患者和正常对照组绒毛组织中RXRα基因的各个外显子在PCR SSCP 银染检测中均未显示异常。 1例患者SSCP 银染中显示异常的第 9外显子序列经DNA测序后未发现突变。结论 :目前尚不能认为人类自然流产与绒毛中RXRα基因突变有关     

反复自然流产绒毛生化学改变的研究

木研究对３４例反复自然流产（ＲＳＡ）、１０例１次流产及３８例正常妊娠人流绒毛组织，应用生物化学及免疫组化方法，检测绒毛组织中谷胱甘肽硫转移酶（ＧＳＴ）活性、腺苷脱氨酶（ＡＤＡ）活性和还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）含量及γ谷氨酸转肽酶（γ－ＧＴ）免疫组化定位进行对比性研究。结果表明，ＲＳＡ绒毛组织较正常绒毛组织中ＧＳＴ活性和ＡＤＡ活性均有明显改变（Ｐ＜０．０１）。γ－ＧＴ免疫组化定位、阳性颗粒的分布及强度也有明显的差别。自然流产３次以上较２次和１次流产的ＧＳＨ含量和ＧＳＴ活性明显降低，经统计学分析均有非常显著差别（Ｐ＜０．０１）。该结果提示绒毛组织本身某些生化功能的改变，可能是原因不明的ＲＳＡ的原因之一。     

Expression and localization of tumor necrosis factor receptor 1 protein in the chorionic villi in early normal and spontaneous abortion

BACKGROUND: Increasing tumor necrosis factor alpha (TNFalpha) expression is found to be positively associated with spontaneous abortion. TNFalpha acts through the binding of two types of transmembrane receptors called TNFR1 and TNFR2. Here we compare membrane TNFR1 (mTNFR1) protein expression on chorionic villi in women with spontaneous abortion (SA) and viable pregnancy. METHODS: In a prospective study, 31 women with SA and 30 with a viable pregnancy were studied. Chorionic villous membrane TNFR1 was detected by confocal laser scanning microscopy and immunohistochemistry. RESULTS: The mTNFR1 protein is expressed in villous stromal, vessel endothelial, syncytiotrophoblast, and cytotrophoblast cells in early pregnancy. The intensity of mTNFR1 fluorescence (mean+/-S.D.) in villous stromal cells was higher in the abortion groups than in the control group (35.99+/-6.35 versus 32.64+/-5.01; p<0.05). In the abortion groups, villous cytotrophoblast cells were intensely positive for mTNFR1, whereas mTNFR1 staining of vessel endothelial and syncytiotrophoblast cells was significantly lower (p<0.001). CONCLUSION: Abundant mTNFR1 expression in the cytotrophoblast cells in women with SA may mediate TNFalpha to induce programmed cell death in the mTNFR1-expressing cytotrophoblasts to limit their growth. The over-expressing mTNFR1 in villous stromal cells, mediating TNFalpha effects, may cause pathological changes or tissue damage in chorionic villi locally in nonviable pregnancies.     

蛋白酶体亚基LMP 2在稽留流产的蜕膜和绒毛组织中的表达

目的探讨蛋白酶体亚基LMP-2在稽留流产中的作用。方法 用免疫组化方法研究LMP-2在201例稽留流产中的48例绒毛和45例脱膜与114例正常早孕人工流产中的56例绒毛和58例蜕膜中的表达。结果LMP-2在稽留流产的绒毛和蜕膜中的表达均低于正常早孕人工流产的绒毛和蜕膜,二者间的表达强度差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 LMP-2在稽留流产中绒毛与蜕膜的表达减弱提示泛素-蛋白酶体通路介导的细胞蛋白降解参与调控滋养层细胞的生长过程。