卵巢癌细胞系COC1紫杉醇体外化疗后survivin mRNA及蛋白表达差异的研究

目的:探讨卵巢癌细胞系COC1紫杉醇体外化疗后survivin mRNA及蛋白表达的变化,进而探讨survivin表达与肿瘤细胞耐药的关系。方法:应用细胞培养技术及四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察不同浓度紫杉醇(0.39、0.78、1.56、3.13、6.25、12.5、25μg/ml)对COC1细胞体外生长的抑制作用。应用RT-PCR技术检测5μg/ml紫杉醇分别处理COC1细胞24、48、72h和20μg/ml处理细胞24h后存活的卵巢癌细胞中survivin mRNA的表达水平。Western blot检测5μg/ml紫杉醇处理不同时间后COC1细胞survivin蛋白的表达。结果:紫杉醇抑制卵巢癌细胞生长,不同浓度紫杉醇作用COC1细胞72h后的抑制率分别为13.21%、24.76%、35.78%、44.23%、57.23%、73.36%、89.56%,随着药物浓度的增加,细胞受抑制程度明显升高(P<0.05)。5μg/ml紫杉醇处理COC1细胞48h和72h后存活的卵巢癌细胞中survivin mRNA表达量增加,明显高于对照组。Western blot检测survinvin蛋白表达,结果表明与mRNA水平的表达一致。结论:抗凋亡蛋白survivin在卵巢癌细胞系COC1中高表达,survivin基因在卵巢癌细胞系COC1体外化疗中起抑制作用。     

雷公藤内酯醇对耐顺铂人卵巢癌细胞株(COC1/DDP)体外活性影响机制的初步探讨

目的:通过研究雷公藤内酯醇(TP)对COC1/DDP体外活性的影响,初步探讨雷公藤内酯醇促进COC1/DDP细胞凋亡的机制,为TP成为治疗晚期或耐顺铂卵巢癌药物提供实验依据。方法:采用MTT法检测顺铂(DDP)、TP及两者联用对COC1/DDP的生长抑制作用;用透射电镜观察TP作用24h后细胞超微结构的变化;采用流式细胞术分析不同浓度TP对COC1/DDP细胞周期和细胞凋亡的影响;用DNA电泳分析用药后细胞基因组DNA断裂状况;以免疫组化分析TP对Caspase-7蛋白表达的影响。结果:DDP在24h、48h和72h三个时间段对COC1/DDP细胞的半数抑制量(50%concentration of inhibi-tion,IC50)分别为5.567μg/ml、2.866μg/ml和1.161μg/ml,其对COC1/DDP细胞增殖表现出浓度-时间依赖性的抑制作用(P<0.05);TP可抑制COC1/DDP细胞增殖,其抑制率呈浓度-时间依赖性(P<0.05);TP作用细胞24h后,电镜下可见凋亡小体形成;流式细胞术分析表明,各浓度TP组G1期细胞明显升高,细胞凋亡率呈浓度依赖性(P<0.05);DNA电泳分析可见细胞凋亡特有的DNA断裂形成的"梯形"条带;免疫组化表明Caspase-7参与了TP诱导COC1/DDP细胞凋亡过程。结论:TP对COC1/DDP具有明显的杀伤和促凋亡作用,凋亡机制与Caspase-7蛋白表达上调有关。     

三氧化二砷对卵巢癌细胞的生长及化疗敏感性的影响

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对人卵巢癌COC1细胞顺铂(cDDP)化疗敏感性的影响,As2O3与cDDP联合作用的效应以及As2O3对COC1细胞的生长抑制效应及机制。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度As2O3、cDDP作用72h对卵巢癌细胞生长的抑制作用,As2O3对顺铂化疗敏感性的影响及两药联合作用的效应。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹技术(Western blot)分别检测PIK3CA mRNA和AKT、ERK、MMP-2蛋白表达的变化。结果:单独应用As2O3或cDDP和联合用药时卵巢癌COC1细胞生长均受到抑制,并呈浓度依赖关系,联合用药组抑制率明显高于单独用药组(P<0.05);0.08~0.15μmol/L As2O3无明显细胞毒性,不能提高COC1细胞对顺铂的敏感性。各浓度(1、3、8、16μmol/L)As2O3作用24h可以下调AKT、MMP-2蛋白水平(P<0.05),并呈浓度依赖效应,但对ERK蛋白的表达无显著影响。0.5、1、2、4μmol/L As2O3作用4h,PIK3CA mRNA表达分别降低45.03%、53.05%、61.67%和72.91%(P<0.05)。结论:As2O3抑制COC1细胞增殖具有浓度依赖性,与顺铂联用有相加效应,可能与As2O3下调PIK3CA mRNA、AKT、MMP-2蛋白水平等有关。     

AMPK/ERK信号通路在脂联素抑制子宫内膜癌细胞增殖中的作用

目的:探讨脂联素对子宫内膜癌细胞增殖的抑制作用及AMPK/ERK信号传导通路的有关机制。方法:以10μg/ml脂联素作用子宫内膜癌Ishikawa3-H-12细胞0～60min,Western blot检测脂联素作用不同时间后细胞AMPK及ERK的磷酸化程度。脂联素作用12,24h后,分别采用RT-PCR和Western blot检测Cyclin D1 mRNA和蛋白水平。脂联素作用48h,MTT法检测细胞增殖。结果:脂联素以时间依赖方式诱导子宫内膜癌细胞AMPK活化,脂联素作用5min后明显活化,并维持至30min(F=22.749,P=0.000),AMPK抑制剂复合物C可明显抑制脂联素诱导的细胞AMPK活化。脂联素以时间依赖模式抑制子宫内膜癌细胞ERK活化,作用5min ERK活化明显受抑制,并维持至少60min(F=13.802,P=0.000),复合物C明显阻断脂联素诱导的细胞ERK活性抑制。脂联素明显抑制Cyclin D1 mRNA转录和蛋白表达(P=0.003,P=0.000),复合物C明显阻断脂联素对细胞Cyclin D1 mRNA转录和蛋白表达的抑制作用(P=0.006,P=0.000)。脂联素明显抑制细胞增殖(P=0.001),复合物C明显阻断脂联素对细胞的抑制作用(P=0.002)。结论:脂联素可能通过AMPK/ERK/Cyclin D1途径抑制子宫内膜癌细胞增殖。     

顺铂抑制SKOV3细胞转移的动态监测及相关机制探讨

目的:在细胞水平实时动态监测顺铂抑制SKOV3细胞黏附和转移特性,探讨其相关机制.方法:CCK8法检测顺铂对SKOV3细胞增殖的抑制;采用RTCA监测仪24h实时动态观察顺铂对SKOV3细胞的黏附、迁移和侵袭的抑制作用;细胞组化法检测顺铂作用SKOV3细胞24h后细胞表面CD44v6的表达情况.结果:(1)顺铂对SKOV3细胞增殖的抑制作用呈浓度和时间依赖性,24、48h的IC50分别为24.065±1.031、5.083±0.128μg/ml;(2)在第50min时点,25 μg/ml顺铂组与对照组对SKOV3细胞黏附力的抑制作用差异最显著(P＜0.05).第2h时点,12.5、25 μg/ml顺铂组对SKOV3细胞迁移的抑制作用显著高于对照组(P＜0.05).第10h 15min时点,25μg/ml顺铂组对SKOV3细胞侵袭的抑制作用显著高于对照组(P＜0.05).(3)与对照组比较,25 μg/ml顺铂组细胞表面表达CD44v6明显减少(P＜0.05),而5μg/ml顺铂组减少不明显.结论:顺铂抑制SKOV3细胞转移特性首先表现为抑制细胞的黏附和迁移,这与顺铂减少细胞表面CD44v6蛋白的表达密切相关.CD44v6将成为上皮性卵巢癌治疗的新靶点.     

RNA干扰技术抑制卵巢上皮性癌细胞IGF1R基因表达及增强顺铂敏感性的实验研究

目的 利用RNA干扰(RNAi)技术抑制卵巢上皮性癌(卵巢癌)HO8910PM细胞胰岛素样生长因子1型受体(IGF1R)基因的表达,探讨IGF1R的生物学功能及对顺铂敏感性的影响.方法 将IGF1R基因的特异性小分子干扰RNA(siRNA)、非特异性siRNA分别转染细胞;转染后48h通过实时PCR、蛋白印迹法(western blot)、流式细胞仪分别测定IGF1R mRNA、蛋白的表达及细胞周期变化;转染后24、48、72、96 h通过细胞增殖/毒性检测试剂cell counting kit-8(CCK-8)测定细胞增殖;于转染后24 h给予不同浓度的顺铂作用24 h,通过CCK-8法测定细胞增殖抑制率;于转染后24 h给予10μg/ml顺铂作用24 h,通过流式细胞仪及蛋白印迹法分别检测细胞凋亡和B淋巴细胞白血病/淋巴瘤蛋白2(Bcl-2)蛋白的表达.结果 (1)转染后48 h,IGF1R mRNA和蛋白的表达水平均明显下调,转染后IGF1R mRNA的表达水平下调了85.5%(P＜0.01).(2)转染后48、72、96 h,细胞增殖被明显抑制,细胞增殖活性分别为1.71±0.13、2.32±0.23、2.79±0.28,与未转染及转染非特异性siRNA的对照细胞比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).(3)转染后48 h有24.37%的细胞处于G2期(P＜0.05).(4)转染后24 h联合不同浓度的顺铂作用24 h,当顺铂浓度为2.5、5、10、20μg/ml时,细胞增殖被明显抑制,细胞增殖抑制率分别为(25.94±0.08)%、(40.25±0.05)%、(59.48±0.03)%、(74.18±0.08)%,差异均有统计学意义(P＜0.01).(5)在转染siRNA 24 h后给予10μg/ml顺铂作用24 h,可使细胞的凋亡率增加至17.95%(P＜0.05),并使Bcl-2蛋白的表达水平下调.结论 通过RNAi技术可有效抑制IGF1R基因在转录和翻译水平的表达,抑制肿瘤细胞的增殖,出现G2期阻滞,明显提高细胞对顺铂化疗的敏感性.     

SDF-1对卵巢癌细胞增殖和侵袭能力作用的相关通路研究

目的:探讨PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002、MEK通路抑制剂PD98059对基质衍生因子-1(SDF-1)作用下卵巢癌细胞SKOV3的增殖、侵袭能力的影响,初步探讨SDF-1在卵巢癌中的相关作用通路。方法:细胞免疫化学法检测SDF-1不同作用时间及不同作用浓度对卵巢癌细胞中磷酸化Akt(p-Akt)和ERK(p-ERK)表达的影响。选取对数生长期细胞,分别加SDF-1 100ng/ml、CXCR4中和抗体10μg/ml、CXCR4抑制剂AMD3100 1μg/ml、LY294002 50μmol/L、PD98059 50μmol/L。MTT、Transwell细胞侵袭实验检测细胞的增殖、侵袭能力的变化。结果:随着SDF-1作用时间的延长,p-Akt、p-ERK蛋白表达水平增高;Akt、ERK蛋白的最佳活化时间为30min。作用30min时,随着SDF-1作用浓度的增加,p-ERK1、p-Akt蛋白表达水平增高,差异具有统计学意义(P0.05)。SDF-1可明显促进SKOV3细胞的增殖、侵袭能力(P0.05);但加入CXCR4中和抗体、CXCR4抑制剂AMD3100、通路抑制剂PD98059、LY294002后,SKOV3细胞的增殖、侵袭能力无明显变化(P0.05)。结论:SDF-1对卵巢癌SKOV3细胞的增殖、侵袭能力的增强作用可被PI3K/Akt信号通路抑制剂、MEK通路抑制剂所阻断。SDF-1可能通过Ras/ERK信号转导通路、PI3K/Akt信号通路发挥作用。     

喜树碱药物NSC606985抗卵巢癌细胞活性及其机制的研究

目的:体外观察喜树碱药物NSC606985对人卵巢癌细胞的生长抑制效应、凋亡诱导效应以及抗癌机制。方法:采用MTT法检测不同浓度(6.25,12.5,25,50,100nmol/L)NSC606985作用特定时间(24,48,72h)后对人卵巢癌COC1细胞的生长抑制效应,用AnnexinV-FITC/PI双染法FCM检测NSC606985对COC1细胞的凋亡诱导效应,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测缺氧(2%O2)对HIF-1α,AMFR及RhoC mRNA表达水平的影响。用免疫印迹技术(Western blot)检测物理性缺氧及氯化钴(CoCl2)化学模拟缺氧下HIF-1α蛋白的表达水平以及NSC606985对HIF-1α的调控效应。结果:纳摩尔浓度的NSC606985可以显著抑制人卵巢癌COC1细胞生长,呈现剂量及时间依赖效应。不同浓度(50,100,200nmol/L)NSC606985作用24h凋亡细胞比率分别是68.44%,80.86%,91.98%,具有剂量依赖性。在人卵巢癌细胞系COC1和SKOV3中,缺氧(2%O2)14h对HIF-1α、AMFR及RhoC mRNA的表达无影响,却可以上调HO-8910PM细胞HIF-1αmRNA水平。物理性缺氧(2%O2 14h)及CoCl2化学模拟缺氧(50μmol/L或150μmol/L 24h)诱导COC1,HO-8910PM及SKOV3等卵巢癌细胞株HIF-1α蛋白高水平表达,NSC606985(20～400nmol/L 14h或24h)可呈剂量依赖性显著下调缺氧诱导的HIF-1α蛋白。结论:NSC606985抑制卵巢癌细胞增殖具有剂量和时间依赖性,可能与诱导细胞凋亡相关。缺氧下HIF-1α在卵巢癌细胞的恶性生物学行为中发挥重要作用,NSC606985可通过下调缺氧诱导的HIF-1α蛋白发挥独特的抗癌机制。     

阻断PI3K/PKB通路对卵巢癌OVACA-3细胞株增殖和凋亡的影响

目的采用PI3K/PKB信号传导通路特异性抑制剂LY294002作用于人卵巢癌OVACA-3细胞,观察阻断PI3K/PKB信号传导通路对卵巢癌细胞增殖和凋亡等生物学特性的影响,揭示阻断PI3K/PKB信号传导通路治疗卵巢癌的机理和可行性。方法不同浓度的PI3K抑制剂LY294002作用于人卵巢癌OVACA-3细胞后,运用Western Blotting检测P-AKT及细胞核内NF-κBp65表达情况;MTT法、Annexin V-FITC流式细胞技术检测不同浓度的LY294002对卵巢癌OVACA-3细胞增殖及凋亡的影响。结果 LY294002可抑制人卵巢癌OVACA-3细胞中通路效应蛋白AKT、NF-κBp65的激活,且呈浓度及剂量依赖性。LY294002对细胞增殖抑制作用具有时间依赖性(F=10.398,P=0.001)和剂量依赖性(F=9.801,P=0.002)。LY294002可使卵巢癌细胞S期比例显著减少,G0/G1期比例增多,提示LY294002促使细胞在细胞周期G0-G1期受到阻滞。最终,抑制卵巢癌细胞增殖,促使其发生细胞凋亡,使细胞周期停滞在G1期。结论 PI3K/PKB信号传导通路阻断剂LY294002有可能成为治疗卵巢癌的新药,阻断PI3K/AKT信号传导通路可作为治疗卵巢癌的新切入点。     

脂联素对子宫内膜癌细胞增殖凋亡的影响

目的:研究脂联素对子宫内膜癌细胞增殖凋亡的影响及其信号的传导。方法:免疫细胞化学方法及RT-PCR法检测子宫内膜癌Ishikawa3-H-12细胞AdipoR1/R2蛋白及mRNA的表达,不同浓度脂联素(2.5,5,10,20μg/ml)作用子宫内膜癌细胞30min,Western blot检测AMPK磷酸化程度,不同浓度脂联素作用细胞48h及AMPK抑制剂(复合物C)预处理后脂联素再作用48h后,MTT试验及流式细胞仪检测不同处理组细胞的增殖及凋亡。结果:子宫内膜癌Ishikawa3-H-12细胞AdipoR1/R2蛋白呈棕黄色颗粒状表达,并可见AdipoR1/R2基因表达。除2.5μg/ml浓度外,其余浓度组脂联素均显著诱导AMPK磷酸化,不同浓度组AMPK活化差异有统计学意义(F=27.985,P0.01),脂联素以浓度依赖模式诱导子宫内膜癌细胞AMPK活化。脂联素以浓度依赖模式显著抑制子宫内膜癌细胞增殖(F=13.322,P0.01),诱导子宫内膜癌细胞凋亡(F=46.826,P0.01),复合物C可以阻断脂联素诱导的细胞增殖抑制及凋亡。结论:脂联素可能通过影响AMPK信号通路抑制子宫内膜癌细胞增殖,促进凋亡。     

雷公藤内酯醇联合紫杉醇对COC1/DDP细胞凋亡的影响及其对PI3K/AKT/GSK3β信号通路的调控

目的：通过研究雷公藤内酯醇（TP）联合紫杉醇对耐顺铂人上皮性卵巢癌细胞（COC1/DDP细胞）凋亡的影响,以探讨两药联合对COC1/DDP细胞作用的机制。方法：将对数生长期COC1/DDP细胞随机分为6组：空白对照组、紫杉醇组（3.13μg/ml）、LY294002组（10μmol/ml）、TP组（10ng/ml）、LY294002＋紫杉醇组（10μmol/ml LY294002＋3.13μg/ml紫杉醇）、TP＋紫杉醇组（10ng/ml TP＋3.13μg/ml紫杉醇）。采用MTT法检测各组的细胞增殖活性;普通光镜及AO/EB染色荧光显微镜观察细胞形态的变化;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测各组细胞中Akt、pAkt、GSK3β、p-GSK3β蛋白的表达变化。结果：（1）细胞增殖抑制率：TP＋紫杉醇组显著高于TP、紫杉醇组（P〈0.05）;LY294002＋紫杉醇组显著高于LY294002、紫杉醇组（P〈0.05）。联合用药组中,TP＋紫杉醇组显著高于LY294002＋紫杉醇组（P〈0.05）;单用药组中,TP组〉紫杉醇组〉LY294002组（P〈0.05）。各组抑制率均呈时间依赖性（P〈0.05）。（2）普通光镜及AO/EB染色荧光显微镜下观察,除空白组外,各用药组的细胞形态均有凋亡样改变。两联合用药组的细胞凋亡数显著高于各自单药组,TP＋紫杉醇组高于LY294002＋紫杉醇组;单用药组的细胞凋亡数：TP组〉紫杉醇组〉LY294002组。（3）流式细胞仪检测发现,两联合用药组的细胞凋亡率大于各自单药组（P〈0.05）。联合用药组中,TP＋紫杉醇组凋亡率显著高于LY294002＋紫杉醇组（P〈0.05）;单药组的细胞凋亡率为：TP〉紫杉醇〉LY294002（P〈0.05）。（4）p-Akt蛋白和p-GSK3β蛋白的表达从空白对照组→紫杉醇组→LY294002组→TP组→LY294002＋紫杉醇组→TP＋紫杉醇组,呈逐渐减少的趋势,而总Akt、GSK3β蛋白的表达不变。结论：TP可协同紫杉醇促进COC1/DDP细胞凋亡,其机制可能是通过抑制PI3K/Akt/GSK3β信号通路,从而下调了耐药相关蛋白p-Akt、p-GSK3β的表达。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合顺铂对宫颈癌细胞化疗增敏作用的研究

目的:通过检测组蛋白去乙酰化酶抑制剂(SAHA)联合顺铂(DDP)对宫颈癌SiHa细胞生长抑制和促凋亡结果,探讨SAHA对宫颈癌细胞化疗增敏的疗效及机制。方法:将SAHA 0.25、0.5、1、2、4、6μmol/L和DDP 1、2、4、6、8、10μg/mL分别组成单药组和不同SAHA+DDP联合用药组,另设不加药对照组。MTT法检测两种药物单用及联合用药对SiHa细胞的增殖抑制作用;通过流式细胞术(FCM)观察药物对细胞周期的影响;用AnnexinV-FITC标记药物作用后的细胞,了解其早期凋亡情况;镜检观察药物作用后细胞形态的变化。结果:SAHA有抑制癌细胞生长的作用,两药联合具有协同作用或相加作用(P<0.05);SAHA使细胞停滞在G1/G0期,与DDP联合作用后凋亡率增加,使细胞周期进一步阻滞在G1/G0期(P<0.05)。镜下可见对照组癌细胞生长旺盛,异型性高,SA-HA组与DDP组则可见细胞缩小变形,胞膜皱缩,贴壁不良,肿瘤细胞大量坏死,联用组尤为明显。结论:SAHA联合DDP可以抑制细胞增殖,停滞细胞周期,促进细胞凋亡,二者联合有协同作用。     

丙戊酸钠协同顺铂对HO8910细胞杀伤作用机制研究

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)协同顺铂(DDP)对人卵巢癌HO8910细胞的杀伤作用及机制。方法:以1μg/m l DDP联合3mmol/L VPA处理细胞,MTT法检测细胞生长抑制率;光镜下观察药物作用下各组细胞形态学的改变;流式细胞术检测细胞周期阻滞情况;RT-PCR法检测p53、p21 mRNA水平表达的改变;W estern blot法检测Ac-H3、p53、p21、Cyclin D1蛋白水平表达的改变。结果:(1)VPA能明显抑制HO8910细胞生长,且呈剂量和时间依赖性,VPA+DDP处理组抑制率高于DDP处理组,组间差异有统计学意义(P<0.05);(2)光镜下观察细胞形态,可见VPA处理组细胞体积缩小呈长梭型,胞膜皱缩,贴壁不良,VPA+DDP组改变更明显;(3)VPA阻滞卵巢癌HO8910细胞周期于G0/G1期,VPA+DDP组S期细胞明显减少;(4)VPA及VPA联合DDP均能够明显提高卵巢癌HO8910细胞组蛋白H3的乙酰化水平,上调p53、p21 mRNA及蛋白表达水平,降低CyclinD1蛋白的表达水平,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:VPA能够协同DDP杀伤卵巢癌细胞HO8910;其作用机制可能与VPA提高组蛋白乙酰化水平,上调p53、p21基因表达和下调Cyclin D1表达,引发细胞周期阻滞有关。     

三氧化二砷对人卵巢癌SKOV3细胞侵袭转移能力的影响

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对人卵巢癌细胞系SKOV3细胞侵袭转移能力及其对尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)及尿激酶受体(uPAR)表达的影响。方法:采用0.5μmol/L、1μmol/L、2μmol/L 3种浓度的As2O3处理人卵巢癌SKOV3细胞,48h后收集细胞,采用Transwell检测细胞的侵袭转移能力,实时定量PCR及免疫细胞化学方法检测uPA、uPAR mRNA及蛋白表达的变化。结果:经不同浓度As2O3处理的细胞,穿过模拟基底膜的数目逐步减少,As2O3明显抑制SKOV3细胞的侵袭转移能力(P<0.05);细胞uPA及uPARmRNA及蛋白表达水平与对照组相比显著降低(P<0.05),其表达水平随着药物浓度的增加而降低。结论:As2O3可抑制卵巢癌细胞的侵袭转移能力,其机制可能与抑制uPA、uPAR的表达有关。     

雌激素受体β与磷酸化细胞外信号调控蛋白激酶1、2在卵巢癌中的表达及其临床意义

目的:探讨上皮性卵巢癌组织中雌激素受体β(ERβ)与磷酸化细胞外信号调控蛋白激酶1、2(p-ERK1/2)的表达及其与临床病理参数的关系。方法:选取2010年10月至2011年12月青岛大学医学院附属医院经病理证实的上皮性卵巢癌组织标本70例,卵巢良性肿瘤24例,正常卵巢组织24例。采用RT-PCR和免疫组织化学SP法检测上述组织中ERβ和p-ERK1/2的表达。结果:(1)卵巢癌组织中ERβmRNA相对表达水平(0.3764±0.9826)显著低于卵巢良性肿瘤(0.4900±0.3742)及正常卵巢组织(0.4980±0.0434)(P<0.05)。卵巢癌组织中ERβ表达与组织学分型、细胞学分级及淋巴转移有关(P<0.05);ERβ蛋白阳性表达率及其与临床病理特征关系与ERβmRNA一致;(2)ERK1/2 mRNA相对表达水平(0.6007±0.1554、0.6951±1.3694)显著高于卵巢良性肿瘤(0.3575±0.0479、0.5125±0.0411)及正常卵巢组织(0.3027±0.1024、0.5431±0.0811)(P<0.05);ERK1/2表达与细胞学分级、临床分期及腹水有关(P<0.05);p-ERK1/2蛋白阳性表达率及其与临床病理特征与p-ERK1/2 mRNA一致。ERβ蛋白与p-ERK1/2蛋白表达呈负相关(r=-0.282,P<0.05)。结论:ERβ低表达和p-ERK1/2高表达于卵巢癌组织,可能在卵巢癌的发生、发展中有重要作用。     

SDF-1/CXCR4对卵巢上皮性癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:研究SDF-1/CXCR4在卵巢癌细胞生物学活性中的作用。方法:用RT-PCR方法检测卵巢癌细胞株SW626及Anglne中的SDF-1和CXCR4的表达。细胞经外源性SDF-1或者抗CXCR4单克隆抗体干预后,用MTT法检测细胞增殖,PI测细胞凋亡,Annexin-V/PI法检测细胞早期凋亡,Transwell小室检测细胞的迁移侵袭活性。结果:两株卵巢癌细胞株中,SW626细胞既表达SDF-1又表达CXCR4,Anglne细胞则两者均不表达。在SW626细胞中,SDF-1作用于无血清状态下培养的细胞(吸光度A值为0.911±0.01),与对照组(吸光度A值为0.506±0.01)相比,差异有统计学意义(P<0.01),而加入抗CXCR4单克隆抗体作用后(10μg/ml A值为0.725±0.01,20μg/ml A值为0.650±0.02),与SDF-1组相比,差异均有统计学意义(分别为P<0.05和P<0.01);抗CXCR4单克隆抗体作用于无血清状态下培养的细胞(10μg/ml A值为0.655±0.11和20μg/ml A值为0.520±0.04),与对照组(A值为0.724±0.03)相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。加入外源性SDF-1后,SW626细胞在无血清状态下的早期凋亡数为15.6%,相对于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。抗CXCR4单克隆抗体可增加SW626细胞中的PI阳性细胞数(P<0.01)。并且,与对照组相比,SDF-1促进SW626细胞的迁移和侵袭能力增强(P<0.01),而此活性可被抗CXCR4单克隆抗体阻断。结论:SDF-1/CXCR4可能通过促进细胞增殖、迁移、侵袭及抑制其凋亡,使卵巢癌细胞获得进展。     

丙氨瑞林与DDP对卵巢癌耐药细胞CoC1/cDDP凋亡的影响

目的 探讨促性腺激素释放激素类似物(GnRHa)丙氨瑞林(Alarelin)与顺铂(DDP)对人卵巢癌耐药细胞CoC1/cDDP凋亡的影响.方法 CoC1/cDDP细胞分别加入不同浓度的丙氨瑞林及DDP+丙氨瑞林培养,设空白对照组(不加药),流式细胞仪检测亚G1期细胞及凋亡细胞和线粒体膜电位(ΔΨm),半定量RT-PCR法检测CoC1/cDDP细胞生存素(survivin)-⊿Ex3 mRNA及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase-3 mRNA的表达.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定各组细胞生长抑制率.结果 ①随DDP浓度增加,亚G1期细胞及AnnexinV+/PI-细胞比例上升,对细胞的抑制作用增强(P＜0.05).丙氨瑞林作用于卵巢癌耐药细胞CoCl/cDDP后,随浓度增加降低ΔΨm,亚G1期细胞及AnnexinV+/PI-细胞比例增加,凋亡细胞增多,细胞增殖抑制率上升(P＜0.01).联合应用丙氨瑞林及10 μg/ml DDP后,线粒体膜电位(ΔΨm)降低,Rh123-细胞数增加,G1期细胞及AnnexinV+/PI-细胞增多,细胞抑制率明显上升,强于单用DDP或丙氨瑞林；②丙氨瑞林单独或联合DDP作用于CoCl/cDDP细胞,caspase-3mRNA的表达随丙氨瑞林浓度增加而上调,但survinin-⊿ Ex3 mRNA表达无明显变化(P＞0.05).结论 丙氨瑞林能促进凋亡,逆转CoCl/cDDP细胞对DDP耐药,其机制可能与降低ΔΨm,上调caspase-3mRNA表达有关.     

Netrin-1在HeLa细胞的表达及对HeLa细胞功能的影响

目的:研究Netrin-1在HeLa细胞的表达及对HeLa细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法:利用蛋白质印迹法检测Netrin-1在HeLa细胞的表达,并通过MTT、侵袭实验和流式细胞仪分别检测10,50和100ng/mlNetrin-1对HeLa细胞增殖能力、侵袭能力和凋亡的影响。结果:(1)Netrin-1在HeLa细胞有表达,其相对表达量为0.389±0.026;(2)MTT实验结果显示,Netrin-1可以促进HeLa细胞增值,表现为时间和剂量依赖性,与对照组有显著差异(P<0.05或P≤0.01);(3)Netrin-1处理组细胞迁移数分别为314±16,487±15和553±19,均明显多于对照组180±10(P均<0.05);(4)在Netrin-1干预下,HeLa细胞凋亡率呈递减趋势,与对照组比较有显著差异(P<0.05或P<0.01)。结论:HeLa细胞表达的Netrin-1与宫颈癌的侵袭转移有关,Netrin-1促进HeLa细胞增殖和侵袭能力,并抑制HeLa细胞凋亡,可能为未来宫颈癌的治疗提供依据。     

双酚A激活PI3K/AKT通路促进子宫内膜癌细胞增殖的研究

目的:研究双酚A(bisphenol A,BPA)活化磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)促子宫内膜癌细胞Ishikawa和RL952增殖的机制。方法:CCK8试剂盒检测Ishikawa和RL952细胞的增殖情况,蛋白质印迹(Western blotting)法检测p-AKT蛋白的表达。结果:在Ishikawa和RL952细胞中,BPA作用48 h时,细胞增殖呈浓度依赖性,1μmol/L的BPA促细胞生长效应最显著,Ishikawa和RL952细胞增殖率分别为0.758±0.023和0.692±0.042。BPA浓度超过1μmol/L后,促细胞增殖的作用下降。BPA作用24 h时促增殖效应不明显,BPA作用72 h时表现出细胞毒作用。1μmol/L BPA处理的Ishikawa和RL952细胞48 h后p-AKT蛋白的表达较对照组升高(P<0.05),加入PI3K抑制剂(LY294002),p-AKT的蛋白表达比对照组降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:BPA通过激活PI3K/AKT通路促进子宫内膜癌细胞增殖。     

Inhibitory effects of everolimus in combination with paclitaxel on adriamycin-resistant breast cancer cell line MDA-MB-231

ObjectiveWe aimed to evaluate the therapeutic effects of paclitaxel in combination with mTOR inhibitor everolimus on adriamycin-resistant breast cancer cell line MDA-MB-231 (MDA-MB-231/ADR).Materials and methodsMDA-MB-231/ADR cells were treated with different concentrations of paclitaxel and everolimus. The IC₅₀ values after 48 h of treatment were measured by the MTT assay. The apoptosis rate and cell cycle were detected by flow cytometry. The protein expressions of Akt, PI3K, mTOR, p-pI3K, p-AKT and p-mTOR were detected by Western blot.ResultsWhen paclitaxel at ≥1.56 μg/ml was used, the growth of MDA-MB-231/ADR cells was inhibited more significantly than that of control group (P < 0.05). After treatment with ≥6.25 μg/ml everolimus, the cell growth was also suppressed more significantly (P < 0.05). The IC₅₀ values of everolimus and paclitaxel were 32.50 μg/ml and 7.80 μg/ml, respectively. The inhibition rate of paclitaxel plus everolimus was significantly enhanced with increasing paclitaxel concentration (P < 0.001). After treatment with 7.80 μg/ml paclitaxel, the two drugs had best synergistic inhibitory effects on proliferation. Compared with drugs alone, the combination significantly promoted apoptosis (P < 0.001). The paclitaxel + everolimus group had significantly more cells in the G0-G1 phase than those of control and individual drug groups (P < 0.001). Everolimus significantly decreased mTOR and p-mTOR expressions compared with those of control group (P < 0.001). Compared with everolimus alone, the combination reduced the expressions more significantly (P < 0.05). Paclitaxel decreased the expression levels of PI3K, p-PI3K and p-AKT. Compared with paclitaxel alone, the combination significantly promoted the reduction of PI3K, p-PI3K and p-AKT expressions (P < 0.05).ConclusionEverolimus can enhance the effect of paclitaxel on MDA-MB-231/ADR cells, inhibit cell proliferation, induce apoptosis and arrest cell cycle in the G1 phase mainly by down-regulating the expressions of key proteins in the mTOR signaling pathway.