含A蛋白金黄色葡萄球菌在皮质醇放射免疫分析中的应用

在放射免疫分析中,抗原—抗体复合物与游离抗原的分离是极为重要的一环,它直接关系到分析结果的准确性。分离剂的品种很多,各有利弊。近年来报道,含A蛋白的Cowan Ⅰ型葡萄球菌是良好的抗体吸附剂,具有容易制备、性能稳定、保存方便和价格低廉等优点。我们在皮质醇放射免疫分析中,用含A蛋白的金黄色葡萄球菌(以下简称SPA菌体)     

快速检测痢疾杆菌的实验研究及应用

为了寻求一种简便、快速的痢疾带菌者的检查方法,我们设计了一种增菌培养基。用增菌后的菌液与标记了痢疾杆菌抗体的含A蛋白的葡萄球菌行协同凝集试验(简称CA),作为筛选手段,对阳性标本再进一步分离菌株和进行鉴定.此法简便有效,未见漏检.     

葡萄球菌A蛋白

一、葡萄球菌A蛋白的发现葡萄球菌A蛋白(staphlococcal protein A: SPA)是存在于大多数金黄色葡萄球菌(staphy aureus: SA)细胞壁上的一种蛋白质抗原。1940年Wer-     

黄连化浊胶囊对分泌及Ras相关GTP酶1A敲除诱导的外被蛋白Ⅱ功能障碍胰岛β细胞内质网应激的干预效果

目的 考察黄连化浊胶囊对分泌及Ras相关GTP酶1A (sar-1A)敲除诱导的外被蛋白Ⅱ（COP-Ⅱ功能障碍胰岛β细胞内质网应激的干预效果。方法 将小鼠胰岛β细胞Min6分为空白组（Min6细胞无任何干预）、阴性对照（NC）组（Min6细胞转染sar-1A-NC-siRNA）及sar-1A siRNA组（Min6细胞转染sar-1A siRNA）。收集sar-1A siRNA转染的Min6细胞,分为空白血清组（用含10%大鼠空白血清的培养基培养）,5%、10%、20%黄连化浊胶囊组（分别用含5%、10%、20%黄连化浊胶囊含药血清的培养基培养）,以及罗格列酮组（用含10%罗格列酮含药血清的培养基培养）。采用qPCR检测Min6细胞中sar-1A miRNA的表达、免疫荧光法检测sec31蛋白的表达,蛋白质印迹法检测胰岛素原、磷酸化真核翻译起始因子2α(p-eIF2α)、C/EBP同源蛋白（CHOP）、X盒结合蛋白1(XBP1)、肌醇需求酶1(IRE1)、 X盒（X-box）蛋白的表达。结果 空白组与NC组Min6细胞中sar-1A m RNA、sec31蛋白及胰岛素原、p-eIF2α...     

ESS在心血管材料表面细菌生物膜形成中的作用(摘要)

通过体外实验观察不同培养条件下,不同性状的表皮葡萄球菌(saphylococcusepidermidis,SE)对不同预处理的涤纶材料表面细菌生物膜(bacterialbiofilm,BF)形成的影响,以及兔抗细菌胞外粘质物(extracellularslimesubstance,ESS)抗体对涤纶材料细菌生物膜形成的影响,为临床以生物材料为中心的感染(biomaterialscenteredinfection,BCI)提供有益的思路.用生物膜形成阳性的表皮葡萄球菌RP62A和生物膜形成阴性的表皮葡萄球菌M7,在普通液体培养基及其调整浓度后的培养基(2%Nacl,3%葡萄糖)中,对以血浆预处理和未处理的涤纶材料进行体外动态的生物…     

葡萄球菌A蛋白(SPA)在布鲁氏菌病诊断中的应用

A 蛋白是大多数葡萄球菌细胞壁的主要成份,它能与人及其它哺乳类动物 IgG 的 Fc段可以发生非特异性结合,因此葡萄球菌A 蛋白(SPA)作为免疫试剂而被广泛应用。Coombs 试验,即抗人球蛋白试验,是布鲁氏菌病重要诊断方法之一。抗人球蛋白血清生产方法有多种,比较费时、费事,一般还要作异嗜性凝集素吸收,加之抗血清纯度和效价不同的影响容易引起非特异性凝集,致使该方法推广使用及诊断均存在一定困难。我们利用产生 A 蛋白的葡萄球菌CowanⅠ株,制成固定液,代替抗人球蛋白血清作 Coomb S 试验,取得了令人满意的结果。现报告如下。材料和方法含 SPA 的 CowanⅠ株及不含 SPA 的Wood 46株均由北京生物制品检定所提供,参照遵义医学院加热浸取法制备SPA,即以 PH5.9PB 制成10％(V/V)菌悬     

使用“免疫皂土”检测复盖于葡萄球菌表面的“A”蛋白(摘要)

近年来利用葡萄球菌表面 A 蛋白的 FC受体与抗体结合,进行协同凝集试验,在细菌学和免疫学领域中的应用日益广泛。此项工作中之含 A 蛋白的葡萄球菌稳定液是试验成败的关键之一。我们利用实验室已有的,着色的免疫皂土与葡萄球菌 A 蛋白上的 FC受体结合而发生凝集的这一现象,将其用来定量检测 A 蛋白。经试验,方法简便,结果稳定可靠,有一定的实用意义,特摘要报告如下:     

白细胞介素-4对肺泡上皮细胞钠离子通道β亚基调控研究

目的 研究不同时间不同剂量白细胞介素-4(IL-4)作用下A549细胞钠离子通道β亚基(β-ENaC)的变化情况.方法 以A549细胞为模型,在含IL-4培养基不同时间不同剂量培养下,分别用免疫印迹法以及RT-PCR法测定β-ENaC蛋白表达以及mRNA变化转录情况.结果 IL-4可以呈剂量、时间依赖性的下调β-ENaC的表达,这种蛋白表达的下调作用是通过基因涮控起作用的.IL-4(1 ng/ml)培养A549细胞3 h,β-ENaC蛋白及mRNA开始下降,在6 h后出现显著差异(P<0.05),不同剂量的IL-4(0.1、10、100 ng/ml)培养A549细胞12 h在0.1 ng/ml时即出现显著的差异(P<0.05).结论 IL-4可通过下调β-ENaC的表达抑制肺泡水肿液清除能力,从而不利于急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征的预后.     

SPA痢疾杆菌分型试剂在实际应用上的价值

金黄色葡萄球菌细胞壁的主要成分 A 蛋白(Staphylococcal Protein A,简称 SPA)能与正常人及多种哺乳动物血清中 IgG 分子 Fc 段非特异结合,而 IgG 的 Fab 段则暴露于外,并保持其正常抗体的活性,当与特异性抗原相遇时,则抗原与 IgG 的 Fab 段相结合。如将含 A 蛋白葡萄球菌本身作为载体,用特异抗体致敏,如遇特异抗原,则能引起协同凝集反应。协同凝集反应已在细菌学上应用于细菌的分型,但大多属于实验室方面的研究,正式作为诊断试剂应用于临床的报告不多。     

新型四环素药物Eravacycline体外诱导金黄色葡萄球菌耐药16S rRNA基因突变位点分析

目的:研究Eravacycline体外诱导金黄色葡萄球菌耐药菌株的核糖体30S亚基16S rRNA基因和核糖体蛋白变异特点,阐明金黄色葡萄球菌Eravacycline耐药机制。方法:选择3株金黄色葡萄球菌株,采用Eravacycline不同压力浓度下逐渐诱导Eravacycline耐药金黄色葡萄球菌耐药菌株,挑取诱导菌株单克隆,采用琼脂平板稀释法测定母株及诱导系列的Tigecycline和Eravacycline的MIC值;通过PCR扩增其5个拷贝的16S rRNA基因(RR1-RR5)和30S核糖体蛋白基因,将诱导的Eravacycline耐药株扩增产物测序后与母株序列比较,获得该基因片段突变位点。结果:经过体外Eravacycline不同浓度梯度多步诱导共挑取6株Eravacycline耐药菌株,这些菌株的Tigecycline和Eravacycline的MIC值范围分别为8～16μg/mL和32～64μg/mL。16S rRNA基因PCR测序分析提示该基因的主要突变位点分别为RR1(T170G)、RR2(A1124G,G77A)、RR3(C810T)、RR4(G185A,G1036A),30S亚基核糖体蛋白S3蛋白没有突变,30S亚基核糖体蛋白S10基因多个位点突变。结论:金黄色葡萄球菌Eravacycline诱导耐药后可导致Tigecycline和Eravacycline的交叉耐药及16S rRNA基因和30S亚基核糖体蛋白S10位点突变。     

人和羊IgG对噬菌体展示细菌免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库的体外进化筛选

目的 使用人和羊不同物种IgG来诱导噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库进行体外分子进化筛选,判断不同的Fc段构像是否具有特异的结合优势,同时探索其优势结合序列的组合特点.方法 通过PCR获得金黄色葡萄球菌蛋白A(SpA)的A、B、D、E和链球菌(C和G群)蛋白G (SpG)的B2、B3各单结构域片段,构建...     

SPA协同凝集试验快速检测大肠杆菌不耐热肠毒素

我们在做产肠毒素大肠杆菌(ETEC)质粒电泳分析过程中,建立了金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)协同凝集试验检测大肠杆菌不耐热肠毒素(LT),现将结果报告如下。材料和方法一、菌种:5株ETEC标准株来自中国药品生物制品检定所,24株人源ETEC菌株分别来自军事医学科学院、解放军302医院和本所。二、培养基:SPA协同凝集试验和兔肠结扎用Biken NO_2产毒培养基。质粒电泳用LB培养基。三、SPA协同凝集试验:将ETEC标准株,待检株和阴性对照株分别接种1ml Biken NO_2产毒培养基,37℃振荡培养6～7小时,15000rpm离     

siRNA沉默CTGF表达对高糖诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的探讨针对结缔组织生长因子(CTGF)基因的siRNA对高糖条件培养下的人肾小管上皮细胞株HK-2细胞向间充质细胞转分化(EMT)的影响。方法将体外培养的HK-2细胞分为6组:(1)正常对照组,培养基含D-葡萄糖1g/L;(2)等渗对照组,培养基含D-葡萄糖1g/L,甘露醇3.5 g/L;(3)高糖组,培养基含D-葡萄糖4.5 g/L;(4)高糖+空白对照组:细胞转染空白质粒后于高糖培养基中培养;(5)高糖+阴性对照组:细胞转染含无关序列的重组质粒后于高糖培养基中培养;(6)高糖+干扰组:细胞转染针对CTGF的siR-NA表达质粒后于高糖培养基中培养。应用RT-PCR检测CTGF mRNA水平,Western blot法检测CTGF、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白水平。结果高糖刺激可上调HK-2细胞的CTGFmRNA及蛋白水平,并呈时间依赖性降低HK-2细胞的E-cadherin蛋白表达水平,升高α-SMA蛋白表达水平。而通过特异性siRNA抑制CTGF mRNA表达后,细胞的CTGF蛋白表达随时间延长进行性降低,同时伴有细胞E-cadherin蛋白表达升高,α-...     

用放射免疫法测定血小板表面相关IgG的临床应用

近年来,国外在检测血小板表面相关IgG(PAIgG)的技术方面有很大进展,采用的方法很多。我们利用葡萄球菌蛋白A能和IgG结合的特性,应用~(125)Ⅰ标记葡萄球菌蛋白A(简称~(125)Ⅰ-SPA)的方法检测血小板表面相关IgG,并观察了正常人59例和各种疾     

高效液相色谱法测定马兜铃酸A在细胞培养基中含量变化*

[目的]建立细胞培养基中马兜铃酸A高效液相色谱(HPLC)法的测定方法,考察在细胞培养条件下马兜铃酸A在培养基中的稳定性。[方法]样品经甲醇沉淀蛋白,10 000 r/min,离心5 min,取上清液进样。采用HPLC法,Waters C18柱(150 nm×4.6 nm,5μm),甲醇-水(含3%的冰醋酸)(70∶30,V/V)为流动相;检测波长260 nm,柱温30℃,流速1 mL/min。[结果]马兜铃酸A在0.5~50 mg/L范围内线性良好,相关系数r=0.999 8;日内、日间精密度相对标准偏差(RSD)分别为0.96%、1.92%;回收率为94.01%~104.34%。[结论]马兜铃酸A在培养基中3 d内含量稳定,该法简便、灵敏、特异性强,适用于细胞培养基中马兜铃酸A含量的测定。     

金黄色葡萄球菌Sortase A原核表达纯化方法的研究进展

众所周知,金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)转肽酶A (Sortase A)在致病中起着不可或缺的作用,已成为重要研究的靶酶。虽然已有多种实验方法用于Sortase A的原核表达纯化,但由于缺乏通用的技术来得到理想的目的蛋白,因此应当结合使用多种方法以降低误差。对不同的技术在金黄色葡萄球菌Sortase A原核表达过程的优缺点进行比较分析,并针对性地提出比较理想的解决方案,可为Sortase A作为靶酶的研究提供一些参考。     

选择A蛋白葡萄球菌标准株(Cowan Ⅰ)替代菌株的实验研究

国外对金黄色葡萄球菌A蛋白(SpA)及其应用,已进行了广泛的研究。我们从收集到的金黄色葡萄球菌中,选出了含有丰富A蛋白的Z_5和No.1800株及不含A蛋白的Z_(12)株,经特异性抗体标记后的协同凝集反应,证明Z_5和No.1800株结合IgG的效果良好,可以替代国外标准株Cowan Ⅰ,而Z_(12)株因不含A蛋白,不能结合IgG,故可替代国外标准株Wood 46。Z_5和No.1800株及Z_(12)株的建立为开展SpA在免疫学方面的研究提供了必要条件。     

应用葡萄球菌A蛋白柱免疫吸附法治疗血液病

近年来,采用葡萄球菌 A 蛋白柱进行体外免疫吸附治疗,已用于产生抗体或循环免疫复合物(CIC)的恶性肿瘤、自身免疫性疾病及部分血液系统疾患,并初步取得一定疗效。本文就该疗法在血液系统疾患治疗中的应用作一概述。一、制备及作用机理以高度提纯的葡萄球菌 A 蛋白50mg 或200mg共轭吸附于硅质柱,制成 A 蛋白柱(PROSORBA柱)。用4L 无菌盐水冲洗柱,然后用0.5L 含5000U肝素的无菌盐水灌洗柱。采集患者血浆250～2000ml 通过该柱,继以10～20ml/min 速率由静脉回输给患者,或使用血浆分离器作连续治疗,每周1～3次,每例至少4次,总次数10～15次,每次治疗需更换柱。血浆中的正常成分可回输给患者,不     

大肠癌普查互补性筛检方案的研究

据《中华内科杂志》1994年33卷第6期报道第一军医大学南方医院消化科周殿元等,为减少序贯普查便隐血试验(FOBT)对大肠癌筛检的漏检率,将人血红蛋白抗血清包被的含A蛋白葡萄球菌(SPA)进行免疫便隐血试验(SPA试验)和直肠粘液T抗原检测(即Shams试验)联合用于大肠癌普查初筛,以验证两者的互补效果。     

肿瘤坏死因子-α对NIH3T3细胞成熟化作用的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子-α (TNF-α)对NIH3T3细胞成熟化所起的作用.方法 体外培养NIH3T3成纤维细胞,将细胞分为空白对照组(A组)、TNF-α组(B组)及TNF-α+Anti-TNFRSF1B组(C组).细胞制成 2×108/L的细胞悬液后,接种于25 cm2培养瓶中,待细胞呈汇合状态时,换用无血清DMEM高糖培养基培养12～16 h.然后A组换用含体积分数0.02胎牛血清的DMEM高糖培养基继续培养;B组换用含100 μg/L TNF-α的培养基培养;C组先加入浓度为50 μg/L的Anti-TNFRSF1B作用1 h后,倒出培养基后再加入含100 μg/L TNF-α的培养基继续培养.然后采用RT-PCR方法测定各组Ⅰ型胶原和基质金属蛋白酶3(MMP3)mRNA的表达,Western Blot方法测定各组Ⅰ型胶原蛋白和MMP3蛋白的表达.结果 B、C组 MMP3 mRNA及蛋白的表达较A组升高,差异均有显著意义(t=-13.413～5.076,P<0.05);B组较C组升高,差异也具有显著意义(t=4.441～5.076,P<0.01);B、C组Ⅰ型胶原的表达较A组降低,差异也均有显著性(t=-4.950～5.808,P<0.05),B组较C组降低,差异也均有显著性(t=-4.950～-3.823,P<0.05).结论 TNF-α可促进NIH3T3细胞活化.