成人T细胞白血病N—ras基因点突变的研究

成人Ｔ细胞白血病由人类Ⅰ类嗜Ｔ细胞病毒引起，但其发病机理仍不清楚，我们应用逆转录－多聚酶链的以应结合直接序列分析检测１０例ＡＴＬ患的Ｎ－ｒａｓ基因，结果在一例ＡＴＬ发现Ｎ－ｒａｓ６１位点突变，说明ＨＴＬＶ－Ｉ感染之后有多种因素参与ＡＴＬ的发展。     

聚合酶链反应检测携带N－ras癌基因点突变的急性髓细胞白血病残留细胞的观察

我们建立了用于检测以Ｎ－ｒａｓ癌基因点突变为克隆标志的急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）患者骨髓内微量残留白血病细胞（ＭＲＬＣ）的聚合酶链反应和寡核苷酸探针杂交法。它可扩增出１０ｐｇ的微量ＤＮＡ，检测ＭＲＬＣ的敏感性是０．５％～０．１％，特异性强。临床筛选检测了１０例ＡＭＬ患者证实其中３例出现Ｎ－ｒａｓ基因第１３位点突变，随访其中２例，初步表明Ｎ－ｒａｓ点突变可作为白血病克隆标志，可用于检测ＭＲＬＣ。     

成人T细胞白血病一例

成人Ｔ细胞白血病一例郭笑如余莲廖清霞黄春鑫患者，男，５６岁。因头晕、乏力伴不规则发热１月余，于１９９４年１２月２日入院。患者自幼生长闽西山区，长期务农，从未到过沿海地区。父母２０年前已故。兄弟２人、妻子及３子、１女均健在，无类似病史。查体：全身皮肤、...     

小儿急性T淋巴细胞白血病tal－1基因缺失分析

根据ｔａｌ－１基因缺失上下游序列设计一对引物，应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术对１０株人白血病细胞株和７０例小儿急性白血病骨髓标本进行ｔａｌ－１基因缺失分析。结果ＣＥＭ、ＨＢＳ－２和ＲＰＭＩ－８４０２三株Ｔ细胞白血病（Ｔ－ＡＬＬ）细胞株以及３／１６例Ｔ－ＡＬＬ发现ｔａｌ－１基因缺失，５４例其它类型急性白血病均未见基因缺失，而且具ｔａｌ－１基因缺失的Ｔ－ＡＬＬ细胞均为胸腺发育Ｉ期，免疫表型特征为ＣＤ＿２＋、ＣＤ＿７＋、ＣＤ＿１￣－、ＣＤ＿４￣－和ＣＤ＿８￣－。ＰＣＲ方法敏感性达１０￣（－４）。说明ｔａｌ－１缺失发生于部分Ｔ－ＡＬＬ中，可用于微小残留病的检测。     

以PCR－SSCP分析和核苷酸序列直接测定技术检测人类白血病p53基因点突变

以多聚酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析（技术研究）３６例不同类型的白血病ｐ５３抗癌基因点突变，结果在１４例淋巴细胞白血病中发现３例有ｐ５３基因片段的泳动变位。进一步对其中的１例急性淋巴细胞白血病进行核苷酸序列直接测定，显示在第７外显子的２５７位编码子核昔酸由ＣＴＧ突变为ＣＡＧ、氨基酸由天冬氨酸突变为缀氨酸。２２例髓系白血病未发现有ｐ５３基因的点突变。结果提示ｐ５３抗癌基因点突变导致功能失活在淋巴细胞白血病的发病中可能起一定的作用。     

成人T细胞急性淋巴细胞白血病中NOTCH1突变的特征研究

本研究旨在阐明NOTCH1突变在成人T细胞急性淋巴细胞白血病（T-ALL）中的特征及临床意义。通过对42例成人T-ALL患者外显子（exon）26／异二聚体N末端（HD-N）、exon27／异二聚体c末端（HD-C）、exon28和exon34／脯氨酸-谷氨酸-丝氨酸-苏氨酸（PEST）区域进行扩增、克隆和测序,研究NOTCH1突变的发生率、突变位点和类型、突变与临床和实验室指标的相关性及其预后意义。结果显示,本组成人T-ALL中NOTCH1突变率66．7％（28／42）,共发现45种NOTCH1突变,最多见于HD-N（48．9％,22／45）和PEST（40．0％,18／45）;HD-N结构域突变最多位于氨基酸位点1575（L1575P）（25．O％,7／28）,PEST结构域突变最多位于氨基酸位点2443（14．3％,4／28）;初诊时白细胞计数大于10×10^9／L者NOTCH1突变组显著高于无突变组（91．7％vs 54．5％,P=0．021）;骨髓原始及幼稚淋巴细胞比例超过50％者突变组显著高于无突变组（95．8％vs 57．1％,P=0．006）;流式免疫表型CDl0阳性表达率突变组显著高于无突变组（51．9％vs0％,P=0．006））,CD15和CD11b阳性表达率突变组显著低于无突变组（分别为5．3％vs 42．9％,P=0．047和0％vs57．1％,P=0．002）。结论：成人T-ALL的NOTCH1突变具有不同于儿童的突变特征和预后意义,而且中国成人T-ALL的NOCH1突变与西方国家相比可能存在差异。     

FBXW7在成人T细胞性急性淋巴细胞白血病中的突变研究

背景:F-Box和WD40蛋白7(F-Box and WD40 domain protein 7,FBXW7)是E3泛素连接酶复合物的组份,控制NOTCH1,c-MYC和Cyclin E等多种蛋白的降解。目的:研究成人T细胞性急性淋巴细胞白血病(T-ALL)中FBXW7基因突变。方法:通过对54例成人T-ALL患者FBXW7外显子5-12进行扩增、克隆和测序,分析FBXW7突变的发生率、突变位点和类型、与NOTCH1突变的相关性及其临床预后意义。结果:本组成人T-ALL中FBXW7突变率11.1%,共发现4种点突变(R465H,R465L,R479P和R505C)和1个插入/缺失突变,FBXW7突变全部位于WD40结构域。研究还发现,FBXW7突变患者中83.3%同时存在NOTCH1突变,与FBXW7突变并存的NOTCH1突变均发生于HD结构域,包括点突变(L1574P,L1596H和L1600P),和缺失/插入突变。此外,研究还显示,FBXW7单独突变组患者的总生存时间比无突变组延长(P=0.049)。结论:FBXW7突变可能在NOTCH1介导的TALL发病机制有重要作用。     

急性T淋巴细胞白血病中SIL－TAL－1融合基因的分子生物学研究

ＴＡＬ－１基因位于１号染色体短臂１ｐ３２。在急性Ｔ淋巴细胞白血病（Ｔ－ＡＬＬ）中，２５％的患者该基因５’端发生丢失（约１００ｋｂ），与ＳＩＬ基因５’端相融合，形成ＳｉＬ－ＴＡＬ－１融合基因。我们用筑巢式逆转录／多聚酶链反应（ｎｅｓｔｅｄＲＴ／ＰＣＲ）方法检测ＳＩＬ－ＴＡＬ－１融合基因转录本。在１７例Ｔ－ＡＬＬ中４例检测到该融合ｍＲＮＡ，并证明该转录本由ＳＩＬ基因第１外显子与ＴＡＬ－１基因第３外显子拼接而成。对该法的敏感度测定显示，可从１０￣６个正常细胞中检测出１个肿瘤细胞，并在２例缓解期标本中检测到微量残留白血病（ＭＲＤ）。此外，对３例有融合转录本患者的ＤＮＡ进行ＰＣＲ检测发现，其ＴＡＬ－１基因５’端丢失的位点相同，均为Ｔａｌ￣（ｄ１）重组。可见，ＴＡＬ－１基因的改变是Ｔ－ＡＬＬ一个有用的克隆标志，为其诊断和残留白血病检测提供了十分重要的依据。     

小儿急性白血病MTS1基因缺失及点突变的研究

为探讨MTS1基因突变与恶性血液病的关系,应用PCR-SSCP和DNA印迹方法检测35例急性白血病(AL)患儿MTS1基因改变。结果显示:急性淋巴细胞白血病(ALL)缺失(包括点突变)为25.8％(8/31)。B-ALL纯合缺失为16％(4/25),T-ALL为33％(2/6)。点突变则两型各1例。结果证明:我国儿童ALL有MTS1基因失活的存在,T-ALL高于B-ALL,点突变仅见于少数病例。该基因失活与AL的发生发展及临床预后有密切关系。     

急性B淋巴细胞白血病病儿miR-21表达及意义

目的了解microRNA-21（miR-21）在急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）骨髓单个核细胞（BMMCs）中的表达水平及其意义。方法收集36例B-ALL病儿（其中高危型13例,标危型23例）化疗前后及12例骨髓常规正常非造血系统疾病病儿（对照组）的骨髓标本,采用实时荧光定量PCR方法检测BMMCs中miR-21表达。结果化疗前B-ALL组miR-21表达水平明显高于对照组,高危型组miR-21表达水平明显高于标危型组,差异有统计学意义（t=20.75、23.23,P〈0.05）。化疗后B-ALL病儿miR-21表达水平较化疗前明显减低（t′=10.56,P〈0.05）,其中以化疗敏感组减低最为明显（t=13.57,P〈0.05）;化疗耐药组miR-21表达水平化疗前后无明显变化（P〉0.05）。结论 miR-21过表达在B-ALL发病中发挥着重要作用,可作为判断儿童B-ALL预后指标之一。     

成人急性髓性白血病的反常免疫表型

对58例未经治疗的成人AML骨髓细胞用FCM及13种MoAB进行免疫表型测定。53.4%患者骨髓单个核细胞呈现纯髓系抗原表达(Ly~-AML)。34.5%患者的骨髓细胞除髓系外伴有淋巴系抗原表达(Ly~+AML)。在Ly~+FKAML,其淋巴系抗原表达的荧光强度明显弱于其髓系抗原的。在同样的诱导缓解治疗方案下,Ly~+AML组达完全缓解天数明显长于Ly~-AML组。AML细胞这种免疫表型特点是监测残存白血病细胞的良好标志,亦对临床提示应采用相应的治疗方案。     

急性白血病病人黏着斑激酶的表达及临床意义

目的观察黏着斑激酶（FAK）在急性白血病（AL）病人白血病细胞中的表达及临床意义。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测50例AL病人白血病细胞FAK mRNA的表达水平,以10例健康人作为正常对照。收集病人骨髓细胞,用24h常规培养方法制备染色体,采用R显带技术分析其染色体核型。结果正常对照组FAK mRNA阳性表达率为20.0%,AL病人为66.0%,差异有显著性（χ2=5.49,P〈0.05）。其中急性淋巴细胞白血病（ALL）和急性非淋巴细胞白血病（ANLL）病人FAK mRNA阳性表达率和表达水平均高于正常对照组（P=0.04,χ2=4.44,t=7.98、5.60,P〈0.05）,但ALL和ANLL比较差异无显著性（P〉0.05）。初诊和复发AL病人白血病细胞FAK mRNA阳性表达率和表达水平比较差异无显著性（P〉0.05）,但均高于正常对照组（χ2=9.38,P=0.02,t=8.79、7.58,P〈0.05）。缓解组病人FAK mRNA阳性表达率和表达水平明显低于初诊组和复发组（χ2=10.26,P=0.02,t=4.43、7.82,P〈0.05）,与正常对照组相比差异无统计学意义（P〉0.05）。AL病人异常核型检出组FAK mRNA的表达率和表达水平均明显高于未检出组（χ2=5.82,t=6.72,P〈0.05）。结论 FAK mRNA在AL中存在较高的表达,且与疾病的转归相关,可能为白血病的治疗提供新靶点。     

急性白血病病人XIAP表达及其临床意义

目的探讨急性白血病（AL）病人X染色体连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）的表达及临床意义。方法采用逆转录聚合酶链反应技术检测了46例不同类型、不同阶段AL病人白血病细胞中XIAP的表达情况,以11例健康人作为对照。结果 AL病人白血病细胞XIAP表达水平比对照组明显增高（t=13.96,P〈0.01）。初治组、缓解组和复发组AL病人白血病细胞XIAP表达水平均明显高于对照组（F=204.27,q=8.88～32.69,P〈0.01）,其中缓解组明显低于初治组和复发组（q=12.44、26.02,P〈0.01）,复发组明显高于初治组（q=17.55,P〈0.01）。结论 XIAP表达可能参与了AL的发生和发展过程,XIAP高表达的病人完全缓解率低,预后不良。XIAP高表达可能是导致白血病细胞对化疗药物不敏感的原因之一,XIAP有望成为白血病基因治疗的新靶点。     

非缺失型HbH病基因突变类型的研究

采用选择性聚合酶链反应扩增技术及等位基因特异寡核苷酸探针斑点杂交，分析了１２例经血液学检测及基因图谱分析确认为非缺失型ＨｂＨ病的样品。结果显示，１２例非缺失型ＨｂＨ病样品中，ＨｂＣｏｎｓｔａｎｔＳｐｒｉｎｇ８例（６６．７％），Ｈｂ广西２例（１６．７％），２例为未知突变类型（１６．７％），对这２例未知样品的α＿２％基因外显子ＩＩＩ及其旁侧的突变热点区域进行了扩增、克隆和测序，结果发现这２例的α＿２基因密码子１２４均有ＴＣＣ→ＴＣＧ突变，其中１例的α＿２基因３＇非编码区第３６位碱基发生Ａ→Ｃ突变。     

急性白血病病人骨髓细胞BAALC基因表达及意义

目的通过检测脑和急性白血病胞质（BAALC）mRNA在急性白血病（AL）病人表达,探讨其与AL病情进展及预后关系。方法应用逆转录聚合酶链反应技术,检测20例急性髓系白血病（AML）、8例急性淋巴细胞白血病（ALL）及11例特发性血小板减少性紫癜（ITP）、缺铁性贫血（IDA）等非恶性血液病病人（对照组）骨髓单个核细胞BAALC mRNA表达水平。结果初治组AL病人BAALC mRNA表达水平较对照组显著升高（F=8.59,q=5.62,P〈0.05）;经治疗获完全缓解后,与初治组比较,其表达水平显著下降,两组比较差异有显著性（q=3.99,P〈0.05）。BAALC mRNA表达水平与AL病人外周血白细胞计数及骨髓原始细胞比例无明显相关性（P〉0.05）。结论 BAALC mRNA表达与AL疾病进展及预后密切相关,可作为AL预后判断的有意义指标。     

柏-查综合征患者凝血酶原基因G20210A变异关系研究

目的 :了解柏 -查综合征 (BCS)患者凝血酶原基因G2 0 2 10A(FⅡ )变异频率 ,观察BCS的静脉血栓形成是否存在基因变异因素。方法 :利用聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性分析法 (PCR -RFLP)检测基因变异。结果 :本组 12例未发现凝血酶原基因G2 0 2 10A变异表达。结论 :BCS患者是否存在该基因变异 ,有待扩大病例组数进一步研究 ,以明确BCS血栓形成原因。     

对急性B淋巴细胞白血病的克隆性、多样性及对化疗药物敏感性的探讨

本文应用聚合酶链反应(PCR)及半巢式聚合酶链反应(nest-PCR)的方法,观察了50例急性B淋巴细胞白血病患儿,免疫球蛋白重链(IgH)基因第三高变区(CDR-Ⅲ)扩增产物图谱。所测患儿中的84％有扩增产物带,其中81％扩增带为一条,各扩增带长度有所不同,显示出白血病细胞的克隆性及高度的多样性。对其中28例进行了骨髓细胞形态学及PCR或nest-PCR扩增情况的近期追踪观察,发现后者既敏感又客观,而且PCR特异扩增带消失快慢的不同,可能与患儿对化疗药物敏感程度不同有关。因此,PCR可作为了解患者对药物敏感的程度,指导制订和调整化疗方案的一种简便易行的方法。     

HOMEOSTASIS OF ANTIBODY FORMATION IN THE ADULT RAT

Passive immunization of rats with homologous anti-sheep erythrocyte serum markedly inhibited the primary antibody response to various doses of sheep erythrocytes. Inhibition was "specific" and apparently produced by either "19S" or "7S" antibody to the antigen. Passive immunization inhibited splenic hyperplasia associated with the primary antibody response. Passive immunization 24 hours after active immunization effectively inhibited the primary antibody response. The markedly suppressive effect of specific antibody on the primary antibody response contrasted sharply with the absence of this effect on the secondary response. Antigen-antibody complexes formed in vitro elicited no measurable primary antibody response but did elicit a high secondary response. Exposure of normal spleen cells to the antibody in vivo or in vitro suppressed their response to the antigen in x-irradiated recipients. In contrast, cells from previously immunized animals transferred to x-irradiated animals produced antibody in the presence of passively given antibody. Thus, "potential antibody-forming cells" from normal animals were unresponsive to the antigen in the presence of specific antibody, while "antibody-forming cells" from previously immunized animals responded to the antigen in the presence of antibody. Presumably, antibody actively produced in small quantities by a few antibody-forming cells might inhibit antibody formation by potential antibody-forming cells. Confirmation of this suggestion was obtained by showing that some animals initially injected with small doses of antigen failed to produce measurable antibody to subsequent injections of larger doses of the antigen. Low doses of antigen capable of inducing unresponsiveness produced no measurable circulating antibody, but these doses did produce increased numbers of plaque-forming (antibody-releasing) cells in spleens of rats. Thus, the formation of specific antibody may provide a homeostatic or "feed-back" mechanism which controls or limits production of specific antibody to the portion of the antibody-forming system previously stimulated by the antigen. This mechanism may account in part for immunological unresponsiveness produced in certain other related experimental systems.