旋毛虫对三硝基苯磺酸诱导的实验性小鼠肠炎模型的干预研究

目的 研究旋毛虫对三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的实验性小鼠肠炎模型的影响及其免疫作用机制。方法观察感染和未感染旋毛虫小鼠于TNBS诱导肠炎后3d及7d不同指标的变化，包括小鼠生存率、疾病活动指数（DAI）、结肠大体损伤和病理损伤评分、炎症指标髓过氧化物酶（MPO）活性检测，结肠细胞因子IFN-γ和IL-4 mRNA的表达量分析。结果 预先感染旋毛虫后诱导TNBS模型组小鼠在造模后3d及7d与单纯模型组相比小鼠生存率升高（P〈0．05），DAI、结肠大体损伤和病理损伤评分及MPO活性下降（P〈0．05），结肠中IFN-γmRNA的表达量下调（P〈0．05），而IL-4 mRNA的表达量增加（P〈0．05）。结论 旋毛虫对TNBS诱导的实验性小鼠肠炎具有良好的干预作用，其免疫作用机制可能是通过下调炎症性肠病过度的．TH1型免疫反应、上调TH2型免疫反应而实现的。     

旋毛虫对不同肠炎模型小鼠脾脏淋巴细胞Th1/Th2水平的影响

目的：研究旋毛虫（T.spiralis）对肠炎小鼠［三硝基苯磺酸（TNBS）或唑酮（OXZ）诱导］脾脏淋巴细胞中Th1/Th2水平的影响。方法：雌性BALB/c小鼠,随机分为50%乙醇对照组、TNBS(OXZ)诱导肠炎模型组、预先感染T.spiralis后诱导TNBS(OXZ)模型组,每组小鼠取材时保证6只以上。对各组小鼠脾脏淋巴细胞进行分离,采用流式细胞术观察TNBS（OXZ）诱导肠炎模型组和预先感染T.spiralis后诱导TNBS（OXZ）模型组。造模后3 d和7 d脾脏淋巴细胞中Th1/Th2水平的变化。结果：与模型组相比,预先感染T.spiralis后诱导TNBS肠炎第3天脾脏Th1/Th2比值未见明显下降（P>0.05）,于第7天明显降低（P<0.05）。诱导OXZ肠炎模型后第3天及第7天小鼠脾脏Th1/Th2比值均明显低于T.spiralis干预组（P<0.05）。结论：针对TNBS 肠炎模型,T.spiralis可能是通过诱导Th2及Tr1型免疫反应抑制模型小鼠过度的Th1型免疫而起到良好的干预作用。在T.spiralis对OXZ模型小鼠的干预性研究中,并无T.spiralis感染诱发的Th2型炎症反应加重同样以Th2升高为主的OXZ模型小鼠的病情。     

对三硝基苯磺酸/乙醇与免疫复合物联合诱导的结肠炎动物模型免疫机制的探讨

目的:从细胞免疫和体液免疫的角度证实免疫复合法制作IBD动物模型较之目前引起学者广泛关注的三硝基苯磺酸/乙醇诱导的结肠炎动物模型更符合B淋巴细胞和T淋巴细胞混合作用所致IBD的要求,证实此模型可能是一种更为理想的IBD动物模型,并有利于探讨炎症性肠病的发病机制.方法:SD大鼠168只,雌雄各半,分为①正常对照组42只;②三硝基苯磺酸/乙醇模型组42只;③免疫复合物组42只;④三硝基苯磺酸/乙醇与免疫复合物联合诱导的结肠炎动物模型组42只(以上每组雌雄各半).分别于造模后 1、2、3、4、6、9、12周末将大鼠处死(各组每周处死6只,雌雄各半).观察各组外周血CD4+T细胞的变化,结肠组织CD4+T细胞表达,血清中IgG含量.结果:三硝基苯磺酸/乙醇与免疫复合物联合诱导的结肠炎动物模型组大鼠外周血CD4+T细胞百分含量均数为(44.808 6±9.183 0)%;结肠组织CD4+T细胞计数均数为179.857 1±35.954 6;血清中IgG含量均数为0.536 0±0.120 5皆明显高于其余各组,具有统计学意义.结论:从免疫机制的视角证实上述联合诱导的结肠炎动物模型是一种较理想的IBD动物模型,可作为研究IBD发病机制及评估药物疗效的有益工具.     

TRAIL对CIA小鼠脾细胞表达Th1/Th2细胞因子的影响

 摘要：目的 观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（Tumor Necrosis Factor Related Apoptosis Inducing Ligand , TRAIL）对胶原诱导型关节炎（Collagen-induced arthritis, CIA）小鼠的治疗效果,探讨TRAIL治疗类风湿性关节炎（Rheumatoid Arthritis, RA）的可能机制。方法 牛Ⅱ型胶原蛋白加弗氏完全佐剂免疫DBA/1J小鼠建立CIA模型,采用重组腺相关病毒AAV-TRAIL关节腔内注射进行治疗。CBA和流式细胞术检测Th1/Th2细胞因子的分泌。结果 AAV-TRAIL可改善CIA小鼠的病情,体外研究其机制发现TRAIL可抑制CIA小鼠的脾细胞分泌Th1型细胞因子,但对Th2型细胞因子没有作用。结论TRAIL对CIA小鼠的治疗作用可能和TRAIL抑制Th1型细胞因子分泌相关。     

TNBS诱导炎症性肠病大鼠结肠神经元tau蛋白磷酸化以及COX-2表达的变化

目的:探讨三硝基苯磺酸(trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)诱导炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)模型大鼠结肠神经元tau蛋白磷酸化和环氧合酶2(COX-2)表达的变化。方法:30只健康雄性成年Wistar大鼠随机分为对照组、IBD模型组和TNBS组,每组10只,IBD模型组以TNBS乙醇连续灌肠14 d造模,对照组和TNBS组分别以等量生理盐水和TNBS灌肠;观察大鼠的一般情况和结肠病理组织学改变,用anti-Hu作为神经元标志以免疫荧光法检测结肠黏膜下神经元的数量变化,免疫荧光双染色检测结肠黏膜下神经元COX-2和磷酸化tau231、tau262的表达变化。结果:与对照组比较,IBD模型组大鼠结肠黏膜下神经元数量明显减少(P0.05),神经元tau蛋白磷酸化程度明显升高(P0.05),而TNBS组大鼠神经元数量与对照组相比无显著差别;对照组和TNBS组大鼠结肠黏膜下神经元几乎不表达COX-2,IBD模型组大鼠结肠神经细胞胞核和胞浆中均有COX-2的表达,与对照组和TNBS组相比有显著差异(P0.05)。结论:TNBS乙醇诱导IBD模型大鼠结肠黏膜下神经元减少,可能与tau蛋白高度磷酸化及COX-2表达有关。     

旋毛虫感染经PD-1途径对BCG免疫小鼠细胞因子产生的影响?

探讨PD-1信号通路在旋毛虫感染影响卡介苗(Mycobacterium bovis bacille Calmette-Gu'erin,BCG)免疫小鼠细胞因子产生中的作用。首先,以旋毛虫肌幼虫(400条/只)分别感染C57BL/6遗传背景野生(WT)小鼠和PD-1基因缺失(PD-1~(-/-))小鼠,于感染后42 d处死小鼠,分离脾淋巴细胞以刀豆蛋白A(Concanavalin A,ConA)刺激培养48 h,ELISA检测培养上清中Th1型IFN-γ、IL-2、TNF-α,Th2型IL-4,和调节性TGF-β、IL-10细胞因子水平;进而,在上述相同感染条件下,于感染后28 d接种BCG,分别于免疫后7和28 d分离WT小鼠和PD-1~(-/-)小鼠的脾淋巴细胞,用卡介菌纯蛋白衍生物(purified protein derivative,PPD)体外刺激培养48 h,ELISA检测细胞培养上清中上述细胞因子分泌水平。结果显示,在单纯旋毛虫感染及感染后BCG免疫条件下,各细胞因子变化趋势趋于一致。WT小鼠感染组Th1型IFN-γ、IL-2水平明显低于未感染组,Th2型IL-4及调节性TGF-β、IL-10水平明显高于未感染组(P0.05),TNF-α水平无显著差异。而PD-1~(-/-)小鼠中,与未感染组相比,感染组Th1型IFN-γ、IL-2和TNF-α的下降水平,以及Th2型IL-4和调节性TGF-β、IL-10的上升水平较WT小鼠明显减小。上述结果表明,旋毛虫感染可经PD-1信号通路抑制BCG免疫诱导的Th1型细胞因子的产生,而促进Th2型细胞因子IL-4及调节性细胞因子的IL-10和TGF-β的生成。本研究为蠕虫感染抑制抗结核疫苗保护性效果的潜在机制提供了实验依据。     

内毒素对慢性HBV感染者Th1/Th2类细胞因子的影响

目的 通过研究慢性HBV感染者血浆内毒素(Endotoxin,ET)与Th1、Th2类细胞因子的关系,进而探讨其各自对慢性乙型肝炎(CHB)患者免疫功能的影响.方法 无菌收集HBV感染者和正常对照者血浆、血清,以鲎试剂法测定血浆ET水平,同时测定血清补体活性及Th1、Th2类细胞因子水平.分析ET与Th1、Th2类细胞因子的关系.结果 CHB患者IL-4与IL-10水平明显升高,IL-2、IL-12和IFN-γ水平明显降低;ET阳性组患者IL-4与IL-10水平明显高于阴性组,IL-12水平在阳性组明显低于阴性组;ET与AP50呈显著正相关.结论 CHB患者均有不同程度的Th1/Th2类细胞因子失衡,主要表现为:Th1类细胞因子减少而Th2类细胞因子增加,ET主要影响Th2类细胞因子,进而影响患者的免疫功能.     

TNBS诱导的BALB/c小鼠炎症性肠病模型建立的影响因素

目的建立2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的BALB/c小鼠炎症性肠病（IBD）模型,探讨其影响因素。方法将48只BALB/c小鼠随机分为8组：乙醇非夹闭对照组、乙醇夹闭对照组、低剂量非夹闭组、低剂量夹闭组、中剂量非夹闭组、中剂量夹闭组、高剂量非夹闭组、高剂量夹闭组,每组6只。各组分别用相应试剂灌肠造模,利用DAI评分及Wallace评分并结合一般情况评价模型。结果一般情况显示夹闭各组死亡小鼠均有肠梗阻现象,非夹闭组死亡小鼠未见肠梗阻现象;非夹闭各组体重低于乙醇非夹闭对照组（P〈0.01）;中剂量夹闭组和高剂量夹闭组体重低于乙醇夹闭对照组（P〈0.01）;高剂量夹闭组体重低于高剂量非夹闭组（P〈0.01）。疾病模型评价显示中剂量非夹闭组和高剂量非夹闭组第7天DAI评分及Wallace评分均高于乙醇非夹闭对照组（P〈0.01）,中剂量夹闭组和高剂量夹闭组第7天DAI评分及Wallace评分均高于乙醇夹闭对照组（P〈0.01）;中剂量夹闭组第7天DAI评分高于中剂量非夹闭组（P〈0.05）;中剂量夹闭组和高剂量夹闭组Wallace评分高于同等剂量的非夹闭组（P〈0.01）;中剂量夹闭组Wallace镜下评分高于中剂量非夹闭组（P〈0.01）。结论 TNBS诱导BALB/c小鼠IBD模型过程中,在造模试剂注入结肠后不宜夹闭肛门。同时,相对于大鼠,小鼠造模所用的TNBS剂量略高。     

sGVHD小鼠结肠IEL细胞CD137 和Th1细胞因子的表达

目的研究协同刺激分子CD137和Th1类细胞因子在小鼠同基因型移植物抗宿主疾病（sGVHD）中的作用。方法受体鼠用同基因型骨髓移植后,用环孢菌素A（CsA）诱导3周建立小鼠sGVHD模型;从小鼠结肠中分离上皮内淋巴细胞;用流式细胞术测定细胞亚群,RT-PCR方法检测CD137和Th1类细胞因子的表达,^3H掺入法测定T细胞增殖的抑制。结果sGVHD时,小鼠病变器官结肠上皮内淋巴细胞（IEL）中CD137及Th1类细胞因子（IL-12,IFN—γ,TNF-α）表达较正常,而移植对照组明显增高（P〈0．01）;IFN-γ的增高始于环胞霉素A诱导治疗后3周,而CDl37和IL-12、TNF-α表达增高仅在出现GVHD样症状时,Th2类细胞因子（IL-4、IL-10）在GVHD的诱导和发生中均无明显改变。     

Effect of Trichinella spiralis intervention on TNBS-induced experimental colitis in mice

Inflammatory bowel disease (IBD), including ulcerative colitis and Crohn’s disease (CD), are chronic autoimmune diseases with a high recurrence rate. Epidemiological data have shown that the incidence of IBD increases annually because of improved sanitary conditions and reduced parasitic infection rates. In this experiment, experimental colitis was induced in mice by administering 2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS) 28?days after they were infected with Trichinella spiralis to confirm that T. spiralis infection could alleviate the severity of TNBS-induced colitis.Thirty-six male BALB/c mice aged 6–8 weeks were randomly divided into four groups: control group (with 50% ethanol, Control), T. spiralis-infected group (TS-Control), TNBS-induced colitis model group (Colitis), and T. spiralis-pre-infected and TNBS-induced colitis group (TS-Colitis). The mice were sacrificed 3, 7, and 14?days after the model was established. Changes in various colitis indicators to investigate the effect of T. spiralis infection on TNBS-induced murine CD model.Results showed that the weight, DAI score, and macroscopic and microscopic colon damage in the TS-Colitis significantly decreased compared with those in the Colitis. ELISA revealed that the IFN-γ expression decreased and the IL-4 expression increased in the TS-Colitis compared with those in the Colitis. Western Blotting results revealed that the NF-κB expression increased in the Colitis and higher than those in the TS-Colitis. And Flow cytometry results revealed that the percentage of CD4+CD25+Foxp3+ Treg cells significantly increased in the TS-Colitis.T. spiralis-infected mice induced Th2 immune responses and balanced Th1 immune responses stimulated by TNBS to ameliorate intestinal inflammation.     

紫外线减毒弓形虫免疫对小鼠旋毛虫感染肌肉组织病理的影响

目的探讨紫外线减毒弓形虫免疫对小鼠旋毛虫感染肌肉期组织病理的影响。方法ICR小鼠分为两组，实验组为紫外线减毒弓形虫免疫3周后再感染旋毛虫，对照组为旋毛虫单独感染。结果与旋毛虫单感染相比，小鼠预先经紫外线减毒弓形虫免疫再感染旋毛虫后23d，其肌肉期幼虫周围的炎症细胞浸润明显减轻，肌肉组织的病理损伤也明显减轻。结论紫外线减毒弓形虫免疫对小鼠旋毛虫感染肌肉期的组织病理有一定的免疫调节作用。     

Correlates of Immune Response in Trichinella spiralis Infection

Trichinella spiralis infection induces Trichinella-specific IgG antibody and high level of blood eosinophil. However, the kinetics induced by different parasite burdens during infectious periods remains unclear. In this study, rats were infected with 100, 1000, or 3000 larvae of T. spiralis (100 TS, 1000 TS, or 3000 TS). Correlates of eosinophils, antibody responses, and Regulated on Activation, Normal T Cell Expressed and Secreted (RANTES) with worm burdens were evaluated at 1 week, 2 weeks, 1 month, and 2 months postinfection. Heavy infections (1000 TS and 3000 TS) showed significantly higher levels of eosinophil, IgG, and IgG1 antibody responses at 2 weeks postinfection compared to light infection (100 TS). The highest RANTES mRNA expression was also found in the heavy infection group (3000 TS). The results indicate, at early stage of infection (week 2), heavy infection induced higher levels of IgG, IgG1, eosinophil, and RANTES responses. However, at late stage of infection (month 2), there were no correlates of immunity with parasite burdens. Higher levels of IgG and IgG1 antibody responses are critical in heavy T. spiralis infection. These results provide important information in evaluating immune responses by T. spiralis infective stage during the T. spiralis infection.     

斑点ELISA与环幼沉淀试验诊断旋毛虫病的研究

目的比较斑点ELISA法（Dot—ELISA）和玻片环幼沉淀试验（CPT）检测感染旋毛虫大鼠血清抗体的敏感性和特异性。方法采用Dot-ELISA和CPT两种免疫学诊断技术检测实验感染旋毛虫大鼠血清特异性抗体。结果Dot．ELISA和CPT法检测阳性率分别为97．5％和95．O％,差异无统计学意义（x2=0．3463,P〉0．05）。同时用此两种血清学方法检测正常大鼠、斯氏狸殖吸虫感染大鼠、日本血吸虫感染兔及蛔虫病人血清,除1例蛔虫病人CPT阳性外,其他均为阴性。从第2周开始旋毛虫感染大鼠Dot—ELISA和CPT均能测出抗体,第5周达高峰。结论Dot．ELISA和CPT对旋毛虫特异性IgG抗体的检测均有较好的敏感性和特异性。     

旋毛虫新生幼虫T668重组抗原对小鼠的保护性免疫

目的研究旋毛虫新生幼虫T668重组抗原的免疫原性,制备基因工程疫苗。方法以旋毛虫新生幼虫期特异性基因T668在大肠杆菌中的表达蛋白为抗原免疫小鼠,每间隔10d免疫1次,共免疫3次。末次免疫后10d,每只小鼠攻击感染200条旋毛虫感染性肌幼虫,感染后5周用消化法检查肌幼虫(ML)负荷。结果T668重组抗原免疫组肌幼虫减虫率明显高于佐剂组和对照组。结论T668重组抗原能诱导小鼠产生一定程度的保护性免疫,且可激发特异性体液免疫。     

IgE在小鼠旋毛虫感染急性期免疫反应中的作用

目的观察感染旋毛虫小鼠IgE水平的动态变化及其抗体依赖细胞介导的细胞毒效应（antibody-dependent cell cytotoxicity,ADCC）,并通过IL-4、IL-5的表达测定,探讨IgE在旋毛虫感染小鼠急性期免疫反应中的作用。方法采用双抗体夹心ELISA法,分别检测感染旋毛虫后7、14、21、28、35、60d小鼠外周血中总IgE水平,同时用间接ELISA法测定特异性IgE水平,采用体外培养法做IgE介导嗜酸性粒细胞对旋毛虫肌幼虫的体外杀伤实验,按分组设计在96孔细胞培养板的板孔中加入感染旋毛虫小鼠外周血提取的嗜酸性粒细胞（Eos）、感染鼠血清及感染鼠的旋毛虫肌幼虫与含有10%灭活小牛血清的RPMI-1640培养液,共培养2d。显微镜下,分别在12、24、48h观察小鼠Eos对旋毛虫肌幼虫的影响,另外,用RT-PCR方法观察感染旋毛虫小鼠脾脏中IL-4、IL-5的mRNA含量,观察这两种细胞因子的表达情况。结果实验组较对照组总IgE水平增高,在14、21d达到高峰（P〈0.01）,第3周后逐渐下降,特异性IgE在14和21d组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.01）,阳性率达88.9%。在体外培养的条件下,单纯Eos对旋毛虫肌幼虫无杀伤作用,在免疫血清参与下,Eos对幼虫的杀伤作用明显增强,灭活IgE后,Eos的杀伤作用明显减弱,与单纯Eos的情况无差别。感染组小鼠脾脏中IL-4和IL-5mRNA的含量均明显高于对照组。结论血清中IgE抗体参与了旋毛虫急性期的免疫,主要作用为快速排出肠道内的旋毛虫脱囊幼虫,Eos对旋毛虫肌幼虫杀伤的过程需要IgE的参与,且IgE是Eos发挥ADCC效应所依赖的重要免疫球蛋白,感染旋毛虫小鼠的IL-4和IL-5表达量明显升高,故说明IgE是小鼠旋毛虫感染急性期重要的抗体。