利福平减弱NAPQI耗竭谷胱甘肽的HPLC分析

目的进一步研究小鼠肝微粒体温孵体系中利福平（RFP）减弱对乙酰氨基酚（APAP）毒性中间产物N-乙酸-对苯醌亚胺（NAPQI）耗竭谷胱甘肽（GSH）的保护作用。方法制备小鼠肝微粒体，体外温孵，HPLC测定APAP、RFP及相关代谢产物浓度变化。结果10．8％APAP（10μg／ml）温孵1h后代谢，分别加入RFP和GSH，23．0％、28．2％的APAP温孵1h代谢。RFP（50μg／ml）温孵1h后没明显变化，而在加入APAP温孵1h后开始减少，醌式利福平（QRFP）大量产生。结论RFP和GSH一样加速了APAP代谢，却减弱了APAP毒性中间产物致GSH耗竭的作用，RFP的结构中有两个酚羟基，很可能具有清除对乙酰氨基酚毒性中间产物的可能。     

阿魏酸钠减轻对乙酰氨基酚致小鼠肝损

小鼠ig阿魏酸钠(100mg·kg~(-1),qd×10 d)可减轻ip对乙酰氨基酚所致肝损,使血清丙氨酸转氨酶活性下降,肝糖原、谷胱甘肽含量回升,肝脏和肝微粒体谷胱甘肽S-转移酶活性增加,肝丙二醛含量减少以及膜表层流动性降低,说明阿魏酸钠对小鼠肝脏有保护作用。     

黄芩素激活核转录因子Nrf2拮抗肝毒性的研究

目的研究黄芩素(Baicalein,BAI)对核转录因子Nuclear factor erythroid 2-related factor 2(Nrf2)的转录激活,以及对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)、乙醇(ethanol)和对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导的人正常肝L-02细胞毒性的拮抗作用。方法在肝L-02细胞中,采用瞬时转染报告基因实验检测不同浓度黄芩素对Nrf2转录激活的影响。在L-02细胞上分别用APAP(10 mmol·L-1)、CCl4(10 mmol·L-1)、Ethanol(100 mmol·L-1)诱导肝细胞毒性。黄芩素1、10、25、50、100μmol·L-1分别与细胞预孵15 min后,加入上述肝毒性物质,48 h后采用MTT法检测细胞存活率。结果与对照组比较,黄芩素(25、50μmol·L-1)能明显提高Nrf2的转录激活(P<0.01,P<0.05)。与对照组比较,3种肝毒性物质均能明显降低细胞存活率(P<0.01),而黄芩素能剂量依赖性地提高给予APAP、CCl4和Ethanol后降低的L-02细胞存活率(P<0.01)。结论黄芩素可以诱导重要的抗氧化核转录因子Nrf2的转录激活,这可能是黄芩素拮抗外源性肝毒性物质APAP、CCl4和Ethanol诱导的L-02肝细胞毒性的机制之一。     

阿魏酸钠对异烟肼和利福平肝损害小鼠的保护作用

目的：观察阿魏酸钠对异烟肼(INH)和利福平(RFP)肝毒性的保护作用。方法：分别测定血清谷丙转氨酶(ALT)的活性，肝匀浆中谷胱甘肽(GSH)及脂质过氧化物丙二醛(MDA)的含量，肝微粒体中细胞色素P450及其亚型2E1的活性。结果：阿魏酸钠可对抗INH和RFP合用引起的肝指数、血清ALT水平、肝匀浆中的MDA含量，以及细胞色素P450与亚型P450 2E1活性的升高，增加肝匀浆中GSH含量。病理学检查，阿魏酸钠明显减轻肝细胞的变性和坏死。结论：阿魏酸钠时INH和RFP肝毒性的保护作用与保护肝细胞膜、抑制脂质过氧化反应、清除自由基、降低RFP诱导的细胞色素P450酶系统有关。     

高效液相色谱法测定鼠肝微粒体中CYP1A2酶的活性及动力学考察

目的:建立以非那西丁为探针的高效液相色谱-紫外检测的实验方法,测定大鼠肝微粒体中CYP1A2酶活性并对其进行动力学考察。方法:采用Shimadzu Shim-Pack VP-ODS柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为:100 mmol·L-1磷酸二氢钠缓冲液(pH 4.3)和乙腈,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,柱温为室温,检测波长245 nm。非那西丁与大鼠肝微粒体在37℃温孵60 min,加入冰甲醇终止,12000 r.min-1离心10 min,取上清进行HPLC分析,以Lineweaver-Burk作图计算Vmax与Km值。结果:非那西丁、对乙酰氨基酚及其内标间乙酰氨基酚三者分离良好且无内源性干扰。对乙酰氨基酚最低检测限50 nmol·L-1,线性范围0.1～10μmol·L-1。日内日间精密度均小于10%。回收率大于75%。动力学考察表明选择甲醇作为终止试剂效果较好,非那西丁在0.2 mg·mL-1大鼠肝微粒体体系中孵育60 min,测得动力学参数Vmax为0.21 nmol·min-1.mgprotein-1,Km为20.39μmol·L-1。结论:该方法稳定,结果能准确地反映CYP1A2酶的活性,可以用于相关动力学研究。     

高效液相色谱法同时测定人血中对乙酰氨基酚和咖啡因含量

目的:建立同时测定人血浆中对乙酰氨基酚和咖啡因的反相高效液相色谱(RP-HPLC)方法.方法:以茶碱为内标,色谱分离采用Zorbax-Sb-C18分析柱(4.6 mm× 250 mm,5μm),柱温40℃,以乙腈-甲醇-缓冲液(7:7:86,缓冲液内含甲酸0.2%、甲酸铵18 mmol·L-1)为流动相;流速:1.0 mL·min-1,进样量:20μL;紫外检测波长:273 nm.结果:血浆中对乙酰氨基酚和咖啡因测定方法的线性范围分别为0.125～8 mg·L-1,0.0125～0.8 mg·L-1;方法回收率分别为99.76%～105.5%,98.35%～114.45%;日内精密度RSD分别小于3.0%,5.0%;日间精密度RSD分别小于等于12.0%,10.0%.结论:本方法操作简便,选择性好,准确、灵敏,可用于对乙酰氨基酚和咖啡因的人体药动学研究.     

利福平、异烟肼合用与单用时的肝毒性比较

目的:探讨异烟肼(INH)与利福平(RFP)合用致肝毒性增加的部分作用机制.方法:采用在体心脏灌流法获取小鼠原代 肝细胞,将其常规培养72 h后,含INH(87.5 μmol/L)、RFP(48.6 μmol/L)、INH+RFP(87.5 μmol/L+48.6 μmol/L)培养液培养48 h后,常规HE染色,光镜下观察肝细胞生长情况并计数.结果:INH与RFP合用后与INH单用时比较肝细胞计数减少(P<0.05.P<0.01).结论:RFP和INH合用后使INH肝毒性代谢物浓度增加,可能是其肝毒性增加的原因之一.     

利福平、异烟肼合用与单用时的肝毒性比较

目的:探讨异烟肼(INH)与利福平(RFP)合用致肝毒性增加的部分作用机制.方法:采用在体心脏灌流法获取小鼠原代 肝细胞,将其常规培养72 h后,含INH(87.5 μmol/L)、RFP(48.6 μmol/L)、INH+RFP(87.5 μmol/L+48.6 μmol/L)培养液培养48 h后,常规HE染色,光镜下观察肝细胞生长情况并计数.结果:INH与RFP合用后与INH单用时比较肝细胞计数减少(P<0.05.P<0.01).结论:RFP和INH合用后使INH肝毒性代谢物浓度增加,可能是其肝毒性增加的原因之一.     

左旋黄皮酰胺在大鼠肝微粒体中的代谢转化研究

用大鼠肝微粒体体外温孵法进行了左旋黄皮酰胺[(-)-clausenamide]代谢转化研究,优化了温孵体系,建立了反相HPLC-DAD同时分离检测左旋黄皮酰胺及其体外代谢产物的分析方法。用硅胶低压柱色谱、制备TLC及制备HPLC分离纯化了两个代谢产物并进行了光谱鉴定。结果表明,两个代谢物分别确定为6-和5-位羟基取代的黄皮酰胺。     

抗焦虑新药AF-5及其代谢物在人肝微粒体体外温孵体系中代谢研究

目的研究一类抗焦虑新药AF-5及其代谢物(I,II)在人肝微粒体体外温孵体系中代谢情况.方法自制人肝微粒体,用Lowry法测定酶活性为8.79mg·mL^-1.以此配制人肝微粒体体外温孵体系,加入药物,温孵后,提取分离,GC-MS测定.结果鉴定了AF-5在人肝微粒体体外温孵体系中的两个主要代谢物,并阐明了其体外代谢途径为AF-5的4位首先氧化为羟基,然后氧化成羰基.结论AF-5在体外人肝微粒体温孵体系中,100min后完全代谢成羟基代谢物I及羰基代谢物II,以羟基代谢物为主要代谢产物.AF-5代谢物I在人肝微粒体温孵体系中,可转化为代谢物II,而代谢物II在人肝中则不再代谢.