重组Klotho蛋白对骨髓来源M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞转变的影响

目的:探究重组Klotho蛋白对小鼠骨髓来源M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞表型转变的影响.方法:分离并鉴定小鼠骨髓来源性巨噬细胞,用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导骨髓间充质干细胞(BMSC)转变为巨噬细胞M0,流式细胞术和细胞免疫荧光鉴定细胞,普通光镜观察M0细胞形态.将成熟骨髓来源巨噬细胞细胞M0分成LPS组、LPS+Klotho组和空白组.LPS组用 100ng/mL LPS处理,LPS+Klotho组给与 1 μg/mL Klotho和 100ng/mL LPS+LPS共同处理.RT-qPCR检测巨噬细胞极化相关分子:M1亚型巨噬细胞相关标志物(IL-1β、IL-6、iNOS)mRNA和M2亚型巨噬细胞相关标记物(Arg-1、IL-10)mRNA表达.Western blotting检测iNOS、Arg-1蛋白表达水平,细胞免疫荧光检测细胞肿瘤坏死因子(TNF-a)和Arg-1蛋白含量.结果:流式细胞术显示骨髓巨噬细胞纯度为98.4％,光镜和细胞免疫荧光显示骨髓巨噬细胞呈现不规则形态.与空白组相比,LPS组IL-6、iNOS、IL-1β的mRNA和iNOS、TNF-a蛋白相对表达量明显提高(P＜0.001).而与LPS组相比,LPS+Klotho组降低Ml亚型巨噬细胞标记物IL-6、iNOS、IL-1β的mRNA和iNOS、TNF-α蛋白相对表达量(P＜0.001),显著提高了M2型巨噬细胞标志物Arg-1、IL-10 mRNA和Arg-1的蛋白的表达(P＜0.001).结论:重组Klotho蛋白可促进骨髓来源性巨噬细胞由Ml表型向M2表型转变.     

伊马替尼抑制脂多糖诱导的巨噬细胞炎症表型

【目的】探讨伊马替尼（Ima）在体外对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症表型的影响。【方法】RAW264.7细胞在LPS（0.1μg/mL）或/和Ima（1μmol/L,5μmol/L）处理后,通过Q-PCR方法检测细胞因子IL-1β、IL-10、CCL2、iNOS、TNF-α和Arg1的mRNA表达变化;采用Western Blot检测iNOS蛋白表达变化以及NF-κB和MAPK信号通路活化情况;利用ELISA法检测细胞上清IL-1β、CCL2、IL-10和TNFα的蛋白表达情况。【结果】与对照组相比较,LPS刺激8h后,RAW264.7细胞内的炎症指标IL-1β、CCL2、iNOS和TNF-α的mRNA水平显著升高（P<0.001）以及抗炎指标IL-10的mRNA水平也明显升高（P<0.001）;LPS刺激24h后,细胞上清中IL-1β、IL-10、CCL2和TNF-α的蛋白水平显著上升（P<0.001）,细胞内iNOS蛋白表达以及p65,p38,ERK和AKT的磷酸化水平显著增加。和LPS组相比,Ima提前处理后,IL-1β、CCL2、iNOS和TNF-α的mRNA及蛋白水平显著下降（P<0.01,P<0.001）而IL-10的mRNA及蛋白水平显著升高（P<0.001）,这种抑制作用具有剂量依赖性。Ima的预处理抑制了LPS诱导的p65,p38,ERK和AKT磷酸化。单独用Ima处理RAW264.7细胞后,细胞的功能状态未见明显的改变。【结论】伊马替尼可抑制LPS诱导的巨噬细胞炎症表型,这种作用与抑制NF-κB和MAPK信号通路的过度激活有关。     

人干细胞标志Musashi2在急性髓系白血病细胞分化中的表达变化

目的 探讨人干细胞标志Musashi2 (Msi2)在佛波酯(phorbol myristoyl acetate,PMA)诱导急性单核白血病细胞株THP-1分化过程中的表达变化.方法 PMA作用THP-1细胞0、6、12、24 b后,倒置显微镜下观察THP-1细胞形态学改变,计算分化细胞百分数;流式细胞仪检测THP-1细胞表面分化抗原CD11b的表达;定量PCR和Western blot检测Msi2的基因及蛋白表达水平;定量PCR检测Msi2下游信号分子Numb的mRNA水平;定量PCR和Western blot检测Numb下游分子Notch1的mRNA和蛋白表达水平.结果 PMA处理24h后可诱导THP-1细胞出现巨噬细胞样分化表型,实验组分化细胞的百分比显著高于未处理组(P＜0.05).同时24 h组CD11b表达量(59.30±8.70)较未处理组(0.32 ±0.08)显著增加(P＜0.05).实验组白血病细胞经PMA处理24 h后,Msi2的mRNA和蛋白相对表达量分别为(0.33 ±0.08)和(0.50±0.01),显著低于未处理组(P ＜0.05);PMA处理12 h后Numb的mRNA相对表达量为(2.92±0.33),较未处理组明显升高(P＜0.05);而PMA处理24 h后Notch1的mRNA和蛋白相对表达量分别为(0.31±0.03)和(0.23±0.01),较未处理组显著下降(P＜0.05).结论 干细胞标志Msi2表达随THP-1细胞分化而下降,Msi2-Numb-Notch1通路可能参与白血病细胞的分化调控.     

缓释地塞米松改性丝胶蛋白水凝胶支架促进大鼠下颌骨缺损修复：基于调节巨噬细胞M2极化

目的 探究改性丝胶蛋白水凝胶（SMH-CD/DEX）调节巨噬细胞极化促进骨缺损修复的能力。方法 将地塞米松搭载于丝胶蛋白水凝胶构建SMH-CD/DEX水凝胶。通过扫描电镜、傅里叶红外光谱、细胞活性实验和释放曲线测定,对SMH-CD/DEX水凝胶的形貌、化学性质及生物活性进行表征分析。通过Western blot、RT-qPCR、流式细胞术检测THP-1巨噬细胞中iNOS和Arg-1蛋白表达量,IL-6、IL-10、Arg-1、iNOS基因表达水平及CD86、CD206的表达比例。在共培养条件下通过Western blot,RT-qPCR检测h PDLSCs人牙周膜干细胞COL1A1和Runx2蛋白的表达量,ALP、Runx2、OCN、BMP2基因表达量,并进行碱性磷酸酶染色和茜素红染色。在大鼠下颌骨骨缺损模型植入水凝胶,通过Micro-CT扫描和组织病理染色分析新骨形成情况。结果 通过主客体相互作用与化学偶联改性丝胶蛋白水凝胶,成功构建SMH-CD/DEX水凝胶。SMH-CD/DEX水凝胶能够有效提高巨噬细胞M2极化相关标志物的IL-10及Arg-1的表达量（P<0.001）;并...     

贝壳杉烷型二萜类化合物PV006对THP-1源性巨噬细胞M1型极化的调节作用

目的 利用体外诱导巨噬细胞向M1型极化的模式,初探贝壳杉烷型二萜类化合物PV006对M1型极化的影响。方法 用佛波酯（PMA）联合脂多糖（LPS）及重组人干扰素-γ（rhIFN-γ）刺激人单核细胞株THP-1细胞,促使其向M1型巨噬细胞分化。通过显微镜观察细胞形态学变化,qRT-PCR法检测诱导后的细胞内IL-1β、TNF-α、IL-6以及IL-8 mRNA表达水平,Western blot法检测核转录因子-κB磷酸化P65蛋白（NF-κB p-P65）和磷酸化信号转导与转录激活物1（p-STAT1）蛋白的表达,确认THP-1细胞向M1型极化,同时检测PV006处理后对上述指标的影响。结果 经PMA联合LPS及rhIFN-γ诱导后,THP-1细胞形态由圆形转变为特征的长梭形或纺锤形,IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8 mRNA表达升高,NF-κB p-P65和p-STAT1蛋白表达增强。不同浓度PV006同步处理后,作M1型极化诱导的THP-1细胞未出现特征性的长梭形或纺锤形,大部分细胞仍为圆形。IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8 mRNA表达水平下调（P<0.05）,NF-κB p-P65和p-STAT1蛋白表达减弱。结论 PMA联合LPS及rhIFN-γ可诱导THP-1源性巨噬细胞向M1型极化,PV006有抑制巨噬细胞向M1型分化的作用。     

穗花杉双黄酮激活PPAR-α/γ抑制THP-1源性巨噬细胞向M1型极化

目的 探讨穗花杉双黄酮调节体外诱导的M1型巨噬细胞极化的相关机制。方法 设实验组、溶媒对照组和无药对照组,实验组：不同浓度的（5、10 μmol/L）穗花杉双黄酮干预用联合脂多糖及重组人干扰素-γ诱导的M1型巨噬细胞;溶媒对照组：溶媒3‰DMSO;无药对照组：不加穗花杉双黄酮处理。显微镜下观察细胞形态学;通过ELISA检测干预后细胞上清液L-6、IL-10、TNF-α、TGF-β各自的表达水平;通过CCK-8法检测计算出穗花杉双黄酮对细胞的安全浓度;通过分子对接建模确定穗花杉双黄酮的靶蛋白,利用RT-qPCR、Western blot检测L-6、IL-10、TNF-α、TGF-β、PPAR-α/γ、Arg-1、Fizz1基因和蛋白表达。结果 穗花杉双黄酮干预后可以阻止被诱导引起的THP-1细胞向M1极化;穗花杉双黄酮可下调M1极化时高表达的IL-6、TNF-α的mRNA,上调M2型主要标志细胞因子IL-8和TGF-β的mRNA表达（P<0.05）,同时上调M1极化状态下的细胞内Arg1和Fizz1蛋白的表达（P<0.05）。随着穗花杉双黄酮浓度的增加和作用时间的延长,其抑制细胞的增殖效果增强（P<0.05）,且高浓度具有杀伤作用。穗花杉双黄酮可与PPAR-α/γ关键靶点蛋白活性位点非共价结合并激活该蛋白。结论 穗花杉双黄酮可通激活PPAR-α/γ,恢复Arg-1、Fizz1基因表达,抑制巨噬细胞向M1型分化。     

低氧条件下气道上皮细胞增加巨噬细胞趋化和炎症因子的分泌

目的：探讨低氧条件下气道上皮细胞对巨噬细胞趋化和炎症因子表达的影响。方法：将0,100,200, 400,800 μmol/L氯化钴(CoCl2)处理或转染缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)-1α siRNA的人支气管上皮细胞 HBE与人单核细胞THP-1诱导分化的M1或M2巨噬细胞共培养,采用Transwell小室趋化实验记录巨噬细胞趋化数量, ELISA法检测巨噬细胞上清中TNF-α,IFN-γ,IL-4,IL-13,IL-10浓度,RT-qPCR检测HBE细胞HIF-1α和巨噬细胞Cav-1 mRNA的表达。结果：共培养8和12 h,HBE细胞诱导巨噬细胞趋化,并且呈时间和CoCl2浓度依赖性;转染HIF-1α siRNA的HBE相对于未转染组对共培养的M1或M2巨噬细胞趋化诱导明显减弱(P<0.01),在相同培养条件下,M2巨噬 细胞趋化性高于M1巨噬细细胞。巨噬细胞上清中TNF-α,IFN-γ,IL-4,IL-13,IL-10水平呈时间和CoCl2浓度依赖性升 高,共培养8和12 h,TNF-α和IFN-γ浓度增加较IL-4,IL-13,IL-10浓度增加更明显;共培养24 h,IL-4,IL-13,IL-10浓 度增加程度高于TNF-α和IFN-γ。与转染HIF-1α siRNA的HBE共培养的巨噬细胞上清中各细胞因子水平较未转染组均明 显降低(P<0.05或0.01),其中TNF-α,IFN-γ降低更明显。共培养8和12 h,HBE细胞HIF-1α和巨噬细胞Cav-1 mRNA表达 均呈CoCl2浓度依赖性增加;转染HIF-1α siRNA后,HBE细胞HIF-1α和巨噬细胞Cav-1 mRNA表达量均明显减少。结论： 低氧环境下气道上皮细胞可增加巨噬细胞趋化因子和致炎因子的表达,HIF-1α和Cav-1可能是这些过程的重要介质。     

人脐带间充质干细胞来源外泌体促进小胶质细胞向M2极化

目的: 探讨人脐带间充质干细胞外泌体（human umbilical cord mesenchymal stem cells exosomes, hucMSC-Ex）在小胶质细胞极化态转化中的作用及机制,为临床治疗神经退行性疾病提供新的治疗策略。方法: 原代分离培养人脐带间充质干细胞,收集其条件培养基提取外泌体（exosomes）,电镜、纳米颗粒跟踪分析技术和蛋白质印迹法对其形态特征、粒径大小及表面标志物进行表征;分别用PBS、LPS（1 μg/mL）、LPS（1 μg/mL）+hucMSC-Ex（100 μg/mL）处理小胶质细胞12 h,免疫荧光检测小胶质细胞特异性标志物钙结合蛋白Iba1的表达;蛋白质印迹法检测小胶质细胞M1/M2极化态标志物变化;qRT-PCR检测小胶质细胞IL-1β mRNA和IL-10 mRNA的变化;ELISA检测细胞条件培养基中细胞因子IL-1β和IL-10的分泌量。结果： hucMSC-Ex电镜下呈现典型膜性“杯盘”状结构,纳米颗粒跟踪分析结果显示粒径大小为（119.7±47.9）nm,蛋白质印迹法证实其表达CD9、CD63和CD81特征表面分子;免疫荧光结果显示,活化组（LPS组和LPS+hucMSC Ex组）钙结合蛋白Iba1相比于静息组（PBS组）表达高,且LPS+hucMSC-Ex组高于LPS组;蛋白质印迹法结合qRT-PCR结果显示hucMSC-Ex可能通过抑制NF-κB活化减少M1极化态标志物iNOS、IL-1β表达,上调M2极化态标志物Arg1、IL-10表达;ELISA结果表明相比于LPS组,LPS+hucMSC-Ex组分泌的炎症因子IL-1β减少、抑炎因子IL-10增加。结论： hucMSC-Ex可能通过抑制NF κB活化,促进小胶质细胞向M2极化而减少炎症反应。     

Fractalkine 通过激活 Wnt/β-catenin 信号通路抑制脂多糖诱导的巨噬细胞M1型极化

目的 研究Fractalkine（CX3CL1,FKN）对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7巨噬细胞免疫应答的作用机制。方法 体外培养RAW264.7细胞,使用慢病毒技术构建过表达FKN的稳定细胞珠。细胞分为8组：（1）空白对照组;（2）LPS组,细胞给予脂多糖（1 μg/mL,12 h）;（3）ICG-001组,细胞给与Wnt/β-catenin信号通路抑制剂ICG-001（10 μmol/mL,48 h）;（4）过表达FKN组;（5）ICG-001+LPS组,细胞给与ICG-001（10 μmol/mL预处理36 h）后,加入脂多糖（1 μg/mL,12 h）;（6）过表达FKN+LPS组,过表达 FKN细胞给与脂多糖（1 μg/mL,12 h）;（7）过表达FKN+ICG-001组,过表达FKN细胞给予ICG-001（10 μmol/mL,48 h）;（8）过表达 FKN+ICG-001+LPS 组,过表达 FKN 细胞给与 ICG-001（10 μmol/mL 预处理 36 h）后,加入脂多糖（1 μg/mL,12 h）;应用 CCK-8细胞增殖实验检测ICG-001作用于巨噬细胞中的安全浓度;应用酶联免疫吸附（ELISA）实验检测巨噬细胞上清液中M1型极化因子TNF-α和IL-6的含量;应用蛋白质免疫印记（WB）实验检测巨噬细胞中FKN、Wnt/β-catenin通路关键因子Wnt-4和β-catenin、M1型极化因子iNOS、TNF-α和IL-6的蛋白表达水平;应用免疫荧光（IF）实验检测巨噬细胞中M1型极化因子IL-6蛋白的定位。结果 过表达FKN的RAW264.7细胞中FKN的蛋白水平较空白对照组明显升高（P<0.01）。CCK-8实验显示ICG-001作用于RAW264.7细胞48 h的IC50为10 μmol/mL。与LPS组相比,ICG-001+LPS组上清液中TNF-α和IL-6的分泌量以及细胞内TNF-α、IL-6和iNOS蛋白含量均升高（P<0.05）,而细胞内FKN、Wnt-4和β-catenin蛋白含量均显著降低（P<0.01）;EXFKN+LPS组上清液中TNF-α和IL-6的分泌量以及细胞内TNF-α、IL-6和iNOS蛋白含量均显著降低（P<0.01）,而细胞内FKN、Wnt-4和β-catenin蛋白含量均显著升高（P<0.01）。与LPS组相比,ICG-001+LPS组中IL-6在细胞质中的定位增强,而EXFKN+LPS组中IL-6在细胞质中的定位受到抑制。结论 过表达FKN通过激活Wnt/β-catenin信号通路抑制脂多糖诱导的巨噬细胞M1型极化。     

青藤碱通过调节血红素氧合酶-1表达和自噬抑制脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症

目的：探讨青藤碱对脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症的影响和机制。方法：以小鼠RAW264.7巨噬 细胞为研究对象,在有或无血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)抑制剂Znpp处理下,采用青藤碱和/或脂多糖 (lipopolysaccharide,LPS)处理RAW264.7巨噬细胞。应用Real-time PCR检测细胞炎症因子TNF-α和IL-6 mRNA表达, ELISA检测细胞炎症因子TNF-α和IL-6水平,免疫荧光试验分析细胞自噬情况,Western印迹检测细胞HO-1蛋白表达。 结果：与对照组相比,LPS作用后RAW264.7细胞炎症因子TNF-α和IL-6表达和释放增多,自噬相关蛋白LC3绿色荧光 聚集,HO-1表达水平升高(P<0.05);与LPS组相比,加用青藤碱处理能减少TNF-α和IL-6表达和释放,进一步促进LC3 绿色荧光聚集,增加HO-1水平(P<0.05);用HO-1抑制剂Znpp预处理后,青藤碱对LPS诱导TNF-α和IL-6表达和释放的 抑制作用减弱,LC3绿色荧光聚集减少(P<0.05)。结论：青藤碱能减轻LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症,其机制可 能与HO-1介导的自噬激活有关,这为青藤碱应用于炎症反应的防治提供了实验基础和理论依据。     

异丙酚预处理对脂多糖（LPS）诱导的人肺微血管内皮细胞（HPMVCs）血管紧张素转化酶（ACE）的表达与活性的影响

 目的 在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人肺微血管内皮细胞(human pulmonary microvascular endothelial cells,HPMVCs)损伤模型中,观察异丙酚预处理对血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)的影响,探讨异丙酚肺保护作用的可能机制。方法 以体外培养的HPMVCs 3~5代作为实验对象,将细胞随机分为4组(n=8)：对照组(C组)、异丙酚组(P组)、LPS组(L组)和异丙酚预处理组(P+L组)。药物终浓度：LPS 5 μg/mL,异丙酚50 μmol/L。按上述分组,加入LPS前1 h加入异丙酚。于37℃、5％CO₂培养箱中进行培养。分别培养12、24、48、72 h后采用CCK-8 (Cell Counting Kit-8)法测细胞活力。细胞孵育12 h后,采用改良分光光度法检测各组培养液和细胞中的ACE活性,real-time PCR检测ACE、TNF-α、IL-1β和MCP-1 mRNA表达水平,同时ELISA测定细胞培养液中TNF-α、IL-1β和MCP-1的蛋白含量。结果 (1)各组细胞在72 h内的细胞活力无显著差异(P>0.05);(2)与C组相比,P组各检测指标均无显著差异(P>0.05);(3)与C组相比,L组TNF-α、IL-1β和MCP-1的蛋白含量及其基因表达水平均显著升高,分泌型ACE活性增加,细胞ACE活性降低,ACE mRNA表达下调(P<0.05);(4)与L组相比,P+L组分泌的TNF-α、IL-1β和MCP-1及其mRNA表达显著降低,细胞ACE活性增加,ACE mRNA表达上调(P<0.05),分泌型ACE活性不变(P>0.05)。结论 异丙酚在转录水平调节HPMVCs中ACE的表达,可能是异丙酚保护HPMVCs的作用机制之一。     

肢体缺血预/后适应改善脓毒症小鼠心肌IL-6及心脏功能的作用

目的：探讨肢体缺血预/后适应对脓毒症心肌炎症和心脏功能的作用。方法：采用6 mg/kg脂多糖（LPS）腹腔注射诱导脓毒症小鼠模型。脓毒症小鼠分别经过单、双侧腿缺血预或后适应干预,叠加缺血预和后适应组合干预。应用qRT-PCR检测心肌中白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子（TNF-α）、Apelin和Atrogin-1 mRNA的表达。应用小动物超声仪检测小鼠心脏功能,包括分析收缩功能指标射血分数（EF）、短暂缩短率（FS）和心脏舒张功能指标E/A比值。结果：单侧腿缺血预适应和后适应均能够降低脓毒症小鼠心肌IL-6 mRNA的表达（P<0.05）;预适应和后适应的组合比单独缺血预/后适应更能降低脓毒症小鼠心肌IL-6的表达（P<0.05）,但与LPS组比,间隔2 h的叠加后适应进一步增加IL-6的表达（P<0.05）。LPS导致心肌中IL-1β和TNF-α表达增加,萎缩基因Atrogin-1增加,Apelin基因降低,而缺血预适应能够增强脓毒症小鼠心脏功能,降低IL-1β和TNF-α表达（P<0.05）,不能够改变Atrogin-1...     

IL-27通过STAT3信号通路改善脂多糖诱导的小鼠急性肺炎

目的：探讨IL-27通过调控STAT3信号通路在脂多糖（LPS）诱导的小鼠急性肺炎中的作用。方法：32只雄性小鼠随机分为正常对照组、LPS组、LPS+IL-27组、LPS+IL-27抗体组,每组8只。麻醉处死后取小鼠肺脏,HE染色观察各组小鼠肺组织损伤情况;qRT-PCR检测各组小鼠肺组织及血清中STAT3、SOCS3的mRNA表达水平;Western blot检测各组小鼠肺组织中STAT3、p-STAT3、SOCS3的蛋白表达水平;采用ELISA法分别检测肺组织匀浆及血清中TNF-α、IL-1β、IL-10、TGF-β1的表达水平。免疫组织化学及Western blot检测TNF-α、IL-1β在肺组织中的蛋白表达。结果：HE染色结果发现,正常对照组,LPS组和LPS+IL-27抗体组肺泡结构被破坏,肺泡壁弥漫性增厚,有明显的炎性细胞浸润;LPS+IL-27组病理改变较LPS组明显减轻,炎性细胞浸润减少。与正常对照组比,LPS组和LPS+IL-27抗体组小鼠肺组织STAT3、p-STAT3蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）;LPS+IL-27组较LPS组和LPS+IL-27抗体组显著降低（P＜0.05）,LPS+IL-27组SOCS3表达水平显著高于LPS+IL-27抗体组（P＜0.05）。各组小鼠肺组织及血清TNF-α、IL-1β表达水平较正常对照组均显著升高（P＜0.05）;LPS+IL-27组TNF-α、IL-1β表达水平较LPS组和LPS+IL-27抗体组显著降低（P＜0.05）;LPS组和LPS+IL-27抗体组IL-10表达水平均显著高于正常对照组（P＜0.05）;LPS+IL-27组IL-10、TGF-β1的表达水平均显著高于LPS+IL-27抗体组（P＜0.05）。免疫组织化学结果显示,与正常对照组比,LPS组和LPS+IL-27抗体组TNF-α阳性表达主要表达在细胞浆中,IL-1β阳性表达主要表达与细胞膜与细胞浆中,Western blot结果发现TNF-α、IL-1β在肺组织中均呈高表达（P＜0.05）;LPS+IL-27组TNF-α、IL-1β的表达水平较LPS组和LPS+IL-27抗体组显著降低（P＜0.05）。结论：外源性IL-27可能通过抑制STAT3信号通路相关蛋白磷酸化水平改善LPS诱导的小鼠急性肺炎。     

rL-hIFN-λ1对THP-1源巨噬细胞极化作用的影响

［摘要］目的: 探讨表达IFN-λ1的重组新城疫病毒rL-hIFN-λ1对巨噬细胞极化的影响。方法: 分别用佛波酯、IFN-γ、脂多糖、IL-4和rL hIFN-λ1刺激人外周血THP-1单核细胞系,构建THP-1 M0、THP-1 M1、THP-1 M2、THP-1 rL-hIFN-λ1型巨噬细胞模型。显微镜下观察M0、M1、M2型巨噬细胞形态特点;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组巨噬细胞 M1/M2相关基因表达;免疫荧光检测细胞表面分子CD86、CD163;ELISA检测分泌因子IL-2、IL-13、IL-10及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平;并采用免疫组织化学法检测不同临床分期肺癌组织中巨噬细胞浸润表型。结果： 诱导得到的M0、M1、M2型巨噬细胞形态差异显著。rL-hIFN-λ1诱导的巨噬细胞中,M1型巨噬细胞标志物表达明显升高,M2型巨噬细胞标志物表达显著降低,同时其可促进M1型巨噬细胞因子释放,抑制M2型巨噬细胞因子释放。随着肺癌临床分期进展,M1型巨噬细胞浸润逐渐减少。 结论： rL-hIFN-λ1可诱导巨噬细胞向M1型巨噬细胞极化。     

IL-1β 或TNF-α 干预的子宫蜕膜细胞对母胎界面Th1/Th2 及Th17/Treg 平衡的影响

目的：探讨IL-1β或TNF-α干预的子宫蜕膜细胞对母胎界面Th1/Th2及Th17/Treg平衡的影响。方法：子宫蜕 膜细胞经体外分离后,加入10–8 mol/L雌二醇(E2)+10–7 mol/L孕激素(P)培养7 d后,分别给予IL-1β或TNF-α干预24 h,收 集上清液,制备条件培养液。应用条件培养液刺激子宫蜕膜T细胞72 h后,收集上清液,ELISA 法检测上清液IFN-γ, IL-2,IL-17,IL-5,IL-10及TGF-1β的表达。收集子宫蜕膜T细胞,提取RNA,用实时定量PCR检测细胞因子mRNA的 表达。通过T细胞分泌的细胞因子水平来评估子宫蜕膜细胞对Th1/Th2及Th17/Treg平衡的影响。结果：IL-1β或TNF-α 干预子宫蜕膜细胞24 h后,其条件培养液能够促使子宫蜕膜T细胞Th1细胞因子IFN-γ分泌增加7~8倍,IL-2分泌增加 6~7倍,Th17细胞因子IL-17分泌增加15~19倍,Th2细胞因子IL-10和IL-5的分泌无差异,Treg细胞因子TGF-1β的分泌无 差异;其条件培养液促使IFN-γ和IL-17 mRNA表达增加,而IL-10及TGF-1β mRNA的表达无差异。结论：IL-1β或TNF-α 刺激的子宫蜕膜细胞改变母胎界面Th1/Th2及Th17/Treg细胞的平衡,向Th1及Th17偏移。     

鲍曼不动杆菌OmpA经ROS/NLRP3信号通路调控THP 1细胞自噬和凋亡

目的: 探讨鲍曼不动杆菌外膜蛋白A(outer membrance protein A, OmpA)对人单核巨噬THP-1细胞自噬和凋亡的影响及其可能机制。方法: 构建OmpA/pET-28a载体,转化大肠埃希菌BL21(DE3)表达纯化重组OmpA蛋白,并免疫家兔制备多克隆抗体;采用蛋白质印迹法检测呼吸机相关性肺炎患者发病前后血清中OmpA抗体水平变化。以不同浓度(1、10 μg/mL)重组OmpA蛋白分别刺激THP-1细胞1、3、6 h,采用蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白LC-3和Beclin-1表达,流式细胞术检测细胞凋亡率及活性氧产生,荧光实时定量PCR检测细胞含NLR家族Pyrin域NOD样受体家族3(NLRP3)、Caspase-1和IL-1β等mRNA表达。结果： 自制多抗可以识别临床菌株OmpA蛋白。呼吸机相关性肺炎患者发病前后,血清中均可检出OmpA抗体(IgG型),且发病后OmpA抗体水平显著高于气管插管前(P<0.05)。重组OmpA蛋白刺激THP-1细胞后,细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和Beclin-1表达显著上升,细胞凋亡率显著升高,呈一定的时间和浓度依赖性(P<0.05)。与对照组比,在重组OmpA蛋白作用1 h时,细胞IL-1β mRNA表达和活性氧含量显著增加(P<0.05);3 h和6 h时,3种mRNA表达量和活性氧含量显著降低(P<0.05)。结论： OmpA通过激活THP-1细胞NLRP3炎症小体,释放活性氧和IL-1β等炎症介质,诱导THP-1细胞自噬和凋亡发生。