针刺疗法对子宫内膜异位症大鼠细胞凋亡的影响

目的：基于磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路,探究针刺疗法对子宫内膜异位症(EMs)大鼠异位内膜组织细胞凋亡的影响及相关可能机制。方法：采用自体移植法构建EMs动物模型,按照随机数字表法分为模型组、针刺组、对照组,每组12只。针刺组给予针刺治疗,1次/d,连续治疗28 d,对照组和模型组不给予任何治疗。采用苏木精-伊红染色法(HE染色)观察大鼠内膜组织病理形态;原位末端凋亡法(TUNEL)观察在位及异位内膜组织细胞凋亡变化;采用荧光定量PCR(RT-PCR)和蛋白质印迹法检测在位及异位内膜组织雌激素受体α(ER-α)、雌激素受体β(ER-β)、PI3K、AKT、mTOR、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)的基因表达和蛋白含量变化。结果：与对照组比较,模型组异位组织有明显异位增生和炎症介质浸润,PI3K、AKT、mTOR基因表达和蛋白含量显著升高(P<0.05);治疗干预后,与模型组比较,针刺组异位组织中,细胞增殖和炎症介质浸润明显缓解,PI3K、AKT、mTO...     

基于PI3K/AKT/mTOR通路研究杜仲总黄酮对多囊卵巢综合征大鼠性激素水平及卵巢组织自噬的影响

目的:探讨杜仲总黄酮基于磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠性激素水平及卵巢组织自噬的影响。方法:55只SD大鼠随机取10只作为正常对照组,其余建立PCOS大鼠模型,40只大鼠建模成功,随机分为模型对照组、PI3K抑制剂BKM120 40 mg/kg组、BKM120 40 mg/kg+杜仲总黄酮200 mg/kg组、杜仲总黄酮200 mg/kg组,各组灌胃生理盐水或相应药物,连续干预3 w。Elisa法检测血清促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、抗苗勒氏管激素(AMH)水平;HE染色观察卵巢病理学变化;流式细胞术检测卵巢组织颗粒细胞自噬率;Western blot检测卵巢组织中PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白及微管相关蛋白1轻链3 II(LC3 II)表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠AMH、LH、T含量显著升高,FSH含量显著降低P<0.01);大鼠卵巢组织颗粒细胞自噬率显著升高(P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR比值显著降低,LC3 II/LC3 I比值显著升高(P<0.01);与模型对照组比较,抑制剂组大鼠AMH、LH、T含量显著升高,FSH含量显著降低(P<0.01),卵巢组织颗粒细胞自噬率显著升高,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR比值显著降低,LC3 II/LC3 I比值显著升高(P<0.01);杜仲总黄酮+抑制剂组、杜仲总黄酮组大鼠AMH、LH、T含量明显降低,FSH含量明显升高(P<0.05或P<0.01),卵巢组织颗粒细胞自噬率显著降低(P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR比值显著升高,LC3 II/LC3 I比值显著降低(P<0.01)。模型对照组卵巢表面苍白,黄体减少,出现多个囊状扩张卵泡;杜仲总黄酮+抑制剂组、杜仲总黄酮组卵巢体积减小,表面色泽较红,黄体有所增加,囊状扩张卵泡减少;抑制剂组卵巢体积更大、黄体更少,囊状扩张卵泡更多。结论:杜仲总黄酮可能通过激活PI3K/AKT/mTOR通路降低PCOS大鼠卵巢组织自噬水平,改善其性激素水平。     

“调神畅志”法针刺对帕金森伴便秘模型大鼠结肠组织PI3K/AKT/eNOS信号通路的影响

目的：探讨“调神畅志”针法对帕金森(PD)伴便秘大鼠结肠组织磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶(PI3K/AKT/eNOS)信号通路关键标志物(PI3K、AKT、p-Akt及eNOS)的影响,并探究此针法治疗的机制。方法：采用颈背部皮下注射鱼藤酮的方法制造PD伴便秘大鼠模型,并用APO诱导检测。40只造模成功大鼠随机分为模型组、西药组、常规针刺组与调神畅志组,每组10只,另空白组、假手术组各10只,共计60只,予相应干预4周。采用Western blot法检测各组大鼠远端结肠组织中PI3K、AKT、p-Akt蛋白表达和eNOS含量。结果：与空白组相比,模型组大鼠远端结肠组织中PI3K、AKT及p-Akt蛋白表达显著降低,eNOS含量显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,西药组、常规针刺组和调神畅志组远端结肠组织PI3K、AKT及p-Akt蛋白表达均明显升高,eNOS含量均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与常规针刺组比较,调神畅志组PI3K、AKT及p-Akt蛋白表达明显较高,eNOS含量显著较低,差异具...     

PI3K/AKT/mTOR通路参与多囊卵巢综合征患者子宫内膜病变的研究进展※

引起子宫内膜病变的原因尚未完全清楚，其中PI3K/AKT/mTOR信号通路导致多囊卵巢综合征患者发生子宫内膜病变这一机制日益在越来越多的研究中得到相关证实，但这两者具体的关系仍需更多的实验研究证实。本文主要从多囊卵巢综合征引起的子宫内膜病变、PI3K/AKT/mTOR信号通路以及两者之间的关系进行研究，作一综述。     

补肾调经汤联合人重组干扰素-α-2b对子宫内膜异位症体液免疫、 CA125、EMAb水平的影响

【目的】探析补肾调经汤 （在《景岳全书》大营煎方的基础上加味而成） 联合人重组干扰素-α-2b治疗子宫内膜异位症 （endometriosis,EMs）疗效及其对体液免疫、血清糖类抗原 125（carbohydrate antigen,CA125）、抗子宫内膜抗体（anti- endometrial antibody,EMAb） 水平的影响。 【方法】将86例EMs肾虚血瘀证患者随机分为观察组和对照组,每组各43例。对照 组单纯给予人重组干扰素-α-2b治疗,观察组给予补肾调经汤联合人重组干扰素-α-2b治疗,疗程为1个月。观察2组患者 治疗前后体液免疫因子[免疫球蛋白A （immunoglobulin A,IgA） 、补体3 （complement 3,C3） 、补体4 （complement 4,C4） ]、子 宫内膜异位包块直径及病理相关因子 （CA125、EMAb） 水平的变化情况,并评价2组患者的临床疗效和安全性。 【结果】（1） 治 疗1个月后,观察组的总有效率为97.67% （42/43） ,对照组为81.40% （35/43） ,组间比较 （χ2 检验） ,观察组的疗效明显优于对 照组 （P＜0.05） 。 （2） 治疗后,2组患者的血清IgA水平均较治疗前明显升高 （P＜0.05） ,血清C3、C4水平均较治疗前明显降低 （P＜0.05） ,且观察组对血清IgA水平的升高幅度及对血清C3、C4水平的降低幅度均明显优于对照组 （P＜0.01） 。 （3） 治疗后, 2组患者的血清CA125、EMAb水平及子宫内膜异位包块直径均较治疗前明显降低 （P＜0.05） ,且观察组对血清CA125、 EMAb水平及子宫内膜异位包块直径的降低幅度均明显优于对照组 （P＜0.01） 。 （4） 观察组的不良反应总发生率为6.98% （3/43） , 对照组为11.63% （5/43） ,组间比较,差异无统计学意义 （P＞0.05） 。 【结论】补肾调经汤联合人重组干扰素-α-2b治疗EMs肾 虚血瘀证患者临床疗效显著,可有效改善患者体液免疫因子及血清CA125、EMAb水平,缩小子宫内膜异位包块,且具有 较高的安全性。     

乌丹丸对寒凝血瘀子宫内膜异位大鼠PI3K/Akt/m TOR自噬信号轴及相关分子表达的影响

目的 探讨乌丹丸对寒凝血瘀型子宫内膜异位症（endometriosis,EMs）大鼠自噬信号轴磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B,PKB又称Akt）/雷帕霉素靶分子（mammalian target of rapamycin,mTOR）及相关分子表达的影响。方法 随机将49只雌性SD大鼠分为假手术组、模型组、乌丹丸高、中、低剂量组、散结镇痛胶囊组、地诺孕素组,每组7只,采用冰水浴联合自体子宫内膜移植法建立寒凝血瘀EMs大鼠模型。假手术组及模型组每天给予10 m L/kg生理盐水灌胃,乌丹丸高、中、低剂量组分别给予2.4 g/kg、1.2 g/kg、0.6 g/kg灌胃,散结镇痛胶囊组每天给予0.48 g/kg灌胃,地诺孕素组每天给予0.2 mg/kg灌胃,各组持续用药28日。应用蛋白免疫印迹法和免疫组化法检测异位内膜组织自噬信号轴PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白以及相关自噬分子LC3、Beclin-1蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠异位内膜组织PI3K/Akt/m T...     

健脾益肾化痰方通过VEGF/PI3K/AKT/FOXO1诱导肺鳞癌SK-MES-1细胞自噬的实验研究北大核心CSCD

目的:观察健脾益肾化痰方含药血清对肺鳞癌SK-MES-1细胞增殖、凋亡、自噬及SK-MES-1细胞内Beclin1、LC3、VEGFR、PI3K、AKT、FOXO1相关蛋白的影响,探讨健脾益肾化痰方通过上述蛋白诱导肺鳞癌细胞SK-MES-1自噬的可能作用机制。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、32.2 g/kg健脾益肾化痰方组,各组分别灌胃生理盐水或药物,连续7 d后收集血清;采用CCK-8法测定人肺鳞癌细胞株的存活率;用流式细胞仪检测细胞凋亡;激光共聚焦显微镜观察GFP-LC3脂质体转染干预肺鳞癌细胞后自噬发生情况;Western Blot法检测对人肺鳞癌细胞株SK-MES-1细胞Beclin1蛋白和LC3B-Ⅱ、LC3B-Ⅰ、VEGFR、PI3K、AKT、FOXO1相关蛋白表达的影响。结果:32.2 g/kg健脾益肾化痰方含药血清各浓度组均能够有效抑制肺鳞癌SK-MES-1细胞增殖,其抑制率与药物浓度呈正相关;与正常对照组相比,32.2 g/kg健脾益肾化痰方16%含药血清组使SK-MES-1细胞凋亡率明显增高(P<0.05);8%、16%含药血清组自噬小体显著增多(P<0.05);16%含药血清组SK-MES-1细胞内自噬相关蛋白Beclin1、LC3B-Ⅱ、LC3B-Ⅰ表达显著上调(P<0.01);FOXO1蛋白表达显著上调,VEGFR、PI3K、AKT蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论:健脾益肾化痰方含药血清能够诱导肺鳞癌SK-MES-1细胞发生自噬,其作用机制可能是通过调节VEGF/PI3K/AKT/FOXO1信号通路,上调SK-MES-1细胞内Beclin1、LC3蛋白表达,促进LC3B-Ⅰ转化为LC3B-Ⅱ有关。     

半枝莲总黄酮通过PI3K/AKT/mTOR通路诱导肿瘤细胞自噬的体内实验研究

该研究拟从体内角度研究半枝莲总黄酮(TF-SB)的抗肿瘤作用,并探讨TF-SB对肿瘤细胞自噬的影响及其对PI3K/AKT/mTOR通路的调控作用,为TF-SB的抗肿瘤作用提供实验依据。实验以黑色素瘤荷瘤小鼠模型为研究对象,分为空白对照组、雷帕霉素组(Rap,1.5 mg·kg~(-1))、TF-SB高、中、低剂量组(200,100,50 mg·kg~(-1)),每天给药1次,连续用药11 d,通过测量肿瘤的体积及抑瘤率,来观察TF-SB对黑色素瘤生长的抑制效果;通过TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况,来进一步验证TF-SB的抗肿瘤活性;通过Western blot法检测LC3-Ⅰ,LC3-Ⅱ的蛋白表达,计算LC3-Ⅱ对LC3-Ⅰ的相对表达量,探讨TF-SB对肿瘤细胞自噬的诱导作用;通过检测PI3K/AKT/mTOR通路标志蛋白的磷酸化水平,研究TF-SB诱导细胞自噬的分子机制。结果表明,TF-SB可有效抑制荷瘤小鼠体内黑色素瘤的生长,减小肿瘤体积、提高抑瘤率,并且可以显著增加肿瘤细胞凋亡指数,增加LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ,抑制p-PI3K,p-AKT及p-mTOR的蛋白表达水平,与对照组比较有显著性差异(P0.05,P0.01或P0.001)。由此可见,半枝莲总黄酮具有抑制体内黑色素瘤生长的作用,其机制可能与通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路,诱导肿瘤细胞自噬及凋亡有关。     

针刺调控PI3K/AKT/mTOR信号通路介导自噬保护佐剂性关节炎大鼠膝关节滑膜组织的研究

目的:基于磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路,观察针刺"阴陵泉""三阴交"对佐剂性关节炎(AA)大鼠膝关节滑膜细胞自噬水平的影响,探讨针刺治疗类风湿关节炎的可能机制。方法:Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、针刺组、雷公藤组,每组12只。采用风、寒、湿环境因素+弗氏完全佐剂复合造模方法复制AA大鼠模型。针刺组针刺大鼠"阴陵泉""三阴交"穴,30 min/次,1次/d,连续治疗21 d;雷公藤组予以雷公藤多苷片溶液灌胃给药(8 mg·kg^-1·d^-1),1次/d,连续治疗21 d。分别在致炎后第3天、治疗第21天测量各组大鼠右后足跖容积并计算关节肿胀度(E)、评价关节炎指数(AI);ELISA法检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-17、IL-6的含量;电镜下观察右膝关节滑膜超微结构的变化;Western blot法检测右膝关节滑膜组织中PI3K、AKT、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、mTOR、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、微管相关蛋白1轻链3B ...     

基于PI3K/AKT/mTOR信号通路探讨中医药通过活性氧介导的内质网应激调控细胞自噬和凋亡抑制结肠癌转移的研究概况

肿瘤的发生发展需要微环境的保护与支持,自噬和细胞凋亡在结肠癌的复发转移中起到关键作用。PI3K/AKT/mTOR信号通路是自噬经典信号通路,过度的自噬能够诱导自噬细胞的凋亡,而ROS通过改变细胞的内部环境在细胞凋亡和自噬中发挥重要作用,并且能够通过产生ER应激影响ER中的蛋白错误折叠信号,从而影响细胞生长和死亡。因此,探究基于PI3K/AKT/mTOR信号通路,中医药是否可以通过ROS介导的ER应激调控自噬和细胞凋亡从而抑制结肠癌的转移,为临床提供治疗思路。     

基于PI3K/AKT/mTOR通路探讨沙参麦冬汤调控自噬干预BEAS-2B细胞恶性转化

目的:研究沙参麦冬汤对苯并芘(Bap)诱导的BEAS-2B细胞恶性转化的干预作用,及其与PI3K/AKT/mTOR通路和自噬的关系.方法:提取沙参麦冬汤,MTT法筛选各药物浓度,持续作用30次,检测细胞克隆能力、自噬小体、细胞周期改变;检测通路及自噬相关蛋白AKT、mTOR、p-mTOR、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Bec...     

抗纤灵方通过PI3K/AKT/mTOR信号通路干预肾纤维化机制研究

目的:研究抗纤灵方对PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响及抗肾纤维化作用机制。方法:将60只C57小鼠,随机分为假手术组10只和手术组50只,手术组行5/6肾切除术。术后2周,手术组随机分为模型组、抗纤灵低、中、高剂量组及雷帕霉素阳性药组,各组10只。假手术组给予0.5 mL生理盐水ig,抗纤灵方低、中、高剂量组分别给予0.5 mL抗纤灵药物ig(0.1,0.2,0.4 mg·kg-1),阳性药组给予0.5 mL雷帕霉素ig(0.016μg·kg-1),ig 12周后处死小鼠,在处死小鼠前1 d收集24 h尿液检测24 h蛋白定量,眼眶采血测血肌酐、尿素氮,取残肾采用HE观察肾脏组织形态改变,PCR法检测肾组织中PI3K/AKT/mTOR mRNA表达。结果:与假手术组比较,模型组24 h尿蛋白定量,血肌酐,尿素氮,PI3K/AKT/mTOR mRNA表达均显著升高(P0.01),肾脏病理形态改变明显;与模型组比较,各治疗组24 h尿蛋白定量,血肌酐,尿素氮,PI3K/AKT/mTOR mRNA表达均下降(P0.05),肾脏组织学形态改善。结论:抗纤灵方能降低小鼠24 h尿蛋白定量,改善肾功能,延缓肾纤维化发生;其机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路表达相关。     

白藜芦醇联合顺铂对肺癌A549/DDP细胞的作用机制研究

目的基于PI3K/AKT/mTOR信号通路,以人非小细胞肺癌耐顺铂细胞株A549/DDP为研究对象,探讨白藜芦醇联合顺铂对A549/DDP细胞增殖、凋亡、自噬的影响。方法以CCK-8法检测白藜芦醇、顺铂以及两药联用对A549/DDP细胞增殖的影响,并通过Isobologram分析两药联用的协同作用;将A549/DDP细胞分为空白对照组、白藜芦醇组、顺铂组、白藜芦醇+顺铂组;以Hoechst 33342染色和Annexin V/PI双染实验检测细胞凋亡率;免疫荧光实验检测自噬标志物LC3的表达;Western Blot实验检测各组细胞中凋亡相关蛋白、自噬标志物蛋白、PI3K/AKT/mTOR通路蛋白表达。结果与顺铂组比较,白藜芦醇与顺铂两药联用可以明显降低顺铂对A549/DDP细胞的IC50,Isobologram分析结果也表明二者联用对A549/DDP细胞具有协同抑制作用;与空白对照组、白藜芦醇组、顺铂组3组比较,白藜芦醇和顺铂联用可以明显增加A549/DDP细胞凋亡率(P0.01),降低抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平(P0.01),上调凋亡蛋白Bax、Caspase 3表达水平(P0.01),及增加自噬标志物蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ表达水平(P0.01),降低p62表达水平(P0.01);此外Western Bolt实验结果表明两药联用可以明显下调p-PI3K、p-AKT,p-mTOR蛋白表达水平(P0.01)。结论白藜芦醇与顺铂联用可通过PI3K/AKT/mTOR通路,促进A549/DDP细胞自噬诱导细胞凋亡。     

子宫内膜异位症患者中西医结合治疗前后血清血管内皮生长因子及糖类抗原-125的含量变化

目的观察子宫内膜异位症(EMT)患者中西医结合治疗前后血清血管内皮生长因子(VEGF)及糖类抗原-125(CA125)水平的变化及临床意义。方法将30例EMT患者设为治疗组,予中西医结合治疗,检测其血清VEGF及CA125水平。同时选择30例健康体检者作为对照组。结果治疗组Ⅰ～Ⅱ期血清VEGF、CA125含量低于Ⅲ～Ⅳ期(P<0.01)。治疗组子宫内膜分泌期血清VEGF、CA125含量低于增生期(P<0.05)。对照组子宫内膜分泌期血清VEGF、CA125含量与增生期比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组治疗后血清VEGF、CA125含量低于治疗前(P<0.01),说明中西医结合治疗有效。治疗组治疗后血清VEGF、CA125含量与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 EMT的发生、发展与血清VEGF及CA125水平密切相关,检测EMT患者血清VEGF、CA125水平对EMT的治疗及预后具有重要的临床价值。     

补肾活血法调控PI3K/AKT/mTOR通路修复卵巢颗粒细胞自噬损伤机制研究

目的:观察补肾活血法调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)通路对体外培养大鼠卵巢颗粒细胞(OGCs)自噬损伤的影响。方法:将原代培养的大鼠卵巢颗粒细胞分为六组：空白对照组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、果纳芬组。采用ELISA法检测各组中雌二醇(E₂)、孕酮(P)分泌量;Western blot法和免疫荧光法分别检测各组OGCs中PI3K、AKT、mTOR及自噬关键分子酵母Atg6同系物1(Beclin 1)、微管相关蛋1轻链3(LC3)、自噬受体蛋白p62的蛋白表达。结果:模型组E₂含量显著降低,中药各剂量组E₂含量均上升(均P<0.05),且中药高剂量组与果纳芬组E₂含量相当;各组对P的含量均没有影响(均P>0.05)。中药各剂量组及果纳芬组p-PI3K、p-AKT、p-mTOR水平和p62的表达上调,Beclin 1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达下调,且中药高剂量组效果优于果纳芬组(均P<0.05)。结论:补肾...     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨炙甘草汤抗大鼠MIRI致室速和室颤的作用机制

目的:通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路,探讨炙甘草汤干预心肌缺血再灌注损伤(MIRI)致心律失常(室速和室颤)的作用及其机制。方法:将72只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,炙甘草汤低、中、高剂量组(11.43,22.86,45.72 g·kg~(-1)),稳心颗粒组(2.43 g·kg~(-1)),连续给药干预10 d。末次给药2 h,采用结扎冠状动脉左前降支法制备大鼠MIRI模型,记录心电图的变化。造模成功后采集血液及心脏组织,检测血清中肌酸肌酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)及丙氨酸氨基转移酶(AST)的含量;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测心肌肌钙蛋白(CtnI)的含量;免疫组化法检测心肌PI3K,Akt,mTOR的表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC-3),自噬标志物Beclin1和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达及磷酸化p-PI3K,p-Akt,p-mTOR的水平。结果:模型组大鼠100%发生室速,91.67%发生室颤;与假手术组比较,模型组大鼠血清CK,LDH,AST以及CtnI的含量显著升高(P0.01),心肌组织中PI3K,Akt,mTOR表达显著升高(P0.01),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ与Beclin1的相对表达量显著升高(P0.01),p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt,p-mTOR/mTOR显著降低(P0.01);与模型组比较,炙甘草汤高剂量组室速、室颤发生率显著降低(P0.01),较其他给药组持续时间短(P0.01);炙甘草汤高剂量组CK,LDH,AST水平及CtnI含量显著降低(P0.01);炙甘草汤给药组的PI3K,Akt,mTOR的表达随剂量的增加而显著降低(P0.01);LC-3,Beclin1的表达随炙甘草汤各剂量组的增加有不同程度地下降(P0.01),而PI3K/Akt/mTOR相关蛋白表达比值明显升高(P0.05,P0.01)。结论:炙甘草汤预处理能使异常升高的心肌酶CK,LDH,AST,CtnI降低,抑制细胞的过度自噬,上调PI3K,Akt和mTOR的表达,说明炙甘草汤抗MIRI致心律失常的作用可能与PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

益气化瘀散结方对胃癌SGC-7901细胞PI3K/AKt/Mtor信号通路的影响

目的:通过观察益气化瘀散结方干预后胃癌SGC-7901细胞PI3K/AKt/mTOR信号通路分子的表达变化,探讨益气化瘀散结方影响胃癌细胞增殖的作用机制。方法:体外培养SGC-7901细胞,采用益气化瘀散结方含药血清干预,细胞分为空白血清组及5%、10%、20%益气化瘀散结方含药血清组,药物干预后,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期变化,Western-blot、Real-time PCR技术检测PI3K、AKT、mTOR蛋白及mRNA的表达变化。结果:与空白血清组比较,不同浓度益气化瘀散结方含药血清均能不同程度抑制SGC-7901细胞的增殖,其中10%,20%更为明显,差异有统计学意义(P<0.05),时间上以48 h最为明显;与空白血清组比较,10%,20%益气化瘀散结方含药血清组G0/G1期细胞比例明显升高,S期细胞比例明显降低(P<0.05);与空白血清组比较,不同浓度益气化瘀散结方含药血清组PI3K、AKT、mTOR蛋白及mRNA表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:抑制PI3K/AKt/mTOR信号通路可能是益气化瘀散结方抑制胃癌细胞增殖、调节胃癌细胞生长周期的重要作用机制之一。     

隔药饼灸对动脉粥样硬化兔 PI3K/AKT/mTOR 表达的影响

【目的】 探讨隔药饼灸抗动脉粥样硬化机制。【方法】 将24只新西兰纯种雄兔随机分为正常组、模型组、隔药饼灸组和 阿托伐他汀组,每组 6只。除正常组,其他各组兔采用喂养高脂饲料拌入丙基硫氧嘧啶法构建动脉粥样硬化模型。造模同 期,给予相应干预。12周后取材,检测血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平,苏木素- 伊红（HE）染色法观察兔主动脉组织病理改变,酶联免疫吸附分析（ELISA）检测血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6 （IL-6）、白细胞介素 10（IL-10）水平,Western Blot法检测心肌组织磷脂酰肌醇 3-激酶（PI3K）、磷酸化蛋白激酶 B（p-AKT）、 磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）蛋白含量。【结果】 与正常组比较,模型组血清TC、TG、LDL-C水平均显著升高 （P＜0.001）,主动脉血管内皮结构明显受损,血清TNF-α、IL-6含量升高（P＜0.001）,IL-10含量降低（P＜0.01）,心肌组织 PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达量显著降低（P＜0.05或P＜0.01）;与模型组比较,隔药饼灸组、阿托伐他汀组上述指标均 得到明显改善（P＜0.05或P＜0.01或P＜0.001）;与阿托伐他汀组比较,隔药饼灸组TG、LDL-C含量升高（P＜0.01）,其他指 标均无显著变化（P＞0.05）。【结论】 隔药饼灸抗动脉粥样硬化机制可能与激活 PI3K/AKT/mTOR 信号通路,调节炎症介质 TNF-α、IL-6、IL-10表达相关。     

山楂酸通过PI3K/Akt/mTOR通路诱导鼻咽癌CNE2细胞自噬研究

目的研究山楂酸对鼻咽癌CNE2细胞增殖和自噬的影响,探讨PI3K/Akt/mTOR通路在该过程中的调控作用。方法采用CCK-8法检测不同浓度的山楂酸作用不同时间对CNE2细胞增殖的影响;MDC染色法检测不同浓度山楂酸处理CNE2细胞24 h后自噬小体的形成情况;Western blotting法检测山楂酸对CNE2细胞自噬相关蛋白及PI3K/AKT/mTOR通路关键蛋白表达的影响。结果与溶剂对照组相比,山楂酸可以抑制CNE2细胞的增殖,而且随药物处理时间和浓度的增加,抑制效果增强(P<0.05);山楂酸能够诱导细胞自噬小体的形成,且可显著提高Atg5和LC3-II/LC3-I的表达,降低p62的表达;此外,山楂酸可抑制PI3K-p110α、p-Akt和p-mTOR的蛋白表达。结论山楂酸可抑制鼻咽癌细胞增殖,诱导鼻咽癌细胞发生自噬,其机制与PI3K/Akt/mTOR信号通路有关,可作为治疗鼻咽癌的潜在药物研究。     

芪玉三龙方干扰miRNA21/PTEN/PI3K信号轴抑制LLC肺癌细胞增殖

目的：探讨芪玉三龙方抑制LLC肺癌细胞增殖的分子机制。方法：LLC肺癌细胞常规传代培养,分别设置为LLC组、空白血清组、siRNA组、含药血清组。MTT法筛选芪玉三龙方最佳作用浓度和作用时间。RT-qPCR、Western Blot及免疫荧光法检测miRNA21/PTEN/PI3K信号轴相关分子表达。结果：芪玉三龙方含药血清呈浓度依赖性抑制LLC肺癌细胞活性。与LLC组比较,siRNA组和含药血清组miRNA21 mRNA表达显著降低（P<0.01）,PTEN蛋白和mRNA表达显著上升（P<0.01）,p-AKT、p-mTOR、eIF4E、p70S6K蛋白表达显著降低（P<0.05,P<0.01）,含药血清组PI3K蛋白表达显著降低（P<0.05）。结论：芪玉三龙方可抑制miRNA21的转录,使PTEN表达有所上升,下调PI3K/AKT/mTOR信号轴关键分子表达,从而温和抑制LLC肺癌细胞增殖。