一种荧光比例成像方法的研究

常规的技术,如免疫荧光共定位,允许在光学分辨率极限上显示细胞不同蛋白的共同定位,但是通过一般的图像分析处理方法,不能方便准确地比较各种蛋白的相对分布,也不能追踪这些分布模式随时间的变化情况.新近发展应用的荧光比例成像则可对多重荧光图像进行半定量分析,对细胞的粘附结构提供准确的时空信息,加深人们对细胞粘附结构和功能关系的理解.本文通过对双重荧光染色图像进行噪声滤除、图像分割、比例计算以及伪彩色显示,对荧光比例成像方法进行了研究.实际应用工作显示该方法行之有效.     

2008-2010年广州市自然界白纹伊蚊携带登革病毒监测

目的通过对广州地区登革热媒介蚊虫白纹伊蚊携带登革病毒情况的监测,探讨传播媒介对该地区登革热流行特征的影响。方法采集广州市各区新旧疫点附近的白纹伊蚊幼虫及成蚊,提取蚊虫总RNA,用登革病毒特异引物经实时荧光逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）进行病毒核酸检测。结果 2008年以来共检测白纹伊蚊标本658批,合计12348只,平均每批检测18.8只蚊虫,未检测出登革病毒核酸。结论广州地区白纹伊蚊自然种群携带登革病毒水平较低。     

埃及伊蚊腺苷脱氨酶相关基因的鉴定和表达分析

为了筛选和鉴定埃及伊蚊全基因组中腺苷脱氨酶相关基因,并分析其在蚊虫不同发育时期、雌蚊不同组织中的表达差异,本文运用模式昆虫黑腹果蝇Dm-ADA基因的ADA结构域序列在NCBI埃及伊蚊全基因组数据库中筛选并鉴定埃及伊蚊ADA相关基因,采用ExPASy在线相关工具包分析其理化性质和结构域,运用Signal P4.0预测信号肽,结合使用Gene Doc和Mega6.0软件包进行同源性比对和构建系统进化树构建。首先提取埃及伊蚊不同发育时期(卵、Ι~Ⅳ龄幼虫、蛹、未吸血雌蚊、雄蚊)、雌蚊不同组织(唾液腺、中肠、脂肪体和卵巢)RNA并逆转录为cDNA,利用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)方法对埃及伊蚊不同发育时期和雌蚊不同组织表达谱进行相对定量分析。结果显示,从埃及伊蚊全基因组中获得3条具有完整开放阅读码框的ADA相关基因(Aa-ADAL、Aa-ADGF-A、Aa-ADGF-B);尽管不同物种ADA基因家族成员间相似性较低,但8个酶活性位点高度保守。Aa-ADAL在2龄幼虫期(7.88)、卵巢(8.05)高表达;Aa-ADGF-A在3龄幼虫期(7.25)高表达;Aa-ADGF-B在雌蚊唾液腺(10.07)显著高表达。经分析,2条属于ADA2/ADGF亚家族,1条属于ADAL亚家族。     

荧光定量PCR用于重组杆状病毒鉴定及病毒滴度检测的研究

目的：建立一种高效、简便的荧光实时定量PCR方法,用于重组杆状病毒鉴定及病毒滴度的检测.方法：利用Bac-to-Bac载体系统在E.coli菌株DH10 Bac中构建重组杆状病毒穿梭质粒（Bacmid）和在昆虫细胞中构建含人IL-18基因的重组杆状病毒,纯化的重组Bacmid作为PCR检测的标准模板,由昆虫细胞中收获的病毒母液用于空斑测定和病毒DNA提取.以10倍梯度稀释的重组Bacmid作为标准模板,进行荧光定量PCR扩增IL18基因片段并绘制标准曲线,然后以提取的重组杆状病毒DNA作为模板,采用同样体系进行实时PCR反应检测.同时,以琼脂糖空斑法测定病毒母液的滴度.结果：成功构建了重组杆状病毒并建立了病毒滴度的实时荧光PCR检测方法.运用标准模板进行的PCR反应显示该方法的线形范围为101～108拷贝,病毒母液的DNA拷贝浓度（vg/ml）值约为空斑检测的滴度pfu/ml值的10倍.结论：荧光定量PCR方法可灵敏快速地鉴定重组杆状病毒,并在较大的线性范围内检测重组杆状病毒滴度,较之空斑法更准确地反映了重组杆状病毒的实际数量.     

登革病毒在白纹伊蚊细胞内免疫的研究

目的 研究白纹伊蚊对登革病毒产生细胞内免疫现象的分子机制。方法 扩增与克隆登革病毒NGC株的前膜蛋白基因prM，将prM基因以3种不同表达形式重组入昆虫表达载体pBh-spEGFP，以3种重组质粒分别转染白纹伊蚊C6／36细胞，测定转染后的细胞对登革病毒感染的免疫效果。结果 构建了包含prM基因的3种昆虫表达载体，Western blot和荧光显微镜观察证明在C6／36细胞中成功表达了prM-EGFP融合蛋白。MTT实验和空斑形成实验反映了C6／36细胞对登革病毒产生了细胞内免疫。结论 3种重组质粒均可诱导细胞内免疫现象，说明无论是否表达prM蛋白，只要有prM基因转录就可引起细胞内免疫现象；prM基因正义和反义转录形式均可诱导细胞内免疫；其形成机制可能是通过RNA干扰作用而产生。     

我国伊蚊族(双翅目:蚊科)的新分类系统

近年伊蚊族的分类系统有了较大变更 ,主要是把过去原属伊蚊属 (GenusAedes)的艾蚊亚属 (Sub genusAyruakitia)、骚扰蚊亚属 (SubgenusOchlerotatus)和奇阳蚊亚属 (SubgenusVerrallina)恢复到了属的阶元。原先的伊蚊属所属的亚属也因上述 3属的建立而裂分。伊蚊属中也恢复或记述 2个新亚属。本文根据这些变更 ,提出了我国伊蚊族新的分类系统 ,即从过去的 3个属增加到了 6个属 ,包括伊蚊属 (GenusAedes)、艾蚊属 (GenusAyruakitia)、领蚊属 (GenusHeizmannia)、骚扰蚊属 (GenusOchlerotatus)尤蚊属(GenusUdaya)和奇阳蚊属 (GenusVerrallina)。这使我国已知蚊属从 1 8增加到了 2 1个本文并提出了对新建立的属和亚属我国种类的区分特征     

白纹伊蚊气味结合蛋白的研究进展

气味结合蛋白（OBPs）是昆虫嗅觉系统的一类重要蛋白分子,可能与蚊虫的吸血、寻偶和产卵等生理行为密切相关,本文就白纹伊蚊的OBPs的研究进展、研究前景和意义进行综述。     

广州地区白纹伊蚊对常用杀虫剂抗药性的初步研究

目的初步了解广州地区白纹伊蚊对常用杀虫剂的抗药性水平,为控制登革热媒介科学合理用药提供依据。方法从广州地区三种环境类型（农村、郊区、城区）采集白纹伊蚊幼虫,实验室繁殖1—2代,采用WHO推荐的生物测试法进行测定。结果广州农村地区白纹伊蚊对溴氰菊酯、高效氯氰菊酯的抗药性指数分别为4．95、2．41,已产生低抗性;城区、郊区白纹伊蚊对敌敌畏有低抗性,抗药性指数分别为2．16、3．45;三种环境类型白纹伊蚊均对倍硫磷、氯菊酯、残杀威敏感。结论广州地区不同环境类型白纹伊蚊对常用杀虫剂抗药性有差异．应因地制宜。科学合理使用杀虫剂。     

RPA32蛋白原核表达、多克隆抗体制备及初步鉴定

目的原核表达人RPA32蛋白并制备其多克隆抗体,为后续RPA32的功能研究奠定基础。方法以人cDNA文库为模板,构建原核表达质粒PET41a-RPA32,转化受体菌E.coli BL21,经IPTG诱导表达,采用GST亲和纯化方法获得GST-RPA32融合蛋白,将该融合蛋白免疫家兔制备RPA32多抗血清,最后采用Western blot检测其在多种肝细胞株中的特异性。结果在受体菌E.coli BL21中成功诱导表达GST-RPA32融合蛋白,免疫家兔后获得高效价RPA32抗血清,Western blot检测证实该血清能够识别多种肝细胞株中的RPA32及CPT作用后出现的RPA32磷酸化条带。结论成功制备兔抗人RPA32多克隆抗体,为RPA32在DNA损伤中的功能研究奠定了基础。     

埃及伊蚊对重要黄病毒易感性研究概况（一）

埃及伊蚊Aedesaegypti是黄热病（Yellowfever,YF）和登革热的主要传播媒介,分布于世界各地。我们就埃及伊蚊种群遗传、媒介感受态的生理遗传、蚊与黄病毒相结合的受体、环境因素对虫媒病毒传播的影响、埃及伊蚊对黄病毒媒介感受态变化、绘制控制埃及伊蚊对黄病毒媒介感受态的基因图、埃及伊蚊媒介感受态遗传、鉴定控制埃及伊蚊媒介感受态的基因等方面的研究,做出综述。以加强下列关键问题：Aedesaegypti种群当中媒介感受态多少变化归因于遗传效应,环境因子引起变化如何。在这些遗传位点等位碱基,如何决定感受态？如何探索遗传和环境成分影响自然种群内媒介感受态。     

荧光定量PCR用于重组杆状病毒鉴定及病毒滴度检测的研究

目的：建立一种高效﹑简便的荧光实时定量PCR方法，用于重组杆状病毒鉴定及病毒滴度的检测。方法：利用Bac-to-Bac载体系统在昆虫细胞中构建含人IL-18基因的重组杆状病毒，收获的病毒母液以10倍梯度系列稀释后，提取病毒基因组DNA。以10倍梯度稀释的重组杆状病毒穿梭质粒（bacmid）作为标准模板，进行荧光定量PCR反应扩增IL-18基因片段并绘制标准曲线，然后以上述的重组杆状病毒基因组DNA作为模板，采用同样体系进行实时PCR反应检测，同时用琼脂糖空斑法测定病毒母液的滴度。结果：成功构建了重组杆状病毒并建立了病毒滴度的实时荧光PCR检测方法。运用标准模板进行的PCR反应显示该方法的线形范围为101-108拷贝，病毒母液的DNA拷贝浓度（vg/mL）值约为空斑检测的滴度 pfu/mL值的10倍。结论：荧光定量PCR方法可灵敏快速地鉴定重组杆状病毒，并在较大的线形范围内检测重组杆状病毒滴度，较之空斑法更准确地反映了重组杆状病毒的实际数量。     

一种荧光碳量子点的绿色合成方法及其应用研究

本研究探索一种可用于生物医学成像的绿色、高效的荧光碳量子点合成方法,以天然淀粉和水为原料,采用水热法合成碳量子点(carbon quantum dots,CQDs).利用透射电镜和原子力显微镜表征CQDs形貌;紫外光谱、拉曼光谱等方法表征其光学性能,共聚焦显微镜检测其在金黄色葡萄球菌和肺癌A549细胞中的生物成像能力,...     

一种稀土荧光化合物的合成及光谱性质研究

目的 研制新型时间分辨荧光免疫分析螯合剂.方法 以4,4'-二溴-6,6'-二溴甲基-2,2'-联吡啶为起始反应原料设计合成出一种新型化合物4,4'-二(对氨基苯乙炔基)-6,6'-二(N,N-二(叔丁氧基羰甲基)氨甲基)-2,2'-联吡啶,并对其结构进行确认.结果 将该化合物与铕离子结合形成的稀土荧光化合物的荧光性质进行研究,表明其主要发射波长为595 nm(5D0-7F1)、618nm(5D0-7F2),荧光寿命为643μs.当荧光溶液放置72h,荧光强度值无明显变化.在该荧光体系下,Eu3+浓度分析检测范围为10-5～10-11 mol/L.结论 该荧光化合物结构有较好的稳定性,为固相时间分辨免疫体系奠定了基础,具有广泛的应用前景.     

一种新的荧光染料-碳

荧光色素染色法最突出的特点是具非常高的敏感性。因此荧光显微术在各个科学和技术领域中得到越来越广泛的应用。能用来作荧光染料的物质通常是以苯环为基础的芳香族化合物和一些杂环化合物。我们在实验中首次发现市售普通墨汁可对中、小血管行荧光染色。为进一步探讨是何物质发荧光及可能的机理,我们作了此项研究。     

一种水溶性稀土上转换荧光纳米探针及其活体荧光成像研究

目的制备一种水溶性稀土上转换荧光纳米探针NaYF4∶Yb3＋/Er3＋,用于动物活体荧光成像。方法采用三氟乙酸盐热分解法合成油溶性稀土上转换荧光纳米探针NaYF4∶Yb3＋/Er3＋,然后选用柠檬酸或L-半胱氨酸作为修饰剂,置于油-水两相中加热到100℃进行配体交换,离心纯化得到水溶性产物。并对所制备的上转换荧光纳米微粒进行X射线衍射测试（XRD）、X射线光电子能谱分析（XPS）、透射电子显微镜及红外和荧光光谱等表征,确定稀土上转换荧光纳米探针的组成、形态及修饰后该纳米探针的性质。最后将修饰后的水溶性稀土上转换荧光纳米探针作为探针应用于小鼠的活体成像。结果制备的稀土上转换荧光纳米探针NaYF4∶Yb3＋/Er3＋为立方相、平均粒径约21.3 nm的多边形结构,分别在540 nm和660 nm处发出荧光。用柠檬酸或L-半胱氨酸修饰后的稀土上转换荧光纳米探针可以稳定地分散在水中;并且修饰后的稀土上转换荧光纳米探针的粒径、晶相及荧光性质没有发生改变;红外光谱表明,该纳米探针的表面成功引入了修饰剂;该荧光纳米探针用于小鼠活体成像荧光信号清晰可见。结论研制出了一种用柠檬酸或L-半胱氨酸表面修饰的、水溶性稀土上转换荧光纳米探针NaYF4∶Yb3＋/Er3＋,表现出了较好的动物活体成像应用前景。     

不同气候区白纹伊蚊滞育卵差异研究∗

白纹伊蚊Aedes albopictus是登革病毒、寨卡病毒等多种病原体的重要传播媒介,广泛分布于我国温带和亚热带地区,以滞育卵越冬.一旦虫媒病毒扩散到我国北亚热带地区,非流行季节时期病毒的保存方式,将成为虫媒病毒研究中的重要问题.本研究开展了白纹伊蚊滞育卵的生态学研究,发现在短光照下不同地理株白纹伊蚊滞育卵的滞育率从...     

感染登革病毒Ⅱ型后白纹伊蚊氨基酸动态的研究

为研究感染登革病毒Ⅱ型 (DV2 )后白纹伊蚊氨基酸的动态变化 ,采用DV2经胸注射白纹伊蚊。分别测定感染后 5天 ,10天 ,2 0天白纹伊蚊氨基酸含量 ,并与未感染DV2相应龄期蚊虫氨基酸含量对比。结果显示DV2感染后 5天 :天门冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸和精氨酸含量较对照组有明显升高 ,其余氨基酸变化不显著。DV2感染后 10天、 2 0天所有氨基酸含量的变化均不显著。本研究提示DV2可使感染初期白纹伊蚊的少数几种氨基酸含量升高。随着感染时间延长 ,DV2对白纹伊蚊氨基酸含量影响不大。白纹伊蚊可能通过自身内在调节机制维持其体内氨基酸的稳态