用单链构型多态性快速检测血小板膜糖蛋白Ⅱb和Ⅲa基因变异

为探讨快速检测血小板膜的糖蛋白和Ⅲａ基因点突变的方法，采用单链构型多态性分析研究正常人和血小板无力症患者血小板膜ＧＰⅢｂ，Ⅲａ基因结构。外周血ＤＮＡ提取后，用聚合酶链反主尖扩增各外显子，ＰＣＲ产物变性后在微型聚丙烯酰胺凝胶上分离，通过银染色对迁移率异常的ＰＣＲ产物进行核苷酸序列分析。     

琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测肠道菌群基因扩增产物的方法学比较研究

琼脂糖凝胶电泳(agarose gel electrophoresis, AGE))和聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE)最常用的分离纯化和鉴定核酸的方法.琼脂糖凝胶电泳的有效分离范围是0.1～2kb,聚丙烯酰胺分离小片段DNA(5～500 bp)效果最好,分辨力极高,测序的聚丙烯酰胺凝胶可分离相差lbp的DNA片段.     

OPC纯化合成DNA片段方法探讨

ＯＰＣ纯化合成ＤＮＡ片段方法探讨韩金祥，张翠，杨晓春，唐天华，王美岭（山东省医学科学院基础所分子生物研究室）关键词寡核甘酸类；脱氧核糖核酸；纯化ＯＰＣ（ＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｔｉｄｅＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎＣａｒｔｒｉｄｇｅ）是纯化合成ＤＮＡ片段一种较...     

人外周血细胞线粒体DNA中存在特大片段缺失突变

了解线粒体ＤＮＡ大片段缺失突变及其意义。方法采用６种方法提取人外周血细胞ＤＮＡ,,其中１种方法先分离线粒体,再抽提线粒体ＤＮＡ。以得到的人外周血细胞ＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ扩增,其产生经琼脂糖凝胶回收后与ｐＧＥＭ－Ｔ载体连接、转化、测序。结果６种方法抽提ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增后,产物电泳行为相同,发现人血细胞线粒体ＤＮＡ存在１３１６２ｂｐ特大片段缺失突变。结论此缺失首首发现的,经测序证明为人线粒体ＤＮ     

抗2型登革病毒特异性免疫球蛋白重链可变区基因的扩增与纯化

提取抗２型登革病毒单克隆抗体杂交瘤细胞ｍＲＮＡ和ＤＮＡ反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和ＰＣＲ扩增并纯化特异性免疫球蛋白重链可变区（ＶＨ）基因。琼脂糖凝胶和聚丙烯胺凝胶电泳观察结果;该ＶＨ基因约４５０ｂｐ。实验证明,上述两种方法均是分离和扩增ＶＨ基因的有效方法,但提取ＤＮＡ后进行ＰＣＲ较提取ｍＲＮＡ进行ＲＴ－ＰＣＲ经济,简单。     

人CCR5 5′侧翼调控序列克隆测定及基序分析

目的：克隆人ＣＣＲ５ ５′侧翼调控序列及其基序分析。方法：设计单引物,利用单向多循环ＰＣＲ扩增及聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化人ＣＣＲ５ ５′侧翼调控序列基因组ＤＮＡ,ＰＣＲ产物作为序列分析模板。结果：得到长为１．５ｋｂ的人ＣＣＲ５ ５′侧翼调控序列基因组ＤＮＡ序列,并对该区域的基序进行了分析。结论：该方法适合于基因组ＤＮＡ,特别是逆向扩增一些读框区５′侧翼调控序列。     

胎儿SRY基因用于产前诊断的初步研究

采用ＰＣＲ技术，对５０例胎儿组织ＤＮＡ进行了Ｙ染色体物 的ＳＲＹ基因扩增。扩增片段长度为２５０ｂｐ。结果显示：３２例早孕绒毛ＤＮＡ中，有１７例扩增出特异性片段，１５例未扩增出特异性片段，有、无特异片段比例为１．１３３：１，接近胎儿自然出生性别之比；     

糖还原酶基因（AC）n二核苷酸串联重复序列不同等位基因的筛选

研究了醛糖还原酶基因转当起始点上游－２．１ｋｂ处的微卫星ＤＮＡ标记－（ＡＣ）ｎ二核苷酸串联重复序列７种等位基因（Ｚ＋６，Ｚ＋４，Ｚ＋２，Ｚ，Ｘ－２，Ｚ－４和 Ｚ－６）的筛选方法。首先自人外周血提取基因组ＤＮＡ后设计一对引物进行ＰＣＲ扩增，获得长度为１３２－１４４ｂｐ的ＤＮＡ片段。选取等位基因为纯合子的个体ＤＮＡ标本的ＰＣＲ扩增产物，经纯化后直接测序以确定等位基因的种类；并以确定的等位基因为标准，用     

改进的PCR模板制备及DNA回收方法

直接用煮沸的细菌裂解液中的ＤＮＡ作ＰＣＲ模板，扩增效果与用酚／氯仿抽提纯化的质粒ＤＮＡ作模板的结果一致，缩短了实验时间。利用简单材料回收酶切片段，省去了有机溶剂反复抽提和沉淀的步骤，回收率达到９０％，效果很好。     

用双重PCR快速诊断新生儿巨细胞病毒感染

用双重ＰＣＲ法检测新生患儿及随访新生儿期诊断为巨细胞包涵体病患儿的尿及血标本中巨细胞病毒（ＣＭＶ）ＤＮＡ。两对引物序列取自ＨＣＭＶＩＥＡ基因区，第一对引物扩增片段为７２１ｂｐ，第二对引物扩增片段为１６７ｂｐ。新生患儿２３份尿标本，１７例检出阳性；１８份白细胞提取物，１２份阳性。随访患儿７例，４例在尿或血中检出ＣＭＶＤＮＡ。ＰＣＲ结果与病毒分离比较，两法的符合率为９５．６％，ＰＣＲ获得结果仅需１～２天。尿标本用于ＰＣＲ较血标本检出率高，预处理简便     

散发性非息肉性大肠癌微卫星DNA不稳定性分析

为分析Ｄ２Ｓ４４１、Ｄ２Ｓ１１９和Ｄ２Ｓ１２３３个微卫星ＤＮ标记位点不稳定性,研究ＳＮＰＣＣ发生机理的分子基础。应用ＰＣＲ－ＳＳＬＰ扩增微卫星ＤＮＡ,聚丙烯酰胺凝胶电流方法对３１例临床诊断为散发性非息肉性大肠癌的肿瘤组织及其相应的正常组织的Ｄ２Ｓ４４１、Ｄ２Ｓ１１９和Ｄ２Ｓ１２３３个微卫星ＤＮＡ标记位点进行分析。结果显示,３１例中,２例在所检测的３个位点均存在微卫星ＤＮＡ不稳定性。提示微卫星ＤＮＡ     

人白细胞介素－6受体cDNA的克隆

应用ＲＴ－ＰＣＲ技术，从人的外周血单个核细胞中扩增出人ＩＬ－６受体的特异性ｃＤＮＡ片段，经琼脂糖电泳证实扩增片段大约为１４００碱基对。运用ＤＮＡ重组技术，将获得的片段连接到ＰＵＣ１８质粒中，经转化、筛选、酶切鉴定构建出重组质粒ｐＵＣＩＬ－６受体；经序列分析证实为编码人ＩＬ－６受体的ｃＤＮＡ片段。     

短链线性聚丙烯酰胺—毛细管电泳分析DNA片段

合成生效生聚丙烯酰胺,解决了线性聚丙炮酰胺粘度大,难以填充毛细管的问题。在短链线性聚丙烯酰胺浓度为４％,电压１０ＫＶ条件下,采用激光诱导荧光检测（λｅｘ＝４８８ｎｍ,λｅｍ＝５１３ｎｍ）,ＰＣＲ Ｍａｒｋｅｒｓ、ＤＢＲ ３２２ ＤＮＡ／Ｈａ３ⅢＭａｒｋｅｒｓ的２８个片段达到了较好分离。     

利用不同DNA原进行基因多态性研究的可行性分析

目的 探讨不同ＤＮＡ源作基因多态性分析的优缺点，及以血凝块裂解液直接进行ＰＣＲ扩增的可行性和可靠性。方法 从口腔粘膜细胞、组织切片提取ＤＮＡ，并将临床生化分析遗弃的血凝块制备成裂解液和纯化ＤＮＡ，取各自样本分别进行ＰＣＲ，并进一步对血凝块纯化ＤＮＡ和血凝块裂解液所作的ＰＣＲ扩增作对照研究。结果 本研究使用的不同ＤＮＡ源所作的ＰＣＲ扩增均获得满意结果，以血凝块裂液进行的ＧＳＴＭ１，ＧＳＴＴ１和ＣＹＰ     

人淋巴霉素cDNA克隆及顺序分析

目的：克隆人淋巴毒素ｃＤＮＡ并测序。方法：采用ＲＴ－ＰＣＲ技术，从ＰＨＡ／ＰＭＡ活化的Ｔ细胞系Ｊｕｒｋａｔ细胞总ＲＮＡ中扩增入淋巴毒素ｃＤＮＡ并定向克隆于ｐＵＣ１８，ｐＵＣ１９质粒载体Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法测序，结果：ＲＴ－ＰＣＲ扩增出一个５４１ｂｐ的ＤＮＡ片段，限制性内切酶图谱分析和测序结果显示。该５４１ｂｐ片段为编码人淋巴毒素成熟肽的ｃＤＮＡ，与公布的人淋巴毒素ｃＤＮＡ序列完全一致，结论；     

高质量人体基因组DNA的提取

高质量人体基因组ＤＮＡ的提取周建中＊王申五（北京医科大学血研所，北京１０００４４）关键词脱氧核糖核酸；基因组；人类使用质量不高的ＤＮＡ进行ＰＣＲ以扩增目的基因片段较易成功；相反，用Ｓｏｕｔｈ－ｅｒｎ杂交检测单拷贝基因有否重排时，要求提取高质量的ＤＮＡ...     

应用微小卫星体DNA多态性进行成人型多囊肾病的基因诊断

基因诊断是控制成人型多囊肾病（ＡＰＫＤ）的有效措施，作者利用ＳＭ＿７（一种在１６号染色体上与成人型多囊肾病基因紧密连锁的微小卫星体ＤＮＡ），根据其聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增片段长度多态性，结合聚丙烯酰胺凝胶电泳及Ａｇ￣＋染色方法，进行了１４个ＡＰＫＤ家系１０１名个体染色体ＤＮＡ的家系基因连锁分析，其中８个家系得到了明确结果，ＰＣＲ扩增片断条带清晰，ＡＰＫＤ家系中患者致病基因连锁关系自确。对结果不明确的家系分析了其可能原因。本方法是一种快速、简单，灵敏的非同位素ＡＰＫＤ基因诊断方法。     

D13S133位点CA重复序列在正常中国人群的多态性分布

研究Ｄ１３Ｓ１３３位ＣＡ重复序列在正常中国人群的多态性分布。应用ＰＣＲ扩增该位点的ＣＡ重复序称，通过变性聚丙烯酰胺凝电泳检测扩增产物，测定６０个正常中国人的等位片段。     

改进的PCR模板制备及DNA回收方法

直接用煮沸的细菌裂解液中的ＤＮＡ作为ＰＣＲ模板，扩增效果与用酚／氯仿抽提纯化的质粒ＤＮＡ作模板的结果一致，缩短了实验时间，利用简单材料因收酶切片段，省去了有机溶剂反复抽提和沉淀的步骤，回收率达了９０％，效果很好。     

结核分枝杆菌耐药基因检测

目的：研究结核分枝杆菌耐药的分子机制，建立快速检测耐药基因型的分子药敏试验方法。方法：通过聚合酶链反应、ＰＣＲ－单链构象多态性、ＰＣＲ－限制性片段长度多态性分析ＭＴ临床分离株的ｒｐｏＢ、ｒｐｓＬ、ＫａｔＧ基因和ｉｎｈＡ调节序列。结果：ＰＣＲ分析耐药基因的敏感性为１－１０ｐｇＤＮＡ；除ｒｐｏＢ经物ＰＣＲ扩增为属特异性外，余耐药基因引物ＰＣＲ扩增都具有较高的种特异性。与传统药敏试验方法相比，ＰＣＲ与Ｐ