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1.
目的观察α-黑素细胞刺激素(α-MSH)基因原位转染供者小鼠心脏对小鼠同种异体心脏移植排斥反应的影响。方法将携带α-MSH基因和绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组腺相关病毒(rAAV-α-MSH)和单纯携带GFP的重组腺相关病毒(rAAV-GFP)分别经主动脉灌注原位转染供者小鼠心脏,再行同种异体心脏移植,观察心脏移植物的存活时间,测定移植心脏的C-MSH表达情况,并于术后7d测定移植心脏的细胞因子及趋化因子水平。结果腺相关病毒载体能有效地将α-MSH基因导入小鼠心脏,与rAAV-GFP空载体组[(7.0±0.33)d]和PBS组[(7.0±2.23)d]相比,rAAV-α-MSH原位转染组[(16.3±2.21)d]的心脏移植物存活时间延长。术后7d,rAAV-α-MSH原位转染组心脏移植物的Th1细胞因子(IL-2、IFN-α)水平较其它两组减低,而Th2细胞因子(IL-4、IL-10)水平升高,趋化因子MCP-1、RANTES水平下降。结论携带α-MSH基因的rAAV载体经原位转染供者小鼠心脏,能促进移植心脏局部的细胞因子格局由Th1型向Th2型偏移,降低趋化因子水平,从而延长同种异基因移植心脏的存活时间。  相似文献   

2.
为探讨移植前输注人转化生长因子 β1 (TGFβ1 )基因修饰供者树突状细胞 (DC )对移植心脏存活时间的影响。采用重组质粒TGFβ1 pcDNA3转染供者F344大鼠DC ,RT PCR和Westernblot检测转染后DC的TGFβ1基因表达。收集转染各组细胞静脉输注Lewis大鼠。 1周后检测TGFβ1 DC在受者大鼠脾和淋巴结的分布。另一部分输注大鼠接受DC来源的F344同种异体心脏移植 ,观察各组转染DC输注后移植心脏存活时间的变化以及相同时间点移植心脏重量的变化 ,比较移植后各时间点移植排斥反应级别以及输注不同DC各组移植心脏出现排斥反应的时间。结果 :TGFβ1 DC输注受者后 ,1周内可在脾和淋巴结内形成微嵌合 ,输注后DC在受者体内的迁移以及不同时间的存活数量不同。同时发现TGFβ1 DC输注大鼠 ,移植心脏存活时间 (33 1 4± 7 88)d比对照组 (6 5 7± 1 76 )d明显延长 ,移植后排斥反应级别明显低于对照组 ,并且该组移植心脏排斥反应出现时间也明显晚于各对照组。因此 ,TGFβ1 DC能有效抑制移植排斥反应 ,延长移植心脏存活时间。  相似文献   

3.
目的 观察a-黑素细胞刺激素(a-MSH)基因原位转染供者小鼠心脏对小鼠同种异体心脏移植排斥反应的影响.方法 将携带a-MSH基因和绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组腺相关病毒(rAAV-a-MSH)和单纯携带GFP的重组腺相关病毒(rAAV-GFP)分别经主动脉灌注原位转染供者小鼠心脏,再行同种异体心脏移植,观察心脏移植物的存活时间.测定移植心脏的GMSH表达情况,并于术后7 d测定移植心脏的细胞因子及趋化因子水平.结果 腺相关病毒载体能有效地将a-MSH基因导人小鼠心脏,与rAAV-GFP空载体组[(7.0±0.33)d]和PBS组[(7.0±2.23)d]相比,rAAV.a-MSH原位转染组[(16.3±2.21)d]的心脏移植物存活时间延长.术后7 d,rAAV-a-MSH原位转染组心脏移植物的Thl细胞因子(IL-2、IFN-a)水平较其它两组减低,而Th2细胞因子(IL4、IL-10)水平升高,趋化因子MCP-I、RANTES水平下降.结论 携带a-MSH基因的rAAV载体经原位转染供者小鼠心脏,能促进移植心脏局部的细胞因子格局由Th1型向Th2型偏移,降低趋化因子水平,从而延长同种异基因移植心脏的存活时间.  相似文献   

4.
供者脾细胞对移植心脏免疫耐受的诱导   总被引:2,自引:1,他引:1  
目的探讨供者脾细胞对同种异体心脏移植免疫耐受的诱导效果 ,为抗排斥反应治疗提供依据。方法分别采用供者脾细胞 (SPC)和环磷酰胺 (CP)预处理移植受者 ,然后行大鼠异位心脏移植术 ,根据实验分组对移植心脏存活情况进行观察。结果对照组、CP组和 SPC组移植心脏的存活时间分别为 7.2 1± 2 .5 6 d、9.78± 2 .5 5 d和 15 .14± 8.5 6 d,经统计学处理后证实 ,3组移植心脏的存活时间有显著性差异 (P<0 .0 5 )。结论供者脾细胞预处理移植受体 ,可以明显地延长大鼠同种异体心脏移植的存活时间。  相似文献   

5.
目的:探讨受者树突状细胞(DC)与体外光化学法(PUVA)处理的供者脾淋巴细胞共培养,对心脏移植受者CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)及移植心存活时间的影响。方法:以DA大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,SD大鼠为无关供者,建立大鼠腹部异位心脏移植模型。分离正常的供者脾淋巴细胞(SP),制备经PUVA处理的供者脾淋巴细胞(PU-VA-SP)。在体外将DA大鼠PUVA-SP或SP与受者骨髓来源的DC共同培养,收集经上述处理后受者DC,流式细胞术(FCM)检测其表面分子CD80、CD86以及OX6的表达状况。根据受者术前静脉输注的成分将实验动物随机分为3组:①Control组:单纯输注PBS,n=7;②SPDC组:输注加载供者SP的受者大鼠DC,n=8;③PUVA-SPDC组:输注加载PUVA处理的供者SP的受者大鼠DC,n=8。移植术前7d,经外周静脉给受者输注与PUVA-SP共培养后的DC(PUVA-SPDC组)、正常受者DC(DC组)或只输注PBS(Control组),移植术后观察受者移植物的存活时间,检测受者外周血中CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25highT细胞的比例及其Foxp3表达状况。过继转移PUVA-SPDC组受者大鼠的T细胞后,检测正常LEW大鼠对供者抗原或无关抗原的DTH反应。结果:受者DC与供者未经处理的脾淋巴细胞(SP)混合培养后,其表面分子CD80、CD86以及OX6的表达分别为16.6%±0.72%、36.5%±0.87%及65.6%±1.45%,明显高于未处理DC组(3.53%±0.27%、13.0%±0.57%及27.7%±1.23%)(P0.01);而受者DC与PUVA处理过的供者脾淋巴细胞(PUVA-SP)混合培养后,其表面分子的表达仍保持较低的水平,CD80、CD86以及OX6的表达分别为3.9%±0.12%、13.4%±0.59%及28.0%±1.73%,与未经任何处理的受者DC无统计学差异(P0.05)。移植术后,PUVA-SPDC组受者,外周血CD4+CD25+T、CD4+CD25highT细胞占CD4+T的比例分别是18.97%和3.81%,明显高于输注DC组(4.40%和0.81%)和Control组(3.11%和0.09%)的大鼠(P0.01)。PUVA-SPDC组大鼠外周血CD4+CD25+T细胞中Foxp3表达率为29%±1.73%,CD4+CD25highT细胞中Foxp3阳性率高达95%±1.67%,均明显高于对照组(12%±0.58%和19.3%±2.03%)及DC(16.3%±0.88%和52.0%±1.73%)组(P0.01)。PUVA-SPDC组大鼠移植心存活时间为(27.3±0.98)d,与Control组(6.7±0.29)d及DC组(11.0±0.32)d相比,明显延长(P0.01)。过继转移实验显示,接受PUVA-SPDC组受者T细胞的正常LEW大鼠对DA大鼠抗原的刺激呈特异性免疫低应答状态。结论:PUVA-SPDC能够在移植受者体内诱生CD4+CD25+Foxp3+Treg,同时诱导抗原特异性免疫低反应,进而延长异基因移植物的存活时间。  相似文献   

6.
目的:应用B7-1和B7-2反义寡核苷酸(ASB7-1/ASB7-2oligo)抑制CD80(B7-1)、CD86(B7-2)在供体小鼠骨髓树突状细胞(DC)上的表达,观察这类DC对同种异体小鼠心脏移植存活时间的影响并探讨其机理。方法:小鼠B7-1和B7-2反义寡核苷酸在lipofectamine协助下分别转染供体鼠C57BL/10J(B10)小鼠骨髓DC,流式细胞仪检测其CD80/CD86的表达,证实为CD80low/CD86low。将各组DC经尾静脉输注到受体小鼠C3H/HeJ(C3H)体内,1周后进行心脏移植术,观察存活时间;体外实验观察各组DC对同种异体T细胞的激活作用,包括混合淋巴细胞反应、细胞毒性效应、及IL-2的产生。结果:ASB7-1和ASB7-2分别显著抑制DC表达CD80/CD86;转输这些CD80low/CD86lowDC可使小鼠心脏移植物存活时间显著延长,分别为(18.6±0.89)d和(23.67±10.73)d,与转输成熟骨髓DC(IL-4DC)组和生理盐水注射组(6.22±0.97)d、(11.17±1.72)d比较,均有显著差异(P<0.01);CD80low或CD86lowDC对异体T细胞激活作用较弱,表现为T细胞增殖能力、IL-2产生及细胞毒杀伤均明显低。结论:应用反义寡聚核苷酸转染供者DC,降低其CD80或CD86的表达,可以抑制供者特异性的免疫应答,延长移植物存活时间。  相似文献   

7.
目的: 探讨异基因供者骨髓细胞在致敏模型体内的归巢示踪与植入分析。方法: 以异基因脾细胞输注方法建立致敏的BALB/c小鼠模型,同时取正常BABL/c小鼠作为非致敏模型。致敏或非致敏模型经8 Gy 照射后分别经尾静脉移植1×107 C57BL/6小鼠骨髓细胞。用绿色荧光染料CFSE标记供者骨髓细胞,并分别在移植后不同时点(2 h、12 h及48 h),通过组织细胞悬液动态示踪供者细胞在致敏受者各组织的分布。移植后记录各组的生存情况,每周监测造血重建与骨髓恢复情况。予H-2Db进行标记移植后受者骨髓细胞,检测供者嵌合百分比。结果: CFSE能标记供者骨髓细胞并用于体内示踪实验。动物体内归巢示踪实验表明,与非致敏组相比,异基因供者骨髓细胞在致敏受者体内的外周血、脾脏及股骨的分布均明显减少。植入分析结果发现,非致敏受者于移植后能长期存活,外周血及骨髓细胞均能迅速恢复;而致敏组中,小鼠均于移植后2周左右全部死亡,生存中位数为13 d,外周血及骨髓细胞均随时间推移呈进行性减少。嵌合分析显示移植后第7 d,非致敏受者与致敏受者的供者骨髓细胞百分比分别为(48.07±4.70)%和(0.77±0.11)%,两者差异显著(P<0.01)。结论: 异基因供者骨髓细胞在致敏受者体内脾脏及股骨等部位被清除,不能有效植入。  相似文献   

8.
目的探讨蛇毒因子(CVF)消耗补体对大鼠同种心脏移植急性排斥反应的影响。方法建立Wistar至SD大鼠同种异位心脏移植模型,实验组经静脉注射CVF以消耗受体血清中补体,观察移植心存活时间,并从实验组和对照组中分别抽取5只大鼠于术后1、3、5、6、7 d定时活杀,对比观察移植心急性排斥反应程度,血清补体活性以及CD4+、CD8+T细胞浸润程度。结果使用CVF的实验组,其移植心存活时间显著延长,平均达(32.39±23.82)d,部分移植心甚至达到长期存活,而对照组为(6.60±0.65)d(P<0.01),病理检查及免疫组化证实实验组急性排斥反应程度、组织内C3沉积情况和CD4+、CD8+T细胞浸润程度均较同期对照组明显减轻。结论CVF清除补体可抑制大鼠同种心脏移植急性排斥反应,显著延长移植心存活时间。  相似文献   

9.
为检测细胞因子(CK)在肝移植物中的表达,探讨供者特异性T细胞疫苗(TCV)延长同种肝移植存活的机制。术前分别用特异和非特异TCV免疫受者,另设单纯移植对照。大鼠原位肝移植后观察肝移植物的存活时间(MST);术后第7天获取移植物,作组织切片观察;通过RT-PCR检测肝移植物内IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-10的表达水平;进行混合淋巴细胞反应。结果发现供者特异性LCTCV组MST(15.7±4.2)d比非特异性LTCV组(11.3±2.7)d显著延长(P<0.01),而单纯移植组MST为(5.7±1.4)d(P<0.05);组织切片观察特异性LCTCV组未发现明显排斥改变;与其他两组比较,特异性LCTCV组MLR受到显著抑制(P<0.01);RT-PCR显示:特异性LCTCV组IL-4、IL-10的表达水平显著高于其他两组,IL-2和IFN-γ在单纯移植组呈高表达,同时IFN-γ在非特异LTCV组有表达。实验表明:细胞因子网络调控在免疫耐受形成中发挥重要作用,IFN-γ和IL-2主要参与急性排斥反应,IL-4和IL-10促进同种耐受的形成,不同的微环境下同一种细胞因子所发挥的主要作用会有所变化。  相似文献   

10.
目的 研究调节性T细胞(Tr)和Th17细胞在特异性NF-κB抑制诱导同种异体小鼠心脏移植耐受的早期作用机制.方法 以BALB/c小鼠为供体,C57BL/6小鼠(对照组)和IκBα△N-Tg小鼠(实验组)分别作为受体建立同种异体腹部异位心脏移植模型;流式细胞术分别检测两组受鼠脾脏内Tr在移植前以及移植术后7 d、30 d和100 d的变化规律,以及Th17细胞在移植术后5 d时的变化;Western blot检测两组心脏移植物内IL-17在移植后3 d和5 d的表达.结果 实验组心脏移植物存活时间均大于100 d,HE染色未见心脏移植物内有明显淋巴细胞浸润;实验组Tr比例在移植后7 d和30 d时明显升高(21.23±3.95,23.17±4.11 vs 11.64±1.96,P0.05),而对照组Tr在移植前后则无明显变化;与对照组相比,实验组Th17细胞及移植物内IL-17表达在移植术后5 d时均明显下降.结论 特异性受体T细胞NF-κB功能缺陷可以打破受体内Tr/Th17细胞平衡,在移植术后早期促进T细胞向Tr分化而抑制向Th17细胞分化,从而阻止急性排斥反应发生,诱导耐受.  相似文献   

11.
为观察转染α黑素细胞刺激素(-αMSH)基因的树突状细胞(DC)的功能和特性,以腺相关病毒(AAV)为载体将α-MSH基因导入小鼠骨髓来源的未成熟DC(-αMSH-DC),用ELISA检测-αMSH-DC培养上清中-αMSH及IL-12水平,用流式细胞仪分析-αMSH-DC表面分子的表达,以-αMSH-DC提呈OVA抗原刺激致敏T细胞,通过ELISA测定IL-2水平来观察其抗原提呈功能。结果显示,在-αMSH-DC培养上清中检测到-αMSH的分泌,-αMSH-DC表面分子表达下调,分泌IL-12的能力降低,抗原提呈功能被抑制。-αMSH-DC可部分抵抗LPS上调表面分子表达和促进IL-12分泌的作用。表明-αMSH基因可籍AAV载体导入未成熟DC,并有效地表达,α-MSH基因修饰的DC成熟受到抑制。  相似文献   

12.
目的 :应用B7- 1和B7- 2反义寡核苷酸 (ASB7- 1/ASB7- 2oligo)抑制CD80 (B7- 1)、CD86 (B7- 2 )在供体小鼠骨髓树突状细胞 (DC)上的表达 ,观察这类DC对同种异体小鼠心脏移植存活时间的影响并探讨其机理。方法 :小鼠B7- 1和B7- 2反义寡核苷酸在lipofectamine协助下分别转染供体鼠C5 7BL/10J(B10 )小鼠骨髓DC ,流式细胞仪检测其CD80 /CD86的表达 ,证实为CD80 low/CD86 low。将各组DC经尾静脉输注到受体小鼠C3H/HeJ(C3H)体内 ,1周后进行心脏移植术 ,观察存活时间 ;体外实验观察各组DC对同种异体T细胞的激活作用 ,包括混合淋巴细胞反应、细胞毒性效应、及IL - 2的产生。结果 :ASB7- 1和ASB7- 2分别显著抑制DC表达CD80 /CD86 ;转输这些CD80 low/CD86 lowDC可使小鼠心脏移植物存活时间显著延长 ,分别为 (18.6± 0 .89)d和 (2 3.6 7± 10 .73)d ,与转输成熟骨髓DC(IL - 4DC)组和生理盐水注射组(6 .2 2± 0 .97)d、(11.17± 1.72 )d比较 ,均有显著差异 (P <0 0 1) ;CD80 low或CD86 lowDC对异体T细胞激活作用较弱 ,表现为T细胞增殖能力、IL - 2产生及细胞毒杀伤均明显低。结论 :应用反义寡聚核苷酸转染供者DC ,降低其CD80或CD86的表达 ,可以抑制供者特异性的免疫应答 ,延长移植物存活时间。  相似文献   

13.
田丽华  李雪  刁玉梅  李兵 《免疫学杂志》2012,(3):227-230,236
目的研究IL-10基因修饰后的大鼠树突状细胞(DC)的表型及其生物学特性。方法以含IL-10基因的重组腺病毒载体体外转染大鼠骨髓来源的DC,Western blot测定转染后各组DC中IL-10蛋白的表达,流式细胞仪检测各组DC表面抗原CD83、CD86分子的表达情况,混合淋巴细胞反应法测定各组DC刺激同种异体T细胞增殖的能力。结果 IL-10基因修饰组DC可检测到IL-10高表达,表面抗原CD83、CD86低表达,其刺激T淋巴细胞增殖水平较其他各组低。结论 IL-10基因修饰的DC可有效的表达有功能的IL-10,为研究IL-10修饰的DC诱导同种异体移植免疫耐受奠定了基础。  相似文献   

14.
目的:探讨CD1d在小鼠皮肤移植排斥反应中的免疫调节作用及其机制。方法:利用两种基因缺失小鼠的同种异体皮肤移植实验模型,观察CD1d与移植皮片存活时间的相关性。采用RT-PCR和流式细胞术检测NKT细胞,探讨CD1d的作用机制。以实时荧光定量PCR分析CD1d与受体小鼠体内细胞因子微环境改变的相关性。最后,通过阻断细胞因子、激活NKT细胞和过继免疫法证实结果。结果:CD1d基因缺失时移植物存活时间明显长于野生型(P<0.001),NKT细胞数量较野生型明显减少(P<0.05),而IL-10和TGF-β水平明显增高(P<0.05,P<0.001)。脾淋巴细胞过继免疫、α-GalCer治疗和IL-10阻断均可缩短移植物存活时间。结论:CD1d分子通过以CD1d-NKT细胞为轴的免疫反应,抑制NKT细胞的激活和细胞因子微环境的改变,在器官移植早期排斥反应中起到举足轻重的作用。  相似文献   

15.
目的 探讨抗γ公共链单克隆抗体(抗γc单抗)联合供者脾细胞特异性输注(DST)诱导移植物长期存活的可行性及相关机制.方法 建立小鼠颈部异位心脏移植模型,组Ⅰ为单纯实施心脏移植组,组Ⅱ于移植前给予DST,组Ⅲ术前予DST联合抗γc单克隆抗体处理,术后观察移植物的存活时间及相关指标.结果 组Ⅲ心脏移植物平均存活时间明显长于组Ⅰ及组Ⅱ (P<0.05).FACS分析显示组Ⅲ受者脾细胞中Tr比例较组Ⅰ及组Ⅱ显著增高(P<0.05),同时脾细胞增殖活性明显减低(P<0.05).结论 抗γ公共链单克隆抗体联合DST通过增加供者体内Tr的比例,减低对同种抗原的应答能力,显著延长同种心脏移植模型中移植物存活时间.  相似文献   

16.
凋亡细胞与外染色体的免疫调节作用   总被引:1,自引:0,他引:1  
树突状细胞(DC)是专职的抗原递呈细胞(APC),它能够引起同种异体移植物排斥的抗供者T细胞反应。利用供者来源的凋亡细胞或外染色体在原位将供者同种异体抗原递呈给受者的静止DC来诱导耐受,凋亡细胞和外染色体的免疫调节作用为诱导移植耐受提供了一条新的途径。  相似文献   

17.
冬虫夏草提取物的免疫抑制功能   总被引:13,自引:0,他引:13  
孟明  谢蜀生 《现代免疫学》1993,13(5):261-263
本实验系统地观察了冬虫夏草的三种提取物对小鼠细胞免疫和体液免疫功能的影响。体内,体外实验的结果表明,冬虫夏草的粗品,乙醇提取物和水提取物均能明显抑制小鼠脾细胞对刀豆蛋白A(ConA),细菌脂多糖(LPS)的增殖反应;明显减少小鼠特异的抗体分泌细胞数;减低同种异型抗原诱导的迟发型超敏反应及混合淋巴细胞反应,延长小鼠同种异体移植皮片的存活时间。用流式细胞仪(FACS)对小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的分析结果表明:虫草的以上各种提取物,均能增加小鼠脾脏CD8~+亚群的细胞数。提示虫草对小鼠免疫功能的抑制作用可能在于选择地增强抑制细胞亚群而发挥其对免疫应答的负反馈调节作用。  相似文献   

18.
雌二醇、孕酮对小鼠同种异基因移植物的影响   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的通过研究雌二醇(E2)、孕酮(P4)对小鼠同种异基因移植物存活时间的影响,探讨妊娠期间母体外周血中雌、孕激素水平对母体免疫应答能力以及对母胎免疫耐受的影响。方法雌性受体小鼠通过切除双侧卵巢去势,胃饲E2或P4,使外周血E2或P4浓度达到相当于小鼠妊娠中期水平。以腹腔注射CsA的小鼠作为对照,进行耳后同种异基因半心移植,观察各组移植物存活时间,并取移植部位组织进行石蜡切片HE染色。结果同基因移植组心肌长期存活(>300 d),异基因移植对照组心肌平均存活时间为(12.8±0.8)d。与异基因移植对照组比较,CsA组心肌存活时间显著延长(>20 d),P<0.01;E2组移植心肌存活时间显著缩短(9.7±0.5)d,P<0.01;P4组心肌存活时间与对照组比较无显著差异,平均(12±0.6)d,P>0.05。结论妊娠期母体外周血中E2和P4水平对母体的系统性免疫应答无明显抑制作用,不是维持非胎盘部位母胎免疫耐受的主导性因素。  相似文献   

19.
目的:研究雌二醇(17β-estradiol, E2)处理的供体骨髓来源树突细胞(dendritic cells, DCs)在诱导小鼠同种异基因皮肤移植免疫耐受中的作用。方法:体外培养小鼠骨髓来源DCs,然后用E2处理。受体小鼠在皮肤移植前经尾静脉分别输注经E2处理的供体小鼠DCs、供体小鼠成熟DCs以及不成熟DCs,输注PBS为对照组。1周后对受体小鼠进行同种异基因皮肤移植,手术后观察皮肤存活情况,应用流式细胞术检测手术前后受体小鼠外周血中CD4+CD25+调节性T细胞百分率的变化。结果:在同种异基因皮肤移植中,受体小鼠尾静脉输注经E2处理的DCs组与对照组和不成熟DCs组比较,移植皮肤存活时间显著延长,较不成熟DCs组存活时间平均延长10.6 d(P<0.01);与对照组和不成熟DCs组比较,E2处理组外周血中CD4+CD25+ 调节性T细胞百分率明显升高(P<0.01)。结论:在同种异基因小鼠皮肤移植模型中,E2处理的供体小鼠DCs可以延长移植皮肤存活时间。  相似文献   

20.
本文报道抗小鼠胸腺细胞血清(ATS)有降低周围血白细胞和淋巴细胞数,并能选择性排空脾脏、淋巴结等淋巴组织胸腺依赖区淋巴细胞的作用。短程小剂量多次注射 ATS能延长同种皮片移植物存活时间。在移植前9天,对受者小鼠用供系小鼠脾细胞先作主动免疫,再并用短程ATS注射,还能进一步延长移植物的存活时间。对这两种处理方法的作用机理作了讨论。  相似文献   

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