机械拉伸对人肺上皮细胞粘附及[Ca2+]i的影响

目的探讨周期性拉伸应变对人肺上皮细胞H727的力学性质及其[Ca2 ]i的调控作用.方法应用微管吸吮系统测定细胞与基底间的粘附力和细胞的铺展面积,用荧光探针Fluo-3/AM测定拉伸应变对人肺上皮细胞H727[Ca2 ]i的影响.结果在应变为15%,频率为40次/min的拉伸刺激下,与其静态对照组相比,细胞与基底间的粘附力和细胞的铺展面积均增加;拉伸5 min后,[Ca2 ]i比对照组有明显增加,用三七总皂苷阻断胞内Ca2 离子通道后,细胞对应变的响应仍表现出[Ca2 ]i的升高,但与未加三七总皂苷的实验组相比,[Ca2 ]i响应应变后的升高由原来的3.4倍的增加降低为1.5倍的增加.结论在人肺上皮细胞H727响应周期性拉伸应变的过程中,[Ca2 ]i的升高既有胞外钙内流的参与,也有胞内钙库的释放作用,其中胞外钙通过跨膜通道的内流起主要作用.     

ADP和CPA诱导的高血压病人血小板胞浆游离钙的变化

[目的]探讨高血压病人血小板胞浆游离钙浓度(cytoplasmicfreeCa2 concentration,[Ca2 ]i)的变化.[方法]采用Fura-2/Am荧光双波长测定[Ca2 ]i技术,动态观察激动剂二磷酸腺苷(adenosinediphosphate,ADP)和环匹阿尼酸(cyclopiazonicacid,CPA)对高血压病人血小板[Ca2 ]i的影响.[结果]高血压病人静息血小板[Ca2 ]i与正常人比较明显增高(P<0.05);ADP和CPA激动的高血压病人的血小板平台钙与静息钙比较有统计学意义(P<0.05);峰位钙-平台钙的差(既钙释放)与正常人比较明显增高(P分别<0.05和<0.01);平台钙-静息钙的差(既钙内流)与正常人比较无明显差异(P>0.05).[结论]高血压病人静息血小板[Ca2 ]i增高,平台钙水平明显增高,血小板呈高反应状态;高血压病人的血小板被ADP和CPA激活不能恢复至静息动状态;ADP和CPA激动的高血压病人的血小板钙释放增多,钙内流正常.     

电针对家兔高血压及心肌细胞游离钙镁浓度的影响

利用AR-CM-COM阳离子测定系统和离子探针Fura-2-AM及Furaptra-A从观察了电针在治疗家兔实验性高血压时心肌细胞内游离钙离子浓度（[Ca2＋]i）和游离镁离子浓度（[Mg2＋]i）的变化情况。静脉滴注去甲肾上腺素（NE）造成家兔实验性高血压,心肌细胞[Ca2＋]。随血压升高而增大,[Mg2＋]i则降低,[Ca2＋]i／[Mg＋]i比值升高;电针两侧“足三里”穴位后治疗组家兔血压明显降低,[Ca2＋]i明显低于高血压组,[Ca2＋]i／[Mg2＋]i比值降低;电针对正常家免心肌细胞[Ca2＋]i和[Mg2＋]i均无明显影响。结果提示心肌细胞内游离Ca2＋、Mg2＋在针刺调整血压的过程中可能发挥一定的作用。     

海嘧啶对肿瘤细胞内[Ca^2＋]i的影响

目的　揭示海嘧啶诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法　采用激光扫描共聚焦技术观察海嘧啶对肿瘤细胞内[Ca2 ]i 的影响及 [Ca2 ]i 变化时 Ca2 的来源 ,采用定磷法测定海嘧啶对肿瘤细胞膜钙泵活性的影响。结果　海嘧啶可显著升高肿瘤细胞内 [Ca2 ]i 的浓度 ,[Ca2 ]i 升高时 ,Ca2 同时来源于细胞外钙内流和细胞内钙释放。海嘧啶可显著降低肿瘤细胞膜钙泵活性。结论　海嘧啶通过升高肿瘤细胞内 [Ca2 ]i 的浓度 ,从而启动肿瘤细胞凋亡机制 ,诱导肿瘤细胞凋亡 ;海嘧啶升高肿瘤细胞内的作用是通过开放肿瘤细胞膜钙通道、引起肿瘤细胞内钙库释放、降低肿瘤细胞钙泵活性 3条途径达到的。     

芦荟大黄素对大鼠巨噬细胞[Ca2+]i和释放TNF-α的影响

目的研究芦荟大黄素对正常的和细菌脂多糖(LPS)刺激的大鼠腹腔巨噬细胞(PMφ)释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和细胞内自由Ca2 浓度([Ca2 ]i)的影响。方法应用MTT法检测TNF-α量和细胞钙离子成像系统检测单细胞内[Ca2 ]i的动态变化。结果芦荟大黄素可剂量依赖性活化正常PMφ释放TNF-α,同时诱发正常PMφ[Ca2 ]i呈波动式变化,[Ca2 ]i升高来源于胞外钙内流和胞内钙池释放钙。芦荟大黄素对LPS刺激PMφ升高[Ca2 ]i和释放TNF-α的影响有较复杂的剂量依赖性特征,即芦荟大黄素低浓度时对[Ca2 ]i升高有明确的抑制作用;其对TNF-α释放的抑制呈随浓度增高而减弱的趋势。大黄酸可增强芦荟大黄素对LPS升高[Ca2 ]i的抑制作用。结论芦荟大黄素对PMφ[Ca2 ]i和释放TNF-α表现出双向调节作用,其对[Ca2 ]i动力学的调制与其调节PMφ释放TNF-α间有明确的对应性。     

氨氯地平对高血压患者心肾功能的影响及其与细胞内胞浆游离钙的关系

目的 :探讨氨氯地平对原发性高血压 (EH)患者心肾功能的影响及其与细胞内胞浆游离钙 ([Ca2 + ]i,)的关系。方法 :选择EH患者 90例 ,予氨氯地平治疗 6个月 ,治疗前后检测淋巴细胞内 [Ca2 + ]i 进行 2 4h动态血压监测 ,检测左室重量指数 (LVMI) ,左室舒张功能和肾功能指标。结果 :经氯沙坦治疗后 ,[Ca2 + ]i,日间、夜间和 2 4h收缩压和舒张压 ,LVMI和 2 4h尿蛋白均显著下降 (P <0 .0 1) ,左室舒张功能显著改善 (P <0 .0 5 )。 [Ca2 + ]i,的下降幅度与LVMI的下降幅度呈正相关 (r =0 .6 5 2 2 ,P <0 .0 5 ) ,[Ca2 + ]i 的下降幅与E/A比值的上升幅度呈负相关 (r=- 0 .5 2 3,P <0 .0 5 )。结论 :氨氯地平通过纠正细胞内钙代谢紊乱而平稳降压、逆转左室重构和阻断钙在肾功能损害中的媒介作用 ,达到保护心肾功能的目的。     

高浓度葡萄糖和高浓度胰岛素对体外培养视网膜Müller细胞胞内[Ca2+]i的影响

目的 探讨高浓度葡萄糖、高浓度胰岛素对体外培养的视网膜Müller细胞胞内[Ca2+]i的影响.方法 采用荧光探针技术,应用激光共聚焦显微镜动态、定量测定细胞外高钙、钙拮抗剂条件下,正常、高浓度葡萄糖、高浓度胰岛素、高浓度葡萄糖+高浓度胰岛素培养的视网膜Müller细胞胞内[Ca2+]i的变化.结果 高浓度葡萄糖、高浓度胰岛素、高浓度葡萄糖+高浓度胰岛素培养的视网膜Müller细胞胞内[Ca2+]i明显升高,在细胞外高钙条件下各组[Ca2+]i均降低,在细胞外钙拮抗剂条件下各组[Ca2+]i均再次下降.结论 高浓度葡萄糖和高浓度胰岛素均能使视网膜Müller细胞胞内[Ca2+]i明显升高,而钙拮抗剂通过干扰细胞外钙离子进入细胞来降低[Ca2+]i.     

大电导钾通道对脊髓神经元细胞内游离钙和兴奋性的影响

目的 探讨大电导钾通道(large conductance calcium-activited potassium channel,BK)对脊髓神经元细胞内游离钙 (intracellular free calcium, [Ca2 ]i) 和兴奋性的调节作用.方法 体外培养大鼠脊髓神经元细胞,应用膜片钳技术,观察生理状态下和持续电流去极化条件下BK通道特异性阻断剂Iberiotoxin对神经元[Ca2 ]i和动作电位频率的影响,并采用显微荧光测钙法观察Iberiotoxin对高钾条件下[Ca2 ]i的影响.结果 生理状态下,Iberiotoxin灌流(100 nmol/L)对神经元细胞自发动作电位的频率、[Ca2 ]i无显著影响.持续电刺激去极化后,Iberiotoxin灌流使动作电位频率增加,[Ca2 ]i显著升高.高钾溶液(20 mmol/L KCl)引起神经元[Ca2 ]i升高, 而Iberiotoxin灌流(100 nmol/L) 则使[Ca2 ]i进一步显著升高.结论 生理条件下,BK通道不参与脊髓神经元[Ca2 ]i和兴奋性的调节;但在受持续去极化刺激或在高钾条件下,BK对神经元[Ca2 ]i和兴奋性具有显著的调节作用.     

细胞内钙离子参与代谢综合征X发病机制的研究进展

代谢综合征，又称代谢综合征-X或胰岛素抵抗综合征，是指胰岛素抵抗、糖耐量降低或糖尿病、高血压、冠心病、肥胖等多种代谢性疾病体内共存的现象。由于有研究发现，细胞内钙离子浓度([Ca^2 ]i)升高不仅可易化胰腺β细胞刺激-分泌耦联机制导致高胰岛素血症发生、促进脂肪组织或骨骼肌产生胰岛素抵抗，而且还能促进血管收缩，在高血压、动脉粥样硬化、肥胖等发病机制中也具重要作用，最终可造成多     

胆必清对内毒素诱导的大鼠腹腔巨噬细胞内游离钙浓度的影响

目的：探讨中药胆必清对内毒素诱导的大鼠腹腔巨噬细胞游离钙浓度的影响。方法：制备大鼠腹腔巨噬细胞并在体外进行孵育,使用荧光探针用荧光法测定钙浓度。巨噬细胞随机分为正常对照组,内毒素LPS组,小、中和大剂量中药组。结果：LPS能诱导巨噬细胞[Ca2^ ]i的升高。加入胆必清后,[Ca2^ ]i可有不同程度的降低。结论：胆必清能抑制LPS诱导的大鼠腹腔巨噬细胞内的[Ca2^ ]i升高,提示该药具有抗炎和免疫调节作用。     

三氧化二砷对海马神经元细胞内钙离子浓度的影响

目的 研究三氧化二砷(As2O3)对海马神经元细胞内钙离子([Ca2 ]i)浓度的影响与其神经毒性的可能机制.方法 用激光共聚焦显微镜结合Fluo-3-AM观察As2O3对大鼠原代培养的海马神经元[Ca2 ]i的影响.结果 有钙液中10 μmol/L、100 μmol/L As2O3升高海马神经元[Ca2 ]i与对照组相比[Ca2 ]i分别提高了0.24±0.09和0.41±0.08.20 μmol/L的维拉帕米不能阻断10 μmol/L As2O3升高[Ca2 ]i作用.无钙液中10 μmol/L、100 μmol/Ls2O3升高海马神经元[Ca2 ]i与对照组相比[Ca2 ]i分别提高了0.12±0.06和0.30±0.07.100 μmol/L 2-APB阻断了10 μmol/L As2O3升高[Ca2 ]i作用.结论 As2O3可以升高海马神经元[Ca2 ]i,IP3信号转导途径可能参与As2O3升高海马神经元[Ca2 ]i.     

舒缩血管物质对肺动脉平滑肌细胞膜电位、胞浆及线体Ca2+的作用效应

目的:观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和一氧化氮(NO)对肺动脉平滑肌细胞膜电位、胞浆钙离子浓度([Ca2+]i)和线粒体钙离子浓度([Ca2+] mit)的影响.方法:肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterysmooth muscle cells,PASMCs)分别负载相应的荧光探针:胞浆钙荧光指示剂(Fluo - 4/AM)、细胞膜荧光指示剂(Di -8 - ANEPPS)、细胞线粒体钙荧光指示剂(Rhod -5F),然后给予一定浓度的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和一氧化氮(NO),在激光共聚焦扫描显微镜下,测定[Ca2+]i荧光、细胞膜电位、[Ca2+] mit荧光.结果:AngⅡ基本不影响细胞膜电位,但可一过性引起[Ca2+]i升高,这种[Ca2+]i的升高可导致[Ca2+]mit小幅升高,进而启动线粒体钙离子的释放和[Ca2+] mit的大幅度降低;NO可迅速减弱PASMCs膜电位荧光强度,使细胞处于明显的超极化状态,同时,[Ca2+]i迅速下降,300s时达到最低,并维持在这一水平,[Ca2+]mit也迅速降低,形成低谷平台后迅速回升,并基本稳定于、稍低于初始值的水平.结论:AngⅡ收缩血管可能与线粒体钙释放和[Ca2+] mit的大幅降低有关;NO舒张血管可能与细胞超极化、[Ca2+]i、[Ca2+] mit降低有关.     

K物质对大鼠心肌细胞收缩的影响及其信号传导通路的探讨

目的　研究K物质引起大鼠心肌细胞收缩的信号传导通路。方法　应用钙离子荧光指示剂Fluo 3AM负载原代培养的大鼠心肌细胞 ,通过流式细胞仪检测心肌细胞内游离钙离子浓度 ( [Ca2 + ]i)变化 ;分别应用磷脂酶C抑制剂 新霉素 ,三磷酸肌醇受体拮抗剂 肝素阻断肌醇磷脂 钙信号系统 ,观察二者对K物质诱导的 [Ca2 + ]i变化的影响。结果　SK( 1.78× 10 -5mol/L)能升高 [Ca2 + ]i,新霉素、肝素均可阻断SK诱导的 [Ca2 + ]i升高的效应。结论　SK可升高心肌细胞[Ca2 + ]i,其作用与肌醇磷脂 钙信号系统有关     

芦荟大黄素对T淋巴细胞增殖和细胞[Ca2+]i变化的影响

目的研究芦荟大黄素对植物血凝素(PHA)引起的大鼠T淋巴细胞增殖和细胞内Ca2 浓度([Ca2 ]i)变化的影响,探讨芦荟大黄素对T淋巴细胞增殖的作用和机制。方法采用MTT法检测细胞增殖,用单细胞钙成像系统记录细胞胞浆[Ca2 ]i。结果芦荟大黄素对PHA引起的细胞增殖有显著抑制作用,且其抑制作用与剂量有关;加入PHA引起细胞[Ca2 ]i迅速升高,并持续维持高[Ca2 ]i水平,芦荟大黄素对PHA引起的[Ca2 ]i升高有显著抑制作用,其作用途径包括阻断胞内Ca2 释放和抑制胞外Ca2 内流。结论芦荟大黄素可抑制T淋巴细胞增殖,其作用机制可能与抑制淋巴细胞内[Ca2 ]i升高相关。     

胞内Ca2+、Na+和ATP的稳定性介导NMDA诱导兴奋保护作用

目的:研究N甲基D天冬氨酸(NMDA)诱导大鼠小脑颗粒神经元兴奋毒性保护作用的机制。方法:分别用Ca2 和Na 敏感的染料Fura2/AM和SBFI/AM测定胞内Ca2 和Na 浓度[(Ca2 )i,(Na )i]。并用反向高效液相色谱法测定胞内三磷酸腺苷(ATP)的含量。结果:①在NMDA预处理组与非处理组,谷氨酸均迅速触发胞内Ca2 反应高峰,两者无显著性差异。而后在NMDA处理组,胞内Ca2 迅速下降,并维持在高于静息Ca2 水平的平台状,撤离谷氨酸后,[Ca2 ]i迅速下降并恢复至静息水平;而NMDA非处理组则相反。②谷氨酸均诱发上述两组神经元[Na ]i升高,在NMDA非处理组,[Na ]i均高于NMDA预处理组。③谷氨酸消耗胞内ATP,而NMDA预处理组则减少胞内ATP的耗竭。结论:NMDA诱导兴奋毒性保护作用是通过减少ATP的消耗而增强胞内Ca2 和Na 的自稳态。     

促肾上腺皮质激素释放激素对下丘脑神经元CREB的调控

目的:研究促肾上腺皮质激素释放激素(Corticotropin-releasing hormone,CRH)对下丘脑神经元内CREB(CAMP-responsive element-binding protein)含量变化的调节作用.方法:取孕17d胎鼠下丘脑分散培养下丘脑神经元,采用PTI(Photon technology international,PTI)荧光成像系统测量下丘脑神经元胞浆内游离钙浓度([Ca2 ]i)变化;测量和分析外源性CRH对培养下丘脑神经元内钙信号变化的影响,用Western blot方法测定神经元内P-CREB的含量变化,分别与用细胞膜L-型钙通道拈抗剂尼莫地平或CRHl受体(CRH1R)特异性拈抗剂CP-154526处理下丘脑神经元后[Ca2 ]i和P-CREB的变化作比较.结果:正常对照组的下丘脑神经元[Ca2 ]i含量较低,外源性CRH刺激后,[Ca2 ]i立即升高;预先应用尼莫地平或CP-154526处理再用CRH刺激的神经元[Ca2 ]i含量的增加明显被抑制,同时也可明显抑制神经元内P-CREB含量的增加.结论:在急性应激反应中,CRH可直接与下丘脑神经元CRH1R结合,开放膜L-型钙离子通道促使钙离子内流使[Ca2 ]i明显增加,从而进一步激活神经元内P-CREB信号通路.说明在调节下丘脑神经元激活过程中CRH可能起了重要的作用.     

异紫堇啡碱抑制血管平滑肌由受体中介的细胞内游离钙的增高

目的　观察扩血管药异紫堇啡碱 (ISOC)对去甲肾上腺素 (NA)和高钾所致血管平滑肌细胞内游离钙浓度 ([Ca2 ]i)增高的影响 ,分析该药扩血管作用的原理。方法　利用钙荧光指示剂Fura 2 /AM负载的家兔血管平滑肌培养细胞 ,动态地观察在ISOC存在下 ,由NA和高钾所增加的 [Ca2 ]i的改变 ,分析ISOC对NA和高钾所致钙内流和 /或钙释放的影响。结果　ISOC对血管平滑肌静息 [Ca2 ]i无影响 ,该药在 10 -5和 5× 10 -5mol/L时对高钾所致 [Ca2 ]i的增高也无明显抑制 ,但能明显抑制NA所致细胞 [Ca2 ]i的增高。结论　ISOC抑制由受体中介的血管平滑肌 [Ca2 ]i的增高。     

低渗作用对人成骨样细胞MG63功能的影响

目的 本试验通过研究低渗透压的静牵张作用对成骨样细胞MG63的增殖能力、碱性磷酸酶活性以及[Ca2 ]i的影响,探讨该应力形式下成骨样细胞MG63的力学响应特征.方法 用不同渗透压的低渗透液,对成骨样细胞MG63分别进行2 h、4 h、8 h、12 h、24 h和48 h持续牵张作用后,用MTT法检测细胞增殖情况,用ALP试剂盒检测ALP活性的变化,用钙试剂盒检测[Ca2 ]i含量波动情况.结果 随着作用时间的延长,成骨样细胞MG63在277 mmol/L和240 mmol/L低渗透液的持续性膨胀作用下,其细胞增殖能力增强,[Ca2 ]i、ALP活性缓慢增高;而细胞在163 mmol/L低渗液作用下,细胞增殖受到抑制,8 h时出现[Ca2 ]i急剧升高,ALP活性明显高于其对照组.结论 低渗膨胀对MG63的增殖分化、ALP活性以及Ca2 -ATPase都有一定的影响作用,且Ca2 内流与ALP活性之间存在一定的相关性.     

血管紧张素Ⅱ引起血管平滑肌细胞内Ca2+浓度变化机制的研究

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)调节血管平滑肌细胞(VSMC)内游离钙离子浓度([Ca2 ]i)的作用机制。方法应用改进的组织块贴壁法分离培养大鼠主动脉VSMC。采用Fluo-3/AM负载,应用confocal显微镜观察VSMC内[Ca2 ]i的变化。实验分为对照组和三磷酸肌醇受体系统(IP3Rs)阻断剂2-APB组。结果胞外无钙的情况下AngⅡ可引起一个快速、明显的[Ca2 ]i升高,而2-APB组[Ca2 ]i仅轻度升高,与对照组比较有显著差异(P<0.05)。结论AngⅡ与其受体AT1结合,激活IP3RS系统促进细胞内储备钙释放,调节VSMC内[Ca2 ]i变化。     

PDGF-BB对肾小球系膜细胞[Ca~(2 )]_i和细胞增殖的影响

目的研究肾小球系膜细胞 [Ca2 ]i的变化与系膜细胞增殖之间的关系。　方法以体外培养的系膜细胞为研究对象 ,激光共聚焦显微术结合Fura- 3染色法 ,动态测定细胞 [Ca2 ]i,MTT法测定细胞增殖。　结果血小板衍生生长因子 (PDGF) -BB可浓度依赖性地引起肾小球系膜细胞 [Ca2 ]i 的升高 ,并促进细胞增殖。钙通道阻滞剂和血管紧张素转换酶抑制剂均可同时抑制PDGF -BB引起的细胞钙浓度升高和细胞增殖。中药成分雷公藤多甙在显著抑制系膜细胞增殖的同时 ,对细胞游离钙却无影响。　结论肾小球系膜细胞 [Ca2 ]i 的升高和细胞增殖之间存在着正性关联 ,但 [Ca2 ]i 的升高并非细胞增殖的唯一途径