肉鸡源弯曲菌的分离、多重PCR鉴定及其耐药性分析

目的了解肉鸡屠宰加工过程中弯曲菌的污染及其耐药情况。方法根据GB4789．9-2008,采用增菌培养、选择性平板分离、生化鉴定从肉鸡屠宰过程中分离疑似弯曲菌,并以弯曲菌属的16s球NA、空肠弯曲菌的Hip0和结肠弯曲菌的CeuE为靶基因,采用三重PCR方法对疑似菌株进行鉴定。采用琼脂稀释法对弯曲菌阳性菌株进行8种常用抗生素的药敏试验,参考CLSI标准（2010）判定药敏结果。结果根据形态特征、生化指标及PCR鉴定结果,从651份样品中,鉴定出空肠弯曲菌160株、结肠弯曲菌130株,其他弯曲菌11株,弯曲菌总分离率为46．24％;其中屠宰前、屠宰过程中及屠宰后鸡肉中弯曲菌的污染率分别为56．10％、31．00％、17．00％,可能存在由屠宰前向屠宰后传播趋势。药敏试验表明,弯曲菌对环丙沙星、左氧氟沙星、四环素和林可霉素的耐药率较高,分别为93．02％、87．71％、87．71％、80．07％,对庆大霉素、红霉素、链霉素、氟苯尼考的耐药率分别为67．11％、49．50％、31．89％、13．29％。结论肉鸡屠宰过程中弯曲菌的污染及其耐药情况较为严重,应该加强卫生和抗生素使用监督。     

成都地区肉鸭屠宰链弯曲菌毒力基因分布及分子分型研究

目的 了解并分析肉鸭屠宰环节中弯曲菌分离株的9种毒力基因分布及分子分型特征。方法 利用特异性引物对弯曲菌9种与致病力相关的毒力基因进行PCR检测;参照美国PulseNet 脉冲场凝胶电泳(PFGE)标准方法,对68株鸭源弯曲菌分离株进行PFGE分型。结果 毒力基因PCR检测结果显示空肠弯曲菌中cadF、iamA和cheY毒力基因携带率均为100%,flaA(97.1%)、cdtB(94.3%)、cdtC(94.3%)和ciaB(80%)毒力基因的携带率也较高,其余毒力基因cdtA(25.7%),virB11(2.9%)较低;结肠弯曲菌中除cadF(100%)毒力基因外,高于50%携带率的毒力基因有cheY(84.8%)、cdtB(72.7%)、iamA(66.7%)和cdtA(54.5%),另外4个毒力基因flaA(48.5%)、virB11(18.2%)、cdtC(36.4%)和ciaB(18.2%)携带率均较低。利用PFGE方法对弯曲菌分离株进行分子分型,结果显示35株空肠弯曲菌和33株结肠弯曲菌可分为15个和11个谱型,表现为较低的遗传多样性。结论 弯曲菌毒力基因分布广泛,且空肠弯曲菌携带率较高;PFGE基因谱型相似性表明该肉鸭屠宰场存在交叉感染和弯曲菌沿屠宰链传播的现象。     

成都地区鸭源沙门氏菌的分离鉴定及其耐药特征、毒力基因分析

目的 了解肉鸭屠宰生产链中沙门氏菌的污染、耐药状况以及毒力基因携带情况。方法 参照GB 4789.4-2010,从肉鸭屠宰链中分离疑似沙门氏菌,采用双重PCR对疑似菌株进行准确鉴定,并进行血清分型;采用纸片扩散法对分离株进行10种抗菌药物敏感性试验,根据CLSI标准判定结果;通过PCR检测与沙门氏菌致病性相关的9个基因。结果 343份样品共分离鉴定出99株沙门氏菌,总体分离率为28.86%,宰前、脱毛、掏膛、分割、宰后样品沙门氏菌分离率分别为45.71%、22.68%、24.72%、38.33%、25.81%;分离株共产生了7种血清型,以印第安纳、纽兰和鸭沙门氏菌为优势血清型;药敏试验结果表明,沙门氏菌对NAL(91.92%)的耐药率最高,对TET(43.43%)、AMP(42.42%)、SXT(34.34%)、CIP(29.29%)、CRO(27.27%)、GEN(24.24%)、KAN(22.22%)的耐药率相对较低,对AMC(9.09%)和MH(6.06%)的耐药率最低,多重耐药率为47.47%,其中印第安纳、伤寒和鼠伤寒沙门氏菌的耐药性较突出;沙门氏菌分离株spvR(94.95%)、avrA(93.94%)、ssaQ(90.91%)、mgtC(87.88%)、sopB(83.84%)、bcfC(80.81%)、siiD(77.78%)毒力基因的携带率较高,spvB(29.29%)和spvC(11.11%)的携带率较低。结论 肉鸭屠宰生产链容易受到不同血清型、不同耐药特征,且毒力基因携带率高的沙门氏菌污染,相关企业和部门应当在卫生和抗菌药物的使用上加强监督和管理,保障食品安全和公众健康。     

肉鸡屠宰加工生产链中弯曲菌污染状况及耐药性分析

目的 了解江苏某肉鸡屠宰加工厂不同环节弯曲菌的污染状况及耐药现状。方法 采集屠宰前肉鸡泄殖腔、不同环节鸡酮体以及环境等样品,运用无血弯曲杆菌选择性培养基(modified charcoal-cefoperazone-deoxycholate agar,CCDA)平板法进行分离纯化,PCR鉴定后,采用K-B法测定6大类14种抗生素耐药情况。PCR检测弯曲菌Ⅰ型整合子、四环素耐药基因tet(O)、氨基糖苷类耐药基因簇aadE-sat4-aphA-3以及弯曲菌gyrA基因第257位碱基的突变情况。结果 细菌分离结果显示170份样品分离到124株弯曲菌(72.95%)。分离株对链霉素、妥布霉素、卡那霉素、环丙沙星、氧氟沙星、萘啶酸、红霉素和四环素耐药率为100%,多重耐药现象普遍,多重耐药率高达100%,其优势耐药谱主要为CTX-CRO-cDA-K-NOR-S-AZM-CIP-TE-NA-E-LEV-ENR-TOB。分离株经PCR扩增未检测到Ⅰ型整合子,所有菌株在gyrA喹诺酮类耐药决定区发生了C-257-T点突变,tet(O)基因和aadE-sat4-aphA-3检出率分别为100%和90.23%。结论 江苏某肉鸡屠宰加工生产链中弯曲菌污染及耐药情况比较严重,gyrA基因突变、tet(O)基因及aadE-sat4-aphA-3耐药基因簇的携带,与弯曲菌对喹诺酮类、四环素类和氨基糖苷类耐药密切相关。     

猪源弯曲菌的分离鉴定及耐药性分析

目的 为调查猪肠道内空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的流行和耐药性状况。方法 本试验自北京郊区养猪场和屠宰场采集猪肠道粪便样品,经增菌培养后利用三重PCR进行弯曲菌属、空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的检测,进而对PCR检测阳性样品进行弯曲菌的分离鉴定,最后对分离鉴定的弯曲菌分离株进行药敏试验鉴定。结果 本试验共采集猪肠道和肛门棉拭子样品241份,PCR检测结肠弯曲菌阳性样品数为178份,阳性率为73.9%,而空肠弯曲菌阳性样品数5份,阳性率仅为2.1%。经分离鉴定后共获得结肠弯曲菌菌株63株,分离率为35.4%,未分离获得空肠弯曲菌菌株。对26种抗生素的药敏试验结果显示结肠弯曲菌分离株对氯霉素(100%)、丁胺卡那(93.65%)、强力霉素(91.48%)、庆大霉素(82.54%)和阿莫西林(82.54%)等抗生素比较敏感,而对头孢哌酮(100%)、 头孢氨苄(100%)、头孢拉啶(100%)、头孢唑啉(98.41%)、头孢克肟(92.06%)、萘啶酸(92.06%)、链霉素(90.48%)、环丙沙星(90.32%)、诺氟沙星(88.89%)和青霉素(87.30%)具有显著的耐药性;而且分离株多重耐药现象比较普遍,主要集中于14-20耐。结论 本试验结果显示猪肠道内普遍存在结肠弯曲菌,而且菌株对多种抗生素产生了显著的耐药性。     

苏州市空肠弯曲菌耐药与分子特征分析

目的 了解苏州市空肠弯曲菌的耐药情况和分子特征。方法 对2018年-2022年苏州市分离的空肠弯曲菌进行全基因组测序分析了解毒力基因、耐药基因、多位点序列分型(Multi-locus sequence typing, MLST)等分子特征,通过琼脂稀释法了解其耐药表型。结果 61株空肠弯曲菌被分为42个ST型别,以ST464占比最高(9.8%),包含12个CC群,以CC21占比最高(19.7%)。61株菌共检出18种耐药基因,97种毒力基因。药敏试验耐药率排前3位的抗生素分别是萘啶酸,四环素和环丙沙星,耐药率分别为90.2%,88.5%和73.8%,对红霉素100.0%敏感,多重耐药率达到41.0%。结论 苏州市空肠弯曲菌多重耐药率高,携带耐药基因和毒力基因较多,克隆群以CC21为主,但ST型别较为分散,呈现较高的遗传多样性。     

贵州省鸡源弯曲菌的流行现状及抗生素敏感谱研究

目的 了解贵州省鸡源弯曲菌的流行现状和耐药特征,为兽医和人医临床上抗生素的合理使用提供参考。方法 随机从贵州省东、西、南、北、中5个片区中的养殖场和农贸市场采集359份新鲜粪便样本进行分离培养、生化及MALDI-TOF MS鉴定。采用琼脂稀释法检测分离株对7类11种不同抗生素的耐药性,通过PCR方法检测耐药基因的携带情况。结果 弯曲菌总体检出率为43.5%,包括68株(43.6%)空肠弯曲菌和88株(56.4%)结肠弯曲菌;对其中84株弯曲菌进行药敏实验和耐药基因检测,结果显示分离株对11种抗菌药物产生了38种耐药谱,空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的优势谱型都为NAL-CIP-TET;81.0%的弯曲菌呈多重耐药,其中结肠弯曲菌的多重耐药率(91.7%)高于空肠弯曲菌(54.2%);红霉素、阿奇霉素、泰利霉素、克林霉素、庆大霉素和链霉素耐药株的耐药表型与耐药基因携带相关;交叉耐药显示,红霉素与阿奇霉素呈高度相关(|r|=0.79>0.7),庆大霉素与链霉素呈中度相关(|r|=0.46>0.4),萘啶酸与环丙沙星(|r|=0.36<0.4)、氯霉素与氟苯尼考呈弱相关(|r|=0.04<0.4)。结论 贵州省鸡源弯曲菌存在区域性流行特征和耐药差异,多重耐药现象严重,存在通过食物链传播给人的风险。     

肉鸡源多重耐药空肠、结肠弯曲菌的耐药分子特征

目的了解肉鸡源空肠和结肠弯曲菌的耐药谱特征,检测多重耐药菌株Ⅰ类整合子/基因盒、gyrA基因突变位点、tetO基因、23S rRNA突变位点的分子特征。方法利用PCR检测弯曲菌Ⅰ类整合子/基因盒的存在情况;利用MAMA PCR技术检测弯曲菌gyrA基因第257位碱基的突变情况;针对弯曲菌23S rRNA的V区2075突变位点检测突变菌株。结果多重耐药菌株占分离株的94.5%。146株多重耐药空肠和结肠弯曲菌中Ⅰ类整合子检出率为98.6%,有78株菌株检出3种基因盒,1 000 bp+750 bp+500 bp+250 bp为主要谱型,所占比例为92.3%;有131株在gyrA喹诺酮类耐药决定区发生突变,突变率为92.9%。127株四环素耐药弯曲菌tetO基因的检出率为95.3%。81株红霉素耐药菌株中,23S rRNA的V区2075处突变发生率为96.3%。结论空肠和结肠弯曲菌分离株携带aadA2耐药基因盒,与氨基糖苷类药物的耐药性相关;gyrA基因突变、tetO基因的携带以及23S rRNA突变,与弯曲菌对喹诺酮、四环素和大环内酯类耐药密切相关。     

全基因组测序分析北京地区人源结肠弯曲菌基因组特征和耐药性

目的 了解北京地区人源结肠弯曲菌的耐药特征、毒力特征及多位点序列分型等遗传进化关系。方法 对2019-2021年北京市肠道门诊腹泻病例中分离到的36株结肠弯曲菌,采用琼脂稀释法进行抗生素敏感性检测;基于全基因组测序结果分析其耐药基因、毒力基因、多位点序列分型及全基因组单核苷酸多态性(whole genome single nucleotide polymorphisms, wgSNPs)遗传进化分析。结果 36株结肠弯曲菌对萘啶酸和四环素的耐药率为100.0%,对环丙沙星的耐药率为97.2%,对红霉素和阿奇霉素的耐药率为38.9%;36株菌均为多重耐药株,有10种耐药模式。基于全基因组测序结果,36株结肠弯曲菌分为21种ST型,优势克隆群为CC828;携带大环内脂类、喹诺酮类、氨基糖苷类、酰胺醇类、四环素类等多种类型耐药基因;携带6类38种毒力基因。wgSNPs遗传进化分析显示克隆群CC1150与优势克隆群CC828相距较远,处于独立的分枝,CC828克隆群内菌株聚集成3簇,呈现多样性分布。结论 北京市人源结肠弯曲菌分离株耐药严重,多重耐药谱广泛;耐药基因与耐药表型有一定的关联;克隆复...     

深圳市408份不同来源样本弯曲菌的检测及耐药特征分析

目的 分析深圳市不同来源样本弯曲菌的流行和抗生素敏感特征,与往年菌株的耐药特征进行比对,获得深圳地区弯曲菌的流行现状及耐药变化。方法 采用增强过滤法分离弯曲菌并应用琼脂稀释法进行抗生素敏感性分析。结果 408份不同来源样本中,鸡盲肠的弯曲菌阳性率最高,达72.0%(36/50),鸡肉的分离率次之,为49.3%(34/69)。腹泻病人弯曲菌分离率为10.7%(17/159)。牛肉、猪肉中弯曲菌分离率低,海鲜中分离到1株空肠弯曲菌,生菜未分离到弯曲菌。53株腹泻病人来源和鸡源空肠弯曲菌耐药率最高的是萘啶酸(94.3%)和环丙沙星(94.3%),其次是四环素(92.4%)、氟苯尼考(75.5%)。32株腹泻病人来源和鸡源结肠弯曲菌耐药率最高为萘啶酸、环丙沙星、四环素(100%)。73.6%(39/53)的空肠弯曲菌和100%(32/32)的结肠弯曲菌存在多重耐药性。与往年相比,鸡源空肠弯曲菌对大环内酯类抗生素的耐药增强,腹泻病人来源空肠弯曲菌对萘啶酸-环丙沙星-四环素-氟苯尼考多重耐药性增强。结论本地区首次在腹泻患者中分离到简明弯曲菌,其病原特征有待于进一步分析。深圳地区腹泻病人来源及鸡源空肠弯曲菌有耐药增强现象,应引起重视。     

鸡肉生产链空肠弯曲杆菌的耐药性研究

目的 了解鸡肉生产链(养殖场-屠宰场-市场)中空肠弯曲杆菌分离株的耐药情况。方法 针对成都市及雅安市养鸡场、屠宰场和市场中分离的180株空肠弯曲杆菌,采用微量肉汤稀释法,检测鸡肉生产链中空肠弯曲杆菌对8种抗菌药物的耐药情况;采用错配扩增突变分析PCR(MAMA PCR)技术,检测137株耐环丙沙星的空肠弯曲杆菌的gyrA基因第257位突变情况,对gyrA基因突变进行分析。结果 药敏试验表明,空肠弯曲杆菌分离株对环丙沙星、左氟沙星、四环素和克林霉素的耐药率较高,分别为94.44%、93.89%、91.67%和78.33%;对红霉素(20.00%)、链霉素(20.56%)、庆大霉素(17.78%)、氟苯尼考(12.22%)呈现不同的耐药率。从养殖场到市场,鸡肉生产链中空肠弯曲杆菌对上述8种抗菌药物的耐药率呈持平或上升趋势。MAMA PCR 结果表明,95.62%(131/137)的环丙沙星耐药空肠弯曲杆菌在gyrA基因第257位发生点突变,10株环丙沙星敏感菌株均没有检测出gyrA基因的突变;gyrA基因耐药决定区的测序结果表明,环丙沙星耐药菌株MJF31和MJF53都在第257位碱基发生了ACA→ATA(苏氨酸到异亮氨酸)的突变,而对环丙沙星敏感的菌株JF9和JF136均未发生该类突变。结论 鸡肉生产链中空肠弯曲杆菌耐药性比较普遍,对喹诺酮类药物耐药率较高,多重耐药菌株较突出,应加强对养殖场和食品源空肠弯曲杆菌耐药性的监测。     

一起由空肠弯曲菌所致食源性疾病暴发事件的流行病学及病原学溯源分析

目的 对一起空肠弯曲菌所致的食源性疾病暴发事件进行流行病学及溯源分析。方法 对突发事件进行现场流行病学调查,采集粪便样本、环境涂抹样本、食品样本等进行快速PCR检测和病原菌分离。对分离菌株进行PFGE分子分型和全基因组测序分析,并进行药敏试验。结果 从7份病例样本和2份环境涂抹样本中分离出空肠弯曲菌。PFGE分析和cgMLST聚类结果表明其中3份病例样本和环境涂抹样本(蒸柜容器把手涂抹)分离的菌株克隆聚集成簇,ST型别为ST11105;另2份病例样本和环境涂抹样本(刀具砧板涂抹)分离的菌株属同一克隆株,ST型别为ST2031。还有2份病例样本分离的菌株ST型为ST11106和ST7533。药敏结果表明,分离株对四环素类和喹诺酮类耐药率较高,分别为77.8%、55.6%。基因组测序结果发现最多的耐药基因为bla_OXA-193,gyrA、tet(O),其中gyrA基因86位点发生T-I突变。分离株共获得168个毒力基因,涉及多种致病机理。结论 采用快速PCR法、PFGE分子分型技术、全基因组测序技术等可对突发事件进行快速、准确的溯源分析。     

扬州市区腹泻人群空肠弯曲菌和结肠弯曲菌流行状况及耐药性分析

目的了解扬州市区腹泻人群中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的感染流行和耐药性状况。方法采用多重PCR方法对扬州市区两所医院门诊部和住院部的腹泻人群进行空肠弯曲菌和结肠弯曲菌感染状况调查,采用琼脂扩散法测定分离株的耐药性。结果在2937份粪便样品中,142份空肠弯曲菌阳性、平均阳性率4.83%,10份结肠弯曲菌阳性、平均阳性率0.34%。不同医院间感染率差异不显著(P>0.05),门诊部感染率极显著高于住院部(P<0.01),7岁以下幼儿感染率极显著高于其它人群(P<0.01),6月-8月感染率显著高于其它月份(P<0.05)。93株空肠弯曲菌分离株对21种抗生素高度敏感的是:庆大霉素91.40%、阿齐红霉素89.25%、红霉素88.46%、阿莫西林87.10%、链霉素83.87%、头孢噻肟81.72%、卡那霉素81.72%,高度耐药的是:头孢哌酮100%、复方新诺明100%、头孢拉定97.85%、头孢克罗93.55%、环丙沙星91.40%、萘啶酸91.40%、左旋氧氟沙星88.17%、土霉素87.50%。耐药菌株耐药谱主要集中在9耐至14耐,达81.71%,两医院分离株多重耐药性无显著性差异(P>0.05),不同诊区分离菌多重耐药性存在显著性差异(P<0.05)。结论扬州市区腹泻人群空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的流行及耐药状况呈现多样化和复杂化,研究结果为正确评价腹泻人群弯曲菌的流行状况和制定切实可行的防控措施提供了科学依据。