不同来源肠炎沙门菌耐药特征及遗传多样性特点的研究

目的 分析福建地区腹泻病人和表观健康人群携带的肠炎沙门菌耐药特征及遗传多样性特点。方法 收集福建地区腹泻患者和表观健康人群携带的肠炎沙门菌，采用K-B法进行药敏实验，PCR扩增毒力基因，多位点融数目亭联重复序列分析(multiple-locus variable-number tandem repeat analysis, MLVA)技术进行分子分型，并应用BioNumerics软件进行聚类分析。结果 福建地区肠炎沙门菌除对CIP和NOR 100%敏感外，对其他8种药物(AMP、AMC-AC、CTX、CRO、CHL、NAL、SXT和TET)均有不同程度的耐药。腹泻患者分离株的多重耐药率(33.33%)高于表观健康人群分离株(15.22%)。10种毒力基因(sitC、hilA、sseL、sifA、mgtC、siiE、sopB、stn、spvB和pefA)均有检出，且其在腹泻患者和表观健康人群分离株中分布不同。毒力基因谱型54个(VP1～VP54),其中VP3只存在于表观健康人群分离株，且为其优势谱型，占比为13.04%;VP4和VP5只存在于腹泻患者分离株；VP4和VP3、VP1均为腹泻...     

安徽地区腹泻病人粪便标本中沙门菌分离及其血清型鉴定

目的 了解安徽地区近期临床分离沙门菌血清型、药物敏感性、毒力基因携带及血清型相同菌株的基因溯源情况。方法 应用血清凝集法检测沙门菌的血清型,微量肉汤稀释法检测药物敏感性,PCR法扩增毒力基因,PFGE法检测基因同源性并进行溯源。结果 43株沙门菌中鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌分别占(39.5%/29.6%)。43株菌对四环素、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑、萘啶酸和氯霉素的耐药率分别为(60.5%/39.5%/37.2%/30.2%),43株菌均携带InvA和InvE毒力基因,鼠伤寒沙门菌基因同源性较低,肠炎沙门菌基因同源性较高。结论 本次安徽地区临床分离的沙门菌以鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌为主,其他血清型散在分布。对常规抗生素呈较高的耐药性,分离菌株均携带毒力基因对人体具有致病性。本地区流行的鼠伤寒沙门菌大部分来源于不同的基因克隆株,亲缘关系较远。而流行的肠炎沙门菌大部分来源于同一克隆株或亲缘关系较近的克隆群体。     

龙岩市239株沙门菌毒力基因检测结果分析

目的 了解龙岩市沙门菌毒力基因携带与变迁情况,为沙门菌病的防制提供理论依据。方法 对1991-2017年间收集的分离自人体与食品样本的239株沙门菌进行复核鉴定,并用PCR方法检测invA、sopB、sifA、sscA、sseE、spvB、spvC、spvR、pefA等9个沙门菌毒力基因的片段。结果 龙岩市沙门菌以肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌为主,占62.3%(149/239),属于SPI1的invA、sopB毒力基因检出率为100%,属于SPI2的sseE、sscA、sifA毒力基因的检出率分别为99.2%、95.0%、85.4%,毒力质粒基因spvC检出率71.1%,pefA、spvB、spvR检出率均为46.4%。并且其携带数量也随着时间的进程而显著增加;肠炎沙门菌质粒毒力基因携带率显著高于鼠伤寒沙门菌。肠炎沙门菌以检出全部9种毒力基因为主,占83.5%(76/91);鼠伤寒沙门菌以invA、sopB、sseE、sscA、sifA阳性,spvB、spvR、pefA阴性结果多见,占77.6%(45/58)。人体与食品样本来源的沙门菌所携带毒力基因数量没有差异。结论 龙岩市沙门菌携带毒力基因数量较多,毒力较强,质粒毒力基因随着时间的进程而累积,人源性与食源性沙门菌交叉污染严重,必须加强人、禽、畜沙门菌病的监测与管理。     

福建地区健康人携带德尔卑沙门菌的耐药特征及遗传多样性分析

目的调查分析福建地区健康人携带德尔卑沙门菌的耐药特征及遗传多样性。方法分离自福建地区健康人的德尔卑沙门菌73株,采用K-B法进行药敏试验;采用PBRT法检测18个主要质粒家族的复制子;采用常规PCR方法扩增毒力基因;采用PFGE技术进行分子分型;应用BioNumerics软件进行聚类分析;应用SPSS 17.0进行统计学分析。结果福建地区德尔卑沙门菌健康人分离株对四环素表现出一定的耐药性(耐药率28.77%),其他药物敏感率均90%;2000年后分离的菌株总耐药率高于2000年前的分离株(χ~2=6.767,P0.01),且5株多重耐药菌株均为2000年后分离;分离株中检出IncI1型(13.70%)、IncHI2型(10.96%)和IncP型(4.11%)3种质粒复制子类型,未检出毒力基因spvB,其余毒力基因均有较高携带率;毒力基因谱型26个(VP1-VP26),其中相对优势谱型为VP1:HilA-sifA-mgtC-siiE-sopB-iroN-lpfA-stn;73个分离株共分为56个PFGE带型(PT001-PT056)、6个PFGE簇(cluster A-cluster F),其中cluster E为相对优势簇。结论福建地区健康人携带的德尔卑沙门菌耐药性逐年增强且具有致病潜能。     

伤寒沙门菌hns基因缺失株的构建及其对毒力基因表达的影响

目的 敲除伤寒沙门菌hns基因，分析其对伤寒沙门菌主要毒力基因转录的影响。方法 本研究利用自杀质粒法与RED重组法敲除伤寒沙门菌hns基因；RED重组法先构建phoPQ基因缺失株(ΔphoPQ),再敲除hns基因(ΔphoPQ-hns);提取ΔphoPQ与ΔphoPQ-hns的总RNA,实时定量RT-PCR检测毒力基因hilA、invF、ssrB、ssaB、catB、pltB的mRNA水平，分析HNS对以上毒力基因的调控作用。结果 自杀质粒法与RED重组法均无法直接敲除伤寒沙门菌hns基因；伤寒沙门菌缺失phoPQ基因后，可成功敲除hns基因；ΔphoPQ-hns中毒力基因hilA、invF、ssrB、ssaB、catB和pltB的mRNA水平明显高于ΔphoPQ(均P<0.01)。结论 hns为伤寒沙门菌的毒力负向调控基因，可抑制伤寒沙门菌多个毒力基因的表达。     

成都市人源沙门菌基因组特征分析

目的 基于全基因组测序技术,探究成都市人源沙门菌的基因组特征, 为监测与预防沙门菌感染提供资料。方法 收集35株成都市人源沙门菌(分离自腹泻患者粪便)进行全基因组测序。根据测序数据,进行血清型预测、耐药基因及可移动遗传元件预测、毒力因子注释及分布分析。结果 35株沙门菌分离株经全基因组测序,共预测到5种血清型,包括15株I 4,[5],12:i:-沙门菌(13株为ST34、2株为新ST型)、12株鼠伤寒沙门菌(ST19)、5株肠炎沙门菌(ST11)、2株德比沙门菌(ST40)与1株火鸡沙门菌(ST463)。35株沙门菌分离株共预测到10类42种不同的耐药基因,其中氨基糖苷类aac(6')-Iaa携带率为100%(35/35)。I 4,[5],12:i:-沙门菌的耐药基因、质粒及插入序列数目及种类多于其他血清型菌株。I 4,[5],12:i:-、鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌的毒力因子数目大于其他血清型菌株。部分鼠伤寒沙门菌有更高的毒力质粒、质粒编码菌毛和血清抗性毒力因子分布。结论 成都市人源沙门菌不同血清型菌株之间耐药基因、可移动遗传元件、毒力因子分布差异明显,值得在转录组、蛋白组进一步探究其耐药与毒力机制。     

伦敦沙门菌的流行与耐药性分析

目的 分离鉴定2016-2018年不同宿主来源的伦敦沙门菌,并对其进行药物敏感性分析。方法通过生化实验和肠毒素基因stn检测进行种属鉴定;参照考夫曼怀特表对沙门菌进行血清型分型;采用琼脂稀释法测定伦敦沙门菌对18种抗菌药物的敏感性。结果成功分离鉴定出135株伦敦沙门菌,分离自猪、人、犬和鸡来源的样品;100%伦敦沙门菌至少对一种抗菌药物表现耐药;伦敦沙门菌对四环素(95.6%)、链霉素(93.3%)和氨苄西林(87.4%)的耐药率较高,对氨曲南(8.9%)和头孢噻肟(11.1%)耐药率较低,对阿米卡星、多粘菌素、呋喃妥因和美罗培南敏感;多重耐药率达到95.6%,常见的多重耐药表型为AMP-CHL-FFC-FOS-GEN-OLA-STR-SXT-TET。结论伦敦沙门菌主要分离自猪全产业链各环节样品和体检人员样品,其耐药性和多重耐药性严重。     

耐万古霉素肠球菌临床菌株毒力基因携带情况及差异

目的检测不同种类耐万古霉素肠球菌(VRE)毒力基因携带情况及其差异,为研究VRE致病机制提供基础。方法采用微量稀释法检测浙江地区490株屎肠球菌和862株粪肠球菌临床分离菌株对万古霉素的耐药性。采用PCR检测VRE菌株ace、asa1、cylA、efaA、esp、gelE、hyl七种毒力基因。结果 10%(49/490)屎肠球菌株和0.8%(7/862)粪肠球菌株为VRE。万古霉素耐药屎肠球菌株中,5株未检出任何毒力基因,其余44株仅可检出asa1、esp、gelE和hyl基因,其中esp基因(73.5%,36/49)和hyl基因(53.1%,26/49)为优势基因,以单或双基因为主要携带模式。万古霉素耐药粪肠球菌株中可检出除hyl基因以外其他6种毒力基因,且每株菌均同时携带3~6种致病基因。结论本地区VRE以屎肠球菌为主,耐万古霉素屎肠球菌和粪肠球菌毒力基因携带率、携带种类和模式均有明显差异。     

北京市市售生禽肉及社区居民冰箱耶尔森菌污染状况及分子特征研究

目的 了解北京市市售生禽肉及社区居民冰箱中耶尔森菌污染状况、生物型、血清型、毒力基因携带情况、抗生素敏感性以及分子特征。方法 分批采集北京市区超市和农贸市场冷冻冷藏生禽肉60件和同期社区居民冰箱涂抹60件,进行耶尔森菌病原学检测。对分离菌株进行生物分型、血清凝集、PCR毒力基因检测、抗生素敏感性、PFGE分子分型等研究。结果 生禽肉和居民冰箱耶尔森菌检出率分别为21.67%(13/60)和6.67%(4/60)。17株耶尔森菌对氯霉素、环丙沙星等10种抗生素100%敏感,对头孢唑林、氨苄西林耐药率较高,分别为76.47%(13/17)、52.94%(9/17)。2株小肠结肠炎耶尔森菌对11种抗生素耐药。除2株中间耶尔森菌不能被NotI酶切外,其他15株耶尔森菌得到14种PFGE带型,相似度为0~100%。结论 耶尔森菌是北京市市售生禽肉及社区居民冰箱潜在污染源,对头孢唑林、氨苄西林耐药率较高,PFGE带型多态性分布。     

成都地区肉鸭屠宰链弯曲菌毒力基因分布及分子分型研究

目的 了解并分析肉鸭屠宰环节中弯曲菌分离株的9种毒力基因分布及分子分型特征。方法 利用特异性引物对弯曲菌9种与致病力相关的毒力基因进行PCR检测;参照美国PulseNet 脉冲场凝胶电泳(PFGE)标准方法,对68株鸭源弯曲菌分离株进行PFGE分型。结果 毒力基因PCR检测结果显示空肠弯曲菌中cadF、iamA和cheY毒力基因携带率均为100%,flaA(97.1%)、cdtB(94.3%)、cdtC(94.3%)和ciaB(80%)毒力基因的携带率也较高,其余毒力基因cdtA(25.7%),virB11(2.9%)较低;结肠弯曲菌中除cadF(100%)毒力基因外,高于50%携带率的毒力基因有cheY(84.8%)、cdtB(72.7%)、iamA(66.7%)和cdtA(54.5%),另外4个毒力基因flaA(48.5%)、virB11(18.2%)、cdtC(36.4%)和ciaB(18.2%)携带率均较低。利用PFGE方法对弯曲菌分离株进行分子分型,结果显示35株空肠弯曲菌和33株结肠弯曲菌可分为15个和11个谱型,表现为较低的遗传多样性。结论 弯曲菌毒力基因分布广泛,且空肠弯曲菌携带率较高;PFGE基因谱型相似性表明该肉鸭屠宰场存在交叉感染和弯曲菌沿屠宰链传播的现象。     

不同源沙门氏菌对小鼠致病力的比较与毒力基因检测

目的 探究不同来源沙门氏菌的致病力及毒力基因分布的差异性。方法 采用改良寇氏法对7株不同来源的沙门氏菌进行小鼠致病性试验、病理剖检和组织切片观察,应用PCR检测质粒毒力基因和部分毒力岛基因。结果 7株菌株的LD₅₀按表中编号⑥、④、⑤、②、①、③、⑦依次降低,菌株⑦、①、③引致的病理变化最为明显,4株猪源沙门氏菌的致病力均高于3株鸡源菌株。仅菌株⑦菌株检出spvR、spvA、spvB、spvC、spvD质粒毒力基因;毒力岛毒力基因sscA、sseD、sseE 7株菌株全部检出,而sseC基因仅有③、④、⑤和⑦检出。结论 不同来源的沙门氏菌对小鼠的致病力具有明显差异,不同沙门氏菌对小鼠的致病力表型与其毒力基因的分布存在相关性。     

不同肺炎链球菌株毒力基因携带与转录水平差异及其与血清型的关系

目的探讨不同血清型肺炎链球菌株的毒力基因携带与转录水平差异。方法收集宜宾市第二人民医院于2015年3月-2018年12月间从临床感染患者中分离的肺炎链球菌126株,采用多重PCR进行肺炎链球菌株血清分型,采用PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳法观察毒力基因类型,荧光定量PCR检测psaA、ply、lytA、cbpA、nanA毒力基因转录水平。结果126株肺炎链球菌中,血清19F型27株(21.43%),3型21株(16.7%),23F型16株(12.7%),6A/B型14株(11.1%),14型11株(8.7%),19A型7株(5.6%),15A型4株(3.2%);毒力基因lytA阳性115株(91.3%),ply阳性118株(93.7%),nanA阳性120株(95.2%),psaA阳性112株(88.9%),cbpA阳性114株(90.5%)。3型血清型的nanA、ply、psaA和cbpA基因转录水平较其他血清型水平更高(P均<0.05),不同血清型之间的lytA基因转录水平并无显著差异(P均>0.05)。结论lytA、ply、nanA、psaA、cbpA毒力基因在7种常见血清型肺炎链球菌中普遍存在,不同血清型的毒力基因检出率存在不同程度的差异。     

山东省动物源沙门氏菌MLST和血清分型与分布研究

目的比较动物源沙门氏菌多位点序列分型(MLST)与血清分型的差别,获得动物源沙门氏菌在山东省的分布规律。方法从山东部分地区分离78株鸡源沙门氏菌、56株鸭源沙门氏菌和20株猪源的沙门氏菌,PCR扩增七段沙门氏菌内部保守的片段序列进行多位点序列分型,同时用玻片凝集法分析其血清型。结果血清分析结果表明,鸡源沙门氏菌检出6种血清型,其中肠炎沙门氏菌占88.5%、印第安纳沙门氏菌占5.1%、汤卜逊沙门氏菌占2.6%、鼠伤寒沙门氏菌占1.3%、山夫登堡沙门氏菌占1.3%、阿格玛沙门氏菌占1.3%;鸭源沙门氏菌检出2种血清型,其中肠炎沙门氏菌占67.9%、鼠伤寒沙门氏菌占32.1%;猪源沙门氏菌检出3种血清型,其中鼠伤寒沙门氏菌占65%、德贝儿沙门氏菌占20%、肠炎沙门氏菌占15%。通过MLST分型,鸡源检出7种ST型:ST11、ST19、ST26、ST128、ST14、ST17和New1;鸭源检出3种ST型:ST11、ST19和New2;猪源检出3种:ST34、ST40和ST3007。结论整体来看,分离菌的血清型和ST型数量比较接近,二者分型能力相近。     

成都地区鸭源沙门氏菌的分离鉴定及其耐药特征、毒力基因分析

目的 了解肉鸭屠宰生产链中沙门氏菌的污染、耐药状况以及毒力基因携带情况。方法 参照GB 4789.4-2010,从肉鸭屠宰链中分离疑似沙门氏菌,采用双重PCR对疑似菌株进行准确鉴定,并进行血清分型;采用纸片扩散法对分离株进行10种抗菌药物敏感性试验,根据CLSI标准判定结果;通过PCR检测与沙门氏菌致病性相关的9个基因。结果 343份样品共分离鉴定出99株沙门氏菌,总体分离率为28.86%,宰前、脱毛、掏膛、分割、宰后样品沙门氏菌分离率分别为45.71%、22.68%、24.72%、38.33%、25.81%;分离株共产生了7种血清型,以印第安纳、纽兰和鸭沙门氏菌为优势血清型;药敏试验结果表明,沙门氏菌对NAL(91.92%)的耐药率最高,对TET(43.43%)、AMP(42.42%)、SXT(34.34%)、CIP(29.29%)、CRO(27.27%)、GEN(24.24%)、KAN(22.22%)的耐药率相对较低,对AMC(9.09%)和MH(6.06%)的耐药率最低,多重耐药率为47.47%,其中印第安纳、伤寒和鼠伤寒沙门氏菌的耐药性较突出;沙门氏菌分离株spvR(94.95%)、avrA(93.94%)、ssaQ(90.91%)、mgtC(87.88%)、sopB(83.84%)、bcfC(80.81%)、siiD(77.78%)毒力基因的携带率较高,spvB(29.29%)和spvC(11.11%)的携带率较低。结论 肉鸭屠宰生产链容易受到不同血清型、不同耐药特征,且毒力基因携带率高的沙门氏菌污染,相关企业和部门应当在卫生和抗菌药物的使用上加强监督和管理,保障食品安全和公众健康。     

无锡市腹泻病人沙门菌的病原学特征及分子分型研究

目的分析无锡市腹泻人群中分离的沙门菌的流行特征;同时比较主要血清型菌株间的脉冲场凝胶电泳(PFGE)带型差异,为沙门菌感染的防控提供实验数据。方法收集2015年无锡市腹泻病人的粪便标本,分别进行沙门菌的分离鉴定、药敏试验、血清型分型以及PFGE分型分析。结果 756份粪便标本中共分离到32株沙门菌,阳性率为4.23%;检出时间主要集中在5~10月份,感染人群以老年人为主。药敏试验说明无锡地区的沙门菌对氨苄西林的耐药率最高,达56.25%;对环丙沙星和头孢他啶的耐药率最低,均为6.25%。32株沙门菌共鉴定出11种血清型,以肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌为主,分别占31.25%和21.88%。对这2种血清型的沙门菌进行PFGE分析,显示肠炎沙门菌所有带型的相似度均在85%以上,鼠伤寒沙门菌的带型各不相同。结论无锡市沙门菌的感染具有明显季节和年龄分布差异性,流行的优势血清型为肠炎沙门菌。无锡市需同时加强对食品和环境中沙门菌的监测。     

福建省沙门菌毒力基因sitC及iroN分布特征分析

目的 比较福建省腹泻患者与健康人群分离的沙门菌毒力基因sitC及iroN分布特征;同时分析两种毒力基因在福建省分离率较高的4种常见血清型沙门菌中的分布差异,为进一步有效防控沙门菌病提供依据。方法 选择福建省从腹泻患者和健康人群中分离到的沙门菌166株,其中腹泻患者121株、健康人群45株,包括鼠伤寒、肠炎、德尔卑和斯坦利四种血清型,运用常规PCR方法扩增毒力基因sitC及iroN。结果 毒力基因sitC及iroN在166株沙门菌分离株中的总检出率分别为51.81%(86株)和39.76%(66株)。在腹泻患者和健康人群两个组别中,sitC及iroN的检出率差异无统计学意义(χsitC2=0.347,P=0.556;χiroN2=3.322,P=0.068)。在鼠伤寒、肠炎、德尔卑和斯坦利四种血清型中,sitC及iroN的检出率差异有统计学意义(χsitC2=11.634,P=0.009;χiroN2=15.020,P=0.002)。sitC+iroN+及sitC-iroN-是最常见的基因携带模式。结论 福建省沙门菌分离株中均检出了一定比例的sitC和iroN毒力基因。这两个毒力基因的分布存在血清型差异,但在健康人群和腹泻病人的沙门菌分离株中不存在分布差异。所以健康人群的沙门菌分离株与腹泻病人的沙门菌分离株一样都具有较强的生存能力和一定的致病潜能。     

鸡源肠炎沙门氏菌对抗菌药物的耐药性分析

目的 调查鸡源肠炎沙门氏菌临床分离株耐药特征。方法 从山东省不同来源分离肠炎沙门氏菌,采用微量肉汤稀释法对菌株进行19种抗菌药物敏感性分析;通过PCR方法对菌株携带的耐药基因进行检测;采用脉冲场凝胶电泳对不同场所分离的菌株进行PFGE分型。结果 肠炎沙门氏菌分离率为17.94%(178株),菌株对氨苄西林耐药率达到68.54%、对四环素耐药率达到66.85%、对磺胺甲恶唑和萘啶酸耐药率达到100%。而对庆大霉素、氯霉素、多粘菌素敏感,耐药率在5.62%以下。68.54%的菌株(122株)携带Ⅰ型整合子、bla_TEM和tetA基因。不同场所分离的肠炎沙门氏菌表现4种PFGE谱型。结论 山东省分离的肠炎沙门氏菌对青霉素类、四环素类药物耐药,携带Ⅰ型整合子、bla_TEM 和tetA耐药基因是导致菌株耐药的主要因素。