实验性脑皮层梗死后丘脑netrin-1及其受体的表达

目的观察一侧大脑皮层梗死后远隔丘脑netrin-1及其受体的表达并探讨其可能的作用。方法建立高血压大鼠的右侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,假手术组只暴露而不凝闭MCA,每组24只。MCAO或假手术后第8天和第14天,各组各取12只大鼠处死取脑,分别行梗死侧丘脑免疫荧光和western blot检测netrin-1及其受体DCC、UNC5H2的表达水平和表达部位。结果 MCAO术后第8天netrin-1、DCC和UNC5H2表达开始增加,尤以UNC5H2更为明显,并持续至第14天,双重免疫荧光显示这些蛋白主要在神经细胞上表达。结论Netrin-1及其受体DCC和UNC5H2的表达增高,可能与脑梗死后远隔丘脑的神经可塑性有关。     

经鼻给予血管内皮生长因子对脑梗死大鼠梗死灶周区血管新生的影响

目的 观察经鼻给予血管内皮生长因子(VEGF)对大鼠局灶性脑缺血后梗死灶周区血管新生的影响.方法 采用大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,随机分成VEGF组(12只)和生理盐水对照组(12只),分别于右侧MCAO后第3天起经鼻给予VEGF或等量生理盐水直至处死前1天;另设假手术组(6只).所有大鼠均于术后第1天起按体质量50 mg/kg经腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),每日1次,连续13 d用以标记增殖细胞,分别在MCAO后第1、7、14天行改良神经功能评分,于术后第14天经尾静脉注入异硫氰酸荧光素右旋糖酐(FITC-dextran),采用免疫荧光双标及激光共聚焦方法检测梗死侧灶周区BrdU+/vWF+表达和微血管数.结果 与对照组及假手术组相比,术后第7天及第14天经鼻给予VEGF可明显改善大鼠神经功能,术后第14天假手术组仅见少量BrdU+/vWF+细胞,VEGF组梗死灶周区BrdU+/vWF+细胞数与对照组相比显著增高(P<0.01),FITC-dextran标记显示VEGF组梗死灶周区微血管数较对照组显著增加(P<0.01).结论 经鼻给予VEGF可促进局灶性脑缺血后梗死灶周区血管再生,促进梗死后神经功能恢复.     

大鼠皮层梗死后同侧丘脑胶质细胞活化和炎性介质动态变化北大核心CSCD

目的观察大鼠皮层局灶性梗死后早期阶段同侧丘脑继发的胶质细胞活化与炎性介质表达的动态变化,探讨远隔损害可能的干预靶点。方法采用雄性SD大鼠,建立易卒中型肾血管性高血压大鼠(strokeprone renovascular hypertensive rat,RHRSP)模型。随机分为假手术组和右侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)组,假手术组和MCAO组于术后1 d、4 d及8 d取材,每组各时间段9只。改良神经功能缺损评分(modified neurological severity scores,mNSS)评价神经功能,HE染色以确定MCAO造模成功,免疫荧光检测GFAP、Iba-1、NeuN观察星形胶质细胞、小胶质细胞活化程度及神经元数目,western blot和免疫荧光检测炎性介质ICAM-1、IL-6和TNF-α的表达情况。结果 mNSS评分提示MCAO术后出现神经功能缺损,术后1 d最严重,术后8 d内缓慢恢复。HE染色确认梗死灶局限于右侧皮层。同侧丘脑星形和小胶质细胞自1 d起开始活化,活化增强至8 d更加明显(P<0.001)。术后1 d仅ICAM-1表达增多(P<0.05);4 d时IL-6和TNF-α也增多(P<0.05);至8 d时IL-6表达降低,而ICAM-1和TNF-α仍维持高水平。神经元数目在8 d明显减少(P<0.001)。结论皮层梗死后早期阶段同侧丘脑继发的胶质细胞活化和各炎性介质表达的动态变化具有差异性,对炎性反应进行多靶点的调控可能是神经保护的有效途径。     

大鼠皮层梗死后同侧丘脑胶质细胞活化和炎性介质动态变化

目的观察大鼠皮层局灶性梗死后早期阶段同侧丘脑继发的胶质细胞活化与炎性介质表达的动态变化,探讨远隔损害可能的干预靶点。方法采用雄性SD大鼠,建立易卒中型肾血管性高血压大鼠(strokeprone renovascular hypertensive rat,RHRSP)模型。随机分为假手术组和右侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)组,假手术组和MCAO组于术后1 d、4 d及8 d取材,每组各时间段9只。改良神经功能缺损评分(modified neurological severity scores,mNSS)评价神经功能,HE染色以确定MCAO造模成功,免疫荧光检测GFAP、Iba-1、NeuN观察星形胶质细胞、小胶质细胞活化程度及神经元数目,western blot和免疫荧光检测炎性介质ICAM-1、IL-6和TNF-α的表达情况。结果 mNSS评分提示MCAO术后出现神经功能缺损,术后1 d最严重,术后8 d内缓慢恢复。HE染色确认梗死灶局限于右侧皮层。同侧丘脑星形和小胶质细胞自1 d起开始活化,活化增强至8 d更加明显(P0.001)。术后1 d仅ICAM-1表达增多(P0.05);4 d时IL-6和TNF-α也增多(P0.05);至8 d时IL-6表达降低,而ICAM-1和TNF-α仍维持高水平。神经元数目在8 d明显减少(P0.001)。结论皮层梗死后早期阶段同侧丘脑继发的胶质细胞活化和各炎性介质表达的动态变化具有差异性,对炎性反应进行多靶点的调控可能是神经保护的有效途径。     

D-阿洛糖对小鼠脑缺血再灌注血脑屏障影响

目的研究D-阿洛糖对小鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的影响。方法 80只小鼠随机分为假手术组(sham组)、脑缺血模型组(MCAO组)、D-阿洛糖治疗组(D-allose组)、生理盐水对照组(NS组)。采用插线法制备小鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,尾静脉注射D-阿洛糖(300 mg/kg),运用改良小鼠神经功能缺损评分(m NSS)对小鼠脑缺血再灌注损伤程度评分;通过1%氯化三苯基四氮唑(TTC)染色,计算脑梗面积百分比;运用干-湿重法,测脑含水率;通过伊文思蓝(EB)含量反映血脑屏障的损伤程度;通过HE染色观察脑缺血再灌注损伤后梗死区的病理变化;采用免疫组化检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达。结果与MCAO组相比,D-allose可以明显降低小鼠脑缺血再灌注后神经功能缺损评分,减小小鼠脑梗死面积,减轻脑水肿,降低EB含量,减轻脑组织的病理损伤程度,并且明显减少MMP-9表达(P0.05)。结论 D-阿洛糖可以保护小鼠脑缺血再灌注后的血脑屏障,其机制可能与抑制MMP-9的表达有关。     

促红细胞生成素对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障通透性和ZO-1表达的影响

目的研究促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)预处理对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障通透性和紧密连接蛋白ZO-1的影响。方法采用大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,伊文思蓝渗透性实验检测血脑屏障通透性,免疫组化法和Western blot法测定ZO-1蛋白表达,RT-PCR法测定ZO-1 mRNA表达。结果 EPO预处理能够明显减轻脑缺血再灌注后血脑屏障的通透性(P<0.01),并显著上调缺血脑组织中ZO-1蛋白及mRNA的表达水平(P<0.01)。结论 EPO通过上调脑缺血再灌注后脑组织中ZO-1的表达,降低BBB通透性,这可能是EPO保护脑缺血再灌注后神经组织的机制之一。     

延迟注射Z-VAD-fmk对局灶性脑缺血神经功能及梗死面积的影响

目的 研究延迟注射Z-VAD-fmk对局灶性脑缺血神经功能及梗死面积的影响.方法 将60只大鼠,随机分为生理盐水对照组、Z-VAD-fmk治疗组,制成大鼠大脑中动脉阻断局灶性脑梗死动物模型(MCAO),每天进行神经功能评分,并分别在MCAO术后第1天、第4天、第7天处死,利用图像分析仪测定梗死面积.结果 在术后4h、第1天、第2天各组之间NSS评分统计学计算,无明显差异.从第4天开始,对照组和用药组之间差异非常显著.在第1天对照组和用药组间梗死面积差异不显著;而第4天和第7天在对照组和用药组间的损伤面积差异显著.结论 延迟注射Z-VAD-fmk可以促进神经功能缺损的恢复速度和预后,并可在病理学水平减少梗死面积.

Abstract：

Objective To identify the effect of NSS scale and damage area by delayed Z-VAD-fmk adminstration in rats with transient middle cerebral artery occlusion. Methods 60 transient MCAO rats was divided randomly into saline control group and Z-VAD-fmk treatment group. The NSS scale determination was taken from 4h to 7d after the operation. The sections that at the level of optic chiasma was selected to measured the damage area and edema by image analyzer at the 1,4 and 7d after the operation. Results For the NSS scale, it was no difference at the first 4 times, but from 4d to 7d after operation there showed significant difference in two groups. The damage area level was significant difference between two groups on the 4d and 7d after operation but it was not observed on 1d after operation. Brain atrophy level was also shown the same result. Conclusions Delayed Z-VAD-fmk adminstration in rats with transient middle cerebral artery occlusion showned neuroprotective effect by increasing the speed of recovery and outcome level and reducing the damage area.     

黄体酮对脑缺血再灌注大鼠紧密连接蛋白ZO-1和occludin表达的影响

目的探讨黄体酮对大鼠局灶性脑缺血再灌注后血脑屏障紧密连接蛋白ZO-1、occludin表达及血脑屏障通透性的影响。 方法将42只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组（6只）和缺血再灌注组,后者再按再灌注时间分为缺血2h再灌注3h、6h、12h、24 h、48 h及72h组（各6只）。缺血再灌注组用线栓法制备成大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。采用荧光分光光度法测定缺血侧脑组织中伊文氏蓝(EB)含量来评价血脑屏障的通透性,Western blotting法检测脑组织ZO-1和occludin的表达。取EB漏出最多组的时间点,增设黄体酮干预组和溶剂对照组（各6只）,与相同时间点的缺血再灌注组比较,观察黄体酮对ZO-1、occludin表达及血脑屏障通透性的影响。 结果 缺血2h再灌注3h时脑组织EB含量开始增加,再灌注24 h时达高峰;ZO-1、occludin的表达在缺血2h再灌注3h时开始下降,再灌注24 h时达最低。黄体酮干预组EB含量明显低于缺血2h再灌注24 h组,差异有统计学意义(P＜0.05)。黄体酮干预组ZO-1和occludin的表达水平均明显高于缺血2h再灌注24 h组,差异有统计学意义(P＜0.05)。 结论 黄体酮町抑制缺血再灌注大鼠紧密连接蛋白ZO-1和occludin表达的降低,从而起到保护血脑屏障的作用。     

不同电刺激对卒中后大鼠神经前体细胞增殖的影响

目的 探讨不同部位电刺激治疗对脑卒中后大鼠神经前体细胞增殖的作用.方法 选择2～3月龄,体质量80～120 g雄性SD大鼠95只,随机分为梗死灶周围电刺激组(A组)、肢体电刺激组(B组)、对照组(C组)和假手术组(D组).建立大脑中动脉闭塞模型,在术后24 h开始对两电刺激组大鼠头皮和肢体电刺激治疗.在梗死后7d、14d、21 d、28 d以横木行走试验(BWT)进行神经功能评分,同时进行室管膜和室管膜下5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)的免疫组织化学检测.结果 A组及B组缺血后室管膜Brdu的表达与C组比较在7、14d差异均有统计学意义(P＜0.05),MCAO后7d二者相比Brdu 在室管膜和室管膜下区的表达差异有统计学意义(P＜0.05);MCAO后21dA组Brdu的表达和C组差异有统计学意义(P＜0.05),但此时B组和C组差异无统计学意义(P＞0.05);在MCAO后第1天及第28天三者之间的Brdu均有表达但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 电刺激促进MCAO后神经干细胞的增殖,但梗死灶周围头皮电刺激治疗较肢体电刺激治疗引起的神经干细胞增殖明显.     

C1q肿瘤坏死因子相关蛋白6破坏大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的机制研究

目的 探讨C1q肿瘤坏死因子相关蛋白6（C1q and tumor necrosis factor related protein 6，C1QTNF6） 对大鼠大脑中动脉缺血再灌注（middle cerebral artery occlusion reperfusion，MCAO/R）后血脑屏障及内皮细胞闭合蛋白（occludin）和闭锁小带蛋白-1（zonula occludens 1，ZO-1）表达的影响。      

Apelin/APJ信号系统对脑缺血后血管内皮细胞修复及机制的研究

目的 探讨Apelin/APJ信号系统对脑缺血损伤的血管内皮细胞的修复作用.方法 采用电凝烧灼法制备局灶性大脑皮质梗死模型,通过侧脑室注射腺病毒Ad-Apelin或对照病毒Ad-RFP.实验动物随机分为4组,分别为假手术(sham)组、脑梗死组(MCAO)、Ad-Apelin+脑梗死组(Ad-Apelin)组、Ad-R...     

人工合成E-选择素对大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的影响

目的探讨人工合成E-选择素对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性以及紧密连接咬合蛋白和闭锁小带蛋白-1含量表达的影响。方法 180只SD大鼠随机分为假手术组(用线栓法将线栓插入颈内动脉及颈外动脉分叉处,其余操作同模型组)、模型组(用改良Zea Longa线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型)、治疗组(建模前10 min从股静脉缓慢注射人工合成E-选择素10 mg·kg-1)。每组分为3、6、24、48和72 h 5个时间点(每个时间点大鼠n=12),应用多功能酶标仪测量血脑屏障对伊文思蓝(EB)的通透性,应用免疫组化法和Western blot法测定咬合蛋白及闭锁小带蛋白-1的表达含量。结果与假手术组比较,模型组缺血再灌注损伤后3 h脑组织EB含量开始上升,6 h继续上升,24 h达峰值,48~72 h下降但仍高于初始值;治疗组各时间点EB含量均低于模型组,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。模型组咬合蛋白和闭锁小带蛋白-1的表达都于缺血再灌注3 h开始下降,6 h继续下降,24 h达最低值,48~72 h上升但低于初始值;治疗组各时间点咬合蛋白和闭锁小带蛋白-1的表达含量均高于模型组,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论人工合成E-选择素可减轻大鼠脑缺血再灌注损伤造成的血脑屏障破坏,其机制可能与抑制紧密连接咬合蛋白和闭锁小带蛋白-1表达的减少有关。     

重复经颅磁刺激对脑梗死大鼠梗死侧皮质内源性神经干细胞激活、增殖的影响

目的研究重复经颅磁刺激(rTMS)对脑梗死大鼠神经功能恢复及梗死侧皮质内源性神经干细胞激活、增殖的影响。方法将72只雄性SD大鼠随机分为模型组、假刺激组、rTMS组,每组24只,各组根据脑梗死后不同时间点再分为1、7、14、21 d四个亚组,每个亚组6只。采用线栓法制作左侧大脑中动脉闭塞脑梗死模型。rTMS组于动物清醒后当天即给予每天2次、每次30个脉冲的rTMS治疗(频率为0.5 Hz,场强为1.33 T);假刺激组模拟rTMS固定大鼠头部放置线圈但不给予脉冲磁刺激;模型组不给任何治疗。各组在规定的时间点应用改良的神经功能缺损评分(mNSS)进行神经功能评定,治疗结束前24 h腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),应用免疫组织化学技术检测梗死侧皮质巢蛋白(nestin)及BrdU表达阳性细胞的数量。结果 rTMS组脑梗死后7、14、21 d mNSS评分明显低于假刺激组及模型组同时间点大鼠(P<0.05),假刺激组及模型组大鼠脑梗死后不同时间点mNSS评分差异不明显(P>0.05)。脑梗死后1d模型组、假刺激组和rTMS组梗死灶周围皮质均可见nestin及BrdU阳性细胞,7 d达高峰。和假刺激组及模型组同时间点相比,rTMS组7、14、21 d nestin及BrdU阳性细胞数量明显增多,两者比较差异明显(P<0.05)。结论 rTMS能促进脑梗死大鼠神经功能恢复,机制可能与rTMS治疗能促进脑梗死周围内源性神经干细胞的激活及增殖有关。     

经鼻给予酸性成纤维细胞生长因子对脑梗死大鼠的血管和神经再生作用

目的研究经鼻给予酸性成纤维细胞生长因子（acidic fibroblast growth factor, aFGF）对脑梗死后神经和血管再生及神经功能恢复的影响。方法健康雄性SD大鼠30只,随机分为aFGF组（n=12）、对照组（n=12）和假手术组（n=6）;aFGF组和对照组大鼠建立大脑中动脉闭塞模型,脑缺血再灌注24h后经鼻分别给予10μg aFGF（200μl）和等容积生理盐水,1次／d,连续7d;同时腹腔注射5-溴脱氧尿核苷（Bromodeoxyuridine,BrdU）50mg／kg,1次/d,连续13d;假手术组操作过程和给药与对照组相同,但不用线栓阻塞大脑中动脉;分别在术前和术后第1、7、14d采用改良神经功能评分评价大鼠神经功能改变情况,并于术后第14d经尾静脉注入异硫氰酸荧光素右旋糖酐（FITC—dextran）,采用免疫组化及激光共聚焦方法分别检测梗死灶周、室管膜下区和纹状体BrdU阳性细胞及微血管的数量。结果术后第7及14d aFGF组神经功能评分显著低于对照组;术后第14d aFGF组缺血侧室管膜下区和纹状体BrdU阳性细胞数与对照组相比均显著增高（P〈0.01）,假手术组仅见少量BrdU阳性细胞;激光共聚焦显示aFGF组梗死灶周微血管数较对照组显著增加（P〈0.05）;同时,与对照组相比经鼻给予aFGF能增加Brdu阳性细胞在血管内皮细胞中的百分比,且有统计学意义（P〈0.05）。结论经鼻给予aFGF能有效促进神经和血管再生,改善脑缺血后神经功能评分,对于治疗脑梗死具有潜在的应用前景。     

The temporospatial expression of peripheral myelin protein 22 at the developing blood-nerve and blood-brain barriers

Peripheral myelin protein 22 (PMP22), also known as growth arrest-specific gene 3 (gas3), is a tetraspan membrane protein whose misexpression is associated with demyelinating peripheral neuropathies. Although the function of PMP22 in Schwann cells is unknown, the protein is found at intercellular junctions of various epithelia and endothelia. To begin to elucidate the role of PMP22 at cell junctions, we examined the temporal expression and protein localization during development and maturation of the rat blood-nerve barrier (BNB) and blood-brain barrier (BBB). Developing and adult rat sciatic nerves and brains were coimmunostained for PMP22 and known junctional proteins including zonula occludens-1 (ZO-1), occludin, and claudin-5. Prior to the maturation of the BNB and BBB and detection of the tight junction protein occludin, PMP22 is present at ZO-1 positive endothelial junctions of the sciatic nerve and brain cortex. The subcellular localization of PMP22 in cultured brain endothelia was confirmed by internalization with ZO-1 after EGTA-induced disruption of cell junctions. In choroid epithelia, PMP22 is detected along with occludin and ZO-1 as early as embryonic day 15 (E15). In agreement, PMP22 message is elevated in P1 rat brain microvasculature and choroid epithelia, compared with total cortex. Additionally, neuroepithelial cell junctions in the embryonic rat brain are immunoreactive for PMP22, ZO-1, and beta-catenin but not occludin. Together, these studies identify PMP22 as an early constituent of intercellular junctions in the developing and mature rat BNB and BBB.     

RNA干扰抑制NgR表达对脑梗死大鼠皮质脊髓束可塑性的影响

目的研究应用RNA干扰技术下调Nogo受体(NgR)基因的表达对脑梗死大鼠神经功能恢复及皮质脊髓束可塑性的影响。方法线栓法制作左侧大脑中动脉闭塞脑梗死大鼠模型,用携带U6启动子和NgR特异短发夹RNA(shRNA)编码序列的质粒pNgR-shRNA1、pNgR-shRNA2行缺血侧侧脑室注射给药,以含非特异性shRNA编码序列的无关质粒pGenesil-Con(pCon)注射组及模型组作为对照,应用改良的神经功能缺损评分(mNSS)进行神经功能评定,Western blot检测梗死灶周围脑组织NgR的表达,免疫组织化学技术检测梗死灶周围脑组织生长相关蛋白43(GAP-43)的表达,生物素化葡聚糖胺(BDA)顺行示踪法观察皮质脊髓束可塑性变化。结果 pNgR-shRNA1组、pNgR-shRNA2组mNSS评分明显低于pCon组及模型组(P<0.05),pCon组及模型组mNSS评分差异不明显(P>0.05)。与pCon组及模型组相比,pNgR-shRNA1组、pNgR-shRNA2组梗死灶周围脑组织NgR的表达显著降低(P<0.05),GAP-43的表达明显增强(P<0.05),BDA顺行示踪见病变侧大脑脚水平及病变对侧C1-3脊髓水平BDA阳性纤维数量明显增多(P<0.05)。结论 RNA干扰抑制NgR表达能促进脑梗死大鼠皮质脊髓束可塑性改变及神经功能恢复。     

Nicotine increases in vivo blood-brain barrier permeability and alters cerebral microvascular tight junction protein distribution

The blood-brain barrier (BBB) is critical to the health of the central nervous system. The BBB is formed primarily by the presence of tight junctions (TJ) between cerebral microvessel endothelial cells. In light of the known effects of nicotine on endothelial cell biology, the specific effects of nicotine on the in vivo BBB were examined. Using in situ brain perfusion, it was found that continuous administration of nicotine (4.5 mg free base x kg(-1) x day(-1)) for 1 and 7 days led to increased permeability of the BBB to [14C]-sucrose without significant changes in its initial volume of distribution. The expression and distribution of the TJ-associated proteins actin, occludin, claudin-1, -3, and -5, and ZO-1 and -2 were analyzed by Western blot and immunofluorescence microscopy. Though no changes in total protein expression were observed, nicotine treatment was associated with altered cellular distribution of ZO-1 and diminished junctional immunoreactivity of claudin-3. It is proposed that nicotine leads to changes in BBB permeability via the modulation of TJ proteins.