人成骨细胞的I型胶原合成及基因表达

目的 :观察分析人成骨细胞在骨化三醇作用下细胞I型胶原的分泌。方法 :应用酶法分离细胞 ,四环素、茜素红鉴定 ,在成骨细胞生长的早期测定放射性元素掺入后细胞胶原的合成 ,原位杂交、mRNA表达反映细胞基因水平胶原的合成。结果 :1 0 (-8)mol/L骨化三醇明显提高成骨细胞内胶原的生成 (4 .43± 0 .2 3 ) ,杂交提示细胞胶原的灰度值为 (2 87± 2 5 ) ,Ⅰ型胶原α2 链表达 (3 .2 6± 0 .3 5 )和对照组有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :1 0 (-8)mol/L的骨化三醇在成骨细胞生长的早期 ,使细胞I型胶原的分泌明显的增加。     

杜仲总提物对大鼠成骨细胞增殖、分化及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响

目的观察杜仲总提取物(DZCE)对新生大鼠颅盖骨成骨细胞增殖、分化及分泌Ⅰ型胶原能力的影响。方法体外分离培养大鼠成骨细胞,分为对照组、地塞米松(DEX)10-8mol/L组、杜仲总提取物不同剂量组(10μg/L、1μg/L、0.1μg/L)共5个组,CCK-8(cell counting Kit-8)检测细胞增殖情况。由Pierce BCA蛋白分析试剂盒进行蛋白定量,然后由碱性磷酸酶(ALP)活性测定试剂盒检测成骨细胞的分化情况。用In cell western方法测定成骨细胞中Ⅰ型胶原蛋白(Col1αI)分泌随时间的变化情况。各组干预24 h后,实时荧光定量法检测成骨细胞Col1αI mRNA的表达情况。结果 1杜仲总提取物各剂量均能刺激成骨细胞的细胞增殖(P0.01),同时也都能使成骨细胞的分化能力增强(P0.05)。2药物干预后,Ⅰ型胶原蛋白的分泌随时间的变化情况是第1天的高中剂量,第3天的中低剂量能使成骨细胞的I型胶原蛋白表达提高(P0.05),第5天、第7天、第9天,各组Ⅰ型胶原蛋白的分泌量均增加,但杜仲总提取物各剂量组与空白组差异无统计学意义(P0.05)。3PCR检测发现,杜仲总提取物各剂量组的I型胶原基因的表达增加,而且这种促进I型胶原分泌的能力有量效趋势。结论杜仲总提取物能显著提高成骨细胞增殖、分化和Col1αⅠ的表达。     

葛根素对成骨细胞增殖、分化及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的:探讨葛根素(Pue)对高糖培养的成骨细胞增殖、分化及Ⅰ型胶原m RNA(CollⅠm RNA)表达的影响,为临床治疗糖尿病骨质疏松症提供实验依据。方法:取出生24 h内的SD大鼠的颅骨,体外分离培养成骨细胞,待细胞形态稳定后,取对数生长期的成骨细胞,随机分为正常组、高糖组(葡萄糖浓度22 mmol/L)、葛根素各浓度组(葛根素浓度分别为10-8 mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L)、高糖加葛根素各浓度组,每组设8个复孔,分别培养48 h,隔天换液并加药。测定成骨细胞的增殖能力、细胞内ALP活性以及CollⅠm RNA表达情况。结果:与正常组比较,葛根素各浓度组细胞增殖、细胞ALP活性、细胞CollⅠm RNA表达均显著增高,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);高糖组、高糖+葛根素各浓度组明显低于正常组,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。与高糖组比较,高糖+葛根素各浓度组细胞增殖、细胞ALP活性、细胞CollⅠm RNA表达均显著增高,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:高糖情况下抑制成骨细胞的增殖、分化和Ⅰ型胶原表达,但加入葛根素后能提高成骨细胞的增殖、分化和Ⅰ型胶原表达,说明葛根素对糖尿病骨质疏松症有治疗作用。     

松脂醇二葡萄糖苷对人皮肤成纤维细胞胶原蛋白分泌机制的研究

目的：观察松脂醇二葡萄糖苷(pinoresinol diglucoside, PDG)对人皮肤成纤维细胞ESF-1细胞胶原蛋白分泌的基因调控作用,探讨PDG对烧伤皮肤的修复机制。方法体外培养细胞按随机数字表法分为空白组,雌二醇组,PDG高、中、低剂量组。PDG高、中、低剂量组分别加入100、10、1μmol/L的PDG溶液,雌二醇组加入10-3μmol/L的雌二醇。采用MTT法检测细胞增殖活性。采用RT-PCR技术测定细胞中Ⅰ型胶原蛋白(collagen I, Col I)、Ⅲ型胶原蛋白(ColⅢ)、组织金属蛋白酶抑制剂(tissue inhibitors of matrix metalloproteinase, TIMP)-1、TIMP-2、MMP-1mRNA表达水平。结果与空白组比较,雌二醇组、PDG 中剂量组ESF-1细胞增殖率[(0.559±0.027)、(0.552±0.034)比(0.489±0.027)]升高(P＜0.05);雌二醇组与PDG中、低剂量组细胞ColⅠ[(0.958±0.021)、(0.929±0.031)、(0.916±0.015)比(0.844±0.022)]、Col Ⅲ[(0.783±0.038)、(0.918±0.021)、(0.855±0.017)比(0.678±0.024)]、TIMP-1[(0.939±0.025)、(0.889±0.036)、(0.853±0.015)比(0.780±0.023)]、TIMP-2[(0.507±0.024)、(0.655±0.037)、(0.572±0.025)比(0.405±0.062)]mRNA 表达水平升高(P＜0.05或 P＜0.01), MMP-1[(0.343±0.038)、(0.407±0.046)、(0.435±0.037)比(0.519±0.041)]mRNA表达水平下降(P＜0.05或P＜0.01)。结论 PDG可提高ESF-1细胞的增殖活性,促进相关胶原蛋白和TIMP的表达,抑制MMP的表达,减少胶原的降解,从而发挥修复烧伤皮肤的作用。     

龟鹿二仙胶治疗骨质疏松症的机制研究

目的:研究龟鹿二仙胶对成骨细胞I型胶原及TGF-β表达的影响,探索龟鹿二仙胶治疗骨质疏松症的机制。方法:SD大鼠随机分为对照组、龟鹿二仙胶低剂量组、中剂量组、高剂量组、骨化三醇组,每天灌胃1次,持续7 d,末次给药2 h后腹主动脉采血,制成含药血清作用于大鼠成骨样细胞ROS17_2.8株。用MTT法及活细胞形态观察含药血清对成骨细胞增殖及凋亡的影响。用各组含药血清条件培养基培养成骨细胞,应用Western Blot法检测各组成骨细胞I型胶原及TGF-β蛋白表达水平,采用RT-PCR法检测各组成骨细胞I型胶原及TGF-βmRNA的表达。结果:(1)MTT结果显示:龟鹿二仙胶各组的成骨细胞无明显增殖。骨化三醇组的成骨细胞有明显增值(P<0.05)。细胞染色提示:骨化三醇组及龟鹿二仙胶组的成骨细胞无显著的凋亡。(2)RTPCR法结果显示:骨化三醇组与龟鹿二仙胶各组COL1A1及COL1A2mRNA的水平均有增加(P<0.01);龟鹿二仙胶中、高剂量组COL1A1及COL1A2mRNA水平增加较明显(P<0.05),龟鹿二仙胶高剂量组较中剂量组COL1A1及COL1A2mRNA水平增加不明显(P>0.05);骨化三醇组TGF-β1及TGF-β2mRNA水平无明显变化(P>0.05);龟鹿二仙胶各组TGF-β1及TGF-β2mRNA水平均有增加(P<0.01);且龟鹿二仙胶中、高剂量组TGF-β1、TGF-β2mRNA水平增加差异无统计学意义(P>0.05)。(3)Western blot结果提示:第24 h,龟鹿二仙胶高剂量组能使成骨细胞COL1A1及COL1A2蛋白合成增加(P<0.05)。第48 h,骨化三醇组、龟鹿二仙胶各组均能使成骨细COL1A1及COL1A2蛋白合成增加(P<0.01);龟鹿二仙胶高、中剂量组之间比较差异没有统计学意义(P>0.05);第24、48 h,骨化三醇组TGF-β1及TGF-β2蛋白合成无明显变化(P>0.05);在24 h,龟鹿二仙胶高剂量组TGF-β1及TGF-β2蛋白合成有显著增强(P<0.01),龟鹿二仙胶低剂量和中剂量组TGF-β1及TGF-β2蛋白合成无明显变化(P>0.05);48 h,龟鹿二仙胶各组TGF-β1及TGF-β2蛋白合成增加(P<0.01)。龟鹿二仙胶高中剂量组之间无显著差异(P>0.05)。结论:龟鹿二仙胶治疗骨质疏松症机制可能通过调节细胞因子TGF-β,促进I型胶原的表达,为探讨中药促胶原形成治疗骨质疏松提供细胞及分子生物学依据。     

不同浓度地塞米松在体外定向诱导分化兔骨髓间充质干细胞为成骨细胞的实验研究

目的探讨兔骨髓间充质干细胞(MSCs)体外定向诱导分化为成骨细胞所需的地塞米松的最佳浓度。方法抽取兔骨髓,采用全骨髓贴壁培养法体外培养,贴壁细胞进行传代。取第3代细胞,随机分为5组,在培养基中添加成骨分化诱导剂β-甘油磷酸钠、L-抗坏血酸,5组添加的地塞米松的浓度分别为1×10-6mol/L、1×10-7mol/L、1×10-8mol/L、1×10-9mol/L、1×10-10mol/L。培养10 d后,在倒置显微镜观察细胞形态,计算细胞浓度,采用5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸盐(BCIP)/氯化硝基四氮唑蓝(NBT)底物显色试剂检测碱性磷酸酶(ALP),茜素红染色检测钙结节。结果较高浓度(1×10-8mol/L、1×10-7mol/L、1×10-6mol/L)的地塞米松相对于较低浓度(1×10-9mol/L、1×10-10mol/L)的地塞米松可显著增加ALP表达(P均<0.05),并可增加钙结节的形成;1×10-9mol/L及其以下浓度的地塞米松对细胞增殖无明显影响(P均>0.05),1×10-7mol/L以上浓度的地塞米松可明显抑制细胞的增殖(P<0.01)。结论地塞米松在体外定向诱导分化兔骨髓间充质干细胞为成骨细胞,最佳的浓度为1×10-8mol/L。     

补骨脂异黄酮对A375细胞黑素合成的影响

目的 观察补骨脂异黄酮对A375细胞黑素合成的影响,探讨其作用机制.方法 将细胞按随机数字表法分为空白组,雌二醇组,补骨脂异黄酮10-3、10-2、10-1、1、10、100μmol/L组.雌二醇组给予10-3μmol/L的雌二醇溶液干预,补骨脂异黄酮10-3、10-2、10-1、1、10、100μmol/L组分别给予10-3、10-2、10-1、1、10、100μmol/L补骨脂异黄酮溶液进行干预.分别采用MTT法、NaOH裂解法、多巴氧化法检测细胞增殖率、黑素含量和酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)活性;采用RT-PCR法测定TYR、酪氨酸酶相关蛋白(tyrosinase related protein,TRP)-1及TRP-2 mRNA表达.结果 与空白组比较,10、100μmol/L补骨脂异黄酮组细胞增殖率下降(P<0.01);补骨脂异黄酮1、10-1、10-2μmol/L组细胞黑素含量、TYR活性下降(P<0.01或P<0.05);1μmol/L补骨脂异黄酮组TYR[(0.303±0.003)比(0.628±0.012)]、TRP-1[(0.313±0.008)比(0.677±0.022)]、TRP-2[(0.456±0.028)比(0.687±0.020)]mRNA表达降低(P<0.01).结论 补骨脂异黄酮可能通过抑制TYR活性和TYR、TRP-1/2 mRNA表达从而抑制黑素合成.     

苦杏仁苷对HSC-T6细胞分泌作用的影响

目的:观察苦杏仁苷对肝星状细胞(HSC)-T6细胞Ⅰ型胶原mRNA、Ⅲ型胶原mRNA活化,以及Ⅰ型胶原、透明质酸等分泌的影响。方法:将HSC-T6细胞系分为以下4组,每组细胞均置于6孔板中。4组分别为:正常组,苦杏仁苷高剂量(10-3 mol/L)组,苦杏仁苷中剂量(10-4 mol/L)组和苦杏仁苷低剂量(10-5 mol/L)组。RT-PCR检测Ⅰ型胶原mRNA、Ⅲ型胶原mRNA,酶联免疫法检测HSC-T6Ⅰ型胶原的分泌,放射免疫法检测透明质酸的含量。结果:各苦杏仁苷组对Ⅰ型胶原基因表达均有明显的抑制作用,与正常组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。以苦杏仁苷中剂量组最为明显,苦杏仁苷高剂量组次之,苦杏仁苷低剂量组再次之。提示苦杏仁苷对HSC-T6细胞Ⅰ型胶原mRNA表达有明显的抑制作用,但这种抑制作用或并不与剂量成正比。各苦杏仁苷组对Ⅲ型胶原基因表达均有明显的抑制作用,与正常组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。以苦杏仁苷高、中剂量组明显,苦杏仁苷低剂量组次之。24 h时,Ⅰ型胶原的OD450值苦杏仁苷各组与正常组比较,差异均无统计学意义(P0.05)。72 h时,苦杏仁苷各组与正常组比较,差异均有统计学意义(P0.05),但苦杏仁苷各组组间比较,差异无统计学意义(P0.05)。正常组透明质酸分泌曲线与苦杏仁苷低剂量组稍有重叠,位置较苦杏仁苷高、中剂量组分泌曲线高。但24 h、72 h时,4组透明质酸含量比较,差异均无统计学意义(P0.05)。96 h时,苦杏仁苷高、中剂量组比较,差异有统计学意义(P0.05),其余组间比较,差异仍无统计学意义(P0.05)。结论:苦杏仁苷对HSC-T6细胞活化后的细胞外基质(ECM)分泌功能有明显的抑制作用,此可能是其抗肝纤维化的主要机制之一。     

丹参酮IIA对TGF-β_1诱导的人肾小管上皮细胞增殖及Ⅰ型胶原分泌的影响

目的探讨丹参酮IIA在防治肾间质纤维化方面的作用。方法将体外正常培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)分为空白对照组、转化生长因子-β1组(TGF-β1,10μg/L)、干预一组(丹参酮IIA 1 mg/L+TGF-β110μg/L)、干预二组(丹参酮IIA 5 mg/L+TGF-β110μg/L)及干预三组(丹参酮IIA 10 mg/L+TGF-β110μg/L),分别予相应的干预措施。采用MTT方法检测HK-2的增殖以及用倒置相差显微镜观察细胞形态的变化;采用ELISA法检测上清液中Ⅰ型胶原的含量。结果 TGF-β1组(10μg/L)能刺激肾小管上皮细胞增殖以及促进细胞的形态向成纤维细胞发生转变;加入丹参酮IIA(1 mg/L~10 mg/L)共同作用后,细胞的增殖受到抑制,细胞形态逐渐趋向于正常,呈现明显的剂量依赖性。TGF-β1(10μg/L)能刺激肾小管上皮细胞Ⅰ型胶原的分泌增加,与空白对照组比较差异有统计学意义(P0.05),与丹参酮IIA(1 mg/L~10 mg/L)共同作用后Ⅰ型胶原的表达量下降,并呈明显的剂量依赖性。结论丹参酮IIA能够维持HK-2细胞形态的稳定性,防止细胞向成纤维细胞方向发展,在一定程度上抑制了TGF-β1诱导的细胞增殖及分泌Ⅰ型胶原的作用,这可能也是其治疗肾间质纤维化的作用机制。     

大豆素对尿毒症大鼠肾组织TGF-β1蛋白及mRNA表达的影响

目的：观察大豆素对尿毒症大鼠肾组织细胞外基质的影响,并探讨其作用机制。方法采用随机数字表法将26只大鼠分为假手术组8只、模型组8只、大豆素组10只。除假手术组外,其余各组采用5/6肾切除术制备尿毒症大鼠模型。大豆素组于造模后次日灌胃15 mg/kg大豆素溶液,假手术组、模型组灌胃等体积生理盐水。1次/d,连续给药8周。检测各组造模前、造模后第4、8周尿蛋白及生化指标。第8周观察各组大鼠肾组织病理改变。采用免疫组化法检测肾组织Ⅳ型胶原蛋白、纤连蛋白表达。采用RT-PCR法、Western blot法检测肾组织TGF-β1蛋白及mRNA表达。结果造模后第8周,与模型组比较,大豆素组尿蛋白排泄量[(22.54±3.47)mg/24 h比(31.28±3.78)mg/24 h]减少(P＜0.01),血清BUN[(12.09±0.59)mmol/L比(14.26±0.71)mmol/L]、SCr[(75.20±3.39)μmol/L比(90.25±2.71)μmol/L]水平降低(P＜0.01)。肾小球Ⅳ型胶原蛋白[(16.33±2.14)%比(24.68±3.97)%]、纤连蛋白[(19.17±2.68)比(29.35±4.15)]表达降低(P＜0.01),肾小球硬化明显减轻。肾组织TGF-β1 mRNA[(0.37±0.06)比(0.64±0.08)]、TGF-β1蛋白[(0.28±0.09)比(1.40±0.13)]表达降低(P＜0.05)。结论大豆素可减少尿毒症大鼠细胞细胞外基质的蓄积,对肾脏具有保护作用,其机制可能与下调TGF-β1表达有关。     

养目平突汤含药血清对人眼球后成纤维细胞的影响

目的观察养目平突汤含药血清对人眼球后成纤维细胞(RFS)增殖以及合成透明质酸、Ⅰ型胶原蛋白的影响。方法体外培养正常人RFs,予养目平突汤含药血清孵育后,MTT比色法检测RFs的增殖;放免法检测透明质酸(HA)和Ⅰ型胶原蛋白的合成状况。结果正常组A值为(0.39±0.05)D,而养目平突汤含药血清各剂量组A值均减少,分别为(0.37±0.06)D(、0.30±0.05)D和(0.22±0.06)D(P均<0.05);正常组HA和Ⅰ型胶原蛋白的浓度分别为(1.64±0.12)mg/L、(1.72±0.11)mg/L;养目平突汤含药血清各剂量组HA和Ⅰ型胶原蛋白的合成均显著减少(P均<0.05),HA的浓度分别为(1.47±0.16)mg/L、(0.94±0.12)mg/L、(0.89±0.14)mg/L,Ⅰ型胶原蛋白的浓度分别为(1.55±0.12)mg/L(、0.98±0.13)mg/L和(0.90±0.10)mg/L。结论养目平突汤含药血清治疗Graves’眼病的作用途径部分是通过抑制RFs的增殖和HA、Ⅰ型胶原蛋白的合成,降低RFs生物活性,从而减少Graves’眼病的免疫损伤。     

生脉成骨方对股骨头坏死I型胶原表达的调节作用研究

目的　研究生脉成骨方对股骨头坏死Ⅰ型胶原mRNA表达的影响以揭示其作用机制。方法　以内毒素加甲基强的松注射制备兔骨坏死模型 ,分为模型组及生脉成骨方组 ,分批于用药后 4,8,12周处死 ,于原位杂交法测定骨Ⅰ型胶原表达 ,进行病理学检查 ,并与正常对照组比较。结果　模型组各时段成骨细胞及骨髓基质细胞内的Ⅰ型胶原mRNA的阳性表达减少 ;中药组 4周时mRNA的表达信号强度和量稍弱于正常组而稍高于模型组 ,8周和 12周时其信号强度和量以及阳性表达的骨髓基质细胞分布进一步改善 ,接近于正常组。结论　生脉成骨方在股骨头坏死的治疗中能促进成骨细胞功能活跃 ,增加骨髓基质细胞向前成骨细胞的分化 ,促进Ⅰ型胶原的合成     

生脉成骨方对股骨头坏死Ⅰ型胶原表达的调节作用研究

目的 研究生脉成骨方对股骨头坏死Ⅰ型胶原mRNA表达的影响以揭示其作用机制。方法 以内毒素加甲基强的松注射制备兔骨坏死模型。分为模型组及生脉成骨方组。分批于用药后4，8，12周处死，于原位杂交法测定骨Ⅰ型胶原表达，进行病理学检查。并与正常对照组比较。结果 模型组各时段成骨细胞及骨髓基质细胞内的Ⅰ型胶原mRNA的阳性表达减少；中药组4周时mRNA的表达信号强度和量稍弱于正常组而稍高于模型组。8周和12周时其信号强度和量以及阳性表达的骨髓基质细胞分布进一步改善，接近于正常组。结论 生脉成骨方在股骨头坏死的治疗中能促进成骨细胞功能活跃，增加骨髓基质细胞向前成骨细胞的分化，促进Ⅰ型胶原的合成。     

丹参酮ⅡA通过下调CTGF抗血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原合成

目的 观察丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原合成的影响及可能的机制下调CTGF水平.方法 采用AngⅡ诱导和建立心肌成纤维细胞纤维化模型,采用不同浓度的丹参酮ⅡA处理纤维化细胞,观察其对Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA的影响,同时采用Western blot和RT-PCR检测CTGF和CTGF mRNA水平.结果 (1)AngⅡ处理后的心肌成纤维细胞的Ⅰ型、Ⅲ型胶原的mRNA水平高于DMSO组,且给予丹参酮ⅡA处理后,Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA水平呈浓度依赖的方式下降,且在50μmol/L的浓度下,恢复正常;(2)AngⅡ处理后的心肌成纤维细胞的CTGF和CTGF-mRNA水平高于DMSO组,且50mol/L丹参酮ⅡA可降低CTGF和CTGF-mRNA水平;(3)给予外源性的CTGF处理后,丹参酮ⅡA抑制成纤维细胞胶原合成的作用减弱,且10 μmol/L的CTGF可完全减弱丹参酮ⅡA的作用,外源性CTGF处理未改变CTGF-mRNA水平.结论丹参酮ⅡA具有降低血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原合成的作用,可能的机制是下调CTGF水平.     

姜黄素对人增生性瘢痕成纤维细胞生长及功能的影响

目的 探讨姜黄素对人增生性瘢痕(hyperplastic scar)成纤维细胞（fibroblast, FB）增殖及胶原合成的影响,以寻找治疗人增生性瘢痕的有效药物。方法 应用组织块法分离培养瘢痕和正常真皮组织的FB,在倒置相差显微镜下观察细胞形态,应用细胞计数方法绘制细胞生长曲线,测定细胞生长速度;采用不同浓度的姜黄素（0、12.5、25、50和100 μmol/L）刺激瘢痕FB,采用四氮甲基唑盐比色法（MTT法）检测姜黄素对FB生长的抑制效应,采用RT PCR检测姜黄素对FBα1（Ⅰ）前胶原基因的转录活性的影响。结果 细胞生长曲线显示:增生性瘢痕FB倍增时间约为5天,正常皮肤FB后细胞倍增时间为4天,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05);MTT检测结果显示：12.5 μmol/L姜黄素作用于增生性瘢痕FB,表现为增殖倾向,其光吸收值（A值）显著地高于正常对照组。而在25～100 μmol/L 的浓度范围内,随着姜黄素药物浓度的增加,其抑制作用逐渐增强,50 μmol/L和100 μmol/L姜黄素能显著抑制瘢痕FB增殖（P<0.05）;此外,50 μmol/L和100 μmol/L姜黄素能够显著抑制瘢痕FBⅠ型胶原合成（P<0.01）。结论 较高浓度的姜黄素能有效抑制增生性瘢痕FB增殖和Ⅰ型胶原合成,对增生性瘢痕可能具有治疗作用。     

接骨丹介导成骨细胞增殖促进骨折愈合的观察

目的：观察接骨丹对新西兰乳兔成骨细胞增殖的影响,探讨接骨丹促进骨折愈合的机制。方法：普通级新西兰大白乳兔,耳缘静脉空气栓塞处死,无菌条件下取颅盖骨,Ⅰ型胶原酶消化法获取成骨细胞并进行体外培养、鉴定及传代。将鉴定后的第二代成骨细胞随机分为正常对照组及实验组,正常对照组应用正常兔血清培养,实验组应用接骨丹含药血清培养,MTT法观测2组细胞的生长曲线;不同血清干预48 h后,倒置显微镜观测接骨丹对成骨细胞碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原表达的影响,Elisa法观测接骨丹对成骨细胞培养上清液中骨钙素表达的影响。结果：Ⅰ型胶原酶消化法成功获取并建立成骨细胞体外培养体系,MTT观测显示实验组能够显著促进成骨细胞的增值,倒置显微镜观测实验组中碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原的表达要优于正常对照组,并能够促进成骨细胞分泌骨钙素。结论：接骨丹能够促进骨折的愈合,其机制可能与促进成骨细胞中碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原及骨钙素的表达进而促进成骨细胞增殖和分化有关。     

丹参酸乙对大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原基因表达的影响

目的 :探讨丹参酸乙 (SA B)对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )孵育的新生大鼠心脏成纤维细胞功能的影响。 方法 :将培养的心脏成纤维细胞分成四组 :空白对照组 ;AngⅡ组 :培养基中加了 10 7mol/LAngⅡ ;SA B10 6mol/L组 :培养基中加 10 7mol/LAngⅡ 10 6mol/LSA B ;SA B10 4mol/L组 :培养基中加 10 7mol/LAngⅡ 10 4mol/LSA B。加药后 2 4h分别作3 H TdR细胞增殖测定和采用逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)测定Ⅰ、Ⅲ型胶原基因的转录水平。结果 :10 4mol/LSA B可有效抑制由AngⅡ引起的心脏成纤维细胞的增殖。 10 5mol/LSA B可抑制胶原Ⅲ型mRNA的表达量 ,而 10 6mol/LSA B和 10 5mol/LSA B都可显著抑制胶原Ⅰ型mRNA的表达。结论 :丹参酸乙可逆转由AngⅡ引起的心脏成纤维细胞的增殖和Ⅰ、Ⅲ型胶原基因的表达水平。     

丹参酮Ⅱ_A对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖及Ⅰ型胶原合成的影响

目的:通过观察丹参酮ⅡA(TSN)对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖及Ⅰ型胶原合成的影响,探讨其抗心肌纤维化的作用机制。方法:差速贴壁法提取原代CFs,采用四氮唑盐(MTT)比色法测定细胞数目,ELISA法检测Ⅰ型胶原合成,RT-PCR法半定量检测Ⅰ胶原mRNA表达。结果:①AngⅡ组OD值高于空白对照组,两者比较有显著性差异(P<0.01);AngⅡ+TSN组OD值低于AngⅡ组,两者比较有显著性差异(P<0.01)。②AngⅡ组有促进心肌成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原的作用,与空白对照组比较,有显著性差异(P<0.01);AngⅡ+TSN组Ⅰ型胶原含量低于AngⅡ组,两者比较,有显著性差异(P<0.01)。③AngⅡ组Ⅰ型胶原mRNA表达高于空白对照组,两者比较有显著性差异(P<0.05);AngⅡ+TSN组Ⅰ型胶原mRNA表达低于AngⅡ组,两者比较有显著性差异(P<0.05)。结论:AngⅡ可直接诱导CFs的增殖,促进其分泌Ⅰ型胶原,并能显著增加Ⅰ型胶原mRNA的表达;TSN对AngⅡ诱导的CFs增殖及Ⅰ型胶原分泌增加,及Ⅰ型胶原mRNA表达增强均有抑制作用。提示:TSN抗心肌纤维化作用的产生可能与丹参酮ⅡA抑制心脏局部的RAS系统有关。     

续断对成骨细胞增殖、分化、凋亡和细胞周期的影响

在动物实验的基础上,探讨续断对成骨细胞增殖、分化、凋亡、细胞周期和Ⅰ型前胶原αmRNA表达影响.根据文献方法培养大鼠成骨细胞株UMR-106/01,采用3H-Tdr法检测细胞增殖,PNPP法、RIA法、茜素红染色法以及定量RT-PCR法分别检测碱性磷酸酶活性、骨钙素活性、矿化结节形成和Ⅰ型胶原αmRNA的表达,从而了解续断对成骨细胞增殖、分化的影响;FCM法检测细胞周期.结果显示续断中、高剂量能显著促进成骨细胞的增殖、增加碱性磷酸酶的表达及矿化结节形成的数量,促进成骨细胞骨钙素和Ⅰ型前胶原mRNA的表达(P＜0.01,P＜0.05),和雌激素组比较差异无显著性.续断高剂量组细胞增殖率、S期细胞比率和细胞增殖指数等均显著高于空白对照组(P＜0.01,P＜0.05),和雌激素组比较差异也无显著性.细胞凋亡率和G0-G1期细胞比率显著低于空白对照组(P＜0.01,P＜0.05).表明续断能有效促进成骨细胞的分化、增殖,防止成骨细胞凋亡,可能是该药促进骨折愈合、防治骨质疏松的机制之一.     

染料木素对大鼠成骨细胞骨钙素表达的影响

目的:探讨染料木素体外对大鼠成骨细胞骨钙素表达的影响.方法:用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,染料木素以不同浓度加入细胞培养体系,作用不同时间后,用放免法测定细胞骨钙素(BGP)的水平.结果:染料木素在1×10-9mol/L 范围内48h和72h,1×10-8mol/L及1×10-7mol/L 72h提高成骨细胞骨钙素的水平.结论:染料木素体外能提高成骨细胞骨钙素的表达.