海洋微藻在医药上的应用

综述了海洋微藻在医药上的应用,包括微藻保健功能食品,微藻提取药用成分及生物活性牲等。     

杜氏盐藻硝酸盐还原酶缺陷型突变株的筛选与鉴定

目的:制备杜氏盐藻氯酸盐抗性突变株库并从中筛选出硝酸盐还原酶(NR)缺陷型突变株,测定其NRcDNA全长序列,分析其突变位点.方法:①用乙基亚硝基脲(ENU)对杜氏盐藻进行诱变,得到突变株库.然后用氯酸盐抗性筛选方法获得氯酸盐抗性藻株,经复筛和不同氮源生长试验,获得了氯酸盐抗性突变株库.再用96孔板法进行单藻培养,获得氯酸盐抗性突变株单藻群.用磺胺比色法测定各个单藻群的NR活性,挑选出NR活性完全丧失的突变株.然后用氯酸盐抗性实验和不同氮源生长实验验证其NR突变的稳定性.②根据已知的盐藻NR全长序列,设计3对PCR引物,提取突变株盐藻细胞mRNA,反转录成cDNA,分3段扩增其NR cDNA的全长序列,产物与T载体连接后转化至大肠杆菌JM109中,经筛选后测序,测序结果与野生型盐藻NR eDNA序列比较,分析其突变位点.结果:序列分析表明,3株突变株共有11处相同的突变,其中的3处点突变引起了氨基酸性质的改变.它们均在近3'端有一段相同的移码突变,造成19个氨基酸的完全改变.此外,2株还分别由于在1 235和1 639的位点突变而产生了一个终止密码子.结论:筛选出了3株杜氏盐藻NR完全缺陷型突变株.     

用基因枪法将bar基因导入杜氏盐藻及转基因藻株的检测

目的：探讨基因枪转化方法不同轰击条件和启动子的选择对转化杜氏盐藻的影响。方法：以抗除草剂(bar)基因作为报告基因,用基因枪法将其导入杜氏盐藻。通过草丁膦筛选培养获得转化藻株,对转化藻株进行分析。结果：在氦气压力为100L／min条件下,微弹轰击2次比微弹轰击1次或3次的效果都好;杜氏盐藻碳酸酐酶(CA1)基因启动子可驱动bar基因在杜氏盐藻巾瞬时表达,而双拷贝碳酸酐酶(DCA1)基因启动子可驱动bar基因在杜氏盐藻中稳定表达。结论：在氦气压力为100L／min条件下微弹轰击2次,可能是基因枪法转化杜氏盐藻的较好转化条件。在转基因杜氏盐藻研究中,DCA1基因启动子可能是一种较为理想的启动子类型。     

海洋微藻PUFAs 及合成酶基因在肿瘤预防和治疗中的应用

多不饱和脂肪酸（PUFAs）对人类的健康至关重要,参与了人体内许多重要的生理反应,尤其是体内n-3 PUFAs 和n-6 PUFAs 的相对含量与肿瘤预防和治疗有关.除了在饮食中添加富含n-3 PUFAs 和n-6PUFAs 外,利用PUFAs 合成关键酶基因作用于底物在体内合成也是一个重要的途径.研究已获得海洋微藻中多个PUFAs 合成关键酶基因,转入肿瘤的宿主细胞后发现该基因在肿瘤细胞内能进行有效异源表达,抑制肿瘤细胞的增殖且导致凋亡,展示了该类基因在肿瘤的基因治疗中具有良好的应用价值.     

实时荧光定量聚合酶链反应检测杜氏盐藻突变株中硝酸盐还原酶基因的表达

目的分析获得的2株杜氏盐藻硝酸盐还原酶(NR)突变藻株(M1和M2)中NR基因的表达情况。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)方法,以管家基因β-actin作为内参,进行相对定量检测比较NR基因的表达变化。结果盐藻突变藻株NR基因相对表达量明显低于野生型杜氏盐藻。所分离的杜氏盐藻NR突变藻株中确实存在NR基因的突变。结论本研究为最终利用NR基因作为选择标记,建立杜氏盐藻专用筛选标记奠定了实验基础。     

球等鞭金藻生长抑制物的分离提取与抑制活性

以含有生长抑制物的球等鞭金藻的微藻滤液为研究对象,考察pH、时间、料液体积比和溶剂等因素对生长抑制物提取效果的影响,确定了球等鞭金藻的微藻滤液中生长抑制物的适合提取工艺;通过比较两种型号的葡聚糖凝胶对生长抑制物粗提物的分离效果,确定了适合的凝胶类型;同时研究温度对生长抑制物抑制活性的影响以及生长抑制物对其他微藻生长的抑制作用。结果表明:生长抑制物的适宜提取工艺为pH 2~4、提取时间3 h、料液体积比10∶1、溶剂为乙酸乙酯;Sephadex G-15凝胶对生长抑制物的分离效果好于Sephadex G-25;生长抑制物的抑制活性具有很强的热稳定性,其对角毛藻和小球藻有明显的抑制作用。     

3种典型海洋微藻的细胞增殖特性研究

目的研究硅藻门的三角褐指藻Phaeodactylum tricornutum、甲藻门的东海原甲藻Prorocentrum donghaiense和金藻门的球形棕囊藻Phaeocystis globosa的细胞增殖情况,为认识其基本生物学特性,推动海洋微藻在医药保健食品行业的应用提供参考。方法选取上述3种海洋微藻为生物材料,以添加f/2营养液的人工海水为培养介质,在植物培养箱中利用三角瓶开展为期2周的一次性培养实验。利用倒置显微镜和血球计数板观测微藻细胞密度,采用最小二乘法拟合法计算微藻日生长速率。结果 3种海洋微藻的细胞生长均经历缓慢期、快速期和平稳期3个阶段;实验结束时,三角褐指藻、东海原甲藻和球形棕囊藻的细胞密度分别约为1.126×107、1.167×107和1.210×107个/mL;其最大生长速率分别出现在第2天(1.11/d)、第4天(1.13/d)和第3天(1.02/d)。结论 3种海洋微藻的细胞增殖具有多样性;它们的最大细胞密度和日生长速率出现的时间或程度均存在一定的差异,提示在进行经济微藻培养生长过程中必须考虑各藻种的细胞增殖特性。     

转染杜氏盐藻14-3-3基因对食管鳞癌EC9706细胞Bcl-2和Caspase-9蛋白表达的影响

目的:探讨转染杜氏盐藻14-3-3基因对食管鳞癌EC9709细胞Bcl-2和Caspase-9蛋白表达的影响.方法:将杜氏盐藻14-3-3基因cDNA序列分别亚克隆入表达载体pEGFP-C1和pcDNA3.1(+)的Hind Ⅲ和Bam H Ⅰ位点,构建真核表达载体pEGFP-C1-14-3-3和pcDNA3.1(+)-14-3-3,采用脂质体方法转染EC9706细胞,同时设立空载体对照和空白对照,荧光显微镜观察pEGFP-14-3-3融合蛋白在EC9709细胞中的定位;G-418筛选稳定转染pcD-NA3.1(+)-14-3-3的细胞株,采用RT-PCR和Western blotting法检测14-3-3基因的表达;Western blotting检测3种细胞中Bcl-2和Caspase-9蛋白的表达.结果:pEGFP-14-3-3融合蛋白定位于EC9706细胞的细胞核;通过G-418筛选,最终获得稳定表达盐藻14-3-3基因的转染细胞株;与转染空载体和空白对照的EC9706细胞相比,转染pcDNA3.1(+)-14-3-3的EC9706细胞中Bcl-2蛋白表达量明显增高[(1.60±0.20)、(0.90±0.15)和(2.40±0.10);F=69.889 7,P＜0.001],而Caspase-9蛋白表达量明显降低[(1.00±0.04)、(1.40±0.08)和(0.40±0.05);F=217.066 7,P＜0.001].结论:杜氏盐藻14-3-3基因可能在EC9706细胞凋亡过程中发挥了抑制作用.     

3种具药用价值绿藻的生长特性比较研究

目的比较研究具潜在药用价值的亚心形扁藻Platymonas subcordiformis、眼点拟微绿球藻Nannochloropsis ocutala、海洋小球藻Chlorella vulgaris 3种绿藻门海洋微藻的细胞生长特性,为海洋微藻在医药保健食品行业的应用提供参考依据。方法选取上述3种海洋微藻为生物材料,以添加f/2营养液的人工海水为培养介质,在光照培养箱中利用三角瓶开展一次性培养实验。利用显微镜观测微藻生长14 d内的细胞密度变化情况,采用最小二乘法拟合细胞密度法计算微藻生长速率。结果在实验周期内,3种海洋微藻的细胞生长曲线均呈现出"S"型。在生长平稳期,亚心型扁藻、眼点拟微绿球藻和海洋小球藻的细胞密度分别约为1.30×106、3.50×107和2.45×107个/mL;最大生长速率分别约为0.7/d、0.8/d和1.5/d。结论上述3种具药用价值绿藻的细胞增长经历明显的缓慢期、快速期和平稳期阶段;不同微藻的细胞生长特性差异较大,在进行其高密度培养开发应用时应结合考虑品种特性与收获时期。     

不同培养容器和光照对2种微藻生长的影响

目的 研究具药用价值的海洋微藻杜氏盐藻Dunaliella salina和亚心形扁藻Platymonassubcordiformis在不同培养容器以及光照下的细胞生长情况,为促进海洋微藻生物资源的培养保存提供参考.方法 选取杜氏盐藻和亚心形扁藻2种海洋微藻为生物材料,在植物培养箱中分别利用三角瓶和试管,在正常光照和遮光光照条件下开展为期10 d的一次性培养试验,利用倒置显微镜和血球计数板观测微藻细胞密度,统计分析不同培养容器和光照对2种海洋微藻生长影响的作用.结果 在该实验条件下,2种海洋微藻的细胞生长均表现出初期生长缓慢、中期生长快速、后期生长放缓的趋势.杜氏盐藻在三角瓶中正常光照培养条件下的生长最好(504× 104个/mL),其次为在试管中正常光照培养的条件下(364× 104个/mL);亚心型扁藻细胞在三角瓶中正常光照培养的条件下生长最好(227×104个/mL),其次为在三角瓶中遮光处理的条件下(177× 104个/mL).结论 培养容器(三角瓶和试管)和光照(正常光照和遮光)对2种海洋微藻生长的影响均具有统计学意义,在进行微藻生物资源培养和保存时,应充分考虑或利用这2种因素的作用.     

中国南海海绵Ircinia sp.中化学成分的研究

目的:对采自广西涠洲岛海域海绵Ircinia sp.进行化学研究以获得结构新颖的新化合物。方法:运用高速逆流色谱、凝胶渗透色谱、硅胶柱色谱和半制备型高效液相色谱等多种技术分离纯化,再通过氢谱、碳谱和质谱等谱学解析方法鉴定出单体成分的结构。结果:从海绵Ircinia sp.中分离鉴定出5个化合物,分别命名为cholest-7-en-6R-methoxy-3S,5R-diol(1),cholest-7-en-3S,5R,6R-triol(2),cholest-7,22-dien-6R-methoxy-3S,5R-diol(3),鲨肝醇(4)和邻苯二甲酸正丁酯(5)。结论:化合物1～3为首次从该属海绵中分离得到。     

中国广西涠洲岛海域海绵Callyspongia sp.的化学成分研究

目的:对采自中国广西涠洲岛海域海绵Callyspongia sp.的化学成分进行分离和结构鉴定。方法:采用硅胶薄层色谱、柱色谱、凝胶渗透色谱LH-20,半制备HPLC等方法对采自中国广西涠洲岛海域海绵Callyspongia sp.的次生代谢产物进行化学分离,并通过核磁共振谱(1D、2D NMR)、质谱 (ESI - MS)等方法,确定化合物的结构。结果:共分离得到8个化合物,分别为牛磺酸（1）、乙酰牛磺酸（2）、N-甲基吡啶-2-羧酸盐（3）、zooanemonin（4）、N-丁基乙酰胺（5）、尿嘧啶（6）、3-甲基尿嘧啶（7）、苯甲酸（8）。结论:化合物1-5和7-8均为首次从该属海绵中分离得到。     

一株新海洋细菌生物学特性及其色素性质的研究

目的 研究一株产灵菌红素海洋细菌的生物学特性及其色素的性质、方法 描述该菌的形态特征、培养特征、生理生化特征和拮抗性。结果 该菌次级代谢产物灵菌红素,随着pH的变化色素颜色会随之变化,在pH3．0左右稳定性最好;且在该pH值条件下,紫外线对色素的稳定性影响较小。结论 色素的热稳定性高;部分金属离子对该色素影响较小;作为天然色素及药物资源具有开发和应用价值。     

应激/创伤后成长评定量表在某部海军陆战队员中的信效度检验

目的 使用应激/创伤后成长评定量表(posttraumatic growth inventory,PTGI)在海军陆战队员中进行测量并检验其信效度.方法 采用中文版创伤后成长量表、心理弹性量表、特质焦虑量表和一般效能感量表对经历高强度军事训练和应激事件的65 1名海军陆战队员进行调查研究.将样本按序号奇偶分半,样本1(n=326)用于探索性因素分析,样本2(n =325)用于验证性因素分析和信度检验.结果 ①探索性因素分析保留了量表的17个题项,发现特征根值大于1的因子有3个(个人力量、人际关系和接纳现状),能解释总方差的54.00％.②验证性因素分析表明三因素模型拟合良好(x2/df=2.793,CFI=0.909,TLI=0.893,RMSEA=0.074).③3因子结构的量表内部一致性信度α=0.910.④修订后的量表总分与心理弹性、一般自我效能感呈中等程度的显著正相关(r =0.560,r=0.487,P＜0.01),与特质焦虑呈中等程度的显著负相关(r=-0.436,P＜0.01),表明量表具有良好的效标效度.结论 修订后的3因子PTGI信、效度检验达到心理测量学要求,可用于海军陆战队员的应激/创伤后成长的评估.     

大戟内生真菌对其生长和两种萜类物质量的影响

目的 探讨内生真菌促进大戟药材生产的方法。方法 接种大戟内生真菌到大戟组培苗,将建立共生后的组培苗移栽室外,生长1年后,检测生物量和萜类的量。结果 内生真菌E4(Fusarium sp.Ⅰ)和E5(Fusarium sp. Ⅱ)均促进了宿主植物生长,使根的鲜质量分别提高了49.45%和59.74%;并使大戟的折干率提高了2.99%和6.48%;同时提高了大戟组培期和室外生长1年后二萜物质异大戟素和三萜物质大戟醇的量。室外生长1年后,E4处理组,异大戟素和大戟醇分别比对照提高了92.79%和40%;E5处理组,异大戟素和大戟醇分别比对照提高了105.32%和241.38%。结论 内生真菌E4和E5对大戟有促生长作用,并能同时促进其萜类的合成。     

某地区肺癌住院患者直接经济负担城乡差异比较研究

目的 探讨城乡肺癌患者的直接经济负担的差异.方法 采用自制问卷对某市三级医院肺癌住院患者进行抽样调查.以样本医院的住院患者的城乡别为分组,考察门诊、自购药和住院费用及其中的城乡差异.结果 城乡患者人均门诊和住院医疗费用比较差异无统计学意义(P＞0.05),但是在自付费用上农村患者均高于城市,且自付比例比较差异有统计学意义(P＜0.05).新农合的保障水平并不能使农村患者免于疾病经济风险,且农村患者就医成本高昂.结论 降低就医成本的关键在于引导患者合理利用卫生服务,需要提高新农合保障水平,制订适宜大病诊治的特殊补偿方案.     

中国东部三市耐多药结核病患者经济负担研究

目的 了解中国东部三市耐多药结核病(multi-drug resistant tuberculosis,MDR-TB)患者的经济负担情况,寻找减轻患者经济负担的方法.方法 采用自行设计的调查问卷对正在治疗的江苏省徐州市、宿迁市和江西省赣州市定点医院登记治疗的MDR-TB患者进行面对面调查,对已经结束治疗的患者进行电话调...     

中国南海硬棘软珊瑚Scleronephthya sp.的活性成分研究

目的研究中国南海硬棘软珊瑚Scleronephthya sp.生物活性成分。方法利用正、反相硅胶柱层析、Sephadex LH-20以及HPLC等层析手段对一种硬棘软珊瑚中的生物活性成分进行分离。应用波谱分析技术并结合文献数据,对所得的化合物进行结构鉴定。采用琼脂扩散试验对分离得到的化合物进行体外抗微生物活性测试。结果和结论从该种硬棘软珊瑚中分离得到3个过氧化麦角甾醇(1～3)、鲛肝醇(4)、鲨肝醇(5)和1,2-O-十八烷基甘油缩醛(6)。初步体外抗微生物活性筛选发现这些化合物均有不同程度的抗菌活性。化合物5对大肠杆菌和巨大芽孢杆菌具有一定的抑制活性,化合物6对花药黑粉菌具有很强的抑制活性。化合物1～4仅显示微弱的抗微生物活性。