维甲酸诱导小鼠腭裂发病机制的实验研究

目的 观察维甲酸（retinoic acid,RA)诱导胚鼠腭突发育的形态学变化，探讨胚鼠腭部转化生长因子（transforming growth factor,TGF)β1、TGFβ3、表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF)及BCL2的表达在RA诱导腭裂发病机制中的意义。方法 采用显微镜观察胚腭的发育过程，原位杂交和免疫组化检测TGFβ1、TGFβ3、EGF及BCL2基因在胚腭中的表达。结果 RA引起双侧腭突的形成，使双侧腭突不能接触或接触后不能融合形成中嵴上皮带，以及可调控TGFβ1、TGFβ3、EGF及BCL2在鼠胚腭部的表达。结论 RA抑制中嵴上皮细胞（MEPM）增殖，引起双侧腭突的形成，诱导MEE细胞殿堂分化，使双侧腭突不能接触融合，而最终导致腭裂形成及TGFβ1、TGFβ3、EGF在鼠胚腭部表达的变化与RA诱导腭裂的形成密切相关。     

转化生长因子β与腭裂发生的研究进展

腭裂是人类常见的先天性畸彤，研究显示多种细胞因子及其受体在腭发育中起着重要的作用．研究这些细胞因子及其信号通路为腭裂病因学的探索提供了一个重要线索，其中转化生长因子β（TGFβ）及其受体受到了广泛的关注。本文就TGFβ及其受体的结构和功能、TGFβ信号通路及其与腭裂的相关性研究作一综述。     

转化生长因子βⅢ型受体在腭融合中的作用

为了探明腭裂的分子病理机制,腭形成的分子调节机制成为连续的研究热点。转化生长因子Ⅲ型受体(transforming growth factor-β type Ⅲ receptor,TβR-Ⅲ)在腭黏附的关键时期特异表达在中嵴上皮(medial edge epithelial,MEE)。本研究的目的是探明TβR-Ⅲ mRNA和蛋白在胎鼠体内的定位和表达水平,以及确定体外腭融合期间对TβR-Ⅲ表达的需求。     

维甲酸受体-β基因联合维甲酸对Tca8113细胞的凋亡诱导作用

目的　研究已证实维甲酸受体 -β( Retinoic acid receptor-beta,RARβ)对某些类型的恶性肿瘤细胞有诱导分化和凋亡作用。现观察转导 RARβ基因联合全反式维甲酸 ( all trans retinoic acid,ATRA)对 Tca8113细胞的凋亡作用。方法　先应用脂质体将 RARβ基因导入 Tca8113细胞中 ,然后采用活细胞计数、透射电镜、流式细胞仪等方法观察 ATRA对转基因细胞的凋亡影响和生长抑制作用。结果　转 RARβ基因 Tca8113细胞在 1μmol/LATRA作用 10天后 ,细胞生长抑制率达 90 .2 % ;光镜和透射电镜下观察都可见到典型形态变化的凋亡细胞 ;FCM测定结果表明 ,细胞凋亡率高达 80 .7%。而母本细胞 Tca8113凋亡率小于 2 0 %。结论　 RARβ基因可能是 ATRA诱导 Tca8113细胞产生显著凋亡作用的“靶分子”。 RARβ基因联合维甲酸治疗某些口腔鳞癌将是有效和可行的。     

全反式维甲酸和三氧化二砷对人口腔鳞癌细胞系KB细胞周期的影响

目的研究全反式维甲酸（all-trans retinoi cacid,ATRA）和三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）诱导分化对人口腔未分化鳞癌细胞系KB细胞周期的影响及意义。方法采用流式细胞技术观察人口腔未分化鳞癌细胞系KB细胞经不同浓度ATRA和As2O3诱导分化后96h时的细胞周期的变化。结果ATRA作用于KB细胞后,加药组与对照组相比,被阻断在G1期的细胞比率轻度升高,S期比率下降,抑制率随浓度增高无明显升高的趋势。As2O3三个不同浓度作用KB细胞96h时,没有明显改变各细胞周期所占的比例。抑制率随作用浓度的增加而升高。结论ATRA和低浓度As2O3对人口腔未分化鳞癌细胞系KB细胞具有诱导分化作用,ATRA诱导KB细胞分化可能与G1、G0期阻滞有关。     

OLP中TNF-α、TGF-β1及其受体与细胞凋亡的关系和临床意义

目的 研究肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及其受体TNFR1，转化生长因子-β1（TGF-β1）及其受体TGFβR1在口腔扁平苔藓（OLP）的定位表达，以及与细胞凋亡的关系。方法 采用免疫组化法定位检测OLP组织和正常口腔粘膜（NOM）TNF-α、TNFR1、TGF-β、TGFβR1的蛋白表达；应用原位缺口末端标记技术，检测OLP、NOM组织细胞凋亡情况。结果 TNF-α、TNFR1在OLP组织（上皮层和固有层）内表达均有增强，明显高于对照组，二者在OLP上皮内可分布于上皮细胞，TNF-α多见于巨噬细胞和淋巴细胞，TNFR1则主要分布于部分巨噬细胞。TGF-β1在OLP固有层以及TGFβR1在上皮层和固有层的表达均有增强。TGFβR1可见于OLP全层上皮细胞，在固有层，TGF-α、TGFβR1则主要分布于成纤维细胞、血管内皮细胞和部分巨噬细胞内，二者在淋巴细胞内少见。细胞凋亡在OLP上皮层高于正常。上皮层中其阳性细胞集中分布于下部或全层上皮细胞。上皮层TNF-α表达与凋亡指数呈高度正相关。结论 TNF-α、TNFR1可能是促使上皮细胞凋亡的因素之一。TNFR1、TGF-β1、TGFβR1在OLP淋巴细胞内表达缺失，可能导致OLP痛程慢性迁延。     

全反式维甲酸联合干扰素-γ对Tca8113细胞维甲酸受体基因表达的影响

目的　研究已证实,全反式维甲酸(Alltransretinoicacid,ATRA)联合γ干扰素(Interferonγ,γIFN)对舌鳞癌细胞系(Tca8113)细胞有协同抗增殖和诱导调亡作用?维甲酸受体β(Retinoicacidreceptorsβ,RARβ)是介导维甲酸对鳞癌细胞起作用的关键基因。为了明确ATRA联合IFNγ对Tca8113细胞协同抗增殖作用机理,我们对RARβmRNA表达进行了研究。方法　在该研究中采用了RTPCR半定量检测方法检测RARβ表达水平;活细胞计数法用来进行观察细胞生长抑制情况。结果　1μmolL全反式维甲酸和1000μmlIFNγ单独应用时对Tca8113细胞生长抑制率分别为39.2%和44.4%。该两种药物联合应用时产生明显协同抗增殖作用(86.7%),并且发现IFNγ与低于有效药物浓度的ATRA(0.1μmolL)共同作用时亦能产生协同抗增殖效果。ATRA(1μmolL)、FINγ(1000μml)分别处理Tca8113细胞后其RARβ转录水平分别提高4倍和3倍,以上浓度的ATRA和IFNγ共同处理后,细胞RARβ转录水平增高12倍。结论　研究结果表明,IFNγ与ATRA联合应用能显著提高其对Tca8113细胞的抗增殖作用,而且证明IFNγ协同ATRA上调RARβ基因转录表达是其对Tca8113细胞产生协同抗增殖作用的关键机理所在。     

TGF-β2诱导小鼠腭突细胞成软骨分化的研究

目的 探讨转化生长因子β2(transforming growth factor-β2,TGFβ2)诱导小鼠腭突细胞成软骨分化的作用.方法 取胎龄13.5天的小鼠分离培养腭突细胞,并分别加入不同的细胞因子进行成软骨诱导培养.A组为空白对照组,B组为TGFBR1(转化生长因子受体1)抑制剂-SD208组,C组为加入TGF-β2组,D组SD208+TGF-β2组.通过比较蛋白聚糖、蛋白聚糖半定量,以及软骨标志基因的表达水平,评价各组细胞因子诱导腭突细胞成软骨能力大小及作用.结果 在TGF-β2作用下腭突细胞向软骨细胞分化,TGF-β2组蛋白聚糖及软骨相关基因表达量最高,显著高于A、B、D组(P<0.01).B、D组蛋白聚糖及软骨相关基因的表达量较A组明显降低(P<001).结论 腭突细胞在TGF-β2诱导下具有成软骨分化能力.     

骨形态发生蛋白受体2在维甲酸诱导腭裂小鼠胚胎腭突中的表达

目的 探讨全反式维甲酸（atRA）对小鼠胚胎腭突中骨形态发生蛋白受体 2（BMPR2）表达的影响。方法 通过 atRA灌胃的方法建立 atRA诱导的小鼠腭裂模型,取妊娠 15 d（GD15）和 17 d的（ GD17）的胚胎腭部进行苏木精-伊红染色,并用免疫组织化学及逆转录聚合酶链式反应技术检测 BMPR2在胚胎腭部的表达。结果 atRA诱导小鼠形成体积较小的畸形腭突和明显的中缝腭裂畸形。 BMPR2在GD15和GD17正常胚胎腭部有高水平的阳性表达,但在腭裂胚胎腭部的表达水平明显减弱。正常胚胎腭部 Bmpr2 mRNA在GD15和GD17的表达水平均明显高于腭裂胚胎（ P<0.05）。结论 atRA可导致小鼠胚胎腭突发育不良形成腭裂,并显著下调 BMPR2表达水平,从而影响腭部发育的正常分子调控过程。     

转化生长因子-β-Smad信号通路在腭发育中的作用

腭发育过程的信号调节复杂,转化生长因子(TGF)-β家族在其中起重要作用。TGF-β-Smad通路是TGF-β信号调控的重要途径。下面就TGF-β家族在腭发育中的表达情况、其信号通路TGF-β-Smad的具体途径以及与腭裂发生的关系进行综述。     

RARβ基因联合维甲酸体内抗口腔鳞癌作用机制研究

目的:探讨维甲酸受体β(nuclearretinoicacidreceptorbeta,RARβ)基因联合全反式维甲酸(alltransretinoicacid,ATRA)对荷口腔鳞癌裸鼠体内抗癌作用的机制。方法:ATRA、RARβ+ATRA和生理盐水分别治疗舌鳞癌移植瘤裸鼠4周,第四周末处死所有20只动物,取部分肿瘤组织固定后行常规病理切片,HE染色后光镜下观察并照相。切取部分肿瘤组织固定后行超薄切片和染色,透射电镜观察并照相记录。取部分新鲜组织,应用机械法制备单细胞悬液,PI染色后流式细胞仪检测细胞凋亡,Lysis软件分析凋亡细胞比例。结果:肿瘤组织剖面呈鱼肉状、质脆,中央有坏死;光镜下见空白对照组肿瘤细胞增殖旺盛,细胞呈不均一圆形,核浆比例大,核染色深,核分裂相较多;ATRA和RARβ+ATRA治疗组细胞核分裂少见;ATRA处理组可见部分细胞核固缩;RARβ+ATRA治疗组有较多细胞出现核固缩,呈片状分布,偶见细胞片状坏死。空白对照组肿瘤细胞平均凋亡率为6.3%,ATRA组和RARβ+ATRA组凋亡率分别为16.4%和16.6%。两者与对照组相比凋亡率明显增高(P<0.05),但两处理组差别不明显。透射电镜下空白对照组肿瘤细胞呈多角形,核大,核仁多,分裂相较多,凋亡细胞极少。ATRA组可见散在的凋亡细胞,表现为细胞皱缩,变小、变圆,染色质固缩、边聚,细胞浆浓缩。RARβ+ATRA组可见较     

腭发育不同时期维甲酸对腭突细胞增殖和凋亡的影响

目的研究维甲酸对小鼠腭突融合期细胞增殖和细胞凋亡的影响。方法在SPF级C57BL/6J近交系母鼠妊娠10 d和12 d给予维甲酸（RA）建立小鼠腭裂模型,利用BrdU免疫组化方法和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测胚胎15 d（即腭突融合期）小鼠腭突中细胞增殖及细胞凋亡的表达和分布。结果10 d给药组腭胚间充质细胞及腭中嵴上皮细胞中BrdU阳性细胞率和TUNEL阳性细胞率均低于对照组,12 d给药组和对照组BrdU阳性细胞率和TUNEL阳性细胞差异无统计学意义。结论维甲酸作用于腭发育的不同时期对腭突细胞增殖及凋亡水平有不同的影响,作用于腭突发生前期可引起腭间充质细胞增殖抑制、凋亡过度而发生腭裂,作用于腭突快速生长期可能影响腭中嵴上皮细胞的上皮间充质转化和迁移等其他转归形式。     

牙周膜肌成纤维细胞的体外培养及其标志物的表达时效

目的：探讨人牙周膜肌成纤维细胞（MFB）体外培养及其标志物表达的时效性。方法???体外培养人牙周膜成纤维细胞（hPDLF）,72?h内以5μg?L-1终质量浓度的转化生长因子（TGF）-β1诱导hPDLF向MFB转化,免疫细胞化学和免疫组织化学染色检测MFB标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达情况。分别进行12、24、48、72、96和120?h的MFB观察,采用流式细胞术观察MFB长时间培养的细胞活性,采用免疫细胞化学观察MFB长时间培养后的α-SMA表达情况。结果??经TGF-β1诱导后α-SMA呈阳性;诱导至120?h,α-SMA仍呈阳性,72?h内其表达稳定。结论5μg?L-1终质量浓度的TGF-β1成功诱导人牙周膜细胞向MFB转化。MFB体外培养具有时效性,培养0~72?h,其状态稳定。     

重组人肿瘤坏死因子与维甲酸诱导涎腺腺样囊性癌细胞凋亡的实验研究

目的：探讨重组人肿瘤坏死因子α（recombined human tumor necrosis factor-α，rhTNF-α）和全反式与维甲酸（all-trans retinoic acid,ATRA)对涎腺腺样囊性癌SACC细胞凋亡的诱导作用。方法：应用光镜，电镜观察凋亡细胞形态学的改变，采用流式细胞术检测用药后细胞凋亡率及细胞周期的变化，结果：在采用rhTNF-α或ATRA诱导72h后,光镜观察发现癌细胞核缩小，染色质呈新月状；电镜观察发现癌细胞胞核固缩，染色质边集，出现死亡的形态学改变，流式细胞术检测发现，用药24h后凋亡峰开始形成，72h后细胞凋亡率最高。结论：rhTNF-α与ATRA可诱导体外SACC细胞发生凋亡。     

维甲酸诱导腭裂相关wnt和成纤维细胞生长因子配体表达的动态变化

目的 筛选与维甲酸诱导腭裂相关的wnt和成纤维细胞生长因子(FGF)信号分子,观察其在正常腭突发育和维甲酸诱导腭裂形成不同阶段的表达动态变化.方法建立维甲酸诱导腭裂小鼠模型,制作基因芯片并筛选wnt和FGF信号通路相关基因.根据芯片结果选出wnt经典通路配体wnt3和wnt8a、FGF通路配体fgf9和faf10,并应...     

转化生长因子β对舌癌细胞系Tca83生长的影响

目的：观察转化生长因子β（TGF－β）对于Tca83细胞生长的作用。方法：舌癌细胞常规培养,以MTT检测细胞增殖,免疫组化,原位杂交检测TGF－β及其受体TβRⅠ的表达。结果：加入TGF－β96h后,大多数实验组细胞的生长受到抑制。这种抑制作用 与TGF－β的浓度有关,较低浓度的TGF－β（0．2、1．0、5．0和12．5μg/L）,其A值分别为0．735、0．758、0．760和0．757）能够抑制Tca83细胞的生长（与对照组A值0．911比较,P＜0．01）,而高浓度（25．0μg/L）的TGF－β反而失去了这种抑制作用。Tca83细胞系中可检出TGF－β1、TGF－β受体（TβR）Ⅰ的蛋白及mRNA的阳性表达、TβRⅡ蛋白的阳性表达。结论：TGF－β能抑制Tca细胞的生长。Tca83细胞内的TβRⅠ及TβRⅡ表达使这种抑制作用成为可能。     

维甲酸受体在头颈部鳞癌维甲酸诱导分化治疗中的作用

核维甲酸受体(nuclear retinoic acid receptors,RARβ)与头颈部鳞状细胞癌的发生、发展存在着特定关系,RARβ在癌变早期开始下降,在癌组织中表达明显降低或缺失。应用维甲酸类分化诱导剂可以提高RARβ基因表达水平,其升高程度与治疗效果成正相关。因此,RARβ有希望成为检测头颈部癌变以及评价维甲酸诱导分化治疗效果的标记物。     

口腔黏膜白斑组织转化生长因子-β受体Ⅱ及受体Ⅲ的表达

目的研究转化生长因子-β受体Ⅱ(transforming growth factor type-Ⅱreceptor,TβRⅡ)及转化生长因子-β受体Ⅲ(transforming growth factor type-Ⅲreceptor,TβRⅢ)在口腔黏膜白斑组织中的表达情况。方法应用免疫组织化学技术分析临床收集的25例口腔正常黏膜组织、21例不伴上皮异常增生的口腔白斑组织、24例伴有异常增生的口腔白斑组织中TβRⅡ和TβRⅢ的表达。结果 TβRⅡ弥漫性强阳性细胞数正常组织中为40.0%,白斑不伴异常增生组织中下降到32.3%,白斑伴有异常增生组织中下降到19.7%,差异有统计学意义(P=0.039)。TβRⅢ弥漫性强阳性细胞数正常组织中为28.0%,白斑不伴异常增生组织中下降到19.1%,白斑伴有异常增生组织中下降到12.6%,差异有统计学意义(P=0.032)。结论 TβRⅡ和TβRⅢ的表达下调在口腔黏膜癌变过程中是一种频发现象,且可以发生在癌变的早期阶段即口腔白斑组织中。     

转化生长因子β1对体外成牙本质细胞分化的影响

目的：观察转化生长因子β1（transforming growth factorβ1，TGF－β1）对体外培养鼠牙乳头成本本质细胞分化的影响。方法：取17d胎龄小鼠下颌第一磨牙牙胚，胰腺蛋白消化分离牙乳头，置半固态培养基培养6d，半固态培养基中加入重组转化生长因子β1和肝素，组织学观察。结果：TGF－β1加肝素可诱导牙乳头周边细胞发生极化，并分泌胸外基质，单独加入TGF－β1未见细胞极化，但基质分泌增加，结论：TGF－β1能诱导前成牙本质细胞的细胞学和功能上分化。     

转化生长因子β受体在牙胚发育过程中的表达和意义

目的：探讨转化生长因子β受体在牙胚发育过程中的时空表达和对牙胚发育的影响。方法：建立小鼠牙胚发育模型，用免疫组织化学检测转化生长因子βⅠ型受体（ＴβＲ－Ⅰ）、Ⅱ型受体（ＴβＲ－Ⅱ）、Ⅲ型受体（ＴβＲ－Ⅲ）在牙胚发育中的表达。结果：转化生长因子βⅠ型受体、Ⅱ型受体在牙胚发育的蕾状期、帽状期、钟状期以及硬组织形成期均有表达，且随着成釉细胞和成牙本质细胞的逐渐成熟，表达增加，其中Ⅰ型受体比Ⅱ型受体表达量多，Ⅲ型受体仅在蕾状期的成釉器上皮和钟状期的内外釉上皮、牙囊有弱表达。结论：转化生长因子β受体在牙胚发育过程中的时空表达与成釉细胞、成牙本质细胞的分化密切相关。