密度梯度离心法分离脐血单个核细胞方法的优化

目的 对密度梯度离心法分离脐血单个核细胞的方法进行优化,以提高该方法分离脐血单个核细胞的收率.方法 脐血40份,每份40 ml,分为常规组和优化组,每组20份.常规组脐血与NS1∶1混合稀释后,直接通过Ficoll分离液分离单个核细胞;优化组通过先将脐血洗涤一次,加入等量NS充分吹打混匀,200目筛网过滤,保持细胞悬液和Ficoll分离液1:1的体积比进行分离操作.对每份分离得到的脐血单个核细胞通过白细胞稀释液稀释后计数.结果 常规组分离后的白膜层有11份界面不清晰,同时均混有少量的红细胞.优化组分离后的白膜层有1份界面不清晰,仅有极少的红细胞混入.两种方法收集的脐血单个核细胞数比较,优化组多于常规组(P＜0.01).结论 通过对密度梯度离心法的步骤进行优化,可提高脐血单个核细胞的分离效果.     

脐血干细胞的分离方法比较

目的:为合理选择脐血干细胞的分离方法提供参考.方法:采用改良HES(羟乙基淀粉)沉降分离法和Ficoll分离法分离脐血干细胞,比较两种方法分离前后的有核细胞数、分离后的CD34 细胞数、分离后的有核细胞回收率及台盼蓝拒染率.结果:改良HES沉降分离法和Ficoll分离法分离前的脐血量、有核细胞浓度和细胞数差异无统计学意义(P＞0.05);分离后改良HES法有核细胞数、CD34 细胞数、有核细胞回收率高于Ficoll 分离法(P＜0.05),而显示有核细胞活力的台盼蓝拒染率两种方法比较差异无统计学意义 (P＞0.05).结论:改良HES分离法的有核细胞回收率高,分离速度快、污染机会小、终体积小,是脐血干细胞分离较好的方法.     

脐血造血干细胞低温保存方法的探讨

目的 探讨脐血造血细胞的低温保存方法。方法 分别用程控降温液氮保存法、非程控降温液氮保存法和-80℃非程控降温保存法保存脐血有核细胞。结果 3种方法保存脐血有核细胞均获得较满意的结果。结论 用羟乙基淀(HES)自然沉淀法和低速离心法分离脐血有核细胞，获得较满意的回收率；用-80℃非程控降温保存法保存脐血有核细胞，可降低二甲基亚砜(DMSO)对细胞的毒性作用，适用于短期保存造血细胞。     

骨髓基质细胞联合细胞因子对脐血CD133+细胞体外扩增作用的研究

为了探讨胚胎骨髓基质细胞(FBMSC)联合细胞因子对脐血单个核细胞(MNC)中CD133+细胞的体外扩增作用,将新鲜脐血(CB)中分离出来的MNC接种于无血清培养体系中培养14天.实验分为4组:C组为空白对照组,不含基质细胞和细胞因子;S组为单用基质细胞组;F组为单用细胞因子组;SF组为联合使用基质细胞和细胞因子组.在第0,6,10及14天检测有核细胞总数、CD133+细胞数及集落形成单位(CFU)数.结果表明:各时间点SF组有核细胞总数的扩增倍数均高于其它组;除了第14天外,SF组在第6、10天时CD133+细胞数、CFU数的扩增倍数均高于其它组.结论:胚胎骨髓基质细胞对延缓造血细胞的分化具有重要的作用,基质细胞联合细胞因子可以有效的扩增脐血单个核细胞及其中的CD133+细胞,这是一种比较接近于临床移植要求的造血细胞体外扩增方法.     

脐血来源树突状细胞的体外诱导及扩增

本研究的目的是分析脐血的细胞组成 ,研究加入细胞因子培养前后脐血树突状细胞的变化 ,探索体外诱导、扩增树突状细胞的方法并进行表型鉴定。选择正常成人外周血 9份 ,脐血 12份 ,分离单个核细胞。在脐血单个核细胞中加入细胞因子GM CSF、IL 3、SCF和EPO ,培养 4周。应用流式细胞仪和CD4、CD8、CD19、CD34、CD38、CD1a、CD11c及CDw12 3单克隆抗体测定正常成人外周血、培养前后 1,2 ,3,4周脐血细胞表面抗原及树突状细胞情况。结果表明 :正常成人外周血CD34 细胞 0 .0 2× 10 5 ml,CD1a 细胞 0 .0 1× 10 5 ml,CD11c 细胞 4 .32×10 5 ml,CD83 细胞 1.31× 10 5 ml,CDw12 3 细胞 1.4 1× 10 5 ml。新鲜脐血中CD34 细胞 0 .2 2× 10 5 ml,CD1a 细胞 0 .2 7× 10 5 ml,CD11c 细胞 5 .87× 10 5 ml,CD83 细胞 1.94× 10 5 ml,CDw12 3 细胞 2 .73× 10 5 ml。加入细胞因子GM CSF ,IL 3,SCF ,EPO后培养 1- 4周的脐血单个核细胞分化为CD1a ,CD11c ,CD83 ,CDw12 3 树突状细胞 ,在培养的 2 - 4周 ,脐血树突状细胞数量明显增多 ,此后逐渐减少。通过培养 ,树突状细胞数量增加 ,CD1a 细胞达 11.0 2× 10 5 ml,CD11c 细胞 2 8.2 4× 10 5 ml,CD83 细胞 10 .5 7× 10 5 ml,CDw12 3 细胞 18.7× 10 5     

脐血间充质干细胞支持下脐血单个核细胞扩增的研究

目的 探讨脐血源间充质干细胞联合外源性细胞因子对脐血单个核细胞体外扩增的支持作用.方法 从脐血中分离、培养出间充质干细胞并检测其细胞表面抗原;以此间充质干细胞作为细胞滋养层.将脐血单个核细胞接种于无血清培养体系中培养18天,在第0、7、10、14及18天检测有核细胞总数、CD34+、CDl33+细胞数、集落形成单位数和(G2+M+S)期细胞含量变化.结果 ①从脐血中分离、培养出的间充质干细胞能稳定表达CD29、CD105和CD44,但不表达CD34和CD133;②外源性细胞因子及脐血源间充质下细胞均支持脐血间充质干细胞扩增,但以细胞因子联合脐血源间充质干细胞组效果最好,在第10天上述榆测指标达到峰值,分别为第0天的(6.91±1.91)、(7.75±1.24)、(6.49±1.33)、(15.62±1.29)和(28.26±6.58)倍,且维持造血至少18天.结论 ①从脐血巾能成功分离、培养出间充质下细胞,并完成细胞表型的初步鉴定;②外源性细胞因子联合脐血源间允质干细胞可有效扩增脐血单个核细胞.     

脐血贴壁层细胞和骨髓基质细胞对脐血单个核细胞增殖能力的影响

目的:比较脐血贴壁层细胞和骨髓的基质细胞对脐血单个核细胞增殖能力的影响.方法:实验于2005-02/07在吉林省肿瘤防治研究所完成.①对象:正常足月顺产儿脐带由长春市妇产医院提供;肋骨取自吉林省肿瘤医院外科手术患者,排除血液疾患.产妇及外科手术患者对治疗及实验均签署知情同意书,实验经医院医学伦理委员会批准.②实验方法:采用红细胞裂解法制备有核细胞,以Ficoll-paque淋巴细胞分层液按密度梯度离心法分离出脐血单个核细胞,体外培养24 h后去除悬浮细胞,收集脐血贴壁层细胞,加入到24孔板中,2×106 L-1/孔,再加入含12.5%马血清、12.5%胎牛血清、1×10-7 mol/L氢化考地松的IMDM培养体系1 mL.将肋骨剪成3 cm小块,冲洗髓腔收集细胞悬液,用淋巴细胞分层液分离出骨髓单个核细胞,同法进行骨髓基质细胞的培养.分别将两种细胞于37 ℃、体积分数为0.05的CO2条件下培养3周后,各自加入到24孔板,2×106 L-1/孔,同时每孔再加入1×106 L-1脐血单个核细胞,培养7 d.以未添加脐血贴壁层细胞及骨髓基质细胞的脐血单个核细胞作为空白对照.③实验评估:倒置显微镜下观察脐血贴壁层细胞与骨髓基质细胞的生长状态.采用流式细胞仪测定脐血单个核细胞周期分布.甲基纤维素半固体培养法测定脐血单个核细胞混合集落形成单位情况. 结果:①脐血贴壁层细胞与骨髓基质细胞的形态:培养2周时,多数脐血贴壁层细胞呈大小不等的圆形、椭圆形,少部分呈不规则形;骨髓基质细胞主要为梭形,细胞排列成漩涡状、辐射状或相互缠绕成束状.②细胞周期:与空白对照相比,经脐血贴壁层细胞、骨髓基质细胞干预的脐血单个核细胞S G2 M期所占比例均显著升高(P < 0.05).③混合集落形成单位:经脐血贴壁层细胞、骨髓基质细胞干预后的脐血单个核细胞,其混合集落形成单位的数量显著高于空白对照(P < 0.05).结论:①脐血贴壁层细胞与骨髓基质细胞在形态上具有一定差异,但均能提高脐血单个核细胞体外增殖能力.②脐血贴壁层细胞可替代骨髓基质细胞作为脐血造血细胞体外扩增的辅助条件.     

骨髓基质细胞对多细胞因子介导人脐血单个核细胞体外扩增的影响

背景:体外扩增脐血造血细胞的目的是促进脐血造血细胞的植入能力,细胞因子介导的脐血造血细胞能使细胞数有效扩增,但同时也耗竭了具有分化潜能的造血干细胞.目的:观察骨髓基质细胞对多细胞因子组合介导人脐血单个核细胞体外扩增及扩增后黏附分子和CXCR4表达的影响.方法:将分离的人脐血单个核细胞接种在预先建立的人骨髓基质细胞层上,分组培养:对照组仅含有脐血单个核细胞;多种细胞因子+脐血单个核细胞组;骨髓基质细胞+脐血单个核细胞组;骨髓基质细胞+多种细胞因子+脐血单个核细胞组.培养0,7 d检测有核细胞数, CD34+细胞数及CD34+CXCR4+,CD34+CD62L+,CD34+CD49d+的细胞数.结果与结论:单纯骨髓基质细胞和单用细胞因子组均可有效地扩增脐血造血细胞,并提高造血细胞上CD49d,CD62L及 CXCR4表达.而单用细胞因子组促进脐血造血细胞扩增能力较单纯骨髓基质细胞强,提高造血细胞CD49d,CD62L及 CXCR4表达能力较单纯骨髓基质细胞差.提示骨髓基质细胞虽可支持脐血造血细胞扩增,但难以实现造血细胞的大量扩增,但在骨髓基质细胞层的支持下,多细胞因子可有效地促进脐血造血细胞的扩增,并优于单用细胞因子及骨髓基质细胞,证实骨髓基质细胞可协同多细胞因子有效地促进脐血单个核细胞的扩增,促进造血干细胞的黏附和趋化能力.     

白细胞介素6/可溶性白细胞介素6受体对人脐血单个核细胞扩增及归巢能力的影响

目的:体外扩增脐血造血细胞的目的是促进脐血造血细胞的植入能力,并重建受体的造血功能,而这和脐血造血干/祖细胞的细胞数和体外扩增后细胞的归巢能力密切相关.实验拟观察白细胞介素6/可溶性白细胞介素6受体对人脐血单个核细胞体外扩增及扩增后对归巢有关的CD49d和CXCR4表达的影响.方法:实验于2005-06/2006-03在广州医学院附属广州市第一人民医院血液实验室完成.①实验材料:10份足月顺产健康新生儿脐血标本由广州市第一人民医院妇产科提供,产妇对实验知情同意,实验经医院伦理委员会批准.②实验方法:将由新鲜脐血标本分离的单个核细胞接种于含有不同细胞因子组合的无血清无基质培养体系中培养7 d.根据不同细胞因子组合实验分组为:对照组、干细胞因子 FLT3配基 促聚核细胞生成因子组(简称SFT组)、干细胞因子 FLT3配基 促聚核细胞生成因子 白细胞介素6组(简称SFT6组)、干细胞因子 FLT3配基 促聚核细胞生成因子 白细胞介素6/可溶性白细胞介素6受体组(简称SFT6s组).SFT6s组根据可溶性白细胞介素6受体浓度又分为50,100, 500, 1 000 μg/L组.③实验评估:在0,7 d检测有核细胞数, CD34 细胞数及CD34 CXCR4 ,CD34 CD49d 的细胞数.结果:①培养7 d后,SFT、SFT6、SFT6s组有核细胞数及CD34 细胞数扩增效果优于对照组(P < 0.05), SFT、SFT6、 SFT6s3组间差异不显著(P > 0.05).②与对照组比较,SFT、SFT6、SFT6s组细胞因子组合均可提高脐血CD34 细胞上CD49d, CXCR4表达,3组间差异不显著(P > 0.05).③500,1 000 μg/L SFT6s组脐血单个核细胞扩增效果和CD49d和CXCR4表达均优于SFT, SFT6s组和100 μg/L SFT6s组(P < 0.05), 500,1 000 μg/L SFT6s组比较差异不显著(P > 0.05) .结论:在干细胞因子 FLT3配基 促聚核细胞生成因子组合的基础上,加入白细胞介素6/可溶性白细胞介素6受体后可有效地扩增脐血细胞,并促进CD49d和CXCR4表达,对可溶性白细胞介素6受体浓度有一定的依赖性.     

离心管贴壁细胞对人脐血单个核细胞体外培养成功率的影响

背景:在常规的脐血间充质干细胞密度梯度离心分离过程中,离心管壁有大量单个核贴壁细胞,这些早期的贴壁细胞是否与脐血间充质干细胞的体外培养成功率低存在一定的联系呢?目的:比较4种方法分离人脐血单个核细胞的体外培养成功率,观察离心管贴壁细胞对人脐血单个核细胞体外培养成功率的影响。方法:取足月健康顺产新生儿脐血36份,随机分为4组,每组9份,于采集后6h内分别采用甲基纤维素沉降法(A组)、密度梯度离心分离法(B组)、甲基纤维素联合密度梯度离心分离法(C组)、甲基纤维素联合改良密度梯度离心分离法(D组)分离出单个核细胞,锥虫蓝染色检测细胞活力,用细胞计数板进行细胞计数,调整细胞浓度为1×109L-1～2×109L-1,接种于含体积分数为10%胎牛血清的低糖DMEM培养基中培养和传代,相差显微镜下观察脐血单个核细胞的形态。收集第3代脐血单个核细胞,采用细胞计数板进行计数,计算扩增倍数,采用流式细胞仪鉴定细胞免疫表型。结果与结论:36份脐血中,成功分离33份脐血单个核细胞,B组有3份分离失败。33份中共22份原代培养中出现大量贴壁细胞,其中A组8份,B组2份,C组5份,D组7份。9份(27%)培养出能融合且可稳定传代的成纤维样细胞,其中A组3份,B组0份,C组1份,D组5份。4组脐血单个核细胞在原代培养5～7d后均可见数量不等的贴壁细胞,呈梭形成纤维样细胞或(和)圆形巨核样细胞。A组与D组于原代培养三四周可见成纤维样细胞集落形成,细胞形态与骨髓间充质干细胞相似,呈较均一的长梭形,可稳定培养至60～90d形态无明显变化。流式细胞仪免疫检测,第3代脐血单个核细胞不表达或弱表达CD34、CD45和CD106等造血干细胞和内皮细胞标志,但显著表达CD29、CD105等间充质干细胞表面标志。结果显示离心管贴壁细胞可显著提高脐血单个核细胞的体外培养成功率,而甲基纤维素联合改良的密度梯度离心分离法,可充分回收离心管贴壁细胞,利于脐血单个核细胞的体外扩增和稳定传代。     

脐带血重建造血潜能的母体及新生儿因素分析

脐带血作为一种备选的移植用造血干细胞,能否成功植入与输入受者体内的总有核细胞（total nucleated cells,TNC）数、CD34＋细胞数及粒-巨噬细胞集落形成单位（colony-forming unit-granulocyte-macrophage,CFU-GM）有关。本研究探讨影响脐带血造血潜能的母体及新生儿因素。按照广州脐血库标准化操作常规（SOP）,对脐带血样本进行筛选、处理、检测及冷冻,回顾性分析已保存的4615份脐带血样本的造血细胞参数及其与母体及新生儿特征的相关性。结果表明：脐带血采集量（Mean±SD：95.23±22.42ml;Median：91.85ml）与处理前TNC[Mean±SD：（1.34±0.49）×109;Median：1.25×109]及处理后TNC[Mean±SD：（1.21±0.42）×109;Median：1.14×109]、CD34＋细胞数[Mean±SD：（5.14±4.55）×106;Median：4.08×106]、CFU-GM[Mean±SD：（9.72±8.66）×105;Median：7.53×105]三者均显著相关（p〈0.001）。在供者因素中,只有婴儿出生体重与脐带血采集量及造血细胞参数均呈显著正相关（p〈0.001）,较大婴儿的脐带血在采集量、TNC、CD34＋细胞数及CFU-GM方面均呈现优势（p〈0.001）。母亲年龄与上述各项参数均无显著相关。孕龄与处理前/后TNC正相关（p〈0.001;p〈0.001）,与CD34＋细胞数呈负相关（p=0.04）,而与采集量及CFU-GM均无显著相关。剖宫产时采集的脐带血量虽然高于阴道分娩（Mean±SD：97.05ml±22.23mlvs.92.53ml±22.43ml;Median：94.08mlvs.88.82ml;p〈0.001）,但各细胞参数均低于阴道分娩（p〈0.001）。男婴脐带血的采集量和CD34＋细胞数高于女婴（Mean±SD：96.41ml±22.31mlvs.93.95ml±22.47ml;Median：93.27mlvs.90.14ml;p〈0.001）;[Mean±SD：（5.28±5.04）×106vs.（5.00±3.94）×106;Median：4.18×106vs.3.94×106;p=0.042]、但处理前TNC及处理后TNC均低于女婴[Mean±SD：（1.31±0.50）×109vs.（1.37±0.47）×109;Median：1.22×109vs.1.28×109;p〈0.001];[Mean±SD：（1.18±0.42）×109vs.（1.24±0.41）×109;Median：1.10×109vs.1.17×109;p〈0.001],二者CFU-GM的差异无统计学意义。结论：本研究数据有助于优化脐带血供者筛选及提高脐血库资源利用率。脐血库应侧重选择体重较大、阴道分娩的新生儿供者,优先处理采集量大、TNC高的脐带血样本。     

Dextran sedimentation in a semi-closed system for the clinical banking of umbilical cord blood

BACKGROUND: The results of current processing procedures for reducing volume and recovering HPCs from umbilical cord blood (UCB) before cryopreservation vary. STUDY DESIGN AND METHODS: Dextran was added to bags containing UCB, followed by sedimentation for 30 minutes. The processed UCB was then frozen. RBCs, nucleated cells, MNCs, CD34+ cells, CFUs and long-term culture-initiating cells (LTC-ICs), viability, and sterility were evaluated. Fractionations in ficoll-hypaque and hydroxyethyl starch (HES) were also run in parallel for comparison. RESULTS: The nucleated cell (NC) recovery and RBC depletion were 86.1 percent and 94.3 percent, respectively (n = 50). Sedimentation with dextran also enabled the recovery of 80.7 percent MNCs and 82.6 percent CD34+ cells (n = 30). Postsedimentation samples displayed no impairment of CFU growth (n = 42, 108.7% CFU-C, 104.6% CFU-GEMM, 107% CFU-GM, and 95.7% BFU-E). Long-term cultures on five paired samples before and after sedimentation generated similar numbers of CFU-C each week (p = 0.88). Limiting dilution analysis of 12 paired pre/postsedimentation samples showed comparable median proportions of LTC-ICs (1/6494 vs. 1/5236; p = 0.18). The cell viability of 24 samples of thawed UCB after sedimentation was 90.3 percent (77.5-96%) and the recovery of CFU-C, CFU-GEMM, CFU-GM, and BFU-E of 11 postsedimentation samples was 93.4 percent, 84.9 percent, 92.3 percent, and 83.4 percent, respectively. NC recovery was significantly higher after treatment with dextran than with ficoll-hypaque (n = 30; 88.5% vs. 29.1%; p<0.005) and HES treatment (n = 21; 88.5% vs. 76.4%; p = 0.004). However, MNCs, CD34+ cells, CFUs, LTC-ICs, and RBCs were comparable. Two cycles of dextran sedimentation recovered 93.9 percent of NCs with cell viability of 98.6 percent (96.5-100%), whereas 11.7 percent of RBCs were retained (n = 20). The final yield volume was 33.5 (28-41) mL. CONCLUSION: In a semi-closed system, dextran sedimentation enabled volume reduction of UCB without significant quantitative and qualitative losses of HPCs.     

Cord blood units collected at a remote site: a collaborative endeavor to collect umbilical cord blood through the Hawaii Cord Blood Bank and store the units at the Puget Sound Blood Center

BACKGROUND: Umbilical cord blood is a useful source of hematopoietic stem cells, especially because compared to equivalent HLA-matched stem cells from unrelated adult donors. A network of community collection sites targeted at particular ethnic groups and serviced by a central processing and storage facility can maximize the genetic diversity of banked cord blood units (CBUs) in a cost-effective fashion. STUDY DESIGN AND METHODS: The present study compared CBUs collected near the Puget Sound Blood Center in Seattle, WA, with those collected in Honolulu, HI, and processed in Seattle. Evaluated variables include collection volume, total nucleated cell count, cellular viability, CD34+ cell count, clonogenic activity, and donor race for a total of 1646 CBUs received from July 1998 through November 2002. RESULTS: CBUs from the two sites did not differ with regard to volume or total nucleated cells. Those from Hawaii had significantly longer transit times (p < 0.001) and lower whole cord blood cell viability. However, the numbers of CFU and viable CD34+ cells were not affected by remote collection. CBUs screened from Seattle were largely from Caucasian donors, whereas over 85 percent of those from Honolulu were from donors of Asian-Pacific Islander or mixed ethnicity. CONCLUSION: These studies demonstrate the feasibility of long-distance umbilical cord blood banking. Arrangements such as those described here could be used to help target cost-effective collection from minority populations and increase the HLA and ethnic diversity for CBUs.     

气相液氮罐内温度差异对脐带血造血干细胞保存质量的影响

目的 研究气相液氮罐内因位置不同而导致的温度差异对脐带血造血干细胞保存质量的影响.方法 选取位于液氮中的脐血干细胞20份作为对照组A组,保存在气相液氮罐内最低温度保存处的20份样本为实验B组,最高温度保存处的20组样品为实验C组.各组细胞解冻复苏后进行有核细胞计数、有核细胞活性、CD34+％、CFU-GM等检测,进行单...     

供者特征对脐带血造血功能的影响

目的 分析可能影响脐带血造血功能的供者特征.方法 对广州脐带血库1998年6月至2008年12月保存的4 358份脐带血的供者特征(包括母亲年龄、分娩方式、妊娠期、婴儿体重、婴儿性别)和脐带血采集量及造血功能的指标(包括总有核细胞数、CD34+细胞、干细胞集落等)进行相关性分析.结果 婴儿体重、分娩方式及婴儿性别是影响脐带血采集量、总有核细胞数、CD34+细胞数、CFUs及CFU-GM的主要因素.随着婴儿体重的增加,脐带血采集量、总有核细胞数、CD34+细胞数、CFUs、CFU-GM均呈上升趋势(P=0.000).阴道分娩时脐带血的采集量虽然低于刮宫产(P=0.000),但总有核细胞数、CD34+细胞数、CFUs,CFU-GM均高于剖宫产(P=0.000).女婴脐带血中总有核细胞数含量高于男婴(P=0.000),但脐带血采集量(P=0.000)、CD34+细胞数(P=0.002)均低于男婴.随着妊娠期的延长,脐带血中总有核细胞数增加(P=0.000),但CD34+细胞数减少(P=0.001).结论 某些脐带血供者特征对脐带血造血功能指标有积极影响.     

Cord Blood Banking and Transplantation in China: A Ten Years Experience of a Single Public Bank

Background

Umbilical cord blood (UCB) has successfully used for transplantation to treat hematologic malignancies and genetic diseases. Herein, we describe the experience generated in a single public UCB bank at Zhejiang Province in China.

Methods

Good manufacturing practice and standard operating procedures were used to address donor selection as well as UCB collection, processing, and cryopreservation. Total nucleated cells (TNCs), cellular viability, CD34+ cells, and colony-forming units were determined, and infectious diseases screening test, sterility test, and HLA typing for UCB units were done.

Results

Only 18.51% of all collected UCB units met storage criteria, and 7,056 UCB units were cryopreserved in 10 years. The volume of UCB units was 95.0 ± 22.0 ml. The number of TNCs before and after processing was 13.32 ± 3.63 × 10⁸ and 10.63 ± 2.80 × 10⁸, respectively, and the recovery rate was 80.71 ± 11.26%. 0.4344 ± 0.1874% of the TNCs were CD34+ cells. The CFU-GM was 32.1 ± 28.0 colonies per 1 × 10⁵ nucleated cells. Based mainly on HLA and nucleated cell content, 26 UCB units were released for transplantation.

Conclusions

A public UCB bank was successfully established in China; collection and processing of UCB units should be optimized in order to gain maximum volume and cell count.     

深低温冻存不同时间对脐血细胞质量的影响

本研究旨在探讨不同冻存时间的脐血干细胞复苏后的回收率,并分析冷冻复苏的细胞对患者植入速度的影响。20份经-196℃液氮低温保存1-10年的脐血干细胞标本,比较冻存前（脐血库提供资料）和复苏后的细胞活率、总有核细胞数（TNC）、CD34＋细胞和粒-巨噬细胞集落形成单位（CFU-GM）的数量,并分析复苏后的细胞回收对移植受者植入速度的影响。结果表明,不同冻存时间对复苏后干细胞的回收率没有影响。经冻存复苏后,细胞活存率为（92．75±2．55）％,TNC、CD34＋细胞数和CFU-GM的回收率分别为89．9％、84．8％和84．3％,与冻存前相比明显减少（P=0．000）,但细胞数量的下降对移植患者中性粒细胞和血小板的植入时间均无影响。冻存后TNC和CD34＋细胞数量与冻存前数量有很大的相关性（r=0．954;r=0．931,P=0．000）,而CFU-GM的相关性弱（r=0．285,P=0．223）。结论：冻存和复温过程会-定程度上损伤脐血干细胞,导致细胞丢失,但不会影响移植的效果。     

人骨髓间充质干细胞体外支持脐血CD34+细胞增殖的研究

为了研究人骨髓间充质干细胞(MSC)作为滋养层细胞体外支持脐血CD34+细胞扩增的作用,将MSC和胎儿骨髓来源的成纤维细胞样骨髓基质细胞系(HFCL)经60Coγ线照射后分别制备细胞滋养层,比较不同滋养层细胞和添加或不加细胞因子对脐血CD34+细胞增殖数及LTC-IC数的影响.结果表明,无论有无添加细胞因子(rhFL、rhSCF、rhTPO),HFCL滋养层组培养12天扩增细胞数明显高于MSC滋养层组,以第0天细胞数为100%(下同),有细胞因子组为(9797±361)%vs(7061±418)%,无细胞因子组为(5305±354)%vs(1992±247)%,均P＜0.01.MSC滋养层组CD34+细胞扩增数与HFCL滋养层组相比无显著差异[(825±305)%vs(820±191)%,P＞0.05],但在细胞因子存在时低于HFCL滋养层组[(939±212)%vs(1617±222)%,P＜0.01].MSC滋养层组维持脐血中LTC-IC的能力明显优于HFCL滋养层组[第5周CFU-GM数(129.95±8.73)个/105接种细胞数vs(89.81±10.29)个/105接种细胞数,P＜0.05];细胞因子存在时,其作用更为明显[第5周CFU-GM数(192.93±4.95)个/105接种细胞数vs(90.47±14.28)个/105接种细胞数,P＜0.01].MSC与HFCL按一定比例混合,可提高扩增效率.当MSC与HFCL之比为41时,集落形成数量最高,达(186.89±11.11)个/105接种细胞数,明显高于比例为32(131.45±13.02)个/105接种细胞数和二者单用组[前者(138.92±14.84)个/105接种细胞数,后者(64.63±6.11)个/105接种细胞数;均P＜0.01].结论MSC维持脐血中LTC-IC集落形成的能力优于基质细胞系HFCL,HFCL支持脐血CD34+细胞的增殖能力优于MSC,MSC加上适量HFCL可显著提高CD34+细胞扩增效率.     

Factors associated with parameters of engraftment potential of umbilical cord blood

BACKGROUND: Umbilical cord blood (UCB) is an acceptable source of hematopoietic cells for transplantation with success being associated with the nucleated cell count (NCC), CD34+ cells, and colony-forming unit-granulocyte-macrophage (CFU-GM) content infused. A total of 1033 UCB samples with neonatal and paternal characteristics that might influence hematopoietic content were examined. STUDY DESIGN AND METHODS: UCB samples were screened, processed, and reevaluated for the above cell counts. These parameters of engraftment potential were analyzed for associations with neonatal and parental characteristics. RESULTS: Postprocessed NCCs (median, 6.53 x 10(8)+/- 2.80 x 10(8) SD; mean 7.30 x 10(8)), CD34+ counts (median, 2.02 x 10(6) +/- 2.20 x 10(6) SD; mean, 2.65 x 10(6); r = 0.66; p < 0.001), and CFU-GM content (median, 2.65 x 10(5) +/- 3.16 x 10(5) SD; mean, 3.54 x 10(5); r = 0.61; p < 0.001) all were strongly interrelated. Both initial volume (median, 77.5 +/- 26.2 mL SD; mean, 81.9 mL) and initial NCC (median, 9.75 x 10(8) +/- 4.88 x 10(8) SD; mean, 10.9 x 10(8)) correlated well with postprocessed NCC (r = 0.60; r = 0.90; p < 0.01), CD34+ count (r = 0.40; r = 0.63; p < 0.01), and CFU-GM content (r = 0.38; r = 0.59; p < 0.01), with a stronger relationship seen with initial NCC. Infant birth weight (specifically, >3000 g), but not sex, gestational age, or cytomegalovirus status correlated strongly with collection volume and UCB cell counts. Units from minority volunteers contained relatively smaller volumes and hematopoietic content. CONCLUSION: UCB banks should emphasize selecting the heaviest infants and processing large-volume units with high NCCs to optimize hematopoietic potential. Minority recruitment should be encouraged with consideration given to inherent racial differences in cell counts. There does not appear to be a significant relationship between other neonatal and parental characteristics and that of engraftment potential.     

人脐血及骨髓淋巴细胞免疫表型的比较及其意义

为比较脐血和骨髓淋巴细胞及祖细胞分化抗原，通过流式细胞术（FCM）双标法对38份脐血及10份骨髓免疫细胞表型进行了分析研究。研究发现：（1）脐血及骨髓淋巴细胞中均测到稚淋巴细胞（CD3^-CD4^ )，且前中含量较多，但脐血细胞毒T细胞含量（CTL，CD3^ CD16^ 56^ )低于骨髓；（2）脐血中NK细胞（CD3^-CD16^ 56^ )比例高于骨髓；（3）脐血有核细胞中CD34^ 细胞的比值接近于骨髓，但脐血CD34^ 细胞中髓系祖细胞（CD34^ CD13^ ,CD34^ HLA-DR^ )及淋巴系祖细胞（CD34^ CD19^ )含量均低于骨髓，结论：（1）脐血免疫细胞具有不成熟性，这估计是脐血移植后GVHD程度轻的主要原因；（2）脐血淋巴细胞中NK细胞含量较高，推测脐血移植后移植物抗白血病效应（GVL）并不会降低；（3）脐血CD34^ 细胞中髓系祖细胞及淋巴系祖细胞比例均低于骨髓，可能是脐血移植后造血及免疫重建速度较慢的原因之一。