当归红芪超滤物对辐射后心肌成纤维细胞的增殖和胶原分泌的影响

目的:研究当归红芪超滤物对辐射后心肌成纤维细胞增殖和胶原分泌的影响。方法:采用差速贴壁法原代分离培养大鼠心肌成纤维细胞;当归红芪超滤物干预或射线辐射心肌成纤维细胞后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞分泌Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)的含量;心肌成纤维细胞通过2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)染色在流式细胞仪下检测活性氧(ROS)的含量;采用实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测心肌成纤维细胞中COL-Ⅰ和转化生长因子-β(TGF-β)的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测相关蛋白的表达。结果:低剂量射线(0.5 Gy)辐射心肌成纤维细胞后,细胞内ROS的升高促进细胞增殖和胶原分泌的作用;当归红芪超滤物可以促进细胞中转录因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白的核转位来清除ROS,最终抑制辐射诱导的心肌成纤维细胞的增殖和胶原分泌;并且当归红芪超滤物明显抑制心肌成纤维细胞中COL-Ⅰ和TGF-βmRNA表达。结论:当归红芪超滤物可以抑制低剂量辐射诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原分泌。     

芪参养肝方抗肝纤维化的实验研究

目的观察芪参养肝方对刀豆蛋白A(Con A)肝纤维化小鼠肝脏的肝星状细胞(HSC)活化、胶原合成及细胞因子α-SMA、TGF-β1分泌的影响,探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法将40只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、芪参养肝方组,造模期间芪参养肝方组给予芪参养肝方药液灌胃。检测3组小鼠肝功能、肝组织中羟脯氨酸含量和α-SMA、Col I、ColⅢ、TGF-β1mRNA表达以及α-SMA、Col I、TGF-β1蛋白表达情况。结果模型组血清ALT、AST水平及肝组织中羟脯氨酸含量均明显高于正常组(P均<0.05),而芪参养肝方组各指标水平均明显低于模型组(P均<0.05)。HE、天狼猩红染色显示,芪参养肝方组肝小叶破坏及胶原纤维增生较模型组明显减轻,胶原沉积明显好转。模型组肝组织中α-SMA、TGF-β1、Col I、ColⅢmRNA表达量及α-SMA、TGF-β1、ColⅠ蛋白表达量均明显高于正常组(P均<0.05),而芪参养肝方组各指标水平均明显低于模型组(P均<0.05)。结论芪参养肝方能抑制Con A肝纤维化小鼠α-SMA、TGF-β1分泌及HSC活化,促进活化的HSC凋亡;并能下调ColⅠ、ColⅢmRNA表达,抑制胶原纤维增生;其有保肝降酶、抗肝纤维化作用。     

芪卫颗粒改善TGF-β1诱导的肾小球足细胞转分化的作用研究

目的观察芪卫颗粒对转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)诱导的足细胞转分化的影响。方法以体外培养的小鼠肾小球足细胞株为研究对象,以TGF-β1(7. 5 ng/mL)刺激足细胞建立转分化模型,分为正常组、模型组、芪卫颗粒组,干预24小时后,进行相关检测。采用CCK-8方法检测足细胞的活力,采用荧光定量PCR方法检测足细胞转分化相关指标Nephrin、Podocin、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和成纤维细胞特异蛋白-1(fi-broblast-specific protein1,FSP-1)基因的水平,采用Western blot方法检测足细胞转分化标志蛋白Nephrin、Podocin、α-SMA和FSP-1蛋白表达的变化。结果与正常组相比,TGF-β1诱导的模型组足细胞Nephrin和Podocin的基因和蛋白表达均减少(P 0. 05),α-SMA和FSP-1的基因和蛋白表达均增加,足细胞活力下降(P 0. 05);而与模型组相比,芪卫颗粒组足细胞Nephrin和Podocin的基因和蛋白表达均明显上调(P 0. 05),α-SMA和FSP-1的基因和蛋白表达均有所下调(P 0. 05),细胞活力有所升高。结论 TGF-β1能诱导足细胞发生转分化,芪卫颗粒能明显改善TGF-β1诱导的足细胞转分化。     

逍遥散提取物对瘦素诱导活化人肝星状细胞的影响

目的探讨逍遥散提取物对瘦素诱导人肝星状细胞活化相关细胞因子及细胞外基质表达的影响。方法以瘦素刺激体外培养人肝星状细胞(HSC-LX2)活化,用逍遥散提取物进行干预;24 h后,免疫细胞化学法检测α-SMA和TGF-β1蛋白表达,ELISA法检测COL-Ⅰ、COL-III和HA的含量。结果与空白对照组比较,瘦素刺激组α-SMA和TGF-β1的蛋白表达以及COL-Ⅰ、COL-III和HA的含量均明显增加(P0.05,P0.01)。与瘦素刺激组比较,逍遥散组α-SMA和TGF-β1的蛋白表达以及COL-Ⅰ、COL-III和HA的含量均明显降低(P0.05,P0.01)。结论逍遥散提取物抗肝纤维化的作用机制可能与调节肝细胞中α-SMA和TGF-β1蛋白的异常表达,降低胶原含量有关。     

组分复方“CKJ”药物血清对大鼠原代肝星状细胞活化和转化生长因子β_1及其受体的影响

目的探讨由虫草多糖、苦杏仁苷、绞股蓝总皂苷组成的"CKJ方"药物血清对大鼠原代肝星状细胞(primary hepatic stellate cells,r HSCs)活化的影响及相关药理作用机制。方法分离并培养r HSCs,将培养4天的r HSCs分为正常组、模型组及CKJ组。模型组及CKJ组以2.5 ng/m L转化生长因子β1(TGF-β1)刺激造模24 h,正常组以不含TGF-β1的基质液(无血清的DMEM)作为对照。药物组以5%CKJ方药物血清继续孵育24 h,正常组及模型组以5%空白血清孵育24 h。采用细胞高内涵筛选技术(HCS)免疫荧光法及Western blot检测r HSCsα-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)、血小板源性生长因子β受体(PDGF-βR)、TGF-β1、转化生长因子β受体1(TGF-βR1)、转化生长因子β受体2(TGF-βR2)mRNA的表达水平。结果与正常组比较,模型组r HSCsα-SMA蛋白表达及α-SMA、Col-Ⅰ、PDGF-βR、TGF-β1、TGF-βR1、TGF-βR2 mRNA表达水平明显升高(P0.05,P0.01);与模型组比较,5%CKJ药物血清组r HSCsα-SMA蛋白表达及α-SMA、Col-Ⅰ、PDGF-βR、TGF-β1、TGF-βR1、TGF-βR2 mRNA表达水平明显降低(P0.05,P0.01)。结论组分复方"CKJ"药物血清可降低大鼠r HSCsα-SMA的蛋白表达,其主要作用机理可能与抑制TGF-β1及其相关受体有关。     

当归多糖及小分子提取物对TGF-β1诱导的HELF表达α-SMA、CTGF的影响

目的:观察当归多糖及小分子提取物对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞HELF的增殖及α-SMA、CTGF影响的作用。方法:建立肺纤维化细胞模型,分为空白组、模型组、12.5μg/ml当归多糖组、25μg/ml当归多糖组、50μg/ml当归多糖组、25μg/ml当归小分子提取物组、50μg/ml当归小分子提取物组、100μg/ml当归小分子提取物组。结合形态观察,检测细胞增殖、羟脯氨酸、MMP-9、TIMP-1含量及α-SMA、CTGF蛋白表达的变化。结果:与空白组比较,各组细胞吸光度值、羟脯氨酸、MMP-9、TIMP-1含量、CTGF、α-SMA蛋白表达均明显增高。与模型组比较,25μg/ml当归多糖组、50μg/ml当归小分子提取物组细胞吸光度值、羟脯氨酸含量、CTGF、α-SMA蛋白表达均降低,50μg/ml当归小分子提取物组MMP-9含量下降,25μg/ml当归多糖组、50μg/ml当归小分子提取物组TIMP-1含量均增高。形态学观察,模型组细胞数量增多,体积增大,生长旺盛。25μg/ml当归多糖组、50μg/ml当归小分子提取物组细胞数量较少,体积较小。结论:当归多糖及小分子提取物能抑制TGF-β1诱导的HELF增殖,减少羟脯氨酸的合成,其作用可能与下调α-SMA、CTGF表达,调节维持MMP-9/TIMP-1之间的平衡有关。     

芪苈强心胶囊对心肌梗死后心力衰竭大鼠肺结构重塑作用及机制

目的观察芪苈强心胶囊防治心肌梗死(心梗)后心力衰竭大鼠肺结构重塑的作用及机制。方法结扎大鼠冠脉左前降支,建立急性心梗模型,随机分为模型组(灌胃蒸馏水1 m L/100 g,n=13),芪苈强心组[中药组,灌胃芪苈强心胶囊药液1 g/(kg·d),n=9],另设假手术组(灌胃蒸馏水1 m L/100 g,n=10)。干预4周后,应用超声心动图检测大鼠的心功能;取肺组织采用HE染色、Masson染色方法观察肺的结构学变化;用Western blot方法、免疫组织化学法检测肺组织α-SMA、CollagenⅠ、TGF-β1、p-Smad3蛋白表达情况。结果与假手术比较,模型组EF、FS降低(P0.05),LVIDd、LVIDs、EDV、ESV、α-SMA、CollagenⅠ、TGF-β1、pSmad3蛋白表达升高(P0.05),模型组肌型血管比例及肺组织胶原面积升高(P0.05)。与模型组比较,中药组EF、FS升高(P0.05),LVIDs、ESV、肺α-SMA、CollagenⅠ、TGF-β1、p-Smad3蛋白表达降低(P0.05),中药组肌型血管比例及肺组织胶原面积域降低(P0.05)。结论芪苈强心胶囊可改善心梗后心力衰竭大鼠肺结构重塑程度,其作用机制可能通过调控TGF-β1/Smad3信号通路实现。     

补阳还五汤合参芪地黄汤化裁调控 VEGF-C/VEGFR3 通路抑制淋巴管新生对糖尿病肾病小鼠的保护作用

目的 基于调控 VEGF-C/VEGFR3 通路抑制淋巴管新生探讨补阳还五汤合参芪地黄汤化裁对糖尿病肾 病 （DKD） 小鼠的保护作用及机制。方法 将 24 只雄性 db/db 小鼠随机分为模型组、中药组 （补阳还五汤合参芪 地黄汤化裁,生药量 24.44 g·kg-1 ） 和西药组 （厄贝沙坦,13.5 mg·kg-1 ） ,每组 8 只,另外取 8 只 db/m 小鼠作为 对照组。灌胃给药,每日 1 次,连续 12 周。检测小鼠血糖 （FBG） 、总胆固醇 （TC） 、甘油三脂 （TG） 、尿白蛋白/ 肌酐比值 （ACR） 及肾脏指数;采用 HE、Masson 染色法观察肾脏组织病理变化;免疫组化法检测肾脏组织纤连 蛋白 （FN） 、Ⅰ型胶原蛋白 （ColⅠ） 、波形蛋白 （Vimentin） 、α 平滑肌肌动蛋白 （α-SMA） 、转化生长因子 β1 （TGF-β1） 、血管内皮生长因子受体 3 （VEGFR3） 、血管内皮生长因子 C （VEGF-C） 、淋巴管内皮透明质酸受体 1 （LYVE-1） 、平足蛋白 （PDPN） 、肿瘤坏死因子 α （TNF-α） 和白细胞介素 1β （IL-1β） 的表达;Western Blot 法检 测肾脏组织 ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、VEGF-C、LYVE-1、TNF-α、IL-1β 蛋白表达; Real-time PCR 法检测肾脏组织 FN、ColⅠ、TGF-β1、VEGF-C、VEGFR3、TNF-α、IL-1β mRNA 表达。 结果 与对照组比较,模型组小鼠的血清 FBG、TG、TC、ACR 水平及肾脏指数均明显升高 （P＜0.05） ;肾小 球肥大,系膜外基质增加,基底膜增厚,囊腔变窄,肾小管上皮细胞变性、坏死,间质有大量炎性细胞浸润, 肾小管萎缩,纤维化水平明显升高 （P＜0.05）;肾间质中 FN、ColⅠ、Vimentin、α -SMA、TGF- β1、 VEGFR3、LYVE-1、TNF-α、IL-1β 蛋白表达,胞质中 VEGF-C 蛋白表达及肾小管毛细血管周围 VEGFR3、 PDPN 蛋白表达均明显上调 （P＜0.05） ;肾脏组织中 ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、VEGF-C、 LYVE-1、TNF-α、IL-1β 蛋白表达均明显上调（P＜0.05）;肾脏组织中 FN、ColⅠ、TGF-β1、VEGF-C、 VEGFR3、TNF-α、IL-1β mRNA 表达水平均明显升高 （P＜0.05） 。与模型组比较,中药组小鼠的血清 TG、TC、ACR 水平均明显降低 （P＜0.05） ;肾脏组织损伤有不同程度好转,炎性细胞浸润有一定程度减轻,纤维化水平 明显降低 （P＜0.05） ;肾间质中 FN、ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、LYVE-1、TNF-α、IL-1β 蛋白表达,胞质中 VEGF-C 蛋白表达及肾小管毛细血管周围 VEGFR3、PDPN 蛋白表达均明显下调 （P＜0.05） ; 肾脏组织中 ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、VEGF-C、LYVE-1、TNF-α、IL-1β蛋白表达均明 显下调 （P＜0.05） ;肾脏组织中 FN、ColⅠ、TGF-β1、VEGF-C、VEGFR3、TNF-α、IL-1β mRNA 表达水平均明 显降低 （P＜0.05） 。结论 补阳还五汤合参芪地黄汤化裁可降低 DKD 小鼠肾脏组织炎症及纤维化水平,其机制 可能与调控 VEGF-C/VEGFR3 通路抑制淋巴管新生有关。     

芪附汤调节ERK1/2信号通路改善UUO阳虚证模型肾间质纤维化的作用和机制

目的:探讨芪附汤改善阳虚证模型鼠肾间质纤维化(RIF)的作用和机制。方法:将大鼠随机分为假手术组(A组)、模型组(B组)、芪附汤组(C组)、依那普利组(D组)。通过腺嘌呤灌胃联合单侧输尿管接扎术(UUO)的方法而建立RIF模型。造模成功后,C,D组大鼠分别经灌胃给予芪附汤水煎液或依那普利悬浊液;其余2组大鼠经灌胃给予蒸馏水,共干预3周。各在药物和蒸馏水干预前和干预后第1,2,3周末,分别称量大鼠体重,并检测24 h尿蛋白排泄量(Upro)、尿β2-微球蛋白(Uβ2-MG)、尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(NAG)酶。药物干预第3周末,处死全部大鼠,抽取血液,摘除左肾,称重,并留取相应标本,观察肾脏外观和肾小管/间质形态;检测血清环磷酸腺苷(c AMP)、环磷酸鸟苷(c GMP)、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)和尿酸(UA);检测肾组织中上皮型黏钙蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、细胞外调节激酶(ERK1/2)和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白相对表达量。结果:芪附汤可以改善模型鼠血清中降低的c AMP和c AMP/c GMP;减少模型鼠升高的Uβ2-MG、尿NAG酶,改善肾间质细胞外基质及其胶原沉积,上调肾组织E-cadherin蛋白表达,下调肾组织α-SMA,TGF-β1,CTGF,p-ERK1/2蛋白表达;但是,对Scr,BUN,UA没有影响。芪附汤改善RIF的作用优于依那普利。结论:芪附汤可以改善模型鼠阳虚证指标以及尿β2-MG、尿NAG酶排泄,它可能是通过上调肾组织E-cadherin蛋白表达,下调肾组织α-SMA,TGF-β1,CTGF以及ERK1/2信号通路中关键信号分子——p-ERK1/2蛋白表达,改善肾小管EMT,从而减轻RIF。     

黄芪甲苷抑制IKK/NF-κB炎症通路减轻高糖诱导的H9c2心肌细胞损伤

[目的]观察黄芪甲苷减轻高糖诱导H9c2细胞损伤的作用机制。[方法]通过高糖孵育诱导H9c2心肌细胞损伤模型,MTT法测定细胞存活率,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞培养液上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的含量,蛋白印迹(Western Blot)法检测细胞内IκB激酶β(IKK-β)、核转录因子κB(NF-κB)、p-NF-κB及TNF-α蛋白表达水平。[结果]给予高糖处理H9c2心肌细胞12 h能明显下调细胞存活率(P0.05);黄芪甲苷(20、40、80μmol/L)预处理10 min可呈剂量依赖性增强细胞活力,降低细胞培养液上清中TNF-α和IL-6的含量(P0.05),下调IKK-β蛋白表达(P0.05),抑制NF-κB磷酸活化水平(P0.05),并降低TNF-α蛋白表达(P0.05)。[结论]黄芪甲苷可通过抑制IKK/NF-κB炎症通路过度激活减轻高糖诱导的H9c2心肌细胞损伤。     

毛蕊异黄酮抗肝星状细胞活化的作用机制研究

目的观察毛蕊异黄酮对TGF-β1/Smads信号通路的影响,探讨毛蕊异黄酮抗肝星状细胞活化的作用机制。方法以人肝星状细胞株(LX-2)为研究对象,采用高内涵系统观察细胞增殖(Ed U)及细胞内F-actin骨架的聚合情况,RT-PCR法检测细胞I型胶原(Col-Ⅰ)、α-SMA、TGF-β1mRNA表达水平,Wstern-blot法检测细胞内p-Smad2、Smad2及Smad7蛋白表达水平。结果 TGF-β1可显著促进LX-2细胞增殖、活化,Ed U阳染细胞明显增加,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2及Col-ⅠmRNA或蛋白表达显著增加(P均0.05),Smad7表达显著下降;毛蕊异黄酮可显著降低TGF-β1诱导的LX-2中Ed U阳染细胞率以及α-SMA、p-Smad2与Col-Ⅰ的mRNA或蛋白表达(P均0.05),显著提高Smad7蛋白表达,且作用与TβRI激酶抑制剂SB-431542相当。结论毛蕊异黄酮可显著抑制肝星状细胞活化,其机制与抑制TGF-β1、p-Smad2的表达,提高Smad7蛋白表达,进而抑制TGF-β1/Smads信号转导有关。     

针刀干预对膝骨关节炎兔滑膜纤维化的影响

目的：探讨针刀干预对膝骨关节炎(KOA)兔滑膜纤维化的影响。方法：新西兰兔随机分为空白组、模型组、针刀组、电针组,各8只。采用改良Videman左后肢伸直位固定法制动4周,制备模型。空白、模型组不干预,针刀、电针组各干预3周。测量被动活动范围(PROM)；天狼猩红染色观察滑膜胶原沉积的情况；Western Blot法检测膝关节滑膜组织TGF-β1、α-SMA、COL-Ⅰ蛋白表达情况。结果：与模型组比较,针刀、电针组PROM明显增大(P＜0.01),针刀组大于电针组(P＜0.05)。与模型组比较,针刀、电针组滑膜组织胶原沉积减轻。模型组TGF-β1、α-SMA、COL-Ⅰ蛋白表达显著高于正常组(P＜0.01)；针刀、电针组可明显抑制TGF-β1、α-SMA、COL-Ⅰ的表达(P＜0.01)；与电针组比较,针刀组TGF-β1、α-SMA、COL-Ⅰ蛋白表达明显降低(P＜0.05或P＜0.01)。结论：针刀通过调控TGF-β1的表达,从而下调α-SMA和COL-Ⅰ的表达,减轻滑膜纤维化达到治疗KOA的目的。     

氧化苦参碱对TGF-β1诱导的PANC-1细胞Smad3/Gli1通路相关因子表达的影响

目的研究氧化苦参碱(OM)对接受转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激的人胰腺导管癌PANC-1细胞中Smad3/Gli1通路相关因子表达的影响。方法以TGF-β1刺激PANC-1细胞模拟胰腺纤维化模型,并观察给予OM干预对Smad3/Gli1通路相关因子表达的影响。通过细胞转染技术将Gli1及Smad3的RNA干扰质粒转染入PANC-1细胞;通过Western blotting技术检测Smad3、Gli1和α-SMA的蛋白表达,ELISA技术检测纤连蛋白(FN)和I型胶原(Co L-I)在细胞培养上清中的表达。结果与对照组相比,PANC-1细胞接受TGF-β1刺激后Smad3、Gli1和α-SMA的蛋白表达显著升高;与TGF-β1组相比,OM和TGF-β1共同处理组Smad3、Gli1和α-SMA的蛋白表达显著降低。转染Smad3干扰质粒后,Gli1、α-SMA、FN和Co L-I表达显著下降。与TGF-β1组比较,转染Gli1干扰质粒后加TGF-β1组α-SMA、FN和Co L-I表达显著降低。结论 OM可能通过调节PANC-1细胞TGF-β1/Smad3/Gli1通路发挥抗胰腺纤维化作用。     

黄芪总黄酮对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的影响

目的探究黄芪总黄酮对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的影响。方法大鼠随机分为正常组、模型组、阳性组(秋水仙碱,50 mg/kg)和黄芪总黄酮低、中、高剂量(25、50、100 mg/kg)组。HE染色观察大鼠组织病理学变化,ELISA法检测大鼠血清ALT、AST活性及HA、LN、PCⅢ、CⅣ、IL-1β、IL-6、TNF-α水平,Western blot法检测α-SMA、TGF-β1、Smad3、Smad4蛋白表达。结果与模型组比较,黄芪总黄酮组能抑制肝细胞坏死、炎细胞浸润以及纤维化,显著降低ALT、AST活性,HA、LN、PCⅢ、CⅣ,以及IL-1β、IL-6、TNF-α水平和α-SMA、TGF-β1、Smad3、Smad4蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论黄芪总黄酮可抑制四氯化碳诱导大鼠肝纤维化,其作用机制可能与抑制TGF-β1/Smad信号通路介导的炎症反应有关。     

桃红化浊丸对HSC-T6细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨桃红化浊丸对HSC-T6大鼠肝星状细胞增殖和凋亡的影响。方法：制备桃红化浊丸含药血清,体外培养HSC-T6细胞。将细胞分为空白组(CON),阳性药组(PD),桃红化浊丸高剂量组(THZ-H),桃红化浊丸低剂量组(THZ-L),采用细胞增殖检测(CCK-8)法检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹试验(Western blot)检测各细胞中α-SMA、CollagenⅠ、TGF-β1、Smad2蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time Polymerase Chain Reaction)检测各组细胞中α-SMA、CollagenⅠ、TGF-β1、Smad2 mRNA的表达情况。结果：与空白组相比,桃红化浊丸能抑制HSC-T6细胞增殖能力,诱导细胞凋亡,明显降低HSC-T6细胞中α-SMA、CollagenⅠ、TGF-β1、Smad2的表达量。结论：桃红化浊丸可能通过抑制TGF-β1/Smad2通路,抑制HSC-T6细胞增殖,促进其凋亡,从而发挥抗纤维化作用。     

桂枝茯苓丸抗大鼠肝纤维化作用及其机制研究

目的:观察桂枝茯苓丸对大鼠肝纤维化的拮抗作用,并探讨可能的作用机制。方法:按照随机数字表将60只Wistar大鼠分为正常组8只(A组)和造模组52只,正常组sc予生理盐水3 mL.kg-1,造模组采用等量40%四氯化碳(carbontetrachloride,CCl4)复制肝纤维化模型,共6周。再随机将造模组大鼠分为模型组(B组)、桂枝茯苓丸低、中、高剂量组(C,D,E组)每组7只大鼠。A组与B组大鼠均予生理盐水9.0 mL.kg-1ig,C,D,E组分别给予桂枝茯苓丸0.45,0.9,1.8 g.kg-1.d-1 ig治疗,共4周,并在治疗期间继续使用CCl4维持。采用免疫组化(immunohistochemistry,IH)法及实时定量PCR(real-timequantitative PCR,Real-time PCR)法检测各组大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、转化生长因子β1(transforming growing factorβ1,TGF-β1)、结缔组织生长因子(connective tissue grower factor,CTGF)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ,C-Ⅰ)及Ⅲ型胶原(CollagenⅢ,C-Ⅲ)的蛋白及基因表达量。结果:模型组大鼠肝组织α-SMA,TGF-β1,CTGF,C-Ⅰ,C-Ⅲ蛋白和mRNA的表达较正常组显著增多(P<0.01),治疗组均能下调大鼠肝组织α-SMA,TGF-β1,CTGF,C-Ⅰ以及C-Ⅲ蛋白和mRNA的表达,其中以D组,E组减少α-SMA,C-Ⅰ,C-Ⅲ蛋白的表达明显(P<0.05或P<0.01),以E组降低TGF-β1,CTGF蛋白表达最为显著(P<0.05),以D组,E组降低α-SMA,TGF-β1,CTGF mRNA的表达显著(P<0.01),以E组减少C-Ⅰ,C-ⅢmRNA的表达最明显(P<0.01)。结论:桂枝茯苓丸混悬液可有效减少肝组织α-SMA,TGF-β1,CTGF,C-Ⅰ,C-Ⅲ蛋白和mRNA表达量,有良好的抗肝纤维化作用。     

白花丹醌对TGF-β1 刺激人肝星状细胞α-SMA表达的影响

目的:研究白花丹醌(plumbagin)对转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激的体外培养人肝星状细胞HSC-LX2α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和蛋白表达的影响。方法:体外培养HSC-LX2,随机设立空白组,TGF-β1刺激的模型组,TGF-β1+白花丹醌2.0μmol·L-1高剂量组,TGF-β1+白花丹醌1.5μmol·L-1中剂量组和TGF-β1+白花丹醌1.0μmol·L-1低剂量组,各药物与细胞孵育72 h后,采用RT-PCR检测各组HSC-LX2α-SMA mRNA的表达,采用免疫细胞化学方法(ICC)检测HSCLX2中α-SMA蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组α-SMA mRNA及蛋白表达明显升高(P0.01);与模型组比较,白花丹醌作用72 h后,高、中剂量组HSC-LX2细胞中α-SMA mRNA的表达明显降低(P0.01);免疫细胞化学结果显示白花丹醌高、中剂量组对HSC-LX2细胞α-SMA蛋白的表达有显著地抑制作用(P0.05),尤以高剂量组更明显(P0.01)。结论:白花丹醌能抑制HSC-LX2的活化和增殖,其机制之一可能是从mRNA水平和蛋白水平抑制α-SMA的表达,从而发挥其抗肝纤维化作用。     

芪归方有效组分治疗特发性肺纤维化的实验研究

目的：基于Smurf2串话TGF-β1/Smad信号通路研究芪归方有效组分对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5的影响及机制。方法：体外予以10 ng/mL TGF-β1培养MRC-5细胞，PCR仪检测α-SMA的mRNA水平判断模型是否成功。设立正常对照组、模型组（10 ng/mL TGF-β1处理）、泼尼松处理组、芪归方有效组分高剂量组、中剂量组、低剂量组，采用CCK-8法检测MRC-5的增殖情况，Western blot检测各组细胞Smad7、SnoN蛋白的表达水平，RT-PCR检测各组细胞Smurf2的mRNA水平。结果：与正常对照组比较，48 h模型组细胞增殖明显，α-SMA的mRNA水平增加（P<0.01），造模成功。经10 ng/mL TGF-β1处理细胞MRC-5，与正常对照组比较，Smad7、SnoN蛋白水平显著降低，Smurf2蛋白mRNA水平升高（P<0.01或P<0.05）。不同浓度芪归方有效成分处理组细胞增殖降低，可逆转以上各指标的改变，呈一定的量效关系。结论：芪归方有效组分能抑制MRC-5细胞增殖，可通过减少MRC-5细胞中Smurf2所介导的Smad7、SnoN的泛素化，恢复Smad7、SnoN蛋白的表达，从而调节肺纤维化的发生发展。     

抗纤灵方对体外培养肾成纤维化细胞TGF-β1/p38MAPK信号通路干预的实验研究

目的:观察抗纤灵含药血清对大鼠成纤维细胞TGF-β1和p38MAPK、α-SMA、Ⅰ型胶原的抑制作用。方法:将抗纤灵方煎至含原药材2g/ml,氯沙坦钾配成含药0.33mg/ml,给大鼠灌胃(正常组给予蒸馏水灌胃),制备抗纤灵血清、氯沙坦钾血清和正常血清。用DMEM培养基稀释血清,将其分为正常血清组、TGF-β1组、抗纤灵组、抗纤灵组+TGF-β1、氯沙坦钾组和氯沙坦钾+TGF-β1组。以大鼠的成纤维细胞为材料,采用Westernblot法检测大鼠成纤维细胞p38MAPK、α-SMA、Ⅰ型胶原和TGF-β1的表达。结果:加入TGF-β1刺激因子的细胞表达TGF-β1和p38MAPK、α-SMA、Ⅰ型胶原较正常大鼠血清组明显增强,抗纤灵及氯沙坦钾含药血清可明显抑制其表达。结论:抗纤灵含药血清可以通过抑制大鼠的成纤维细胞TGF-β1的表达,减少细胞外基质p38MAPK、α-SMA、Ⅰ型胶原的沉积,从而延缓肾纤维化的进程。     

绿原酸对TGF-β_1刺激人肝星形细胞凋亡的影响

目的:探讨绿原酸对TGF-β_1刺激人肝星形细胞凋亡的影响。方法:取指数生长期细胞,随机分为空白对照组、TGF-β_1组及绿原酸高、中、低浓度组,以MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时定量PCR检测α-SMA、Bax、Bcl-2 mRNA的表达,免疫细胞化学检测α-SMA蛋白的表达,Western-blot检测Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:10μg/L TGF-β_1刺激HSC细胞后,HSC-LX2细胞中α-SMA、Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著升高,Bax mRNA及蛋白表达显著降低(P0.05)。与模型组比较,绿原酸高、中剂量组细胞活力、α-SMA、Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、Bax mRNA及蛋白表达显著升高(P0.05或P0.01)。结论:绿原酸通过调控Bax、Bcl-2的表达,诱导活化的HSC-LX2凋亡,清除活化的肝星形细胞,抗肝纤维化。