二参颗粒对氯化钴诱导的H9C2细胞氧化应激介导的细胞凋亡的保护作用

目的:通过观察二参颗粒对氯化钴(CoCl_2)诱导的缺氧损伤和大鼠心肌细胞H9C2凋亡的影响,阐明二参颗粒对心脏的保护作用。方法:以500μmol/L的CoCl_2与H9C2细胞共同作用24 h,建立心肌细胞缺氧缺血模型。将H9C2细胞分为空白对照组、模型对照组、二参颗粒50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL组。酶联免疫法检测胞外培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,流式细胞术检测胞内活性氧(ROS)含量、线粒体膜电位(MMP)和凋亡水平,蛋白质印迹分析法检测细胞内Bcl-2/Bax、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Cleaved PARP的表达水平。结果:与空白对照组比较,模型对照组细胞活力下降、活性氧(ROS)荧光表达值升高、线粒体膜电位JC-1单体阳性细胞显著升高以及细胞培养液中LDH含量升高,凋亡率显著升高,凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Cleaved PARP的蛋白表达上调,Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,二参颗粒能有效改善细胞活力,降低LDH的含量,显著降低胞内ROS荧光表达值,改善线粒体膜电位和凋亡水平,下调凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Cleaved PARP的蛋白表达,升高Bcl-2/Bax的比值(P<0.05或P<0.01)。结论:二参颗粒可以抑制CoCl_2诱导的心肌细胞ROS水平,减少氧化应激发生,进而改善氧化应激介导的心肌细胞的细胞凋亡。     

重楼皂苷Ⅱ对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响

目的观察重楼皂苷Ⅱ对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。方法不同浓度重楼皂苷Ⅱ作用于A549细胞48 h,CCK-8法检测细胞存活率;将细胞分为对照组和重楼皂苷Ⅱ低、中、高剂量组,JC-10荧光探针检测线粒体膜电位(MMP),Fluo-4 AM荧光探针检测细胞内Ca2+水平,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2、cleaved Caspase-3蛋白表达。结果与对照组比较,各浓度重楼皂苷Ⅱ可降低A549细胞存活率,差异均有统计学意义(P0.01);重楼皂苷Ⅱ低、中、高剂量组A549细胞MMP显著降低,Ca2+、ROS水平显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低,重楼皂苷Ⅱ高剂量组Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论重楼皂苷Ⅱ可能通过降低细胞MMP,提高细胞内Ca~(2+)水平,增加细胞内ROS含量,调节凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3表达,促进A549细胞凋亡。     

自噬对双去甲氧基姜黄素诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用的影响

目的:探讨自噬对双去甲氧基姜黄素诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用的影响。方法:以24 mg·L~(-1)双去甲氧基姜黄素或联合5 mol·L~(-1)自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)对HepG2细胞作用24,48 h,以四甲基偶氮唑盐(methye thiazolye telrazlium,MTT)比色法检测细胞活力;以24 mg·L~(-1)双去甲氧基姜黄素单用或联合3-MA对HepG2细胞作用48 h,Hoechst 33342染色倒置荧光显微镜观察细胞凋亡形态,磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annxin V/propidium iodide,PI)双染检测细胞凋亡率,罗丹明123(Rhodamine 123,Rh123)染色检测线粒体膜电位,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测自噬相关蛋白Beclin-1,LC3,半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),活化型Caspase-3(cleaved Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)的活性表达。结果:与空白组比较,双去甲氧基姜黄素可抑制HepG2细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低线粒体膜电位,使pro-Caspase-3,Bcl-2,LC3-Ⅰ蛋白表达降低(P0.01),升高cleaved Caspase-3,Bax,Beclin-1,LC3-Ⅱ蛋白的表达(P0.01);3-MA可增强双去甲氧基姜黄素所诱导的HepG2细胞凋亡,提高凋亡率(P0.01),增加其降低线粒体膜电位作用(P0.01),明显下调pro-Caspase-3,Bcl-2蛋白的表达(P0.01),并上调Beclin-1,LC3,cleaved Caspase-3蛋白的表达(P0.01)。结论:双去甲氧基姜黄素可经线粒体机制诱导HepG2细胞凋亡,并诱导细胞自噬,自噬对凋亡有抑制作用。     

参麦注射液对乳鼠心肌细胞线粒体凋亡通路的影响

目的:探讨参麦注射液对心肌细胞凋亡通路的影响。方法:原代培养心肌细胞,AngⅡ诱导凋亡。MTT法检测线粒体活性,流式细胞仪检测凋亡率及线粒体膜电位,免疫组化染色检测细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达。结果:参麦注射液明显降低细胞凋亡率,增高线粒体活性和膜电位,升高Bcl-2蛋白表达,降低Bax、Caspase-3蛋白表达。结论:参麦注射液可抑制心肌细胞凋亡,其机制与线粒体凋亡通路密切相关。     

姜黄素通过调控脂多糖诱导的炎症抑制软骨细胞凋亡

目的探讨姜黄素通过调控脂多糖(LPS)诱导的炎症抑制软骨细胞凋亡。方法取4周龄SD雌性大鼠,分离原代软骨细胞,甲苯胺蓝染色鉴定细胞。将软骨细胞分为对照组、模型组及姜黄素低、中、高剂量组,除对照组外,其他组均采用LPS诱导软骨细胞炎症模型。姜黄素低、中、高剂量组分别加入5、10、20μmol/L姜黄素干预24 h。Hoechst 33258染色观察细胞形态及凋亡情况;流式细胞术检测细胞线粒体膜电位以及ROS水平;生化测定细胞内ATP浓度;Western blot检测Bcl-2、Bax、Cyt-c、caspase-3、caspase-9表达。结果模型组软骨细胞凋亡增加,线粒体膜电位降低,ATP浓度下降,ROS水平升高,Bcl-2蛋白表达下降,而Bax、Cyt-c、caspase-3及caspase-9蛋白表达均升高(P0.05)。姜黄素干预后,细胞凋亡减少,线粒体膜电位及ATP浓度均升高,ROS水平降低,Bcl-2表达升高,Bax、Cyt-c、caspase-3及caspase-9蛋白表达降低(P0.05),呈现出剂量依赖性。结论姜黄素可改善线粒体功能故障,通过调控线粒体介导的内源性途径抑制LPS诱导的炎症软骨细胞发生凋亡。     

鹿茸蛋白对缺血缺氧诱导心肌细胞凋亡的保护作用

目的探讨鹿茸蛋白对缺血缺氧诱导心肌细胞凋亡的作用及其机制。方法将SD大鼠心肌细胞适应性培养后分为对照组,模型组,鹿茸蛋白低剂量组(0.25 mg/mL)、中剂量组(0.5 mg/mL)、高剂量组(1 mg/mL)和鹿茸蛋白高剂量+LY294002[PI3K抑制剂(10μmol/L)]组并置于相应培养基培养36 h,模型组和用药组进行缺氧处理。采用AnnexinⅤ-fluorescein Isothiocyanate (FITC)/Propidum Iodide(PI)检测心肌细胞的凋亡情况;应用JC-1荧光探针检测心肌细胞线粒体膜电位改变情况;Western Blot检测Akt、p-Akt、Bcl-2、Bax和cleaved-Caspase3蛋白表达。结果与对照组比较,模型组心肌细胞凋亡加重,正常细胞减少,晚期凋亡细胞增加,心肌细胞线粒体膜电位降低,心肌细胞Bax和cleaved-Caspase3蛋白的表达增加,p-Akt和Bcl-2蛋白表达下降(P0.05,P0.01)。与模型组比较,用药组晚期凋亡细胞数量下降(P0.01),各用药组之间比较,差异无统计学意义(P0.05);用药组心肌细胞线粒体膜电位升高(P0.01);鹿茸蛋白高剂量组细胞Bax和cleaved-Caspase3表达下降,p-Akt和Bcl-2的表达增加(P0.01),鹿茸蛋白高剂量+LY294002组各蛋白表达无明显变化(P0.05)。结论鹿茸蛋白可能通过调控PI3K/Akt信号通路下游凋亡相关蛋白减轻缺血缺氧对心肌细胞造成的损伤,维持细胞线粒体膜电位稳定性,减少细胞凋亡。     

人参糖蛋白对阿霉素所致心肌毒性的保护作用及其机制研究

目的通过体内外实验,探讨人参糖蛋白对阿霉素心脏毒性的保护作用及机制。方法建立SD大鼠心肌损伤模型,给予人参糖蛋白进行干预后,检测血清中乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH)、肌酸激酶同工酶MB(creatinekinase isoenzymes-MB,CK-MB)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性及谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平;采用苏木素-伊红(HE)染色法观察大鼠心肌组织病理变化。建立心肌细胞H9c2损伤模型,采用CCK-8法检测H9c2细胞活力;通过流式细胞术检测H9c2细胞周期、细胞凋亡、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和线粒体膜电位变化;采用Western blotting法检测H9c2细胞凋亡相关蛋白、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路相关蛋白、沉默信息调节因子2相关酶类3(silent mating type information regulation 2 homolog 3,Sirt3)的表达情况。结果心肌损伤大鼠模型中,模型组大鼠心肌纤维排列紊乱,肌纤维严重变性,LDH和CK-MB活性显著升高(P0.01),SOD活性和GSH水平显著降低(P0.05、0.01);与模型组比较,人参糖蛋白高剂量组心肌肌束排列较为整齐,LDH和CK-MB活性显著下降(P0.05),GSH水平显著升高(P0.05),人参糖蛋白对阿霉素所致的心肌组织病理学损伤有明显修复作用。细胞损伤模型中,模型组细胞存活率显著下降(P0.001),细胞周期阻滞于G1期(P0.01),细胞凋亡显著升高(P0.01),ROS水平显著升高(P0.01),线粒体膜电位显著下降(P0.01),Sirt3、Caspase-3、B淋巴细胞瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白表达水平显著降低(P0.01),Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、p38、细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases 1/2,ERK1/2)蛋白表达水平显著升高(P0.05、0.01);与模型组比较,人参糖蛋白组细胞存活率显著升高(P0.05、0.01),细胞增殖周期恢复,细胞凋亡率显著降低(P0.05),ROS水平显著降低(P0.05),线粒体膜电位显著升高(P0.05),Sirt3、Caspase-3、Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05),Bax、Cyt C、JNK、p38、ERK1/2蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论人参糖蛋白能够通过抗氧化应激、降低线粒体膜电位、提高H9c2细胞内ROS水平并调控MAPK信号通路抑制细胞凋亡,从而保护阿霉素诱导的心肌损伤。     

当归红芪超滤膜提取物对过氧化氢致PC12细胞凋亡的影响

目的观察当归红芪超滤膜提取物对过氧化氢(H2O2)致PC12细胞凋亡的影响,探讨其作用机制。方法 H2O2诱导PC12细胞凋亡,构建氧化损伤神经细胞凋亡模型。实验分为正常对照组、模型组及中药低、中、高剂量组,中药各组给予不同剂量当归红芪超滤膜提取物。流式细胞术检测细胞凋亡率,激光共聚焦显微镜检测细胞线粒体膜电位变化,Western blot检测Bax、Bcl-2和cleaved Caspase-3的蛋白表达。结果与模型组比较,中药各剂量组细胞凋亡率明显降低,线粒体膜电位升高,Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达均减弱,Bcl-2表达增强,Bcl-2/Bax比值升高(P0.05)。结论当归红芪超滤膜提取物具有抗H2O2诱导的PC12细胞凋亡的作用。     

抗纤益心方对去甲肾上腺素诱导H9c2心肌细胞凋亡及凋亡相关因子表达的影响

目的探讨抗纤益心方对去甲肾上腺素(NE)诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响及可能作用机制。方法采用CCK-8法筛选抗纤益心方最佳给药浓度。大鼠H9c2心肌细胞常规培养,饥饿8 h后细胞进行分组,正常组未做处理,模型组加100μmol/L的NE 100μl,抗纤益心方组加入筛选最佳浓度抗纤益心方溶液2μl+100μmol/L的NE 100μl、卡托普利组加入2×10~(-5)mol/L卡托普利5μl+100μmol/L的NE 100μl,各组设3个复孔,作用24 h。流式细胞仪检测细胞凋亡率,并检测凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA和蛋白的表达。结果最终筛选以0. 25 mg/ml的抗纤益心方为干预浓度进行实验。与正常组比较,模型组细胞凋亡率升高,Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达升高,Bcl-2 mRNA和蛋白表达降低(P 0. 01)。与模型组比较,抗纤益心方组和卡托普利组细胞凋亡率降低,Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达降低,Bcl-2 mRNA和蛋白表达升高(P 0. 05或P 0. 01)。结论抗纤益心方可抑制NE诱导的H9c2心肌细胞凋亡,其作用机制可能与调节凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达有关。     

香青兰总黄酮对阿霉素心肌毒性的保护机制研究

目的 探讨香青兰总黄酮（TFDM）对阿霉素心脏毒性的保护作用及相关机制。方法 大鼠心肌细胞H9c2细胞随机分为对照组、模型组和TFDM治疗组（5、25、50、100 μg/mL）。药物干预后,除对照组外,其余各组细胞采用阿霉素1 μmol/L作用24 h制备心脏毒性模型。采用CCK-8法测定TFDM干预后阿霉素损伤对H9c2细胞活力的影响;采用试剂盒法测定各组细胞乳酸脱氢酶（LDH）释放情况及细胞内超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平;采用Annexin-V FITC/PI双染法通过流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;采用DCFH-DA、JC-1探针检测细胞内活性氧（ROS）和线粒体膜电位;采用Western blotting检测各组细胞中p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较,阿霉素诱导的模型组细胞活力下降,LDH、MDA水平升高,SOD活性降低,细胞凋亡率升高,ROS释放显著增多,线粒体膜电位显著下降,而TFDM则剂量依赖性地使细胞活力升高,LDH、MDA水平下降,SOD活性升高,细胞凋亡率降低,ROS释放显著减少,线粒体膜电位显著升高;Western blotting结果显示,与对照组比较,模型组细胞p-PI3K、p-Akt、p-ERK、Bcl-2蛋白表达水平降低,p-p38MAPK、Bax、Caspase-3蛋白表达水平显著升高;与模型组比较,TFDM使细胞中p-PI3K、p-Akt、p-ERK、Bcl-2蛋白表达水平升高,p-p38MAPK、Bax、Caspase-3蛋白表达水平降低。结论 TFDM能够保护心肌细胞,可能通过抗氧化应激,保护心肌细胞线粒体,调节MAPK、PI3K/Akt凋亡通路及其下游凋亡分子的表达抑制细胞凋亡。     

银杏内酯B对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响

目的观察银杏内酯B(GB)对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法将对数生长期的H9C2心肌细胞随机分为5组:对照组、H_2O_2(200μmol/L)干预组、GB(50、100和200μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预组,每组设10个复孔。经药物干预16 h后,采用MTT法检测细胞存活率;测定培养液中心肌酶(AST、CPK、LDH)活性;检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;通过流式细胞仪检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,采用RT-PCR法检测细胞中AKT mRNA、Bcl-2mRNA、Bax mRNA表达,计算Bcl-2/Bax表达比值,Western blot法检测细胞核因子-κB(NF-κB)蛋白表达并进行半定量分析,比色法检测细胞中Caspase-3、Caspase-9活性。结果与H_2O_2干预组比较,GB(100、200μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预组细胞存活率显著升高(P0.01),培养液中AST、CPK、LDH活性显著降低(P0.05或P0.01),细胞中SOD、CAT活性显著升高且MDA含量显著降低(P0.05或P0.01);GB干预组细胞凋亡状况明显好转,其中GB(100、200μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预组细胞凋亡率显著降低(P0.01),AKT mRNA和bcl-2 mRNA表达显著上调(P0.05或P0.01),Bax mRNA表达显著下调(P0.01),Bcl-2/Bax表达比值显著升高(P0.01),细胞中NF-k B蛋白表达量和Caspase-3、Caspase-9活性显著降低(P0.05或P0.01)。结论 GB对H_2O_2诱导损伤H9C2心肌细胞凋亡具有抑制作用;其作用机制可能与GB能够有效改善抗氧化酶活性、降低氧化应激损伤,下调NF-κB蛋白表达,上调抗凋亡基因AKT和bcl-2表达、下调促凋亡基因Bax表达,提高Bcl-2/Bax表达比值,降低Caspase-3、Caspase-9活性有关。     

田蓟苷预处理对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用研究

目的观察田蓟苷对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用,并探讨其机制。方法制备H9c2心肌细胞H/R损伤的模型,MTS比色法观察田蓟苷与H9c2心肌细胞活力的量效关系,明确田蓟苷的保护作用。实验分正常对照组、模型组(H/R)及H/R+田蓟苷不同浓度组,试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH),Hoechst 33342染色检测细胞核变化,Western blot检测田蓟苷抗H9c2心肌细胞H/R损伤中对cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。结果与对照组相比,H/R组细胞活力水平显著降低(P0.001),LDH释放量明显增多(P0.001),细胞核呈现明显的固缩、碎裂征象,平均荧光强度显著增加(P0.001),cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低;与H/R组相比,田蓟苷能够显著提高细胞的活力(P0.001)。显著减少LDH的释放(P0.001),维护细胞膜的稳定性。田蓟苷干预后,可以缓解细胞核的损伤状态,并显著降低细胞核平均荧光强度。cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平显著降低(P0.05),Bcl-2蛋白表达显著升高(P0.05)。结论田蓟苷对H/R诱导的H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤具有一定的保护作用,其机制可能与增强细胞清除自由基能力及抑制细胞凋亡有关。     

参附益心方对血管紧张素Ⅱ诱导H9c2心肌细胞凋亡及线粒体含量、膜电位的影响

目的探讨参附益心方对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的H9c2心肌细胞损伤的干预作用及相关机制。方法采用CCK-8法筛选参附益心方、辅酶Q10、氯沙坦钾实验药物浓度,MTT法筛选AngⅡ实验药物浓度。以H9c2心肌细胞为研究对象,以AngⅡ诱导H9c2心肌细胞损伤为模型,将细胞分为正常对照组、模型组、辅酶Q10组、氯沙坦组和参附益心方低、高剂量组。正常对照组正常培养24 h;模型组用含筛选浓度的AngⅡ的培养基培养24 h;参附益心方低、高剂量组及氯沙坦组、辅酶Q10组用含筛选出相应药物浓度及AngⅡ的培养基培养24 h。检测各组H9c2心肌细胞活性、线粒体含量及膜电位、活性氧簇(ROS)含量、细胞凋亡率,凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax、Bcl-2基因表达,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9蛋白活性。结果最终选择参附益心方低、高浓度为0. 25、0. 5 mg/ml,辅酶Q10研究浓度为1×10~(-4)mol/L,氯沙坦钾研究浓度为1×10~(-4)mol/L,AngⅡ建立实验模型浓度为1×10~(-5)mol/L。与正常对照组比较,模型组大鼠心肌细胞活性、线粒体数量及膜电位、Bcl-2基因表达降低,ROS含量、细胞凋亡率及Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax基因表达升高,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9蛋白活性亦升高(P 0. 05);与模型组比较,参附益心方高剂量组和氯沙坦组、辅酶Q10组细胞活性、线粒体数量及膜电位升高,ROS含量、细胞凋亡率、Caspase-3、Caspase-9、Bax基因表达降低,Caspase-3、Caspase-9蛋白活性亦降低(P 0. 05)。结论参附益心方可能通过改善心肌细胞线粒体功能,降低ROS含量,从而减少AngⅡ诱导的H9c2心肌细胞发生凋亡。     

去甲斑蝥素诱导人皮肤鳞状细胞癌A431细胞凋亡作用

目的探讨去甲斑蝥素(Norcantharidin,NCTD)诱导人皮肤鳞状细胞癌A431细胞凋亡作用及其相关分子机制。方法体外培养A431细胞,分为对照组和NCTD低、高剂量组(20,40μmol·L~(-1))。采用MTT法检测对细胞增殖的抑制作用;Annexin V/PI染色法检测细胞凋亡;试剂盒检测细胞活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)含量、线粒体膜电位(MMP)变化、Caspase-3及Caspase-9酶活性变化;Western Blot法检测对细胞Bcl-2及Bax蛋白表达水平的影响。结果采用NTCD处理A431细胞48 h,与对照组相比,NCTD低、高剂量组均能抑制细胞增殖能力(P0.05),并明显诱导细胞凋亡(P0.05),提高细胞内的ROS水平(P0.05,P0.01)和MDA含量(P0.05,P0.01),降低细胞MMP(P0.05,P0.01)。同时,NTCD可以抑制Bcl-2蛋白表达及上调Bax蛋白表达,并能够明显升高细胞的Caspase-3及Caspase-9酶活性。结论 NCTD可能通过提高细胞内ROS水平的途径诱导A431细胞发生凋亡。     

田蓟苷对缺氧/复氧损伤大鼠心肌细胞H9c2的影响

目的观察田蓟苷对缺氧/复氧损伤大鼠心肌细胞H9c2的影响,探讨其可能的作用机制。方法培养H9c2细胞,缺氧/复氧处理建立缺氧/复氧细胞损伤模型,实验随机分为对照组、模型组和田蓟苷低、中、高剂量组。倒置光学显微镜观察细胞形态;CCK-8法检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;DCFH-DA检测细胞内活性氧(ROS)水平;JC-1探针检测细胞内线粒体膜电位(MMP)水平;Western blot检测肝X受体α(LXR-α)、p-p38MAPK、Akt、p-Akt、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果与对照组比较,模型组H9c2细胞活力下降,ROS释放显著增加,MMP降低,细胞凋亡率升高,LXR-α、p-Akt、Bcl-2蛋白表达降低,p-p38MAPK、Bax和Caspase-3蛋白表达升高;与模型组比较,田蓟苷中、高剂量组H9c2细胞活力升高,ROS含量减少,MMP升高,细胞凋亡率降低,LXR-α、p-Akt、Bcl-2蛋白表达升高,p-p38MAPK、Bax和Caspase-3蛋白表达降低。结论田蓟苷可能通过抑制ROS产生、升高MMP、调节LXR-α/MAPK通路及激活Akt抑制细胞凋亡,保护心肌细胞。     

斑蝥素酸镁诱导BEL-7402人肝癌细胞凋亡的机制

目的探讨斑蝥素酸镁诱导BEL-7402人肝癌细胞凋亡的机制。方法磺酰罗丹明B(SRB)染色法检测不同浓度(1.668、3.336、5.004、6.672μmol/L)斑蝥素酸镁对BEL-7402人肝癌细胞增殖的抑制作用,将细胞随机分为空白对照组、斑蝥素酸镁组(2.43、4.86、9.72μmol/L)、冈田酸组(0.072 nmol/L)。作用24 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率、活性氧(ROS)、线粒体膜电位变化,Western blot检测细胞色素c、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、ERK1/2蛋白磷酸化表达。结果斑蝥素酸镁能明显抑制BEL-7402人肝癌细胞的增殖,呈剂量-效应关系,其IC_(50)为4.86μmol/L;与对照组比较,斑蝥素酸镁组凋亡率、细胞内活性氧(ROS)水平、Cyt-C、Caspase-3、Cleaved-Caspase-3蛋白表达显著增加(P0.01),线粒体膜电位、ERK1/2蛋白磷酸化表达显著降低(P0.01)。结论斑蝥素酸镁可能通过抑制ERK1/2磷酸化水平来反向调节线粒体凋亡途径,最终诱导BEL-7402人肝癌细胞发生凋亡。     

真武汤含药血清对异丙肾上腺素致心肌细胞凋亡Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:观察真武汤含药血清对异丙肾上腺素致大鼠心肌细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响,探讨真武汤对心肌细胞损伤的保护作用机制。方法:采用MTT法分别观察于3 h、6 h、12 h三个时间点异丙肾上腺素对心肌细胞活性的影响,测定细胞存活率,选择建立体外心肌细胞损伤模型所需异丙肾上腺素的最佳时间及剂量。筛选真武汤含药血清的最佳浓度。实验分为空白组、模型组[异丙肾上腺素(10-6mol/L)]、西药组[异丙肾上腺素+卡托普利(10-6mol/L)]、真武汤组(异丙肾上腺素+10%含药血清)。硫代巴比妥酸(TBA)法测定细胞丙二醛(maleic dialdehyde,MDA)的含量来衡量心肌细胞的损伤程度。免疫荧光检测线粒体膜电位。应用TUNEL法检测心肌细胞凋亡率。Western blotting方法测定培养心肌细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:1、异丙肾上腺素对心肌细胞的生长有抑制作用;2、异丙肾上腺素10μmol/L作用6 h后,细胞存活率降低较明显;3、TBA法检测MDA含量:与异丙肾上腺素作用相比,真武汤使心肌细胞内MDA含量减少,使心肌细胞受损伤的程度降低;4、免疫荧光检测线粒体膜电位:模型组与空白组比较线粒体膜电位明显变化,而真武汤与西药组较模型组线粒体荧光表达有所下降;5、TUNEL分析心肌细胞凋亡率:异丙肾上腺素组心肌细胞凋亡率明显升高,与空白组相比有显著性差异(P0.05);卡托普利组及真武汤10%含药血清组心肌细胞凋亡率与异丙肾上腺素组相比明显降低,有显著性差异(P0.05);6、Western Blotting检测结果:异丙肾上腺素组心肌细胞Bcl-2蛋白表达降低、Bax蛋白表达增加,与空白对照组比较有显著性差异(P0.01);真武汤10%含药血清组和西药组与模型组相比较,Bcl-2蛋白表达增加、Bax蛋白表达降低(P0.05)。结论:真武汤能有效降低异丙肾上腺素引起的心肌细胞损伤,抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能与其能够保护心肌细胞内线粒体,调节Bcl-2和Bax蛋白表达有关。     

羟基红花黄色素A对内皮细胞EA.hy926缺氧复氧后凋亡的抑制作用研究

目的观察羟基红花黄色素A(HSYA)对缺氧复氧诱导的人脐静脉内皮细胞EA.hy926凋亡的影响。方法噻唑蓝(MTT)比色法检测不同缺氧(8、12 h)、复氧(4、8、12 h)时间对细胞活力的影响以及不同浓度HSYA(0.1、1、10、100μmol/L)对缺氧12 h、复氧8 h后细胞活力的影响。Western blotting法检测HSYA对缺氧12 h,复氧8 h后EA.hy926细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3)、cleaved Caspase-9蛋白表达的影响。实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测HSYA对缺氧12 h复氧8 h后EA.hy926细胞中Bax、Bcl-2m RNA表达的影响。Hoechest染色、流式细胞术检测HSYA对缺氧12 h复氧8 h后EA.hy926细胞凋亡的影响。结果与对照组比较,缺氧8、12 h,复氧4、8、12 h后EA.hy926细胞活力均显著下降,其中缺氧12 h、复氧8 h后细胞活力下降最为显著(P0.001),且Bax、cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-3蛋白表达水平显著上升、Bcl-2蛋白表达水平显著下降。与模型组比较,HSYA 10μmol/L能够明显提高缺氧复氧后细胞活力(P0.01),并显著上调Bcl-2蛋白表达水平,下调Bax、cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-3蛋白表达水平。结论 HSYA能有效抑制缺氧复氧导致的EA.hy926凋亡,其机制可能与下调Bax、cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-3蛋白表达、上调Bcl-2蛋白表达有关。     

人参皂苷CK抑制人结肠癌SW480细胞增殖的机制研究

目的研究人参皂苷CK对人结肠癌SW480细胞增殖及凋亡的影响,并进一步探讨其作用机制。方法采用CCK-8法检测细胞活力;通过流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡、活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位(MMP)变化;Hoechst染色检测细胞凋亡;蛋白免疫印迹法检测细胞色素C(CytC)释放以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和cleaved Caspase-3等的表达。结果人参皂苷CK对SW480细胞的增殖有显著抑制作用。人参皂苷CK诱导SW480细胞周期阻滞于G0/G1期,促进细胞发生早期凋亡。人参皂苷CK可以显著增加细胞内ROS水平,降低MMP水平;人参皂苷CK促进Bax和cleaved Caspase-3的表达,抑制Bcl-2的表达。此外,人参皂苷CK使SW480细胞内CytC大量释放。结论人参皂苷CK对SW480细胞的增殖具有显著的抑制作用,其作用机制可能是通过促进线粒体超氧化物升高,导致胞内ROS水平显著增加和MMP显著下降,进而导致CytC释放,上调Bax的表达,下调Bcl-2的表达,最终导致细胞发生凋亡。     

忍冬藤提取物诱导骨肉瘤细胞凋亡的作用及机制研究

目的研究忍冬藤Lonicerajaponica提取物对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的作用及机制。方法采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF/MS)表征忍冬藤提取物的化学成分;采用MTT法检测忍冬藤提取物对人骨肉瘤细胞HOS、143B以及人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2存活率的影响;采用荧光显微镜观察忍冬藤提取物对HOS、143B细胞凋亡的影响;采用Annexin V/PI双染法检测忍冬藤提取物对HOS细胞凋亡的影响;采用JC-1染色法检测忍冬藤提取物对HOS细胞线粒体膜电位的影响;采用Westernblotting法检测忍冬藤提取物对HOS细胞B细胞淋巴瘤2相关X蛋白(bcl-2associated X,Bax)、B细胞淋巴瘤2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)、活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、活化的多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleavedpolyADP-ribosepolymerases,cleavedPARP)、cleavedCaspase-9和细胞色素C(cytochrome-c,Cyt-C)蛋白表达的影响。结果忍冬藤提取物中鉴定出有机酸类、三萜皂苷类、黄酮类、环烯醚萜类和氨基酸类5种类型的36种化学成分。忍冬藤提取物抑制HOS和143B细胞存活率,显著诱导HOS细胞凋亡(P0.01),Caspase-3抑制剂Z-VAD-FMK显著抑制忍冬藤提取物诱导的HOS细胞凋亡(P0.05、0.01);忍冬藤提取物显著提高HOS细胞Caspase-3活性(P0.01),显著改变HOS细胞线粒体膜电位(P0.05、0.01),显著上调HOS细胞Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP、cleaved Caspase-9、Cyt-C和Bax/Bcl-2蛋白表达水平(P0.05、0.01),显著下调Bcl-2蛋白表达水平(P0.05、0.01)。结论忍冬藤提取物能够抑制骨肉瘤细胞增殖,并通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP、cleaved Caspase-9和Cyt-C蛋白表达,激活Caspase级联反应有关。