三氧化二砷对K562细胞增殖作用的影响和机制

目的:探讨三氧化二砷(As_2O_3)通过调控细胞周期素D1(CyclinD1)和细胞周期素依赖性激酶抑制剂p27kip1对K562细胞增殖的影响。方法:用细胞增殖实验M TT检测As_2O_3对K562细胞的增殖的影响;选取合适的药物浓度作用于K562细胞,观察As_2O_3对K562细胞凋亡的影响;进一步应用RT-PCR、免疫组织化学和Western blot方法检测As_2O_3对K562细胞CyclinD1和p27kip1表达的作用。结果:As_2O_3可以抑制K562细胞的增殖,细胞抑制率均随药物浓度增大抑制率逐渐增高,在药物作用24 h时呈明显的剂量依赖关系(r=0.9675)。在As_2O_3作用后K562细胞凋亡数量较正常对照组明显增多,其差异有统计学意义(P﹤0.05);在As_2O_3作用K562细胞48 h后CyclinD1的mRNA和蛋白的表达降低,与对照组相比差异有统计学意义(P﹤0.05),但p27kip1的mRNA和蛋白的表达水平没有明显增高。结论:As_2O_3可诱导K562细胞凋亡,As_2O_3可能通过调控CyclinD1的表达诱导细胞凋亡,从而抑制K562细胞的增殖。     

下调NPM基因表达对慢性髓系白血病细胞株K562增殖的抑制作用研究

目的:运用RNA干扰技术抑制核仁磷酸蛋白(NPM)的表达,研究NPM基因在慢性髓系白血病细胞株(K562细胞)增殖中的作用及其机制。方法:采用shRNA抑制NPM的表达,应用实时荧光定量PCR技术检测NPM基因的表达,MTS法检测抑制NPM基因对细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测细胞周期的改变,Western blot检测细胞周期相关蛋白的表达。结果:成功构建了针对NPM基因的shRNA慢病毒载体,并感染K562细胞。检测结果显示,与对照组相比较,抑制K562细胞NPM基因的表达可以抑制细胞的增殖,减少细胞集落形成。干扰NPM基因可使G0/G1期延长,细胞周期阻滞,这可能与下调NPM基因后激活p21蛋白的表达,进而抑制CDK2/Cyclin E复合物形成有关。结论:下调K562细胞NPM基因的表达,可以通过诱导细胞周期阻滞抑制K562细胞的增殖。     

MEIS1/miR-425反馈调节通路对慢性髓系白血病细胞株K562增殖的作用

目的:研究转录因子MEIS1和miR-425对人慢性髓系白血病细胞株K562增殖的调控作用及其分子机制。方法:通过生物信息学预测分析转录因子MEIS1在miR-425启动子区的结合位点情况,ChIP-qPCR结合双荧光报告基因实验检测MEIS1与miR-425启动子的结合情况及其对miR-425启动子的调节作用,CCK-8法检测MEIS1和miR-425对K562细胞增殖的影响,PI染色结合流式细胞术检测MEIS1和miR-425对K562细胞周期的影响,Western blot检测miR-425对MEIS1表达的影响。结果:MEIS1可以与miR-425启动子区结合,并可抑制其活性。使用针对MEIS1的shRNA转染K562细胞后,可显著抑制K562细胞增殖及细胞周期的运行。类似地,使用miR-425的模拟物转染K562细胞后,也可抑制K562细胞的增殖和细胞周期的运行。miR-425可以通过与MEIS13′UTR的结合抑制MEIS1的表达。结论:转录因子MEIS1可在转录水平抑制miR-425的转录活性,miR-425则在转录后水平抑制MEIS1蛋白的表达,因此,两者共同构成一个反馈调节通路作用于K562细胞的增殖。     

Rheb过表达在白血病细胞株HL-60和K562中的作用

mTOR信号通路是细胞内重要的生命活动枢纽,它通过抑制细胞凋亡,促进细胞增殖来调控细胞生命活动。Rheb可以激活mTOR信号通路,进而参与多种肿瘤的发生发展。本研究以髓系白血病细胞株为研究对象,探讨Rheb在HL-60和K562中的作用及相关机制。本研究利用逆转录病毒技术使髓系白血病细胞株HL-60和K562过表达Rheb;利用Western blot和Real-Time PCR分别检测HL-60和K562细胞中Rheb的蛋白表达水平及mRNA表达水平;利用CCK-8法检测细胞活力;利用Annexin V-PE和7-AAD双染检测细胞凋亡。结果表明:成功构建了Rheb过表达的HL-60和K562细胞株,并发现Rheb过表达可以促进细胞生长;进一步研究发现,Rheb过表达加快细胞进入G2/M期(P<0.01),但不影响细胞凋亡。结论:Rheb通过加快细胞周期进程促进HL-60和K562细胞增殖。     

整合蛋白β1在藻蓝蛋白抑制白血病细胞系K562细胞增殖中的作用

本研究观察不同浓度藻蓝蛋白（phycocyanin）对K562细胞增殖的影响，并检测藻蓝蛋白处理后细胞表面整合蛋白β1表达和胞内黏着斑激酶（FAK）基因表达的变化，探讨整合蛋白β1在藻蓝蛋白抑制K562细胞增殖中的可能作用机制。用流式细胞术（FCM）检测藻蓝蛋白处理前后K562细胞表面整合蛋白β1表达变化；MTT法测定不同浓度藻蓝蛋白对K562细胞增殖的影响；RT—PCR检测不同浓度藻蓝蛋白对K562细胞内FAK基因表达的作用。结果表明：整合蛋白β1在K562细胞上高表达；藻蓝蛋白不能改变其表达量。不同浓度藻蓝蛋白对K562细胞的增殖均有抑制作用。藻蓝蛋白可上调胞内FAK的基因表达水平，恢复整合蛋白β1介导的细胞增殖抑制信号。结论：藻蓝蛋白可能通过增强细胞基质与K562细胞表面的整合蛋白β1结合，上调K562细胞内FAK基因表达水平，恢复整合蛋白β1介导的细胞增殖抑制信号而发挥抑制K562细胞增殖的作用。     

细胞周期蛋白E2反义脱氧寡核苷酸对K562细胞增殖及凋亡的调控作用

目的 研究细胞周期蛋白E2 (cyclin E2)反义脱氧寡核苷酸(ASON)对人红白血病细胞K562增殖的调控作用.方法 采用反义技术合成ASON并与K562细胞共培养.用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染ASON和脂质体lipofectamineTM 2000后的细胞活力,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测转染细胞cyclin E2 mRNA表达水平及流式细胞术和形态学观察检测细胞凋亡.结果 Cyclin E2特异的ASON能显著地抑制cyclin E2mRNA水平的表达(F=26.442,P＜0.01);白血病细胞的生长明显受抑制(P＜0.01),细胞凋亡明显增加.结果 表明反义脱氧寡核苷酸能有效地抑制K562细胞的增殖,抑制K562细胞cyclin E2 mRNA表达上调,并显著地诱导细胞凋亡.结论 脂质体转染cyclin E2的反义寡核苷酸能够有效地抑制K562细胞cyclin E2 mRNA的表达,同时对白血病细胞K562的生长有明显的抑制作用,并可诱导K562细胞凋亡.提示cyclin E2在细胞周期调控中起作用,cyclinE2基因有望作为反义技术治疗急性白血病中的一个较有意义的新靶点.     

MicroRNA-17-92 簇对 K562 细胞生物学特性的影响及机制初探简

本研究旨在探讨microRNA-17-92对K562细胞生物学特性的影响.以K562细胞系为模型,采用lipofectin2000转染miR-17-92 mimic,应用Q-PCR方法鉴定基因表达水平,CCK-8细胞增殖检测试剂盒检测K562细胞增殖活性,Annexin V-FITC/PI标记检测K562细胞的凋亡;细胞经过乙醇固定后利用流式细胞仪检测K562细胞周期变化,Western blotting检测相关蛋白Crk的表达.结果显示：K562细胞系转染miR-17-92 mimic后miR-17-92表达增高;miR-17-92高表达后K562细胞的增殖能力增强、在细胞周期方面由G1期向S期细胞增加;同时,miR-17-92 mimic能够抑制乏血清诱导的K562细胞凋亡;Western blot检测显示miR-17-92 mimic促进Crk蛋白的表达.结论：miR-17-92可以促进K562细胞增殖,抑制其凋亡并调控细胞周期变化.     

RNA特异性干扰bcr-abl融合基因联合p27基因克隆对K562细胞的影响

本研究旨在探讨RNA干扰抑制慢性髓系白血病bcr-abl融合基因表达,以及RNAi和p27基因克隆联合作用对K562细胞的细胞增殖、细胞周期及凋亡等的调控作用。以细胞系K562为研究对象,合成并转染针对K562细胞bcr-abl融合基因融合位点的21nt siRNA,应用Northern blot法检测bcr-abl融合基因的表达,Western blot法检测BCR-ABL蛋白及凋亡相关蛋白BCL-xL的表达;同时应用RT-PCR扩增p27基因,构建P27-pcDNA3.1载体,转染p27基因入缺失p27基因的K562细胞,经筛选得到G418抗性的K562细胞株;经Western blot证实有P27蛋白表达后,联合应用RNA干扰及p27基因克隆,通过MTT法及流式细胞仪等检测联合作用后对K562细胞的细胞增殖、细胞周期及凋亡等的调控作用。结果表明,RNA干扰组K562细胞bcr-abl融合基因的表达水平明显下降,转染24小时时有18.4%的K562细胞发生凋亡,细胞凋亡相关蛋白BCL-xL的表达水平下调,出现明显的G1期阻滞;表达外源性P27蛋白的P27-pcDNA3.1-K562细胞株生长速度明显慢于对照K562细胞株。流式细胞仪检测显示,G0/G1期细胞增多,S期细胞明显减少;RNA干扰与p27基因克隆联合作用于K562细胞后,凋亡细胞比例明显上升(33.4%)。MTT法显示,细胞存活率较单纯p27-K562细胞组及RNA干扰-K562细胞组均明显下降(p0.01和p0.05)。结论:特异性siRNA分子可以抑制bcr-abl融合基因的表达,诱导K562细胞分化或凋亡。RNA干扰联合p27基因克隆对抑制K562细胞增殖及促凋亡方面具有协同作用。     

慢病毒介导的RNA干扰HMGA2基因表达对HL-60细胞增殖及细胞周期素B2、A2表达的影响

目的 探讨慢病毒介导的RNA干扰沉默高迁移率族蛋白A2(HMGA2)基因表达对人急性白血病细胞系HL-60细胞增殖及细胞周期素(cyclin) B2、cyclin A2表达的影响.方法 制备表达HMGA2基因短发夹RNA(shRNA)的重组慢病毒载体,转染HL-60细胞.通过半定量RT-PCR和Western blot检测特异性shRNA转染后HL-60细胞HMGA2基因表达;CCK-8法检测细胞增殖抑制率;软琼脂克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术(FCM)检测细胞周期; RT-PCR及Western blot检测cyclin B2、cyclin A2 mRNA和蛋白表达水平.结果 RT-PCR和测序证实,成功构建了表达HMGA2 shRNA的重组慢病毒载体;RT-PCR和Western blot证实经嘌呤霉素筛选出的阳性克隆转染的HL-60细胞HMGA2 mRNA和蛋白表达水平与空载体组相比明显受抑,抑制率分别达(80.66 ± 7.98)%和(76.35±12.72)%;CCK-8比色结果显示,HMGA2表达受到稳定干扰的HL-60细胞增殖活力明显受到抑制,细胞增殖曲线低平,缺乏指数增殖特征.FCM检测显示,与对照组相比,转染特异性shRNA的HL-60细胞出现了明显的G2/M期阻滞,G2/M期细胞分别为(13.90±4.07)%和(30.00±5.78)%(P<0.05).HMGA2特异性shRNA转染的HL-60细胞cyclin B2 mRNA和蛋白表达与未转染细胞相比,抑制率分别为(67.55±7.69)%和(51.77±4.81)%(P<0.01).而cyclin A2的表达无明显改变.结论 HMGA2基因沉默可下调cyclin B2表达,从而使细胞出现明显的增殖抑制和G2/M期阻滞.     

Wt1基因与Ph~+白血病细胞系K562的生物学特性

Wt1基因是与造血调控、白血病发生及治疗预后密切相关的双功能基因,在急性髓系白血病及慢性粒细胞白血病进展期呈高表达,且与预后呈负相关,已用于临床微量残留病的监测。WT1蛋白不同亚细胞定位发挥不同生物学功能。本研究旨在探讨Ph+白血病细胞系K562中wt1 mRNA及蛋白的表达与定位,wt1抑制剂——姜黄素(curcumin)对K562细胞的增殖及细胞周期的影响及wt1在白血病发生发展中的相关作用机制。采用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术分析细胞周期改变;免疫荧光技术及Western blot观察WT1蛋白的亚细胞定位及药物处理后表达水平的变化;实时定量PCR法观察药物处理后wt1及bcr/ablp210转录本水平的变化。结果表明,wt1 mRNA及蛋白在K562细胞高表达,姜黄素及格列卫均能降低wt1 mRNA及蛋白的表达水平,抑制细胞增殖;姜黄素使K562细胞停滞于G2/M期,而格列卫使其停滞于G0/G1期。结论:wt1基因表达改变可以影响Ph阳性细胞—K562的生长、增殖,调控wt1表达有可能成为Ph阳性白血病的新的治疗策略。     

Acadesine对K562细胞的增殖抑制作用及其对伊马替尼敏感性增强的影响

目的:探索腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)激动剂Acadesine(AICAR)对K562细胞的增殖抑制作用及对伊马替尼(IM)敏感性的影响。方法:以不同浓度的AICAR单用或联合IM处理K562细胞48 h,应用CCK-8法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期分布及凋亡,Western blot检测Cyclin D1、Cyclin E1及Caspase 3蛋白表达水平。结果:AICAR对K562细胞增殖具有抑制作用,且呈浓度依赖性,其48 h的IC_(50)为0.45 mmol/L;AICAR可诱导K562细胞发生G_1期阻滞并可下调Cyclin D1和Cyclin E1蛋白的表达水平,但不能诱导其凋亡发生;AICAR与IM联用与单用相比,K562细胞的增殖活性明显被抑制(P0.05)。结论:AICAR可通过阻滞细胞周期抑制K562细胞增殖,且与IM具有协同作用。     

晚期糖基化终末产物和汉防己甲素对K562及K562/A02细胞增殖的影响

本研究旨在探讨晚期糖基化终末产物(AGE)对K562及K562/A02细胞增殖的影响及汉防己甲素(Tet)对AGE诱导细胞增殖的干预作用,并初步探讨其可能机制。用CCK8法观察AGE对K562及K562/A02细胞增殖及Tet对AGE诱导细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率及晚期糖基化终末产物受体(RAGE)的表达,并用半定量RT-PCR检测RAGE mRNA相对表达水平。结果显示:AGE可促进K562及K562/A02细胞增殖,呈浓度依赖性,0-48 h内细胞增殖随时间延长而增强,72 h增殖仍明显高于对照组;AGE上调两种细胞RAGE mRNA及其蛋白的表达,具有浓度依赖性;Tet与AGE共作用于K562及K562/A02细胞48 h,可通过诱导细胞凋亡抑制AGE促细胞增殖的作用,且呈浓度依赖性,但Tet对AGE诱导RAGE mRNA及其蛋白表达的增加未见明显影响。结论:AGE可促进K562及K562/A02细胞增殖,其机制可能与上调细胞RGAE mRNA及其蛋白的表达有关;Tet可抑制AGE诱导的K562及K562/A02细胞增殖,其机制可能与改变AGE诱导的RGAE mRNA及其蛋白表达增加无关。     

肌醇5'磷酸酶基因突变对K562细胞周期蛋白和Akt磷酸化的影响

目的 从分子水平探讨肌醇5'磷酸酶(SHIP)基因突变对人白血病细胞系K562细胞周期及其相关基因表达的影响.方法 应用携带野生型和突变型SHIP及绿色荧光蛋白的慢病毒及空载体慢病毒质粒转染K562细胞,通过流式细胞术检测K562/SHIP细胞转染效率、细胞增殖指数及细胞周期变化;MTT法检测细胞增殖活性改变,实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测SHIP mRNA水平变化,Western blot检测各组K562细胞SHIP、细胞周期蛋白(cyclin)D1、p21WAF1/CIPI、P27KIP1蛋白表达水平及Akt磷酸化变化.结果 野生型SHIP基因能明显抑制K562细胞增殖,并产生明显的G0/G1期阻滞[G0/G1期细胞分别为(34.2±7.8)%和(0.7±8.3)%,P<0.01];但SHIP基因点突变并未影响K562细胞增殖及细胞周期改变[G0/G1期细胞分别为(33.4±4.2)%和(36.3±6.7)%,P>0.05].Western blot结果发现转染野生型SHIP基因后K562细胞Akt磷酸化和cyclin D1表达水平明显下降(P<0.01),p21WAF1/CIPI、p27KIP1表达增高,而突变型SHIP基因对Akt磷酸化水平和细胞周期蛋白表达几乎没有影响(P>0.05).结论 ①野生型SHIP基因通过下调K562细胞Akt磷酸化水平,进而抑制其下游cyclin D1表达,上调p21WAF1/CIPI和p27KIP1基因表达,导致细胞周期阻滞在G0/G1期,抑制K562细胞增殖;②SHIP基因突变体(TTC→CTC,Phe→Leu)丧失了对K562细胞的增殖抑制作用,提示SHIP基因对K562细胞增殖的负调控作用有赖于其基因结构和功能正常.     

过表达Src诱导K562细胞产生格列卫耐药

目的:探讨过表达Src激酶在诱导K562细胞产生耐药中的作用及机制.方法:应用质粒转染的方法在K562细胞中过表达Src激酶,WST方法检测对格列卫(Imatinib)的敏感性,并通过RNA干扰特异抑制Src激酶,检测其对耐药的K562/G细胞增殖的影响.结果:在K562细胞中过表达Src激酶,显著提高细胞对格列卫的耐药性;用siRNA方法抑制Src激酶,24 h就可以抑制约47％的K562/G细胞增殖.结论:Src激酶在诱导K562细胞耐药中发挥重要作用,抑制Src激酶可以抑制细胞增殖,Src激酶可以成为治疗耐药的慢性粒细胞白血病的新靶点.     

CPEB4对慢性髓系白血病细胞增殖与凋亡的影响

目的:探索CPEB4在K562细胞中的表达、生物学活性及其可能的分子机制。方法:采用Western blot检测正常白细胞和K562细胞中CPEB4的表达情况;再将过表达质粒pcDNA3.1(+)-His-CPEB4、沉默质粒pPLK+Puro-CPEB4 shRNA电穿孔转染K562细胞,改变CPEB4在K562细胞中的表达量,应用Western blot检测转染效率;最后应用CCK-8和流式细胞术检测不同处理的细胞增殖和凋亡情况,并用Western blot法检测增殖与凋亡标志蛋白(AKT、p-AKT、caspase-3、BCL-2)的表达变化。结果:与正常白细胞相比,K562细胞中CPEB4蛋白表达量较高(P0.01);CPEB4沉默的K562细胞与对照组相比,细胞增殖水平显著增高(P0.001),细胞凋亡数显著减少,AKT、p-AKT、BCL-2蛋白表达水平明显增高,而caspase-3蛋白表达显著降低;CPEB4过表达后的K562细胞增殖减慢(P0.05),细胞凋亡数明显增加,AKT、p-AKT和BCL-2蛋白表达显著降低,caspase-3蛋白表达增高。结论:CPEB4可抑制K562细胞增殖,促进K562细胞凋亡,而AKT、p-AKT、BCL-2和Caspase-3等分子参与调控机制。     

S1PR2拮抗剂JTE-013抑制白血病细胞增殖

目的:探讨鞘氨醇-1-磷酸受体2(sphingosine-1-phosphate receptor 2,S1PR2)特异性拮抗剂JTE-013对人慢性髓系白血病(CML)K562细胞增殖的影响。方法:将JTE-013(0,0.5,1,5,10,20μmol/L)分别作用于人慢性髓系白血病细胞系K562细胞24、48 h,采用CCK-8法检测细胞活力;用JTE-013(0,5,10,20μmol/L)处理K562细胞24 h,采用碘化丙啶(PI)DNA染色法检测细胞周期变化;采用Western blot检测细胞周期蛋白P21和Cyclin D1表达水平。结果:JTE-013呈浓度依赖性抑制CML细胞系K562细胞增殖(r=-0.971)。实验结果显示,随着JTE-013作用浓度的升高,K562细胞活力逐渐降低(r=-0.971),且这种增殖抑制作用是通过将K562细胞阻滞在G0/G1期来实现的。进一步对G_0/G_1期调控蛋白进行检测,发现随JTE-013处理浓度升高,周期蛋白P21表达逐渐升高(r=0.835),Cyclin D1蛋白表达逐渐减少(r=-0.803)。结论:S1PR2拮抗剂JTE-013可抑制人CML细胞系K562细胞增殖,可能是通过将细胞阻滞在G_0/G_1期有关。     

槲皮素对K562和K562R细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:观察槲皮素(Qu)对伊马替尼(IM)敏感细胞K562及耐药细胞K562R的增殖、凋亡、细胞周期的影响,探讨凋亡及细胞周期调控因子、Wnt/β-catenin信号通路及BCR-ABL的表达变化,为Qu的临床应用提供实验室依据。方法:应用台盼蓝染色法检测K562和K562R细胞的增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期的分布;荧光定量PCR及Western blot法分别检测Wnt/β-catenin信号通路成员、细胞凋亡及细胞周期相关因子的mRNA及蛋白的表达。结果:经Qu 5、10、20、40、80、160、320μmol/L作用于K562细胞后,K562细胞抑制率分别为5.07%、5.98%、11.09%、31.88%、56.89%、70.44%、86.63%;K562R细胞抑制率分别为4.99%、9.75%、10.54%、8.93%、25.13%、46.89%、68.60%。K562、K562R的IC_(50)分别为76.4和230.2μmol/L。Qu 50、100和200μmol/L可诱导K562和K562R细胞凋亡(r=0.9914),使细胞周期阻滞于G_1期(r=0.9871),且呈剂量依赖趋势。与对照组比较,Qu作用于K562后,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9及p21、p27 mRNA及蛋白(Caspase-9除外)表达均有升高(P 0.05),K562R细胞除p27外,其他mRNA和蛋白(Caspase-3除外)均表达增加。Wnt/β-catenin信号通路成员GSK-3β、β-catenin、Lef-1,下游靶向PPAR-δ、Cyclin D1 mRNA及蛋白表达水平均降低(P 0.05)。BCR-ABL mRNA表达降低,但BCR-ABL及p-BCR-ABL蛋白表达无明显变化。结论:Qu能够抑制K562及K562R细胞的增殖,降低其耐药性,增加敏感性,这与Qu抑制Wnt/β-catenin信号通路、激活凋亡途径及细胞周期因子相关。     

DLL4/Notch1配体过表达抑制K562细胞生长机制研究

本研究旨在探讨Notch1信号通路的配体delta-like ligand4（DLL4）基因过表达对K562细胞增殖的影响及其可能的作用机制.采用脂质体介导将含配体DLL4基因的质粒pBudCE4.1-DLL4转染K562细胞,通过RT-PCR和Western blot检测转染48 h后DLL4基因的mRNA及蛋白表达,同样检测转染后Notch1受体胞内区（NICD）、下游靶基因Hesl的mRNA及蛋白表达;通过Western blot检测与Notch信号通路相关的细胞转录因子YY1、原癌基因C-MYC及抑癌基因Rb蛋白的表达水平;用CCK-8法检测转染后细胞的增殖情况;用流式细胞术检测转染质粒48 h后各组细胞的凋亡情况.结果表明,DLL4基因转染后的K562细胞中DLL4、NICD及下游靶基因Hesl的mRNA及蛋白表达量比对照组明显增多（P＜0.05）,说明DLL4的过表达激活了Notch1信号通路;Western blot方法检测显示,DLL4的转染增加了细胞转录因子YY1、原癌基因C-MYC及抑癌基因Rb蛋白的表达,从而抑制了K562细胞的生长,诱导细胞周期停滞于G1期及细胞凋亡的增加.结论：外源性DLL4基因过表达可有效活化K562细胞内Notch1信号通路,可能通过YY1、C-MYC及Rb等Notch信号通路相关基因的高表达诱导K562细胞的生长减慢及细胞凋亡.     

高三尖杉酯碱对K562细胞NF-κB和BCL-2蛋白表达的影响

本研究旨在探讨高三尖杉酯碱（HHT）对K562细胞增殖、凋亡及BCL-2和NF-κB蛋白表达的影响。不同浓度HHT作用K562细胞后用MTT法、流式细胞仪、Western blot等方法分别检测细胞增殖、凋亡、BCL-2及NF-κB蛋白表达水平。结果表明,HHT作用48h,浓度依赖性抑制K562细胞增殖,Ic50为43．89rig／ml。HHT10ng／ml作用48h,K562细胞凋亡率明显增高;细胞周期阻滞于G0／G1期;BCL-2和NF-κB蛋白表达水平明显低于对照组（P〈0．05）。结论：HHT对K562细胞有显著的增殖抑制、细胞周期阻滞和凋亡诱导作用,抑制NF-κB和BCL-2表达可能是其抗CML的机制之一。     

Rigosertib对白血病细胞系HEL和K562的抗肿瘤作用及机制研究

目的:探讨Rigosertib对白血病细胞系HEL和K562细胞的凋亡、增殖和细胞周期的影响及其作用机制。方法:Rigosertib梯度浓度作用于HEL和K562细胞,采用Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,WST-1法绘制细胞增殖曲线,PI染色流式细胞术检测细胞周期,流式细胞术胞内染色检测胞内信号通路蛋白表达。结果:Rigosertib明显诱导HEL和K562细胞凋亡且呈现时间依赖性(r=0.997)和剂量依赖性(r=0.987);以低剂量Rigosertib浓度(0.5μmol/L)分别作用于HEL和K562细胞6-54 h,明显抑制HEL和K562细胞增殖,诱导HEL和K562细胞阻滞于 G_0/M期, G_1期细胞比例明显降低。流式细胞术分析显示,Rigosertib激活胞内凋亡蛋白cleaved caspase 3和cleaved PARP蛋白的表达,同时抑制增殖蛋白BCL-2和Cyclin D1蛋白的表达。此外Rigosertib明显抑制AKT、磷酸化AKT(S473)和磷酸化GSK-3α/β(S21/9)的表达。结论:Rigosertib诱导白血病细胞系HEL和K562细胞凋亡,增殖抑制和细胞周期阻滞,其抗肿瘤作用可能通过抑制AKT-GSK信号通路而实现的。本研究为rigosertib进一步应用于临床前研究提供了实验依据。