吲哚美辛对白血病细胞增殖和细胞衰老的影响

目的:观察吲哚美辛对白血病细胞体外增殖与细胞衰老的影响,探讨非甾体类抗炎药物对白血病的辅助治疗作用。方法:吲哚美辛30μmol/L处理U266、K562、U937细胞株,连续培养7 d后,以台盼蓝拒染法检测细胞活率,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,用细胞衰老检测试剂盒检测各组细胞各时间点(0、4、7 d)的细胞衰老情况,RT-PCR检测增殖抑制基因P21、P27 mRNA的表达水平。结果:药物作用后U266、U937的细胞活率显著降低(P0.01)。K562细胞活率未发生显著变化。U266、U937细胞均于G2/M期发生不同程度阻滞,K562细胞周期变化不明显。U266、K562、U937的细胞凋亡率升高(P0.01)。药物处理后,除U937细胞的P27变化不明显外,U266和K562细胞系的P21和P27 mRNA表达水平均显著增高。K562、U937细胞衰老率明显增高(P0.01)。结论:吲哚美辛对白血病细胞具有抑制作用,但其机制可因白血病细胞的种类不同而异;提示非甾体类抗炎药物可对白血病起辅助治疗作用,但需根据白血病的类型适当选择。     

细胞周期蛋白E2反义脱氧寡核苷酸对K562细胞增殖及凋亡的调控作用

目的 研究细胞周期蛋白E2 (cyclin E2)反义脱氧寡核苷酸(ASON)对人红白血病细胞K562增殖的调控作用.方法 采用反义技术合成ASON并与K562细胞共培养.用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染ASON和脂质体lipofectamineTM 2000后的细胞活力,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测转染细胞cyclin E2 mRNA表达水平及流式细胞术和形态学观察检测细胞凋亡.结果 Cyclin E2特异的ASON能显著地抑制cyclin E2mRNA水平的表达(F=26.442,P＜0.01);白血病细胞的生长明显受抑制(P＜0.01),细胞凋亡明显增加.结果 表明反义脱氧寡核苷酸能有效地抑制K562细胞的增殖,抑制K562细胞cyclin E2 mRNA表达上调,并显著地诱导细胞凋亡.结论 脂质体转染cyclin E2的反义寡核苷酸能够有效地抑制K562细胞cyclin E2 mRNA的表达,同时对白血病细胞K562的生长有明显的抑制作用,并可诱导K562细胞凋亡.提示cyclin E2在细胞周期调控中起作用,cyclinE2基因有望作为反义技术治疗急性白血病中的一个较有意义的新靶点.     

HSP90抑制剂17-DMAG对白血病细胞株K562增殖及凋亡的影响

目的:通过HSP90抑制剂17-二甲基胺乙基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-DMAG)作用于白血病K562细胞株,观察HSP90在白血病K562细胞增殖与凋亡中的作用。方法:收集K562细胞,应用HSP90抑制剂17-DMAG作用于K562细胞株,通过半定量PCR检测HSP90的基因表达,WST技术检测17-DMAG对细胞增殖的影响,Annexin V流式细胞术检测细胞凋亡。结果:17-DMAG处理K562细胞不同时间后,K562细胞的生长明显受抑,且呈时间依赖性(48 h)(r=0.9918)和剂量依赖性(3.2μmol/L)(r=0.9999)(P0.01);不同浓度17-DMAG处理K562细胞不同时间后,K562细胞明显凋亡,且呈剂量依赖性(r=0.9903)(P0.01);不同浓度17-DMAG作用于K562细胞48 h后,HSP90 mRNA表达明显减少,17-DMAG下调HSP90 mRNA的表达,且呈剂量依赖性(r=0.9227)(P0.01)。结论:HSP90抑制剂17-DMAG能够抑制白血病K562细胞的增殖,诱导K562细胞凋亡,这为17-DMAG用于白血病的治疗提供实验依据。     

Rigosertib对白血病细胞系HEL和K562的抗肿瘤作用及机制研究

目的:探讨Rigosertib对白血病细胞系HEL和K562细胞的凋亡、增殖和细胞周期的影响及其作用机制。方法:Rigosertib梯度浓度作用于HEL和K562细胞,采用Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,WST-1法绘制细胞增殖曲线,PI染色流式细胞术检测细胞周期,流式细胞术胞内染色检测胞内信号通路蛋白表达。结果:Rigosertib明显诱导HEL和K562细胞凋亡且呈现时间依赖性(r=0.997)和剂量依赖性(r=0.987);以低剂量Rigosertib浓度(0.5μmol/L)分别作用于HEL和K562细胞6-54 h,明显抑制HEL和K562细胞增殖,诱导HEL和K562细胞阻滞于 G_0/M期, G_1期细胞比例明显降低。流式细胞术分析显示,Rigosertib激活胞内凋亡蛋白cleaved caspase 3和cleaved PARP蛋白的表达,同时抑制增殖蛋白BCL-2和Cyclin D1蛋白的表达。此外Rigosertib明显抑制AKT、磷酸化AKT(S473)和磷酸化GSK-3α/β(S21/9)的表达。结论:Rigosertib诱导白血病细胞系HEL和K562细胞凋亡,增殖抑制和细胞周期阻滞,其抗肿瘤作用可能通过抑制AKT-GSK信号通路而实现的。本研究为rigosertib进一步应用于临床前研究提供了实验依据。     

与白血病骨髓间充质干细胞共培养后K562细胞增殖与凋亡的变化

目的比较K562细胞与人白血病骨髓间充质干细胞(LMSC)共培养前后增殖和凋亡的变化。方法采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)分析法检测SCG和CCG组K562细胞光密度(OD)值,比较不同培养条件下K562细胞的增殖情况。采用流式细胞仪检测与LMSC共培养后K562细胞周期变化,Annexin V/聚酰亚胺(PI)荧光标记法检测血清饥饿后与LMSC共培养后K562细胞凋亡的变化。结果与LMSC共培养后,K562细胞的增殖受到明显抑制,CCG组OD值明显低于SCG组。流式细胞仪检测细胞周期发现,与LMSC共培养后,G0~G1期细胞比例明显增高,S期细胞比例明显下降,且G2~M期细胞比例也呈上升趋势;CCG+0%FBS组K562细胞凋亡较SCG+10%FBS组明显增多,较SCG+0%FBS明显降低,LMSC有抵抗白血病细胞凋亡的作用。结论 LMSC通过阻滞G0~G1期K562细胞周期而发挥抑制增殖的作用,并能抑制血清饥饿诱导的K562细胞凋亡。     

蒿甲醚对K562细胞作用的体外实验研究

目的:探讨蒿甲醚对人慢性髓性白血病细胞K562体外增殖、细胞周期和凋亡的影响.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(简称MTT)法测定不同浓度蒿甲醚对K562细胞生长抑制作用.计算半数抑制浓度(IC50);流式细胞术DNA含量分析检测蒿甲醚对K562细胞周期的影响,流式细胞仪TUNEL法检测蒿甲醚对K562细胞凋亡的作用.结果:蒿甲醚可以抑制K562细胞增殖,经药物作用24、48、72 h后,IC50分别为(32.27±0.15)、(27.48±0.08)、(25.00±0.37)μg/mL;流式细胞术DNA含量分析结果显示蒿甲醚作用后,G2/M期细胞增多;流式细胞术TUNEL法显示蒿甲醚作用后K562细胞凋亡率和坏死率均高于对照组.结论:蒿甲醚可以抑制人慢性髓性白血病细胞株K562细胞增殖、影响细胞周期、诱导肿瘤细胞的凋亡.     

miR-124-3p靶向ABCA2增强慢性白血病细胞K562-R对伊马替尼的敏感性

目的:探讨miR-124-3p靶向ABCA2对CML细胞株耐药性及细胞活性的影响。方法:过表达miR-124-3p和ABCA2的CML细胞株K562-R及裸鼠皮下移植瘤模型用于本研究。设置K562-R空白对照组、miR-124-3p mimic对照组、ABCA2过表达组和mimic+pc ABCA2组,研究miR-124-3p和ABCA2对K562-R细胞的影响。Western Blot检测体系中增殖、凋亡和自噬相关分子表达;qRT-PCR检测体系中miR-124-3p和ABCA2的表达;荧光素酶系统及生物信息学软件预测miR-124-3p和ABCA2之间靶向关系。CCK-8染色检测细胞增殖,Hoechst染色检测细胞凋亡,免疫组织化学检测细胞凋亡和增殖相关分子。结果:miR-124-3p在K562耐药细胞(K562-R)中低表达,在K562敏感细胞(K562-S)中高表达;ABCA2在K562-R中高表达,在K562-S中低表达(P0.01);生物信息学和荧光素酶报告系统检测显示,miR-124-3p靶向调节ABCA2表达。miR-124-3p过表达能有效抑制K562-R细胞增殖,促进细胞凋亡和自噬发生(P0.01);而ABCA2过表达则促进K562-R细胞增殖,明显抑制凋亡和自噬发生(P0.01);进一步通过裸鼠体内皮下移植瘤模型表明,miR-124-3p可以有效抑制K562-R细胞增殖,促进细胞凋亡和自噬(P0.01)。结论:miR-124-3p可以通过靶向ABCA2来有效抑制白血病耐药细胞株K562-R的增殖,促进细胞凋亡和自噬。     

下调miR-125b以抑制白血病K562细胞的增殖

目的:探讨下调mi R-125b对白血病K562细胞的增殖抑制作用及相关机制。方法:利用LipofectamineTM2000脂质体将mi R-125b inhibitor和mi R-125b NC转染于白血病K562细胞中,应用RT-PCR法检测mi R-125b表达,MTT法检测细胞活力,琼脂糖形成实验检测细胞集落形成能力,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测细胞中BCL-2、BCL-2同源拮抗物1(Bak1)、p53及p53正向细胞凋亡调控因子(Puma)表达。结果:与mi R-125b NC比较,mi R-125b inhibitor组mi R-125b表达下调(P0.01),细胞活力及细胞集落形成能力降低(P0.01),细胞周期阻滞在G1期(P0.01),BCL-2表达下调(P0.01),BAK1、p53和Puma表达上调(P0.01)。结论:mi R-125b表达量下调能显著地抑制白血病细胞K562的增殖,这一效应与下调BCL-2表达、上调BAK1、p53及Puma表达有关。     

氟达拉滨联合丙戊酸对慢性粒细胞白血病细胞凋亡诱导作用

目的 研究氟达拉滨（Fludarabine,FDB）联合丙戊酸（valproic acid,VPA）对慢性粒细胞白血病（chronic myeloidleukemia,CML）细胞株K562增殖及凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 慢性粒细胞白血病细胞株K562,单独使用不同浓度的FDB（1,5,10μmol/L）或VPA（1,2.5,5 mmol/L）,或联合使用FDB和VPA处理K562细胞,采用MTT法检测细胞增殖情况,并观察其有效的作用浓度;流式细胞仪检测K562细胞周期变化;western blot检测凋亡相关蛋白及组织蛋白酶B的表达变化.结果 单独使用FDB或VPA均可明显抑制K562细胞的增殖,呈剂量依赖性,并使K562细胞停滞在G0/G1期,联合使用VPA能增强FDB对K562细胞的凋亡诱导作用.同时检测到FDB和VPA能诱导溶酶体中组织蛋白酶B的表达.结论 联合使用FDB和VPA可诱导K562细胞溶酶体中组织蛋白酶B的表达及活性,从而启动溶酶体介导的细胞凋亡过程,明显抑制K562细胞的增殖,并促进K562细胞的凋亡,提高治疗效果,为临床抗肿瘤治疗提供新的指导方向.     

三氧化二砷对K562/ADM耐药细胞凋亡抑制的逆转作用

目的:研究三氧化二砷(As2O3)诱导白血病K562/ADM耐药细胞凋亡的分子机制。方法:采用MTT比色法检测K562/ADM耐药细胞增殖活性,细胞形态学和annexinV /PI双染色检测细胞凋亡,RT-PCR检测mdr1、bcl-2和caspase-3基因mRNA的表达水平,流式细胞法(FCM)测定P-糖蛋白(P -glycoprotein,P-gp)和bcl-2蛋白表达及caspase-3活性。结果:As2O3显著抑制K562/ADM耐药细胞的增殖;经 As2O3处理后细胞形态上出现典型的凋亡改变,annexinV /PI双染显示凋亡细胞明显增加;mdr1mRNA表达和P-gp合成明显降低,凋亡抑制基因bcl-2mRNA及其蛋白bcl-2表达下调, caspase-3mRNA表达和caspase-3活性显著增强。结论:As2O3诱导K562/ADM耐药细胞凋亡,其主要机制可能为As2O3抑制 mdr1和bcl-2基因表达,逆转耐药白血病细胞因bcl-2和P-gp高表达所介导的凋亡抑制。     

热休克蛋白90抑制剂17-AAG诱导K562细胞凋亡作用的研究

目的研究热休克蛋白90(Hsp90)抑制剂17-AAG诱导人白血病细胞系K562细胞凋亡及其分子机制。方法用17-AAG处理K562细胞,用四氮唑盐还原法(MTT法)检测17-AAG对K562细胞增殖抑制的剂量-时间-效应关系,瑞特-姬姆萨染色观察细胞形态学变化,Hoechst 33342荧光染色观察凋亡细胞核的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化,Western blot检测相关蛋白分子的变化。结果17-AAG呈时间和剂量依赖性抑制K562细胞,5μmol／L 17-AAG作用24 h,K562细胞增殖抑制率接近50％,阻断细胞周期于G0／G1期。5μmol／L 17-AAG作用12 h G0／G1期细胞占47．22％;24 h占71．62％,并出现明显的凋亡峰。17-AAG可有效清除Hsp90底物蛋白,阻断Raf／Mek- Erk及PI3K／Akt信号通路。结论17-AAG通过抑制K562细胞中Hsp90的分子伴侣功能,清除其底物蛋白Bcr-Abl、Raf-1、Akt、Cdk4、XIAP、survivin等,导致细胞内与增殖和抗凋亡相关的Raf/Mek-Erk、PI3K／Akt信号通路被阻断,从而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

酪氨酸激酶抑制剂STI571与P21WAF基因克隆治疗慢性粒细胞白血病的实验研究

本研究探讨酪氨酸激酶抑制剂ST1571和P21^WAF基因克隆对慢性粒细胞白血病急变K562细胞株的细胞增殖、细胞周期及凋亡等的治疗作用。RT—PCR扩增P21^WAF基因，胶纯化回收后连接到T载体测序，序列正确后构建P21—pcDNA3．1栽体，将P21—pcDNA3．1与空载体分别以脂质体转染入P21蛋白表达缺如的K562细胞，经筛选得到G418抗性的K562细胞株，Westernblot证实转染后有P21蛋白表达，MTT法检测细胞存活率，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果表明：表达外源性P21蛋白的P21—pcDNA3．1-K562细胞株生长速度明显慢于对照K562细胞株，流式细胞仪显示G0／G1期细胞增多，MTT法显示P21—pcDNA3．1-K562细胞与ST1571联合应用后，与单用ST1571作用的K562细胞相比，凋亡细胞比例轻度减少，细胞存活率下降较慢。结论：表达外源P21蛋白能抑制K562细胞增殖，同时对ST1571的促凋亡作用有轻度抑制，并降低K562细胞对ST1571的敏感性。     

miR-17-92簇对慢性粒细胞白血病细胞K562增殖和凋亡的影响

目的 探讨miR-17-92簇对慢性粒细胞白血病(CML)细胞K562增殖和凋亡的影响。方法 采用RT-qPCR检测CML细胞K562中miR-17-92表达水平;采用Lipofectamin 2000转染miR-17-92 mimic,CCK-8检测转染后K562细胞增殖能力; Annexin V-FITC/PI标记,流式细胞仪检测转染后K562细胞凋亡情况,Western blotting检测转染后K562细胞中转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白表达水平。结果 CML CD34+细胞中miR-17-92表达水平显著高于健康者CD34+细胞,差异有统计学意义(P值均0. 05)。转染miR-17-92后,K562细胞增殖能力较对照组显著升高,凋亡能力较对照组显著降低,差异有统计学意义(P值均0. 05)。转染miR-17-92后K562细胞中TGF-β1蛋白表达水平较对照组均显著升高,差异有统计学意义(P值均0. 01)。结论 miR-17-92表达促进细胞的增殖能力,抑制细胞的凋亡,在CML中发挥促癌基因作用,其作用机制可能与TGF-β1信号通路的激活有关。     

三氧化二砷对白血病细胞株K562的杀伤作用

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对白血病细胞株K562的杀伤作用。方法采用台盼蓝拒染法计数活细胞数，并计算细胞生长率；细胞涂片经Wright—Giemsa染色，光镜下观察细胞的形态。结果As2O3对白血病K562细胞的增殖具有明显的抑制作用。4μmol／L的As2O3能够使K562细胞发生M期阻滞，引起部分细胞发生凋亡。结论As2O3：不但抑制K562细胞的增殖，而且导致K562细胞M期阻滞。     

三氧化二砷对白血病细胞株K562的杀伤作用

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对白血病细胞株K562的杀伤作用。方法采用台盼蓝拒染法计数活细胞数,并计算细胞生长率;细胞涂片经Wright Giemsa染色,光镜下观察细胞的形态。结果As2O3对白血病K562细胞的增殖具有明显的抑制作用。4μmol/L的As2O3能够使K562细胞发生M期阻滞,引起部分细胞发生凋亡。结论As2O3不但抑制K562细胞的增殖,而且导致K562细胞M期阻滞。     

三氧化二砷对K562细胞增殖抑制作用及其机制研究

目的:研究三氧化二砷(ATO)抑制K562细胞增殖的机制,探索慢性髓系白血病(CML)治疗的新靶点。方法:体外培养人CML细胞株K562细胞,采用不同浓度ATO处理K562细胞;MTT法检测经ATO处理24、48和72 h后细胞的增殖状况;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡、细胞周期变化、K562细胞表面分子CD44的表达水平;RT-PCR分析K562细胞β-catenin和cyclinD1基因的改变。结果:2μmol/L ATO处理的细胞即出现显著的细胞增殖抑制效应,且抑制率呈时间和剂量依赖性(r=0.997,r=0.813),随着药物浓度的增加及作用时间的延长,CD44的表达率逐渐下降。AnnexinV/PI双染FCM显示,2.5-10μmol/L的ATO作用48 h均可诱导K562细胞凋亡,且呈剂量依赖性(r=0.985)。不同浓度ATO作用细胞48 h后,G_0/G_1期的细胞比例随药物浓度的增加逐渐增高(r=0.813),S期细胞比例逐渐降低(r=-0.800)。RT-PCR结果显示,随着ATO浓度的增加K562细胞β-catenin及CylinD1的表达水平逐渐下降(r=-0.924)。结论:在一定的浓度范围内ATO能够抑制K562细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制可能是通过下调CD44影响Wnt/β-catenin通路的传导,使细胞周期停滞在G0/G1期,影响基因转录,从而抑制K562细胞的增殖。     

中药复方君子汤对白血病细胞株K562增殖和凋亡的影响

本研究探讨中药复方君子汤（FFJZ）对抑制白血病K562细胞生长增殖和诱导凋亡的生物学特点及其可能的作用机制。应用细胞形态学、台盼蓝拒染法观察细胞生长状态;四氮甲唑蓝（MTT）法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果表明：一定浓度范围的FFJZ作用于K562细胞后,随FFJZ药物浓度的升高其对K562细胞生长的抑制率明显增加（p〈0.01）,其半数抑制浓度（IC50）约为5.6mg/ml。在FFJZ浓度为4mg/ml时,细胞凋亡以早期凋亡为主,而至8mg/ml组时晚期凋亡比例显著增多,与未加药组比较有显著差异（p〈0.01）。结论：在体外FFJZ一定浓度范围内可以抑制白血病K562细胞的生长增殖,诱导其凋亡并呈浓度依赖性,其机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

Src激酶抑制剂ZD6474对白血病耐药细胞系K562/A02细胞增殖的影响及其作用机制探讨

目的 研究Src激酶抑制剂ZD6474对K562及其耐药株K562/A02细胞增殖的影响及其作用机制.方法 用不同浓度ZD6474处理K562、K562/A02细胞,观察细胞的增殖情况;用流式细胞术分析细胞周期的变化;用Western blot法分析ZD6474处理前后K562/A02细胞Src激酶及其磷酸化水平.用K562和K562/A02细胞建立裸鼠皮下移植瘤模型,待肿瘤直径达到0.5 ～1.0 cm,灌胃方法每天给予25、50及100 mg/kg ZD6474,生理盐水灌胃作为对照,观察ZD6474对裸鼠移植瘤的影响.并对移植瘤组织进行HE染色和免疫组化染色检测Src激酶表达(末次给药后24h)的改变.结果 ZD6474呈剂量依赖的方式抑制K562和K562/A02细胞增殖,作用48 h的IC50值分别为(1.61±0.07)μmol/L和(3.22±0.21) μmol/L.6μmol/L ZD6474分别作用K562和K562/A02细胞24 h,可以诱导G0/G1期细胞分别由(40.2±9.4)％、(25.0±7.0)％提高至(76.3±6.1)％、(54.2±6.6)％.6 μmol/L ZD6474可呈时间依赖方式抑制磷酸化(p)-Src和Src激酶的表达.用灌胃方法给予ZD6474,连续给药18 d,50 mg/kg ZD6474对K562和K562/A02移植瘤的抑制率分别为43.7％和56.3％.结论 ZD6474可通过抑制Src激酶磷酸化水平诱导K562/A02细胞凋亡;体内给药可抑制裸鼠移植瘤的生长.     

吴茱萸碱诱导不同起源的白血病细胞凋亡的研究

目的:探讨吴茱萸碱对白血病细胞株K562、Raji、Jurkat的作用.方法:采用CCK8试剂盒检测药物对细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期、凋亡率、死亡率及胞内ROS水平.结果:昊茱萸碱对K562、Raji、Jurkat细胞均有抑制作用,并呈时效量效关系.作用48 h的IC50值分别为K562细胞17.84μmol/L,Raji细胞27.49μmol/L,Jurkat细胞18.89μmol/L.吴茱萸碱作用后三种细胞阻滞在G2/M期,凋亡率、死亡率及胞内ROS水平随着药物浓度增加而增加.结论:吴茱萸碱对不同起源的白血病细胞均有抑制增殖的作用.     

Acadesine对K562细胞的增殖抑制作用及其对伊马替尼敏感性增强的影响

目的:探索腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)激动剂Acadesine(AICAR)对K562细胞的增殖抑制作用及对伊马替尼(IM)敏感性的影响。方法:以不同浓度的AICAR单用或联合IM处理K562细胞48 h,应用CCK-8法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期分布及凋亡,Western blot检测Cyclin D1、Cyclin E1及Caspase 3蛋白表达水平。结果:AICAR对K562细胞增殖具有抑制作用,且呈浓度依赖性,其48 h的IC_(50)为0.45 mmol/L;AICAR可诱导K562细胞发生G_1期阻滞并可下调Cyclin D1和Cyclin E1蛋白的表达水平,但不能诱导其凋亡发生;AICAR与IM联用与单用相比,K562细胞的增殖活性明显被抑制(P0.05)。结论:AICAR可通过阻滞细胞周期抑制K562细胞增殖,且与IM具有协同作用。