ADAMTS13依赖性血管性血友病因子水解相关影响因素的研究进展

血浆中血管性血友病因子(vWF)多聚体的相对分子质量的大小主要是由血浆中的血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)通过剪切vWF A2功能域内的Tyr1605-Met1606之间的肽键而实现的.ADAMTS13对vWF的水解是受多种因素调控或影响的,此种ADAMTS13依赖性vWF水解过程的改变具有重要的生理或病理意义.     

ADAMTS13的结构、功能及其与TTP诊疗的关系

血管性血友病因子裂解蛋白酶（ADAMTS 13）是一种能够特异性裂解血管性血友病因子（vWF）的血浆金属蛋白酶,严重的ADAMTS13活性缺失可导致特发性血栓性血小板减少性紫癜（TTP）的发生.本文简要综述了ADAMTS13的结构和功能及其与TTP的发病机制、诊断和治疗之间的关系.     

无流体剪切力条件下ADAMTS13裂解内皮细胞上特大血管性血友病因子的研究

目的：研究血管性血友病因子裂解酶（ADAMTS13）在无流体剪切力下裂解内皮细胞上特大血管性血友病因子（ULVWF）的分子机制,为探明血栓性血小板减少性紫癜（TTP）和其他血栓性疾病的发病机理提供理论依据。方法：通过免疫荧光显微镜观察ADAMTS13在无流体剪切力下裂解内皮细胞表面上ULVWF的情况,采用ELISA测定不同条件下培养基中VWF抗原量的变化。ELISA和Western blot分别测定有无流体剪切力或凝血因子VIII(FVIII)条件培养基中的VWF和蛋白水解片段的数量。多聚体分析评估ADAMTS13裂解内皮细胞上ULVWF的情况。将组胺刺激的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）与ADAMTS13和各种N-和C-末端截断的突变体一起孵育,通过免疫荧光显微镜观察与细胞保持结合的ULVWF,ELISA测定内皮细胞释放出的ULVWF,确定降解内皮细胞上ULVWF所需的ADAMTS13结构域。结果：在无流体剪切力下,重组ADAMTS13和血浆ADAMTS13迅速降解了内皮细胞表面上新形成的ULVWF。ULVWF的蛋白水解过程依赖于培养时间、ADAMTS13浓度和剪切力。ADAMTS13...     

急性心肌梗死患者血浆vWF/ADAMTS13比值与冠状动脉病变程度的关系

目的 探讨急性心肌梗死(AMI)患者的血管性血友病因子/血管性血友病因子裂解酶比值?(vWF/ADAMTS13)与AMI患者冠状动脉(冠脉)病变严重程度的关系.方法 纳入2018年4月1日至2019年3月1日在新疆维吾尔自治区人民医院心内科住院并且行冠脉造影的人群,根据是否确诊为AMI分为AMI组和对照组.采用Gens...     

血管性血友病因子裂解蛋白酶活性的检测方法及评估

血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13,vWF-CP)裂解血浆中具有高黏附能力的超大分子量血管性血友病因子(UL-vWF),防止血小板因其引起聚集形成血栓。ADAMTS13活性异常是临床上血栓性血小板减少性紫癜(TTP),特别是遗传性TTP和特发性TTP发病的基础。其活性的检测在TTP临床诊断和治疗上具有日益重要的意义。目前报道的一些用于检测ADAMTS13活性的方法有十余种,本文对此进行综述。     

血管性血友病因子裂解蛋白酶活性的检测方法及评估

血管性血友病因子裂解酶（ADAMTS13，vWF—CP）裂解血浆中具有高黏附能力的超大分子量血管性血友病因子（UL—vWF），防止血小板因其引起聚集形成血栓。ADAMTS13活性异常是临床上血栓性血小板减少性紫癜（TTP），特别是遗传性TTP和特发性TTP发病的基础。其活性的检测在TTP临床诊断和治疗上具有日益重要的意义。目前报道的一些用于检测ADAMTS13活性的方法有十余种，本文对此进行综述。     

急性冠状动脉综合征血浆hs-CRP、vWF及其裂解酶含量改变的意义

目的:检测不稳定型心绞痛、急性心肌梗死患者血浆中高敏C反应蛋白和血管性血友病因子及其裂解酶水平,探讨其在发病机制中的作用和相互联系.方法:研究对象分不稳定心绞痛组和急性心肌梗死组、稳定型心绞痛组和正常对照组,应用酶联免疫吸附试验测定血浆血管性血友病因子浓度和高敏C反应蛋白含量,以残余胶原结合力试验测定血浆血管性血友病因子裂解酶活性水平.结果:(1)不稳定型心绞痛组和急性心肌梗死组血浆高敏C反应蛋白与血管性血友病因子水平均高于稳定型心绞痛组和正常对照组﹙P＜0.01﹚;(2)不稳定型心绞痛组和急性心肌梗死组血浆血管性血友病因子裂解酶活性水平均低于稳定型心绞痛组和正常对照组﹙P＜0.01﹚.结论:(1)血浆高敏C反应蛋白、血管性血友病因子水平升高可能是预测急性冠状动脉综合征斑块破裂和血栓形成的指标;(2)血浆血管性血友病因子裂解酶降低在急性冠状动脉综合征血栓形成中可能起重要作用.     

A1500E突变对血管性血友病因子的ADAMTS13依赖性水解的影响

目的 研究血管性血友病因子(VWF) A1500E突变体对金属蛋白酶ADAMTS13敏感性的改变,为VWF-A1500E突变导致2A型血管性血友病(VWD)的发病机制提供直接依据.方法 将野生型VWF质粒和A1500E突变体VWF质粒分别瞬时转染HeLa细胞,收集并浓缩培养上清,分别用重组人ADAMTS13( rADAMTS13)进行水解,然后通过十二烷基硫酸钠-琼脂糖凝胶电泳进行VWF多聚体分析,观察与野生型VWF相比,A1500E突变体VWF对ADAMTS13的敏感性有无改变.结果 体外表达研究结果显示WT-VWF和A1500E突变体VWF的表达上清中VWF:Ag的平均含量分别为1.10 U/ml和0.78 U/ml,突变体细胞裂解液中的VWF:Ag表达量为野生型的90.6％,两者差异均无统计学意义(P＞0.05).VWF多聚体电泳显示突变体VWF与WT-VWF的多聚体分布亦无明显差别.在无尿素和盐酸胍等变性剂的静态条件下,rADAMTS13即可对A1500E突变体VWF进行有效地水解,VWF多聚体分析显示大中分子量VWF多聚体明显减少和小分子量VWF多聚体明显增多;相反,野生型VWF在非变性条件下则无被rADAMTS13水解的证据.结论 A1500E突变导致突变体VWF对ADAMTS13的敏感性异常性增高,符合第二组2A型VWD的突变特点.     

急性心肌梗死和脑梗死患者血浆中ADAMTS13的测定及意义

目的 研究急性心肌梗死(AMI)及急性脑梗死(AIS)患者血浆中血管性血友病因子(vWF)裂解酶(ADAMTS13)抗原和活性变化情况,探讨ADAMTS13在动脉血栓性疾病患者发病中的作用及意义.方法 用Frests-WF73试剂盒检测血浆中ADAMTS13的活性;用ELISA法检测ADAMTS13抗原含量;并对患者血浆vWF多聚物进行电泳分析.结果 正常对照组、AMI组和AIS组ADAMTS13抗原含量分别为(878±198)、(618±188)和(702±155)U/L;活性分别为(81.7±13.9)%,(59.2±22.1)%和(65.4±15.8)%.AMI组和AIS组ADAMTS13抗原含量及活性均显著低于正常对照组(P《0.01);vWF多聚物分析未见异常.结论 AMI及AIS患者血浆ADMATS13抗原及活性均降低,提示ADAMTS13的减少与动脉血栓性疾病的发病相关.     

ADAMTS13蛋白C-末端结构调节其酶活性的研究

目的 初步研究并探讨ADAMTS13蛋白C-末端结构域变化在调节其酶活性方面的作用.方法 将人全长野生型及缺失C-末端TSP8和CUB结构域的截短型重组ADAMTS13基因转染Hela细胞并稳定表达.分别在静态尿素变性条件及蜗旋装置提供的高剪切力条件下观察这两种ADAMTS13蛋白酶切血管性血友病因子(vWF)的差异,同时利用Western blot技术及残余胶原结合实验对结果进行检测,另外利用ELISA法直接检测这两种ADAMTS13蛋白静态条件下结合vWF的能力.结果 在Hela细胞真核表达载体表达并纯化了全长野生型及缺失C-末端TSP8和CUB结构域的截短型ADAMTS13蛋白,分别利用鼠抗His-Tag单抗(抗载短型ADAMS113单)及兔抗人ADAMTS13多抗Western blot法鉴定了其特异性.静态尿素变性条件下,截短型ADAMTS13蛋白酶活性显著高于野生型,且静态条件下在结合vWF的能力方面,截短型也显著高于野生型;但在高剪切力作用下,只有全长野生型ADAMTS13可以对vWF进行剪切.结论 ADAMTS13蛋白C-末端TSP8和CUB结构域在不同条件下可以调节ADAMTS13蛋白结合vWF的能力,从而调节其酶活性的发挥,ADAMTS13蛋白C-末端在高剪切力作用条件下对ADAMTS13酶活性的发挥至关重要.     

脓毒症患者血清假血友病因子血管性血友病因子裂解酶水平变化的临床意义

目的 探讨脓毒症患者血清假血友病因子(VWF)、血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)水平变化的临床意义.方法 收集66例脓毒症患者的血清及临床资料,并从正常人群中随机抽取20例志愿者的血清,采用ELISA法分别定量检测血清VWF和ADAMTS13水平.把脓毒症患者分为脓毒症(sepsis,S)组、严重脓毒症(severe sepsis,SS)组及多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)组,与正常对照(C)组比较,观察血清VWF、ADAMTS13水平变化与脓毒症严重程度之间的关系.结果 S组、SS组和MODS组血清VWF、ADAMTS13水平与C组比较差异有统计学意义(P＜0.05).S组和SS组血清VWF水平显著高于C组,MODS组VWF水平较S组和SS组显著增高,ADAMTS13水平在脓毒症各组均显著低于C组.结论 VWF、ADAMTS13从脓毒症发病早期即开始参与,患者血清VWF水平的变化在预测脓毒症预后较ADAMTS13更敏感.     

血管性血友病因子裂解蛋白酶的研究进展

血管性血友病因子裂解蛋白酶是一种大分子量的单链糖蛋白,属于金属蛋白酶的ADAMTS亚家族(ADAMTS13),在体外、体内有较长的半生存时间.其活性主要是在vWF225kDa亚单位A2区域的Tyr842-Met843间裂解vWF,将UL-vWF转变为分子量相对小的多聚体形式,从而保证vWF多聚体的多态性分布,预防微血管内血小板血栓形成.     

TSP2-8和CUB1+2片段对血管性血友病因子裂解酶分泌方向的影响

本研究旨在探讨羧基端TSP2-8和CUB1+2片段是否决定血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)合成后细胞内运输的方向,以了解金属蛋白酶ADAMTS13羧基端结构与功能的关系。利用脂质体转染技术将重组质粒pcDNA3.1-ADAMTS13及pcDNA3.1-delTSP2-8CUB1+2ADAMTS13分别转染犬肾上皮极性细胞MDCK,筛选出阳性细胞克隆后传代铺到中间有特殊分子筛膜的双池培养皿内培养,待细胞生长到无空隙后收集上、下池培养液;通过Western blot检测上、下池培养液中ADAMTS13蛋白表达水平,以对比分析ADAMTS13蛋白在极性细胞内的分泌方向。结果表明,稳定表达野生型ADAMTS13的MDCK细胞组,在分子筛膜的上池培养液中检测到ADAMTS13蛋白,而表达缺失TSP2-8CUB1+2区域ADAMTS13的细胞组,在分子膜的上、下池培养液中均检测到ADAMTS13重组蛋白。结论:金属蛋白酶ADAMTS13的分泌是有极性的,且羧基端TSP2-8和CUB1+2结构域与ADAMTS13合成后细胞内的运输方向密切相关。     

ADAMTS13与炎症反应

ADAMTS13是血管性血友病因子裂解酶(vWF-CP).其含量与活性的改变与血栓及炎症性疾病密切相关.本文就ADAMTS13与血管性血友病因子和炎症性疾病的关系,及其在白细胞流动和黏附中的机制作一综述.     

特发性血小板减少性紫癜和系统性红斑狼疮患者血浆中血管性血友病因子裂解蛋白酶的测定

血管性血友病因子（vwF）裂解蛋白酶（ADAMTS13）是近年发现的调节vwF分子量大小的主要蛋白酶。ADAMTS13活性缺乏临床上可导致血栓性血小板减少性紫癜（TTP）的发生。Moore等报道特发性血小板减少性紫癜（ITP）、系统性红斑狼疮（SLE）等患者ADAMTS13活性也降低，为进一步明确ADAMTS13在ITP和SLE发病中的意义，我们用新近建立的试剂盒检测了上述患者ADAMTS13及vWF的抗原含量。     

血管性血友病因子裂解蛋白酶的研究进展

血管性血友病因子裂解蛋白酶是一种大分子量的单链糖蛋白，属于金属蛋白酶的ADAMTS亚家族（ADAMTS13），在体外，体内有较长的半生存时间，其活性主要是在vWF225kDa亚单位A2区域的Tyr842-Met843间裂解vWF，将UL-vWF转变为分子量相对小的多聚体形式，从而保证vWF多聚体的多态性分布，预防微血管内血小板血栓形成。     

房颤患者vWF与ADAMTS-13水平的变化及意义

目的 研究房颤患者vWF、ADAMTS-13的变化及意义.方法 分别测定27例持续性房颤、20例阵发性房颤患者和25例正常对照组血浆血管性血友病因子（vWF）、血管性血友病因子裂解酶（ADAMTS-13）水平、D-二聚体（D-D）水平,测vWF/ADAMTS-13比值.结果 与对照组比较,阵发性房颤组、持续性房颤组的vWF、D-D均显著增高、ADAMTS-13明显下降,vWF/ADAMTS-13比值明显增高;vWF/ADAMTS-13比值在阵发性房颤组和持续性房颤组间差异有统计学意义,且持续性房颤组比值与D-D水平呈正相关.结论 房颤患者存在有明显vWF、ADAMTS-13水平变化,且与其可能出现的血栓栓塞并发症有密切关系.     

去冷沉淀血浆制备前后ADAMTS13质量变化

目的比较去冷沉淀血浆(CRP)制备前后血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13)的质量变化。方法运用荧光共振能量转移法(FRET)分别测定20人份新鲜冰冻血浆(FFP)和CRP中的ADAMTS13抗原含量和活性,并比较两者之间的差异。结果 FFP和CRP中ADAMTS13抗原含量分别为(744.59±104.75)ng/ml和(720.07±91.53)ng/ml,活性分别为(126.75±49.47)%和(131.62±50.03)%,(P>0.05)。结论 CRP可代替FFP用于血栓性血小板减少性紫癜(TTP)的治疗,为补充我国现行成分血品种及其临床使用范畴提供了支持数据。     

血管性血友病因子裂解蛋白酶与炎症反应相关疾病的研究进展

血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS-13)主要由肝脏星状细胞、血管内皮细胞、骨骼肌细胞等细胞合成和分泌,随着研究的深入发现,ADAMTS-13与血栓性血小板减少性紫癜、脓毒症、弥漫性血管内凝血以及自身免疫性疾病等的发生发展均有密切关系,本文就AD-AMTS-13与炎症反应相关疾病方面的研究进展作一综述。     

血管性血友病因子裂解酶CUB区的稳定表达及其鉴定

目的 该研究旨在得到血管性血友病因子裂解酶ADAMTS13中重组的CUB区蛋白,进一步研究其生物功能.方法 利用脂质体将编码CUB区序列的重组质粒pSecTag-CUB转染Hela细胞.用潮霉素（hygromycin-B）筛选得到阳性克隆细胞株,并扩大培养,收集上清.利用Ni-NTA琼脂糖柱,梯度咪唑淋洗法纯化蛋白,SDS-PAGE和Western blotting鉴定纯化产品纯度和免疫学活性.结果 成功获得一株能恒定分泌重组CUB区蛋白的细胞株CUB-7,每1 L培养上清可纯化剑6.0mg重组蛋白.Western blotting结果显示,6×His抗体能与重组蛋白在41kD处显单一条带.结论 重组蛋白具有较好的免疫原活性和纯度,为进一步研究CUB区在ADAMTS13中的作用机理和运用奠定了良好的基础.