加减三甲散对肝纤维化大鼠Th17/Treg平衡的影响

目的:观察加减三甲散对肝纤维化大鼠肝脏Th17/Treg平衡的调控作用,从免疫学的角度探索其作用机制。方法:选取健康雄性大鼠18只,随机分成正常组、模型组、治疗组(加减三甲散组)。采用猪血清腹腔注射法复制大鼠肝纤维化模型,治疗组以加减三甲散干预,治疗60 d后检测各组大鼠肝纤维化指标、Th17细胞和Treg细胞的相关指标,了解Th17/Treg平衡的变化情况。结果:(1)与正常组比较,模型组大鼠肝纤维化指标LN、Ⅳ-C、PCⅢ、HA明显升高(P0.01);与模型组比较,加减三甲散组LN、PCⅢ、HA显著下降(P0.01或P0.05),Ⅳ-C无明显变化(P0.05)。(2)模型组大鼠RORγt、Foxp3、IL-6,IL-17、IL-10、RORγt/Foxp3、IL-6/IL-10、IL-17/IL-10均较正常组显著升高(P0.01或P0.05),加减三甲散组上述指标均较模型组显著降低(P0.01或P0.05)。结论:加减三甲散可减轻大鼠肝纤维化程度,其可能机制是通过下调肝组织中Th17及Treg细胞数量,使Th17/Treg平衡偏于Treg方向发展,从而有利于肝纤维化的控制及逆转。     

从Th17/Treg失衡探讨肝纤维化“主客交浑”机制

目的:从Th17/Treg失衡探讨肝纤维化"主客交浑"机制。方法:选取健康雄性大鼠16只,随机分成正常组和模型组。采用猪血清腹腔注射法复制大鼠肝纤维化模型,造模结束后检测两组大鼠肝纤维化指标、Th17细胞和Treg细胞的相关指标,了解Th17/Treg平衡的变化情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠肝纤维化指标LN、Ⅳ-C、PCⅢ、HA明显升高,差异有统计学意义(P0.01);模型组大鼠RORγt、Foxp3、IL-6、IL-17、IL-10、RORγt/Foxp3、IL-6/IL-10、IL-17/IL-10均较正常组显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论:肝纤维化大鼠出现了以Th17细胞占优势的Th17/Treg失衡,失衡的Th17/Treg可能是肝纤维化"主客交浑"的机制之一。     

龙胆泻肝汤对变应性接触性皮炎模型小鼠Treg/Th17细胞平衡调节作用的实验研究

目的:观察变应性接触性皮炎Treg/Th17细胞平衡的变化,探讨龙胆泻肝汤治疗变应性接触性皮炎的部分干预机制。方法:将40只小白鼠随机分为4组:空白组、模型组、龙胆泻肝汤组、氢化可的松琥珀酸钠组,每组10只。采用DNCB皮肤涂抹方法制备小鼠背部ACD模型。模型复制成功后,龙胆泻肝汤组、氢化可的松琥珀酸钠组小鼠均按照成人2倍等效剂量灌胃,连续给药21 d,空白组、模型组给予等量蒸馏水灌胃。实验结束后,取小鼠致敏部位皮肤,对皮肤组织中Foxp3、RORγt、IL-17 mRNA及蛋白的表达水平进行检测。结果:与空白对照组比较,模型对照组、西药组、龙胆泻肝汤组小鼠皮肤组织中Foxp3 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P0.01);而IL-17、RORγt mRNA及蛋白表达水平显著升高(P0.01)。与模型对照组比较,西药组和龙胆泻肝汤组小鼠皮肤组织中Foxp3 mRNA及蛋白表达水平显著升高(P0.01);而IL-17、RORγt mRNA及蛋白表达水平显著降低(P0.01)。结论:Treg/Th17细胞失衡可能是变应性接触性皮炎的发病机制之一,而龙胆泻肝汤可能就是通过作用于该靶点,调节Treg/Th17细胞平衡,而实现其对变应性接触性皮炎的治疗作用。     

玉屏风散及过敏煎合止嗽散对PM2.5致Th17/Treg失衡诱发肺损伤大鼠的影响

目的观察PM2.5致辅助性T细胞17(TH17)与调节性T细胞(Treg)失衡诱发的大鼠肺损伤及不同中药治法的干预作用。方法将SPF级雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、中药1组和中药2组。采用气道滴注方法建立PM2.5致肺损伤模型,模型组和正常组予生理盐水灌胃,中药1组和及中药2组分别予玉屏风散及过敏煎合止嗽散灌胃。ELISA检测各组肺泡灌洗液(BALF)及血清白细胞介素(IL)-17、IL-10、IL-8、中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、黏蛋白(MUC)5AC含量;免疫组化检测肺组织Foxp3、IL-17的表达。结果与正常组比较,模型组血清和BALF IL-8、IL-17、NE、MUCAC含量显著升高,IL-10含量明显降低(P0.05,P0.01),肺组织IL-17蛋白表达明显增加、Foxp3蛋白表达明显降低(P0.01);与模型组比较,中药1组及中药2组血清和BALF IL-8、IL-17、NE含量明显降低,BALF IL-10明显升高,中药2组血清IL-10明显升高(P0.05),肺组织IL-17蛋白表达明显降低、Foxp3蛋白表达明显增加(P0.01),病理学变化明显改善。结论 PM2.5可通过引起Th17/Treg失衡诱发肺损伤,玉屏风散及过敏煎合止嗽散均可明显改善PM2.5致大鼠肺组织病理损害,并可改善PM2.5导致的TH17/Treg失衡。     

千金苇茎汤对香烟烟雾暴露模型大鼠肺组织Th17/Treg分化及其相关细胞因子表达的影响

目的:观察千金苇茎汤对香烟烟雾暴露模型大鼠肺组织辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)分化及其相关细胞因子表达的影响。方法:雄性大鼠60只,随机分为正常组,烟雾模型组,乙酰半胱氨酸组、千金苇茎汤高、中、低剂量组,共6组,每组10只。香烟烟雾造模30 d后,药物分别干预30 d,后处死各组大鼠并取组织;实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)检测维甲酸相关孤儿受体(ROR-γt),叉头状/翼状螺旋转录因子3(Foxp3)mRNA表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肺组织白细胞介素-17(IL~(-1)7),IL-6,IL~(-1)0,转化生长因子-β_1(TGF-β_1)含量,苏木素-伊红(HE)染色切片观察肺组织病理,流式细胞术检测Treg(Foxp3~+CD25~+)比例,Th17(CD4~+IL~(-1)7~+)比例,Treg/Th17。结果:与正常组比较,模型组ROR-γt mRNA表达显著升高(P0.01);与模型组比较,千金苇茎汤高、中、低剂量组干预后都能够降低其表达(P0.05,P0.01);与正常组比较,模型组Foxp3 mRNA表达明显降低(P0.05),与模型组比较,千金苇茎汤中低剂量组干预后表达明显升高(P0.05)。与正常组比较,模型组IL~(-1)7,IL-6含量明显升高,IL~(-1)0,TGF-β1含量明显降低(P0.05,P0.01);与模型组比较,千金苇茎汤高、中、低剂量组干预后能够降低肺组织IL~(-1)7,IL-6含量,同时升高IL~(-1)0的含量(P0.05),与Real-time PCR检测的结果趋势一致。流式细胞术检测显示,千金苇茎汤中、低剂量组干预后Th17(CD4~+IL~(-1)7~+)比例降低,Treg/Th17增加(P0.05,P0.01)。结论:千金苇茎汤能调节Treg/Th17,使Th17/Treg达到平衡状态。     

犀角地黄汤对免疫性血小板减少症模型大鼠外周血CD4~+ CD25~+调节性T细胞及Th17细胞的影响

目的探讨犀角地黄汤对免疫性血小板减少症(ITP)模型大鼠外周血CD4~+ CD25~+调节性T细胞(Treg)、Th17细胞及相关细胞因子的影响。方法将48只大鼠随机分为正常组、模型组、醋酸泼尼松组及犀角地黄汤低、中、高剂量组,每组8只。除正常组外,其余组均采用腹腔注射兔抗大鼠血小板血清(APS)建立ITP模型,于造模开始后第7天开始,各给药组灌胃给予相应剂量药物,连续14 d。采用血细胞计数仪检测造模前、灌胃前、灌胃结束后各组大鼠外周血中血小板数目;灌胃结束后,采用流式细胞术检测各组大鼠Treg、Th17细胞比例,采用实时荧光定量PCR法检测淋巴细胞Foxp3 mRNA相对表达量,采用酶联免疫吸附法检测血清白细胞介素-17(IL-17)、IL-35水平。结果灌胃结束后,与模型组比较,犀角地黄汤各剂量组大鼠血小板数目明显上升(P均0.05),外周血淋巴细胞中Treg所占比例、Foxp3 mRNA相对表达量及IL-35水平均明显上升(P均0.05),而Th17细胞所占比例及IL-17水平均明显下降(P均0.05),且具有剂量依赖性;犀角地黄汤高剂量组各指标与醋酸泼尼松组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论犀角地黄汤可能通过上调ITP大鼠外周血中Treg细胞表达,下调Th17细胞表达,维持Treg/Th17平衡,进而调节相关细胞因子IL-17、IL-35的表达发挥抗血小板减少作用。     

黄芪甲苷对结肠炎小鼠的抑炎作用及对外周血Th17细胞比例的影响研究

探讨黄芪甲苷对溃疡性结肠炎(UC)小鼠的抑炎作用及对外周血辅助性T细胞(Th17)比例的影响。采用2%葡聚糖硫酸钠(DSS)建立结肠炎小鼠模型,阳性对照组以及黄芪甲苷低、高剂量组小鼠分别灌胃相应药物,计算疾病活动指数(DAI),ELISA法检测血清白细胞介素-17(IL-17)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)含量,HE染色法观察结肠组织病理学变化,流式细胞仪检测外周血Th17细胞/调节性T细胞(Treg)比例,蛋白印迹法检测叉头蛋白p3(Foxp3)、视黄酸相关孤儿核受体γt(ROR-γt)蛋白相对表达量。结果显示,正常小鼠结肠组织结构完整,杯状细胞未减少,腺体排列整齐,无黏膜糜烂、出血,无阳性细胞浸润;模型组小鼠结肠组织黏膜结构严重破坏,腺体排列紊乱或缺失,可见血管扩张、充血,大量炎性细胞浸润;各药物治疗组结肠组织病理损伤出现不同程度减轻。与正常组比较,模型组Th17细胞百分比、IL-17和TNF-α含量、ROR-γt蛋白相对表达量升高,TGF-β含量、Treg细胞百分比、Foxp3蛋白相对表达量降低;与模型组比较,阳性对照组、黄芪甲苷低剂量组、黄芪甲苷高剂量组DAI评分、组织病理学评分、Th17细胞百分比、IL-17和TNF-α含量、ROR-γt蛋白相对表达量降低,TGF-β含量、Treg细胞百分比、Foxp3蛋白相对表达量升高;与阳性对照组比较,黄芪甲苷低剂量组DAI评分、组织病理学评分、Th17细胞百分比、IL-17和TNF-α含量、ROR-γt蛋白相对表达量升高,TGF-β含量、Treg细胞百分比、Foxp3蛋白相对表达量降低;与黄芪甲苷低剂量组比较,黄芪甲苷高剂量组DAI评分、组织病理学评分、Th17细胞百分比、IL-17和TNF-α含量、ROR-γt蛋白相对表达量降低,TGF-β含量、Treg细胞百分比、Foxp3蛋白相对表达量升高;阳性对照组与黄芪甲苷高剂量组比较,各指标差异无统计学意义。结果表明,黄芪甲苷可抑制结肠炎小鼠的炎症反应,降低Th17细胞比例。     

玉屏风颗粒对变应性鼻炎大鼠Th17/Treg平衡及相关细胞因子的影响

目的研究玉屏风颗粒对变应性大鼠Th17/Treg免疫平衡的影响。方法采用OVA制备AR大鼠模型,大鼠随机分为正常组、模型组、氯雷他定组、玉屏风颗粒组(12、6 g/kg)。各组干预后评估大鼠AR行为学总分,HE和AB-PAS染色观察鼻黏膜组织病变情况,ELISA检测AR大鼠血清中的IL-17、TGF-β1水平,RT-PCR检测鼻黏膜组织中RORγt mRNA、Foxp3 mRNA的表达,Western blot检测鼻黏膜组织中RORγt、Foxp3蛋白表达。结果与模型组比较,玉屏风颗粒组(12、6 g/kg)大鼠挠鼻次数、打喷嚏次数等行为学总分降低(P0.05);上皮细胞结构完整、少量炎症细胞浸润、杯状细胞化生明显减少;血清中的IL-17水平降低、TGF-β1水平升高(P0.05);鼻黏膜RORγt mRNA表达降低、Foxp3 mRNA表达升高(P0.05);鼻黏膜组织RORγt/Foxp3蛋白表达比例升高(P0.05)。结论玉屏风颗粒能明显改善变应性大鼠鼻黏膜炎性症状,其作用机制可能与调节Th17/Treg平衡及相关细胞因子有关。     

不同制法下瘀血汤对CCl4诱导大鼠肝纤维化的影响

目的:探讨蜜丸酒煎下瘀血汤与饮片酒煎下瘀血汤抗肝纤维化作用是否存在异同。方法:40只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、蜜丸酒煎下瘀血汤组、饮片酒煎下瘀血汤组、扶正化瘀方组。以50%CCl_4皮下注射9周制备肝纤维化模型。第7周首日开始,正常组与模型组给予0.3%羧甲基纤维素钠灌胃,其余3组分别给予蜜丸酒煎下瘀血汤(0.58 g·kg~(-1)),饮片酒煎下瘀血汤(0.43 g·kg~(-1)),扶正化瘀方(2 g·kg~(-1))灌胃,第9周结束后收集肝组织和血清样本。分别采用苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠肝组织病理学,天狼猩红染色观察纤维化程度,碱水解法测定肝组织羟脯氨酸含量情况,全自动分析法检测大鼠血清肝功能,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原(COL-I)mRNA的表达情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)和免疫组化测定肝组织α-SMA蛋白的表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)测定炎症因子与氧化指标。结果:与正常组比较,模型组大鼠肝肝纤维化程度较严重,肝组织天狼猩红阳性染色面积比、羟脯氨酸含量,α-SMA和COL-I蛋白及mRNA表达显著增加(P0.01),大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(AST),天门冬氨酸氨基转移酶(ALT),总胆红素(TBil),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素(IL)-1β,IL-17A及丙二醛(MDA)的水平显著增加(P0.01),超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的水平显著降低(P0.01);与模型组比较,蜜丸酒煎下瘀血汤与饮片酒煎下瘀血汤可明显减轻肝纤维化程度,肝组织天狼猩红阳性染色面积比、羟脯氨酸含量,α-SMA和COL-I蛋白及mRNA表达,大鼠血清AST,ALT,TBil,TNF-α,IL-1β,IL-17A,MDA的水平明显降低(P0.05,P0.01),SOD及GSH-Px水平明显增加(P0.05,P0.01)。其中蜜丸酒煎下瘀血汤组肝组织病理变化的改善显著优于饮片酒煎下瘀血汤,且肝组织在天狼猩红阳性染色面积比、羟脯氨酸含量、肝组织COL-I mRNA以及α-SMA mRNA和蛋白的表达降低也较饮片酒煎下瘀血汤明显(P0.05,P0.01)。血清肝功能、炎症因子及氧化相关指标2种制法下瘀血汤组间差异无统计学意义,但蜜丸酒煎下瘀血汤改善趋势更为明显。结论:蜜丸酒煎下瘀血汤与饮片酒煎下瘀血汤均具有较好的抗肝纤维化作用,其中以蜜丸酒煎下瘀血汤作用更为显著,提示制蜜丸一定程度上能够增加下瘀血汤抗肝纤维化作用。     

补肝益肾通络法对佐剂型关节炎大鼠Th17/Treg平衡的影响

目的观察运用补肝益肾通络法对佐剂型关节炎大鼠进行测量的足跖肿胀程度以及对大鼠脾脏中Th17和Treg细胞的影响,探讨其作用机制。方法选用随机数字表法将40只大鼠平均分为空白组、模型对照组、自拟汤组、雷公藤组,除空白组外,选用弗氏完全佐剂法对其余3组进行诱导佐剂型关节炎模型大鼠。每组大鼠的足趾肿胀度选用容积法来进行测量;治疗结束后取大鼠关节滑膜组织,于光镜下观察滑膜组织变化;选用流式细胞术显示大鼠脾脏中Th17细胞、Treg细胞数量的变化。结果与空白组比较,其余3组大鼠的足容积于造模后明显增大(P 0.05)。与空白组相比,造模后的3组大鼠其关节的滑膜组织均有炎性改变,经采用补肝益肾通络法和雷公藤治疗后其炎性改变明显改善。造模后Th17细胞数量较空白组明显升高,Treg细胞数量较空白组明显降低(P 0.05);采用补肝益肾通络法和雷公藤治疗后,Th17细胞数量较模型对照组的数量明显降低(P 0.05),Treg细胞数量较模型对照组的数量有所升高(P 0.05)。结论运用补肝益肾通络法能调节Th17/Treg平衡,从而抑制佐剂型关节炎大鼠的炎症反应,改善足趾肿胀程度,从而减轻和改善关节损伤。     

益气化瘀化痰法制剂对CCL_4所致肝纤维化大鼠肝组织KLF15、NF-κB及下游炎症因子的影响

目的观察益气化瘀化痰法制剂对四氯化碳(CCL_4)所致肝纤维化大鼠模型的治疗作用及其可能机理。方法 105只雄性SD大鼠,随机选取10只为空白对照组,其余大鼠采用腹腔注射40%CCL4玉米油溶液联合高脂低蛋白饮食建立肝纤维化大鼠模型,成模后随机分为模型组(10只)、秋水仙碱组、益气组、化瘀组、化痰组及益气化瘀化痰合剂组(各9只),分别给予相应药物制剂灌胃治疗,模型组及空白对照组以等量生理盐水灌胃,连续用药12周后处死大鼠。苏木素-伊红(HE)、马松(Masson)、天狼猩红(Sirius Red)染色观察肝组织形态学变化,RT-q PCR法检测肝组织KLF15、核因子κB(NF-κB)、白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、纤维连接蛋白(FN m RNA)表达水平,Western Blot检测肝组织NF-κB、IL-1β蛋白表达水平。结果与空白对照组比较,模型组大鼠肝组织大量胶原纤维沉积,纤维化明显;NF-κB、IL-1β、TNF-α、Col-Ⅰ、FN m RNA表达显著上调(P0.01),KLF15 m RNA表达显著下调(P0.01);NF-κB、IL-1β蛋白表达显著上调(P0.05)。与模型组相比,各药物干预组肝纤维化程度减轻,NF-κB、IL-1β、TNF-α、Col-Ⅰ、FN m RNA表达下调(P0.05),KLF15 m RNA表达上调(P0.05),NF-κB、IL-1β蛋白表达显著下调(P0.05),其中益气化瘀化痰合剂组各项指标改善最明显(P0.05)。结论益气、化瘀、化痰法和秋水仙碱均可以降低肝组织内纤维化程度,改善部分纤维化指标,其作用机制可能与上调肝组织KLF15表达,抑制NF-κB等炎症相关因子的表达有关。其中益气化瘀化痰法合剂优于单法治疗和秋水仙碱治疗。     

扶脾柔肝方配方颗粒对肝纤维化大鼠肝组织诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的:观察扶脾柔肝方配方颗粒对肝纤维化大鼠肝组织诱导型一氧化氮合酶(i NOS)表达的影响,并探讨其作用机制。方法:SD大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、秋水仙碱(0.2 mg·kg-1)组、扶正化瘀(0.415 g·kg-1)组、扶脾柔肝方配方颗粒高、中、低剂量(80,40,20 g·kg-1)组,采用四氯化碳复合乙醇诱导大鼠肝纤维化模型,造模8周成功后,分别给予相应药物ig,每日1次,连续4周,正常组、模型组ig等体积生理盐水。第12周末,检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基酸转移酶(AST),透明质酸(HA);苏木素伊红(HE)染色观察肝组织病理情况;采用实时荧光定量PCR(Realtime PCR)及免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肝组织i NOS mRNA和蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清中ALT,AST,HA含量显著升高(P0.01);与模型组比较,秋水仙碱组、扶正化瘀组、扶脾柔肝方低、中剂量组血清中的ALT,AST含量均明显降低(P0.05),高剂量组ALT,AST含量显著降低(P0.01),秋水仙碱组、扶正化瘀组、扶脾柔肝方中剂量组血清中的HA含量明显降低(P0.05),扶脾柔肝方高剂量组HA含量显著降低(P0.01)。与模型组比较,各药物干预组肝组织内纤维化程度均有不同程度减轻(P0.05)。与正常组比较,模型组大鼠肝组织i NOS mRNA和蛋白表达显著升高(P0.01);与模型组比较,各药物干预组大鼠肝组织i NOS mRNA和蛋白表达显著降低(P0.01),其中以扶脾柔肝方高剂量组最明显。结论:扶脾柔肝方配方颗粒下调纤维化肝组织i NOS mRNA和蛋白表达水平,可能是其抗肝纤维化作用机制之一。     

芪参养肝方抗肝纤维化的实验研究

目的观察芪参养肝方对刀豆蛋白A(Con A)肝纤维化小鼠肝脏的肝星状细胞(HSC)活化、胶原合成及细胞因子α-SMA、TGF-β1分泌的影响,探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法将40只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、芪参养肝方组,造模期间芪参养肝方组给予芪参养肝方药液灌胃。检测3组小鼠肝功能、肝组织中羟脯氨酸含量和α-SMA、Col I、ColⅢ、TGF-β1mRNA表达以及α-SMA、Col I、TGF-β1蛋白表达情况。结果模型组血清ALT、AST水平及肝组织中羟脯氨酸含量均明显高于正常组(P均<0.05),而芪参养肝方组各指标水平均明显低于模型组(P均<0.05)。HE、天狼猩红染色显示,芪参养肝方组肝小叶破坏及胶原纤维增生较模型组明显减轻,胶原沉积明显好转。模型组肝组织中α-SMA、TGF-β1、Col I、ColⅢmRNA表达量及α-SMA、TGF-β1、ColⅠ蛋白表达量均明显高于正常组(P均<0.05),而芪参养肝方组各指标水平均明显低于模型组(P均<0.05)。结论芪参养肝方能抑制Con A肝纤维化小鼠α-SMA、TGF-β1分泌及HSC活化,促进活化的HSC凋亡;并能下调ColⅠ、ColⅢmRNA表达,抑制胶原纤维增生;其有保肝降酶、抗肝纤维化作用。     

青黛通过影响GPR41/43信号通路调控溃疡性结肠炎大鼠Treg/Th17免疫平衡的机制研究

目的探讨青黛通过影响GPR41/43信号通路调控溃疡性结肠炎大鼠Treg/Th17免疫平衡的机制。方法将24只健康的SPF级雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组与青黛组。模型组和青黛组大鼠自由饮用4.5%DSS溶液以制备结肠炎模型,空白组自由饮用去离子水作为对照,同时青黛组大鼠给予青黛(600 mg/kg)灌胃,模型组、空白组大鼠给予去离子水处理,每天观察大鼠一般情况,记录体质量、粪便性状,检测粪便潜血,计算疾病活动指数,干预7 d,麻醉后处死大鼠,取血及结肠组织。RT-qPCR法检测结肠RORγt mRNA、Foxp3mRNA的表达;Western Blotting法检测结肠GPR41、GPR43、RORγt、Foxp3蛋白的含量,ELISA法检测血清IL-10、IL-17水平。结果与空白组相比,DSS诱导的结肠炎大鼠结肠GPR41、GPR43、FOXP3,血清IL-10的表达明显降低(P <0.05或P <0.01),结肠RORγt、血清IL-17表达明显升高(P <0.05或P <0.01);青黛干预后,大鼠结肠GPR41、GPR43、FOXP3、FOXP3 m RNA,血清IL-10的表达较模型组明显升高(P <0.05或P <0.01),结肠RORγt、RORγt mRNA、血清IL-17表达较模型组明显降低(P <0.05)。结论青黛能够上调GPR41、GPR43的表达,进而调节Treg/Th17免疫平衡治疗溃疡性结肠炎。     

解毒化瘀汤对活动期溃疡性结肠炎Th17/Treg细胞及其细胞因子的影响

目的观察解毒化瘀汤对湿热蕴结型活动期溃疡性结肠炎临床疗效及对Th17/Treg细胞及其相关细胞因子的影响。方法选取符合诊断和纳入标准的溃疡性结肠炎患者48例,按照随机数字表法分为对照组和治疗组各24例。其中对照组给予美沙拉嗪肠溶片口服,治疗组在对照组的基础上给予解毒化瘀汤口服。两组疗程均为12周,分别观察两组患者临床疗效,ELISA法检测白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β(TGF-β)水平,Real-Time PCR法检测Th17/Treg细胞的核转录因子RORγt/Foxp3m RNA的表达。结果治疗组总有效率为91.67%,明显优于对照组(P0.05);两组治疗后IL-17较治疗前均明显降低(P0.01),两组治疗后IL-10、TGF-β较治疗前均明显升高(P0.01),治疗后治疗组明显优于对照组(P0.01);两组治疗后RORγt m RNA、RORγt/Foxp3比值较治疗前均明显降低(P0.01),两组治疗后Foxp3 m RNA较治疗前均明显升高(P0.01),治疗后治疗组明显优于对照组(P0.05或P0.01)。结论解毒化瘀汤能够明显改善湿热蕴结型活动期溃疡性结肠炎患者临床症状,降低IL-17,增加IL-10、TGF-β水平,调控RORγt、Foxp3 m RNA的表达,促进Th17/Treg细胞平衡,减少复发率,疗效显著。     

针灸治疗对狼疮性肾炎小鼠Th17/Treg细胞及其细胞因子表达影响的研究

目的:观察针灸治疗对狼疮性肾炎小鼠的影响,并探讨针灸对调节性T细胞(Treg)及辅助性T细胞17 (Th17)分化及其细胞因子表达的调控作用。方法:将MRL/lpr狼疮性肾炎模型小鼠随机分为针灸组、地塞米松组、模型组,每组10只。另取10只C57BL/6小鼠作为正常组。采用HE染色法检测小鼠肾脏病理改变;PI单染流式细胞术检测各组小鼠肾脏组织中Th17/Treg比例;采用q RT-PCR和ELISA法检测肾脏中叉头样转录因子3 (Foxp3)、维A酸相关孤儿受体-γt (RORγt)及白细胞介素-17 (IL-17)的水平。结果:与正常组比较,模型组肾小球肾炎、间质性肾炎以及血管病变评分、Th17/Treg比值及RORγt、IL-17蛋白及mRNA表达水平均显著升高(P<0.05),Foxp3蛋白及mRNA表达水平均下降(P<0.05)。与模型组比较,地塞米松组、针灸组肾小球肾炎、间质性肾炎以及血管病变评分、Th17/Treg比值及肾脏组织RORγt、IL-17蛋白及m RNA表达水平均显著降低(P<0.05);Foxp3蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05)。结论:针灸能显著减少狼疮性肾炎小鼠肾脏RORγt及IL-17表达,增加Foxp3水平,调控Th17/Treg比例,改善肾脏病理改变,从而对MRL/lpr狼疮肾炎小鼠肾脏起到保护作用。     

疏肝化瘀方治疗慢性乙型病毒性肝炎相关性肝纤维化的疗效及对血清Treg/Th17的影响

目的探究疏肝化瘀方治疗慢性乙型病毒性肝炎肝纤维化的临床疗效及对血清Treg/Th17的影响。方法回顾性分析2017年12月—2018年11月黑龙江省中医药科学院肝胆脾胃一科门诊收治的90例慢性乙型病毒性肝炎合并肝纤维化患者资料,其中ETV组给予恩替卡韦治疗,联合组在ETV组的基础上联合疏肝化瘀方治疗,2组疗程均为26周。观察2组患者治疗前后肝功能指标[谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBil)]、肝纤维化指标[层黏连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)]、肝纤维化无创诊断指标(LSM、FIB-4)、血清Th17和Treg表达率及Th17/Treg比值,并评估其临床疗效。结果治疗后2组患者ALT、AST、TBil、HA、Ⅳ-C、PCⅢ、LN、LSM、FIB-4均较治疗前显著下降(P均0.05),联合组均显著低于ETV组(P均0.05);治疗后2组患者Th17、Treg表达率及Th17/Treg比值均较治疗前下降(P均0.05),且联合组较ETV组下降更为显著(P均0.05)。联合组治疗后总有效率为91.1%(41/45),ETV组治疗后总有效率为75.6%(34/45),联合组总有效率明显高于ETV组(P0.05)。结论疏肝化瘀方联合恩替卡韦治疗慢性乙型病毒性肝炎肝纤维化临床疗效显著,不仅能够改善肝功能,抑制肝纤维化,还可以调节免疫平衡。     

消水方联合顺铂对肺癌移植瘤胸腔积液小鼠模型Th17/Treg免疫平衡的影响

目的:探讨消水方联合顺铂对肺癌移植瘤胸腔积液小鼠模型Th17/Treg细胞免疫平衡的影响。方法:将75只C57BL/6小鼠随机分为消水方(33.5 g·kg~(-1))组、顺铂(6 mg·kg~(-1))组、消水方(27 g·kg~(-1))+顺铂(6 mg·kg~(-1))组、模型组、空白组。除空白组小鼠胸腔内注射磷酸盐缓冲液(PBS)外,其余各组小鼠均采用Lewis肺癌细胞胸腔注射建立模型,连续给药10 d后各组取10只小鼠处死,采用流式细胞技术检测外周血中Th17,Treg细胞数量;流式微球阵列法(CBA)以及酶联免疫吸附法(ELISA)检测外周血中白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-17A(IL-17A),白细胞介素-21(IL-21),白细胞介素-23(IL-23)和转化生长因子-β1(TGF-β1)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠脾组织维甲酸相关孤核受体γt(RORγt),叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)mRNA及蛋白表达。结果:各组小鼠外周血Th17,Treg细胞数量均高于空白组(P0.05,P0.01)。其中消水方+顺铂组、消水方组较模型组能明显增加Th17细胞数量(P0.05),降低Treg细胞数量(P0.01)。消水方+顺铂组IL-6,IL-17A,IL-21含量分别较其余各组均显著升高(P0.01);消水方+顺铂组较消水方组、模型组IL-23含量升高(P0.05),TGF-β1含量降低(P0.05)。与顺铂组、模型组比较,消水方+顺铂组、消水方组可上调脾组织中RORγt mRNA表达(P0.01),下调Foxp3 mRNA表达(P0.05)。与模型组比较,消水方+顺铂组可上调脾组织RORγt蛋白表达(P0.05),下调Foxp3蛋白表达(P0.01)。结论:消水方联合顺铂可能通过上调Th17细胞水平,下调Treg细胞水平,从而纠正Th17/Treg免疫失衡,发挥抑制MPE作用。     

祛风消炎汤对类风湿关节炎大鼠滑膜组织Th17/Treg细胞转录因子RORγt和Foxp3表达影响的研究

目的:探究祛风消炎汤对类风湿关节炎(RA)大鼠滑膜组织Th17/Treg细胞转录因子RORγt和Foxp3表达影响的研究。方法:制备胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型,分为模型组、祛风消炎汤低、中、高剂量组(10、20、40g/kg)及地塞米松组(2mg/kg),每组10只,另取10是正常大鼠作为对照组,共治疗35天。测定各组大鼠治疗前后足关节炎指数(AI)和右后足肿胀度,流式细胞术检测各组大鼠滑膜组织辅助性T细胞17(Th17)和调节性细胞T细胞(Terg)水平,RT-PCR法检测RORγt mRNA和Foxp3mRNA表达水平。结果:治疗后,相比较于模型组,祛风消炎汤能呈剂量依赖性降低CIA大鼠AI评分及足肿胀程度(P0.05)。与模型组比较,祛风消炎汤低、中、高剂量组Treg细胞占比及Foxp3mRNA水平显著增加(P0.05),Th17细胞占比、Th17/Treg比值及RORγt mRNA水平显著降低(P0.05)。结论:祛风消炎汤对RA大鼠具有良好的治疗作用,其作用机制可能与通过降低RA大鼠滑膜组织RORγt水平,提升Foxp3水平来调节Th17/Treg平衡有关。     

扶肝化纤汤对肝纤维化正虚毒蕴血瘀证模型大鼠Th17/Treg平衡及相关转录因子的影响

目的 从免疫角度探讨扶肝化纤汤抗肝纤维化的可能作用机制。方法 48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、秋水仙碱组及扶肝化纤汤高、中、低剂量组,每组8只。除空白组外,其余各组大鼠建立肝纤维化正虚毒蕴血瘀证大鼠病证结合模型,共6周。造模成功后,扶肝化纤汤高、中、低剂量组分别给予扶肝化纤汤颗粒37.50、18.75、9.38 g/（kg·d）灌胃,秋水仙碱组给予秋水仙碱片2 mg/（kg·d）灌胃,空白组与模型组给予纯净水10 ml/（kg·d）灌胃,连续干预3周。实验期间记录大鼠一般情况。干预结束后HE染色观察肝脏组织病理学形态;ELISA法检测血清中白细胞介素10 (IL-10)、白细胞介素17 (IL-17)含量;流式细胞术检测外周血中辅助性T细胞17 (Th17)、调节性T细胞（Treg）表达,计算Th17/Treg值;qRT-PCR法检测肝脏组织中维甲酸相关核孤儿受体γ (RORγt)、叉状头/翅膀状螺旋转录因子（FoxP3） mRNA表达。结果与空白组比较,模型组大鼠一般情况为精神萎靡,活动减少、扎推,弓背喜卧,灌胃无抵抗,进食量明显减少,大便溏薄、肛门污秽,体质量增加缓慢,毛发枯...