miR-142-2p通过TCF7调控骨肉瘤细胞侵袭、迁移以及凋亡的分子机制

目的研究miR-142-2p对骨肉瘤细胞迁移、侵袭、凋亡的影响,并探讨其机制。方法运用Western blot检测癌旁组织、骨肉瘤组织或U-2OS细胞中TCF7的蛋白表达;将miR-142-3p组(转染miR-142-3p mimics)、miR-con组(转染miR-con)、si-TCF7组(转染si-TCF7)、si-con组(转染si-con)均用脂质体法转染至U-2OS细胞; qRT-PCR法检测各组细胞中miR-142-2p的表达; Transwell法检测各组细胞的迁移、侵袭;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与癌旁组织相比,骨肉瘤组织中miR-142-3p表达显著降低,TCF7表达显著升高(P 0. 05);过表达miR-142-3p、敲减TCF7可抑制U-2OS细胞的迁移侵袭,促进凋亡; miR-142-3p可靶向负调控TCF7的表达。结论 miR-142-3p可抑制骨肉瘤细胞迁移、侵袭,促进凋亡,其机制可能与靶向TCF7有关,将可为骨肉瘤的治疗提供新靶点。     

miR-224通过调控同源异型盒基因B3表达对大肠癌细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨miR-224通过调控同源异型盒基因B3(HoxB3)表达对大肠癌细胞增殖、凋亡的影响。方法采用RT-PCR法检测miR-224在大肠癌细胞株及人正常结肠直肠黏膜上皮细胞HIEC中的表达,大肠癌细胞转染miR-224 inhibitor,并通过双荧光素酶实验、Western blot及RT-PCR证实HoxB3是miR-224的靶基因。MTT及Annexin V-PI法检测miR-224及HoxB3表达量下调后分别对大肠癌细胞活力的影响。流式细胞术检测miR-224 inhibitor对大肠癌细胞周期的影响;Western blot检测miR-224 inhibitor对大肠癌细胞中细胞分裂周期相关蛋白3(CDCA 3)、细胞周期蛋白D1(CyclinD 1)、p21及p27表达的影响。结果大肠癌细胞中miR-224表达量高于人正常结肠直肠黏膜上皮细胞HIEC,且HCT 116中的表达量最高,因此选为后续细胞株。双荧光素酶报告基因证实HoxB3是miR-224下游靶基因,Western blot及RT-PCR结果证实下调miR-244的表达水平后HoxB3蛋白及mRNA表达量均显著下降(P0.01)。下调miR-224及干扰HoxB3表达都能显著降低HCT_116细胞活力(P0.01),促进细胞凋亡(P0.01)。下调miR-224还能使HCT_116细胞周期阻滞在G_1期,抑制CDCA3及CyclinD1表达(P0.01),促进p21及p27表达(P0.01)。结论 miR-224在大肠癌细胞中高表达,并能通过调控靶基因HoxB3的表达及调节细胞周期相关蛋白的表达而参与大肠癌细胞的增殖与凋亡。     

miR-497-5p靶向WWP1调控人瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和凋亡

目的探讨微小RNA-497-5p(miR-497-5p)是否通过靶向含有WW结构域的E3泛素蛋白连接酶1(WWP1)调控人瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和凋亡。方法实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)测定瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)和正常皮肤成纤维细胞(NFB)中miR-497-5p、WWP1 mRNA和蛋白表达。TargetScan预测miR-497-5p和WWP1的靶向关系,双荧光素酶报告和Western blot进一步验证。构建miR-497-5p过表达或抑制WWP1表达的细胞,Western blot检测WWP1、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。共转染miR-497-5p和pcDNA-WWP1,观察WWP1过表达对miR-497-5p过表达诱导的KFB细胞增殖和凋亡的影响。结果与NFB相比,KFB内miR-497-5p表达量明显下调(P0.05),WWP1mRNA和蛋白表达量显著上调(P0.05)。miR-497-5p靶向调控WWP1的表达。miR-497-5p过表达明显降低KFB 48h、72h的细胞活性、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达,提高细胞凋亡率、p21、Bax蛋白水平(P0.05),与抑制WWP1表达结果相同。WWP1过表达逆转了miR-497-5p过表达对KFB增殖、WWP1、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达的抑制作用,以及对细胞凋亡、p21、Bax蛋白表达的促进作用。结论过表达miR-497-5p通过靶向调控WWP1抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,并诱导其凋亡。     

miR-181a-5p对T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖和凋亡的影响

目的探究miR-181a-5p对T淋巴细胞白血病(T lymphocytic leukemia, TLL)Jurkat细胞增殖及凋亡的影响。方法采用miR-181a-5p mimic、pc-B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2, BCL-2)不同组合方式转染Jurkat细胞,并将细胞分为Jurkat组、mimic-scramble组、miR-181a mimic组、pc-BCL-2组和mimic+pc-BCL-2组。RT-PCR检测miR-181a-5p的表达及pc-BCL-2 mRNA水平,Western Blot检测BCL-2蛋白表达,CCK8和流式细胞学检测细胞增殖和凋亡情况。结果与mimic-scramble组比较,miR-181a mimic组miR-181a-5p表达水平显著升高,BCL-2 mRNA水平下降,差异有统计学意义(P0.01)。与Jurkat组比较,miR-181a mimic组BCL-2蛋白表达量及细胞增殖倍数降低,细胞凋亡率明显升高,pc-BCL-2组BCL-2蛋白表达量及细胞增殖倍数升高,细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P0.01);与miR-181a mimic组比较,mimic+pc-BCL-2组BCL-2蛋白表达量及细胞增殖倍数升高,细胞凋亡率显著下降,差异有统计学意义(P0.01)。结论 miR-181a-5p通过靶向抑制BCL-2表达以抑制TLL细胞系Jurkat细胞增殖、诱导细胞凋亡。     

miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的影响及机制

目的探讨miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的影响以及潜在的作用机制。方法设置miR-con组、miR-219a-5p组、anti-miR-con组、anti-miR-219a-5p组、miR-219a-5p+pcDNA组、miR-219a-5p+pcDNA-SMC4组、miR-con+SMC4-WT组、miR-con+SMC4-MT组、miR-219a-5p+SMC4-WT组、miR-219a-5p+SMC4-MT组,转染均用脂质体法。qRT-PCR检测miR-219a-5p和SMC4 mRNA表达水平;Western Blot检测蛋白表达;MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果相较于人正常皮肤细胞HaCaT,皮肤鳞状细胞癌细胞HSC-2、Colo-16、SCL-1中SMC4 mRNA和蛋白表达水平显著升高,miR-219a-5p表达水平显著降低(P<0.05)。过表达miR-219a-5p可抑制皮肤鳞状细胞癌细胞增殖,诱导细胞凋亡;促进Caspase-3蛋白表达,抑制Cyclin D1蛋的表达;抑制Wnt/β-catenin信号通路激活。miR-219a-5p靶向负调控SMC4的表达,转染SMC4野生型表达载体的HSC-2细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05);而转染SMC4突变型表达载体的HSC-2细胞荧光素酶活性差异不显著。且过表达miR-219a-5p,SMC4表达水平显著降低;抑制miR-219a-5p表达,SMC4表达水平显著升高。过表达SMC4能逆转miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞HSC-2的增殖抑制和凋亡促进的作用。结论miR-219a-5p可抑制皮肤鳞状细胞癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与Wnt/β-catenin及SMC4信号通路有关,将为皮肤鳞状细胞癌的预防和治疗提供新靶点。     

MicroRNA-9对口腔鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响

目的检测miR-9在口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织和细胞中的表达水平,探讨miR-9对OSCC细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法收集42例OSCC患者肿瘤及癌旁组织标本。将SCC-9细胞分为3组:miR-9 mimics组,转染对照组(miR-NC)和未转染组(空白组)。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织样本和细胞中miR-9的表达水平,体外实验通过转染miR-9 mimics至SCC-9细胞中,平板克隆形成试验和流式细胞术检测细胞增殖凋亡情况。Pearson相关分析分析miR-9与人高迁移率族AT Hook蛋白2(HMGA2)的相关性;荧光素酶试验,qRT-PCR和蛋白质印迹技术(Western blot)验证HMGA2是miR-9的靶基因。结果与癌旁组织和正常口腔角化细胞相比,miR-9在OSCC组织和细胞中的表达下调(P0.05);体外实验发现,与空白组和miR-NC组相比,miR-9mimics组的细胞增殖受到抑制,而凋亡比率增加(P0.05)。机制研究结果表明,OSCC组织中HMGA2 mRNA和蛋白的表达均增加(P0.05),并与miR-9成显著负相关(r=-0.7701,P0.001);荧光素酶结果显示,miR-9能直接与HMGA2-3'-UTR靶向结合;成功转染miR-9 mimics后能降低SCC-9细胞中HMGA2 mRNA和蛋白的表达(P0.05)。结论在OSCC中,miR-9表达下调;miR-9能够降低HMGA2表达,抑制OSCC细胞增殖,促进其凋亡。     

miR-103a-3p通过调控FEZF1/CDC25A途径影响肝癌细胞的增殖和凋亡

目的探究miR-103a-3p在肝癌细胞的表达及其与锌指蛋白1(FEZF1)/细胞分裂周期25A蛋白(CDC25A)途径的关系。方法体外培养人肝癌Hep G2、BEL-7402细胞,将转染试剂、miR-103a-3p阴性对照质粒、miR-103a-3p mimis质粒分别转染细胞,命名为空白对照组、miR-103a-3p阴性转染组、miR-103a-3p过表达组。实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-103a-3p mRNMA表达;MTT法检测细胞增殖情况;平板细胞克隆形成试验检测菌落形成情况;流式细胞仪检测细胞凋亡以及周期分布情况;蛋白免疫印迹法(WB)检测细胞中FEZF1、CDC25A蛋白表达情况;荧光素酶活性检测miR-103a-3p与FEZF1靶向调控关系。结果在Hep G2细胞、BEL-7402细胞中,与空白对照组、阴性转染组相比,miR-103a-3p过表达组miR-103a-3p mRNA表达显著升高(P0.05)。随着细胞培养时间延长,miR-103a-3p过表达组细胞抑制率逐渐升高,在同一时间点,与空白对照组、阴性转染组相比,miR-103a-3p过表达组细胞抑制率均升高(P0.05)。与空白对照组、阴性转染组相比,细胞菌落数量显著降低,细胞凋亡率显著升高,G0/G1期DNA含量升高,S期细胞DNA含量下降,FEZF1、CDC25A蛋白表达均降低(P0.05)。荧光素酶活性测定显示,在3'UTR-Wt的细胞中,与阴性转染组相比,miR-103a-3p过表达组荧光素酶活性显著降低(P0.05);而3'UTR-Mut的细胞中,阴性转染组与miR-103a-3p过表达组荧光素酶活性无显著差异(P0.05)。结论 miR-103a-3p过表达后能够抑制肝癌细胞的增殖,引起细胞周期G0/G1期阻滞,促进其凋亡,其机制可能与靶向调控FEZF1/CDC25A表达有关。     

miR-15b-5p通过靶向LATS2基因调控 前列腺癌细胞侵袭、迁移以及凋亡的分子机制

目的探讨miR-15b-5p靶向大肿瘤抑制分子(LATS2)基因对前列腺癌PC-3细胞侵袭、迁移及凋亡的影响及机制。方法将anti-miR-15b-5p及anti-miR-15b-5p+si-LATS2(同时抑制miR-15b-5p和LATS2表达)转染前列腺癌PC-3细胞,48 h后,通过qRT-PCR检测miR-15b-5p mRNA表达,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡率。双荧光素酶报告系统检测miR-15b-5p与LATS2的靶向关系。Western blotting检测LATS2、β-catenin、MMP-2和Bax蛋白表达。结果 PC-3细胞转染anti-miR-15b-5p后,miR-15b-5p mRNA表达明显降低,细胞侵袭和迁移能力明显降低,细胞凋亡率明显升高(P 0. 05)。miR-15b-5p与LATS2存在靶向关系,抑制LATS2表达后可明显减弱anti-miR-15b-5p对PC-3细胞侵袭、迁移、凋亡及β-catenin、MMP-2和Bax蛋白表达的影响(P 0. 05)。结论抑制miR-15b-5p可明显降低前列腺癌PC-3细胞的侵袭和迁移能力,并诱导细胞凋亡,其机制与靶向LATS2抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

长链非编码RNA NR2F1-AS1靶向微小RNA-493-5p表达调控卵巢癌细胞增殖及凋亡的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA NR2F1-AS1(LncRNA NR2F1-AS1)靶向微小RNA-493-5p(miR-493-5p)的表达调控卵巢癌细胞增殖及凋亡的机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测NR2F1-AS1与miR-493-5p在不同卵巢癌细胞株中的表达水平;采用双荧光素酶报告基因检测NR2F1-AS1与miR-493-5p的相互作用;采用MTT增殖实验检测干扰NR2F1-AS1表达或miR-493-5p过表达后卵巢癌细胞增殖能力的变化;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用Western blot检测CyclinD1、p21、p27、Bcl-2、Bax、cleaved-caspase 3蛋白表达。结果 与正常卵巢上皮细胞比较,NR2F1-AS1在卵巢癌细胞中的表达水平升高,而miR-493-5p的表达水平则降低,差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶实验证实NR2F1-AS1能与miR-493-5p特异性结合,并可负性调控miR-493-5p的表达及活性。干扰NR2F1-AS1表达或miR-493-5p过表达后可抑制卵巢癌细胞增殖能力,...     

过表达miR-132-3p对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的作用

目的探讨过表达miR-132-3p对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、侵袭以及迁移的影响。方法通过RT-PCR检测人子宫内膜上皮细胞HEEC和子宫内膜癌细胞Ishikawa中miR-132-3p的表达水平。用Lipofiectamine~(TM)2000将miR-132-3p mimics及NC分别转染子宫内膜癌Ishikawa细胞,分为miR-132-3p mimics组、NC组以及对照组,对照组不做处理。通过CCK8法检测24 h、48 h、72 h后,三组Ishikawa细胞的增殖情况。流式细胞仪检测转染后三组Ishikawa细胞的凋亡情况。Transwell小室检测三组Ishikawa细胞侵袭、迁移情况。Western-blot检测三组Ishikawa细胞B淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、BCL2-Associated X(Bax)、细胞增殖抗原标记物Ki-67(Ki-67)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达水平。结果与人子宫内膜上皮细胞HEEC相比,子宫内膜癌细胞Ishikawa中miR-132-3p的表达水平显著下降。CCK8结果显示:与对照组和NC组比,miR-132-3p mimics组子宫内膜癌细胞Ishikawa增殖受到抑制,Ki-67蛋白表达水平显著下降(P0.05)。流式检测结果显示:与对照组和NC组比,miR-132-3p mimics组子宫内膜癌细胞Ishikawa的凋亡率显著升高,Bax蛋白表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著下降(P0.05)。Transwell结果显示:与对照组和NC组比,miR-132-3p mimics组子宫内膜癌细胞Ishikawa侵袭及迁移能力受到抑制,MMP-2蛋白表达水平显著下降(P0.05)。结论 miR-132-3p在子宫内膜癌细胞Ishikawa中低表达,过表达miR-132-3p能够抑制细胞增殖、侵袭及迁移,并促进细胞凋亡。     

LncRNA NORAD靶向抑制miR-363-3p对多发性骨髓瘤细胞生物学行为的影响及机制

目的:探索长链非编码RNA NORAD(lncRNA NORAD)对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及其与微小RNA-363-3p(miR-363-3p)的靶向关系。方法:RT-qPCR检测健康人成骨细胞h FOB1.19和多发性骨髓瘤细胞U266,LP-1,H929中NORAD和miR-363-3p表达。在U266细胞中转染si-NORAD,或共转染si-NORAD和anti-miR-363-3p,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。star Base软件预测结合双荧光素酶报告实验分析NORAD与miR-363-3p的靶向结合。结果:多发性骨髓瘤细胞系U266,LP-1和H929中NORAD表达明显上调(P0.05),miR-363-3p表达显著下调(P0.05)。沉默NOR A D表达显著降低48,72h的U266细胞活性和c yclin D1,CDK4,Bcl-2蛋白水平(P0.05),明显提高细胞凋亡率和cleaved caspase-3,Ba x蛋白表达量(P0.05)。NOR AD靶向调控miR-363-3p表达。抑制miR-363-3p表达逆转沉默NOR AD表达对U266细胞增殖、cyclin D1,CDK4和Bcl-2表达的抑制作用,以及逆转沉默NORAD表达对细胞凋亡、cleaved caspase-3和Bax蛋白表达的促进作用。结论:Lnc RNANOR AD通过靶向miR-363-3p表达影响多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡。     

miR-29a-3p靶向肝癌衍生生长因子抑制E6-1细胞增殖并促进其凋亡

目的：探讨miRNA-29a-3p(miR-29a-3p)对肝癌衍生生长因子（HDGF）的调控作用以及急性淋巴细胞白血病细胞系E6-1增殖、凋亡的影响。方法：选择2017年1月-2019年1月在本院就诊的急性淋巴细胞白血病患者35例,同期进行健康体检的成人35例为健康对照组。将miR-29a-3p过表达载体、miR-29a-3p抑制表达载体以及miR-29a-3p和HDGF联合过表达载体转染至E6-1细胞中,用RT-qP CR检测miR-29a-3p和ma-3p HDGF mRNA的表达水平,Western blot检测蛋白表达,双荧光素酶报告实验检测iR-29和HDGF的靶向关系,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果：与健康对照组相比,急性淋巴细胞白血病患者血清及细胞mHuT78、E6-1、CCRF-CEM中HDGF高表达,iR-29a-3p低表达（P<0.05）。过表达miR-29a-3p后,白血病细胞E6-1中CyclinD1、Bcl-2表达水平显著降低,p21、Bax表达水平显著升高,E6-1细胞活性显著降低,凋亡率显著升高（均Pm<0.05）。m...     

miR-195-5p过表达对前列腺癌PC3细胞增殖、侵袭的影响

目的探究miR-195-5p过表达对前列腺PC3细胞增殖和侵袭的影响。方法采用miR-195mimic转染前列腺癌PC3细胞,RT-PCR检测miR-195-5p和血管内皮生长因子A(vascular endothelial cell growth factor A,VEGFA)的表达,预测miR-195-5p和VEGFA的靶向关系,采用双荧光素酶实验证明miR-195-5p和VEGFA的靶向关系,利用免疫蛋白印迹检测VEGFA表达情况,CCK8方法检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果 miR-195 mimic能促进PC3细胞miR-195-5p的表达水平,降低VEGFA的mRNA水平、VEGFA野生质粒的荧光素酶活性、PC3细胞增殖速度和细胞侵袭数,且miR-195-5p有VEGFA的结合位点,pc-VEGFA能升高PC3细胞VEGFA的蛋白表达水平,减弱miR-195 mimic对VEGFA表达的抑制作用,显著促进细胞增殖和侵袭能力,同时减弱miR-195 mimic对细胞增殖和侵袭能力的抑制作用。结论 miR-195-5p通过下调VEGFA的表达以抑制前列腺癌PC3细胞增殖和侵袭能力。     

miR-92a-3p靶向同源盒蛋白13对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的影响

目的 探讨miR-92a-3p靶向同源盒蛋白13(Homeobox protein 13,HOXA13)对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的影响及其作用机制。方法 实验分组：对照组、高糖组、anti-miR-NC+高糖组、antimiR-92a-3p+高糖组、pcDNA+高糖组、pcDNA-HOXA13+高糖组、anti-miR-92a-3p+si-NC+高糖组、anti-miR-92a-3p+si-HOXA13+高糖组;qRT-PCR法与Western blot法分别检测miR-92a-3p、HOXA13的表达量;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测miR-92a-3p与HOXA13的靶向关系;Western blot法检测Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-12蛋白表达量。结果 与对照组比较,高糖组miR-92a-3p的表达量升高（P <0.05）,HOXA13 mRNA及蛋白水平降低（P <0.05）,细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-12蛋白水平升高（P <0.05）;转染a...     

华蟾素通过miR-106a-5p/STAT3信号通路调控肺癌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的研究华蟾素对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法以0. 15μg/ml华蟾素处理肺癌A549细胞,qRT-PCR和Western blot检测miR-106a-5p和STAT3表达量,MTT和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡。转染miR-106a-5p模拟剂(mimic)和STAT3 siRNA至A549细胞中,检测细胞增殖和凋亡。靶基因预测软件预测miR-106a-5p和STAT3靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测二者靶向关系。转染miR-106a-5p抑制剂(inhibitor)和pc DNA-STAT3至A549细胞中,并用0. 15μg/ml华蟾素处理,检测细胞增殖和凋亡。结果华蟾素处理的A549细胞中,miR-106a-5p上调表达,STAT3下调表达,细胞增殖抑制率和凋亡率显著升高。过表达miR-106a-5p和抑制STAT3的表达,均可提高A549细胞增殖抑制率和凋亡率。双荧光素酶报告基因实验证实miR-106a-5p和STAT3的靶向结合关系。抑制miR-106a-5p或过表达STAT3,可逆转华蟾素对A549细胞的增殖的抑制和凋亡的促进作用。结论华蟾素可抑制A549细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控miR-106a-5p/STAT3信号通路有关,上述结论可为华蟾素治疗肺癌的分子机制提供新依据。     

miR-217调控TIMP3的表达对喉癌细胞生物学行为的影响

目的探讨miR-217调控金属肽酶抑制剂3(metallopeptidase inhibitor 3, TIMP3)的表达对喉癌细胞生物学行为的影响。方法选择喉癌并行喉部分切除术或喉全切除术的癌组织32例,同时取距离肿瘤2 cm的癌旁正常喉组织32例。选择人喉癌细胞株Hep2,并将miR-217 mimics、Control mimics转染至细胞,分别作为miR-217 mimics组与miR-217 NC组,再将TIMP3 3'-UTR野生型(Wt)质粒和TIMP3 3'-UTR突变型(Mut)质粒分别转染细胞。实时定量核酸扩增检测(qPCR)miR-217及TIMP3的表达水平,双荧光素酶实验检测验证miR-217与TIMP3在喉癌Hep2细胞株中的调控关系,MTT增殖实验检测细胞增殖数,Transwell检测细胞迁移、侵袭数,分析miR-217在喉癌组织中的表达与其临床特征的相关性。结果 qPCR检测结果显示,癌旁正常喉组织、喉癌组织的miR-217表达量分别为1.53±0.21、0.68±0.13,TIMP3表达量分别为1.18±0.15、0.31±0.08,比较差异有统计学意义(P0.05)。双荧光素酶实验结果显示,miR-217 mimics+TIMP3 3'-UTR Wt组、miR-217 NC+TIMP3 3'-UTR Wt组、miR-217 mimics+TIMP3 3'-UTR Mut组、miR-217 NC+TIMP3 3'-UTR Mut组的荧光素酶活性分别为1.79±0.31、1.15±0.11、1.28±0.28、1.18±0.19,比较差异有统计学意义(t=12.09,P=0.019);miR-217 mimics+TIMP3 3'-UTR Wt组、miR-217 NC+TIMP3 3'-UTR Wt组双荧光素酶活性比较差异有统计学意义(P0.05)。与miR-217 NC组比较,miR-217 mimics组喉癌细胞增殖数、迁移细胞数及侵袭细胞数降低,差异有统计学意义(P0.05)。miR-217表达与喉癌的病理分期及淋巴结有无转移相关(P0.05)。结论 miR-217调控TIMP3表达以抑制喉癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-29a-3p调控COL1A1参与喉癌Hep-2细胞增殖及凋亡过程研究

目的研究miR-29a-3p是否调控COL1A1参与喉癌Hep-2细胞增殖及凋亡过程。方法前瞻性选取人喉癌Hep-2细胞,分为对照组、实验组1(miR-29a-3p过表达组)、实验组2(miR-29a-3p抑制组),对照组未进行任何处理,实验组1转染miR-29a-3p模拟剂,实验组2转染miR-29a-3p抑制剂。通过qRT-PCR法检测三组细胞miR-29a-3p及COL1A1基因表达,通过western blotting法检测三组细胞COL1A1蛋白表达。采用双荧光素酶报告基因分析法验证COL1A1是否是miR-29a-3p靶基因。采用MTT比色法检测三组细胞增殖能力,采用流式细胞术检测三组细胞凋亡情况。结果 miR-29a-3p模拟剂转染Hep-2细胞后miR-29a-3p表达升高,COL1A1表达降低;miR-29a-3p抑制剂转染Hep-2细胞后miR-29a-3p表达降低,COL1A1表达升高。双荧光素酶报告基因分析法证实COL1A1是miR-29a-3p靶基因。miR-29a-3p过表达能抑制Hep-2细胞增殖,增加细胞凋亡;miR-29a-3p抑制表达能增强Hep-2细胞增殖,抑制细胞凋亡。结论 miR-29a-3p调控COL1A1参与喉癌Hep-2细胞增殖及凋亡过程。     

miR-27a-3p靶向Rnd3对氧糖剥夺/复氧诱导的神经细胞凋亡的影响

目的 探讨miR-27a-3p调控Rho家族GTP酶3(Rnd3)在氧糖剥夺/复氧（OGD/R）神经细胞凋亡中的作用及机制。方法 体外培养大鼠PC12神经细胞，氧糖剥夺2 h后分别复氧3、6、9和12 h，检测各时刻细胞活力、miR-27a-3p和Rnd3 mRNA的表达筛选最适复氧时间点。采用慢病毒分别转染miR-27a-3p Mimic、miR-27a-3p Inhibitor及二者的阴性对照、转染shRnd3及其阴性对照、或共转染shRnd3和miR-27a-3p Inhibitor入细胞后，CCK-8法检测细胞的活力；流式细胞术检测细胞的凋亡率；RT-qPCR检测miR-27a-3p和Rnd3 mRNA的表达；Western blot检测凋亡相关蛋白和Rnd3蛋白的表达；双荧光素酶报告基因实验验证miR-27a-3p和Rnd3的靶向关系。结果 上调miR-27a-3p提高了细胞活力，降低了细胞的总凋亡率、抑制了促凋亡蛋白Cleaved Caspase-3(C-caspase-3)、Bax和促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，差异有统计学意义（P <0.05）；下调miR-27...     

miR-23b-3p靶向PALM3对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症因子表达的影响

目的研究miR-23b-3p对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症的作用及机制。方法将肺泡上皮细胞A549细胞分为对照组、感染组、转染组、感染组+转染组;对照组A549细胞常规培养,感染组用1×108 CFU/mL肺炎链球菌培养A549细胞,转染组转染不同载体,感染组+转染组在A549细胞被肺炎链球菌处理前48h进行转染。qRT-PCR检测细胞中miR-23b-3p和paralemmin-3(PALM3)mRNA的水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中PALM3、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax),酶联免疫法(ELISA)检测肺炎链球菌诱导后细胞培养上清中白介素-6(interleukin 6,IL-6)和白介素-10(interleukin 10,IL-10)的含量;双荧光素酶报告系统验证miR-23b-3p与PALM3的关系。结果与对照组相比,感染组A549细胞中miR-23b-3p、IL-10、Bcl-2含量明显降低(P0.05),PALM3、IL-6、Bax水平及细胞凋亡率明显升高(P0.05);过表达miR-23b-3p和干扰PALM3表达均可抑制肺炎链球菌诱导的A549细胞凋亡和炎症;miR-23b-3p靶向负调控PALM3的表达;过表达PALM3逆转了过表达miR-23b-3p对肺炎链球菌诱导的A549细胞凋亡和炎症的作用。结论 miR-23b-3p靶向PALM3抑制肺炎链球菌诱导的A549炎症和细胞凋亡。     

MiR-103a-3p靶向FLOT2调控甲状腺癌细胞增殖、 凋亡的分子机制

目的:研究miR-103a-3p对甲状腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:运用RT-q PCR法检测甲状腺癌细胞SW579,FTC-133及人甲状腺上皮细胞TEC中miR-103a-3p、脂筏结构蛋白2(FLOT2)的表达。将miR-NC(miR-NC组)、miR-103a-3p mimics(miR-103a-3p组)、anti-miR-NC(anti-miRNC组)、anti-miR-103a-3p(anti-miR-103a-3p组)、si-NC(si-NC组)、si-FLOT2(si-FLOT2组)、miR-103a-3p+pc DNAmimics(miR-103a-3p+pc DNA组)、miR-103a-3pmimics+pc DNA-FLOT2(miR-103a-3p+pc DNA-FLOT2组)用脂质体法转染至SW579细胞。蛋白质印迹法检测细胞中FLOT2、多肿瘤抑制基因(P16)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(P21)、聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶[poly-(ADPr i bose)poly merase,PA R P]、裂解的PA R P(cleaved-PA R P)、半胱天冬酶-3的前体(pro-caspase-3)、裂解的半胱天冬酶3(cleaved-caspase-3)的蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果:与人甲状腺上皮细胞TEC相比,甲状腺癌细胞中miR-103a-3p的表达明显下调,FLOT2的表达明显上调(P0.05);过表达miR-103a-3p、敲减FLOT2均可抑制甲状腺癌细胞的增殖,促进凋亡;miR-103a-3p明显抑制野生型FLOT2细胞的荧光活性,且负向调控FLOT2的表达;过表达FLOT 2逆转miR-103a-3p对甲状腺癌细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论:miR-103a-3p可抑制甲状腺癌细胞的增殖,促进凋亡,其机制可能与靶向FLOT2相关,可为甲状腺癌的治疗提供参考。