丹溪痛风方对胰腺癌BxPC-3细胞Hedgehog信号通路关键蛋白的影响

目的探讨丹溪痛风方(DGP)对胰腺癌BxPC-3细胞Hedgehog信号通路关键蛋白的影响。方法胰腺癌BxPC-3细胞随机分成模型组,5-氟尿嘧啶(5-FU)组(50μg/ml),DGP高、中、低剂量组(40,20,10μg/ml)。采用台盼蓝染色、MTT法、细胞划痕法分别检测胰腺癌BxPC-3细胞生长曲线、增殖抑制率、运动能力;采用免疫组织化学、RT-PCR法检测胰腺癌BxPC-3细胞Hedgehog信号通路关键蛋白Shh、Smo、Ptch1、Gli1水平。结果与模型组比较,5-FU组,DGP高、中剂量组胰腺癌BxPC-3细胞OD值明显降低(P0.05);运动能力明显降低(P0.05);Hedgehog信号通路关键蛋白Shh、Smo、Ptch1、Gli1水平明显降低(P0.05);Hedgehog信号通路关键蛋白Shh、Smo、Ptch1、Gli1 mRNA水平明显降低(P0.05)。结论 DGP对胰腺癌BxPC-3细胞Hedgehog信号通路关键蛋白Shh、Smo、Ptch1、Gli1具有抑制作用,可见DGP在胰腺癌治疗中扮演重要角色。     

半夏泻心汤含药血清对胃癌细胞来源外泌体诱导BMSCs增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探讨半夏泻心汤对胃癌细胞来源外泌体诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖、迁移、侵袭的影响.方法 荧光染料1,1'-双十八烷基-3,3,3',3'-四甲基吲哚羰花青高氯酸盐(Dil)标记胃癌细胞来源外泌体,制备半夏泻心汤含药血清.实验分为空白组,模型组,半夏泻心汤低、中、高剂量组及Shh阻断剂组,各组上室加入BM...     

半夏泻心汤对正常骨髓间充质干细胞摄取胃癌细胞来源外泌体的干预作用

目的：观察胃癌细胞来源外泌体能否靶向骨髓间充质干细胞（BMSCs）并被摄取及半夏泻心汤的干预效应。方法：分离大鼠BMSCs,倒置显微镜及免疫荧光染色法对其进行鉴定;制备半夏泻心汤含药血清,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测半夏泻心汤含药血清对BMSCs存活率的影响,筛选最佳实验浓度;提取人胃癌BGC-823细胞来源的外泌体,采用透射电镜观察及Western Blot法对其进行鉴定,并用荧光染料Dil标记,分为空白组,模型组,中药高、中、低剂量组及阳性药组,各组上室均加入BMSCs悬液,下室均加入无外泌体血清的培养基。模型组,中药高、中、低剂量组及阳性药组下室加入胃癌外泌体。模型组及空白组上室加入含10%正常对照血清,中药高、中、低剂量组上室内相应加入含10%中药高、中、低剂量含药血清;阳性药组上室加入含10μmoL/L氯丙嗪的10%正常对照血清。24、48、72 h时用激光共聚焦显微镜观察各组BMSCs对胃癌细胞来源外泌体的摄取情况。结果：MTT法筛选半夏泻心汤含药血清的最佳实验浓度为10%。免疫荧光结果显示：共培养24 h内各组未发现BMSCs内红色荧光标记,48 h后发现BMSCs内红...     

益气活血方对胃癌前病变大鼠胃黏膜Sonic Hedgehog信号通路的影响

目的:研究益气活血方对1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(MNNG)诱导的新生大鼠胃癌前病变胃黏膜组织Sonic Hedgehog(Shh)信号通路的影响。方法:48只雄性乳鼠随机分为正常组8只,造模组40只。造模组灌服800mg/L的MNNG 0.1mL/只,正常组灌服等量0.9%氯化钠溶液,共10d。23周后将造模组随机均分为模型组,中药高、中、低剂量组,环耙明组。正常组、模型组灌服0.9%氯化钠溶液10mL/kg,中药高、中、低剂量组分别灌服38.4、19.2、9.6g/kg的益气活血方流浸膏,环耙明组腹腔注射0.2mg/kg环靶明,均每日1次,12周后HE染色观察胃黏膜组织病理学变化,免疫组化检测胃黏膜PCNA的表达,qRT-PCR法检测胃黏膜组织Shh、Ptch1、Smo、Gli1、SuFu、CyclinD1、CyclinE1、C-Myc mRNA的表达,Western Blot检测胃黏膜组织Shh、Ptch1、Smo、Gli1、SuFu、CyclinD1、CyclinE1、C-Myc、p-c-Myc蛋白表达。结果:与模型组比较,益气活血方高、中、低剂量组和环耙明组大鼠胃黏膜炎症及异型增生程度均显著减轻,PCNA表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01),Ptch1及SUFU mRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01),Shh、Smo、Gli-1、CyclinD1及p-c-Myc蛋白的相对表达量显著降低而Ptch1及SUFU蛋白的表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论:益气活血方可能通过下调Shh信号通路的表达起到对胃癌前病变的防治作用。     

蝎毒多肽干预K562/BALB/c-nu小鼠Hedgehog通路传导的机制研究

目的探究蝎毒多肽干预K562/BALB/c-nu白血病荷瘤小鼠Hedgehog通路信号传导的机制,从基因、蛋白水平解析蝎毒多肽抑制慢性粒细胞白血病发展的分子机制和作用靶点。方法将K562/BALB/c-nu白血病荷瘤小鼠分为对照组、模型组、伊马替尼(50 mg/kg)组和蝎毒多肽高、中、低剂量(0.3、0.6、1.2 mg/kg)组,药物干预14 d后,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法检测小鼠瘤组织Hedgehog信号通路上游因子Shh、Ptch、Smo m RNA表达水平,Western blotting法检测Shh、Ptch、Smo蛋白表达水平,ELISA法检测小鼠瘤组织Hedgehog信号通路下游因子Gli1蛋白表达水平。结果与模型组比较,蝎毒多肽干预组小鼠瘤组织Shh m RNA和蛋白表达水平均升高;蝎毒多肽低、中剂量组小鼠瘤组织Ptch、Smo m RNA及蛋白表达水平均降低;伊马替尼组各上游因子与模型组比较差异不显著;蝎毒多肽低、中剂量组小鼠瘤组织Gli1蛋白表达水平降低,蝎毒多肽高剂量组、伊马替尼组Gli1蛋白表达水平无显著差异。结论蝎毒多肽能够抑制Hedgehog信号通路上游因子Ptch、Smo以及下游因子Gli1的表达,而伊马替尼对Hedgehog信号通路无明显抑制作用。     

半夏泻心汤含药血清对胃癌微环境中BMSCs生长增殖的影响

目的:观察半夏泻心汤及不同配伍药组含药血清对胃癌微环境中骨髓间充质干细胞(BMSCs)生长增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:设BMSCs常规培养为空白组;模型组采用transwell小室将人胃癌BCG-823细胞与大鼠BMSCs非接触共培养建立胃癌微环境;半夏泻心汤及不同配伍含药血清组(全方组、辛开组、苦降组、甘补组)在上室内加入体积浓度为10%的相应配伍药含药血清。倒置显微镜观察BMSCs细胞形态、噻唑蓝(MTT)比色法观察BMSCs的增殖率,流式细胞术(FCM)检测BMSCs的细胞周期,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测原癌基因(c-Myc)和端粒酶逆转录酶(TERT)蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测c-Myc和TERT mRNA的表达。结果:全方组、辛开组、苦降组、甘补组含药血清在4,5,6,7 d对BMSCs的增殖有明显抑制作用,全方组明显优于甘补组(P0.05);第7天的检测结果显示全方组、辛开组、苦降组、甘补组含药血清均可降低c-Myc和TERT表达水平,升高G1期细胞比例,降低S期细胞比例,全方组明显优于甘补组(P0.05)。结论:半夏泻心汤及不同配伍药组含药血可抑制胃癌微环境中BMSCs的异常增殖,半夏泻心汤全方为最佳配伍。     

薏苡仁油对人结肠癌细胞增殖及凋亡的影响和机制

目的:观察薏苡仁油对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡的影响,探讨薏苡仁油对人结肠癌HT-29细胞Hedgehog(Hh)信号通路的影响。方法:分别使用不同浓度薏苡仁油处理人结肠癌细胞株HT-29,另取空白培养基做对照组。采用噻唑蓝还原法[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]检测各组细胞增殖情况,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率。采用实时定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,q-PCR)检测Ptch、Smo、Shh和Gli-1 mRNA表达,采用蛋白印迹检测CyclinD1、p21、Caspase-3、Bcl-2、Ptch、Smo、Shh和Gli-1蛋白的表达。结果:MTT法观察到薏苡仁油可抑制人结肠癌HT-29细胞增殖,各浓度水平组HT-29细胞增殖抑制率差异均有统计学意义(P0.05),抑制率随着薏苡仁油浓度的增加而升高。流式细胞术观察到薏苡仁油可诱导HT-29细胞凋亡,各浓度水平组HT-29细胞凋亡率差异均有统计学意义(P0.05),凋亡率随着薏苡仁油浓度的增加而升高。与空白对照组比较,薏苡仁油各组Ptch、Smo、Shh和Gli-1 mRNA的表达降低,且随着薏苡仁油浓度增加,各组表达变化逐渐降低,差异有统计学意义(P0.05)。与空白对照组比较,薏苡仁油各组CyclinD1、Bcl-2、Ptch、Smo、Shh和Gli-1蛋白的表达降低,且随着薏苡仁油浓度增加,各组表达变化逐渐降低,差异有统计学意义(P0.05)。与空白对照组比较,薏苡仁油各组p21和Caspase-3蛋白的表达升高,且随着薏苡仁油浓度增加,各组表达变化逐渐升高,且差异有统计学意义(P0.05)。结论:薏苡仁油能抑制人结肠癌HT-29细胞增殖、促进其凋亡,其机制可能和薏苡仁油抑制Hh信号通路相关。     

三氧化二砷对慢性粒细胞白血病Hedgehog信号转导通路分子基因表达影响的研究

目的:以人类慢性粒细胞白血病(CML)细胞株K562为模型,探讨三氧化二砷(ATO)对CML的Hedgehog(Hh)信号转导通路相关分子的基因表达的作用,为ATO应用于具有Hh异常活化的CML提供理论基础。方法:将不同浓度的ATO作用于K562细胞48 h,免疫印迹(WB)技术检测ATO对CML致病关键分子P210/Bcr-Abl的影响,采用实时定量PCR(q RT-PCR)检测Hh信号转导通路关键分子Gli2、Gli1、SMO和Ptch在mRNA水平的变化。结果:ATO处理后,P210/Bcr-Abl蛋白表达呈剂量依赖性抑制(P0.05),ATO对Gli1和Gli2 mRNA的表达具有显著的抑制作用,且抑制作用呈剂量依赖性(P0.05)。ATO对ptch mRNA的表达具有上调作用(P0.05)。但Smo mRNA的表达在各浓度ATO的作用下均未受到影响(P0.05)。结论:在CML细胞中,ATO可通过抑制Gli1和Gli2 mRNA,上调Hh通路的抑制因子ptch mRNA的表达,并通过降解P210/Bcr-Abl蛋白发挥作用,且该研究为扩大ATO应用于CML提供了理论基础。     

益气活血法对MNNG诱导萎缩性胃炎癌前病变大鼠hedgehog信号通路的调控作用

目的探讨益气活血法对萎缩性胃炎癌前病变大鼠hedgehog信号通路的调控影响。方法雄性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、黄芪组、三七组、黄芪三七组、Purmorphamine组、环巴明组及叶酸组,运用MNNG负荷多因素法制备萎缩性胃炎癌前病变模型。应用HE染色评价胃黏膜病理损伤,应用Western Blot、RT-PCR和量子点介导的免疫荧光化学法分别检测各组大鼠胃组织hedgehog信号通路的蛋白和基因表达水平。结果与空白组相比,模型组大鼠血清PGⅠ/PGⅡ和GAS含量显著降低(P0.01),Shh、Ptch基因及蛋白含量均明显下调(P0.05,P0.01),Smo蛋白表达减弱(P0.01)。与模型组相比,三七组、黄芪三七组及Purmorphamine组PGⅠ/PGⅡ明显升高(P0.01),黄芪组、三七组及黄芪三七组GAS含量显著升高(P0.05)。三七组、黄芪三七组及叶酸组Shh蛋白表达明显升高(P0.05),三七组和Purmorphamine组Ptch蛋白表达增多(P0.05),黄芪组、三七组、黄芪三七组和Purmorphamine组Smo蛋白表达显著增强(P0.05,P0.01)。结论益气活血法可激活hedgehog信号通路,对萎缩性胃炎癌前病变大鼠胃黏膜病变起到改善作用。     

半夏泻心汤含药血清对胃癌微环境诱导腹膜间皮HMrSV5细胞损伤的保护作用

目的观察半夏泻心汤含药血清对胃癌微环境诱导腹膜间皮HMr SV5细胞损伤的保护作用。方法将胃癌BGC-823细胞上清液与人腹膜间皮HMr SV5细胞共培养,建立胃癌微环境对腹膜间皮细胞损伤模型,以不同浓度半夏泻心汤含药血清进行干预,采用倒置显微镜观察HMr SV5细胞形态,MTT法观察HMr SV5细胞存活率,流式细胞术检测细胞周期。结果经胃癌微环境诱导后腹膜间皮细胞呈纤维样变化,细胞间排列稀松,可见片状裸区,细胞G0/G1及G2/M比例升高,S期比例及细胞存活率下降,经不同浓度的半夏泻心汤含药血清干预后,HMr SV5细胞形态排列紧密,裸区逐渐消失,细胞G0/G1、G2/M比例下降,S期比例及细胞存活率增加,有显著统计学意义(P0.05)。结论半夏泻心汤含药血清能够保护胃癌微环境诱导的腹膜间皮细胞损伤。     

莪术含药血清抑制HSCs中Shh和Gli1表达的机制研究

研究莪术含药血清抑制活化的大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)中Hedgehog(Hh)信号通路关键因子Shh(sonic hedgehog),Gli1(glioma-associated oncogene homolog-1)表达的机制。清洁级SD大鼠均分2组,分别给予莪术水煎剂、生理盐水灌胃取血制备含药血清。体外培养大鼠HSCs,分为7组:空白组、模型组、Hh通路抑制剂组、莪术组、Hh通路抑制剂+莪术组、Hh通路激动剂组、Hh通路激动剂+莪术组。除空白组外,其余各组均给予100μg·L-1瘦素诱导后,各组再予以相应药物干预24 h,经MTT法检测HSCs增殖情况,RT-PCR法检测Shh,Gli1的mRNA表达,Western blot法检测Shh,Gli1蛋白表达及免疫荧光法检测Gli1蛋白表达。经瘦素活化的大鼠HSCs中Shh,Gli1的mRNA和蛋白表达均显著上调(与空白组比较P0.01)。Hh通路抑制剂、莪术含药血清分别干预后,Shh,Gli1的mRNA和蛋白表达显著下调(与模型组比较P0.01);莪术含药血清与Hh通路抑制剂协同干预后,Shh,Gli1 mRNA和蛋白表达显著下调(与模型组比较P0.01);Hh通路激动剂干预后,Shh,Gli1 mRNA和蛋白表达显著上调(与模型组比较P0.01)。用莪术含药血清干预Hh通路激动剂组后,Shh,Gli1mRNA和蛋白表达显著下调(与Hh通路激动剂组比较P0.01)。莪术含药血清可通过抑制瘦素诱导活化的HSCs中Shh,Gli1的表达,参与Hh信号通路抑制HSCs的活化,发挥抗肝纤维化的作用。     

白毛藤对人胃癌BGC-823细胞增殖及凋亡的影响

目的:探析白毛藤对人胃癌BGC-823细胞增殖及凋亡的影响。方法:将人胃癌BGC-823细胞分为空白对照组与白毛藤(4mg/m L、8mg/m L)观察组(观察1组、观察2组),采用MTT法测定BGC-823细胞生长抑制率,采用RT-PCR法测定BGC-823细胞Fas、Bcl-2基因表达,并对各组测定结果予以统计比较。结果:观察2组BGC-823细胞生长抑制率明显大于观察1组(P0.05);观察组BGC-823细胞Fas、Bcl-2基因表达明显低于对照组(P0.05)。结论:白毛藤可抑制人胃癌BGC-823细胞增殖,促进BGC-823细胞凋亡,且浓度越大,作用越强。     

半夏泻心方及其配伍药组含药血清对人胃癌BGC-823细胞生长抑制作用及p53表达的影响

目的:研究半夏泻心方不同配伍药组含药血清对BGC-823细胞的生长抑制作用及对p53表达的影响.方法:采用MTT法观察半夏泻心方配伍药组含药血清对BGC-823细胞生长的影响,S-P免疫组化法检测凋亡相关基因p53的表达.结果:半夏泻心方配伍中辛开组、苦降组和由其组成的辛苦组可明显抑制BGC-823细胞的生长,显著高于辛甘组、苦甘组、甘补组和全方组(P<0.05),呈剂量-效应关系,可使 p53基因表达下调.结论:半夏泻心方中辛开、苦降的配伍形式能抑制BGC-823细胞增殖,其诱导细胞凋亡作用与下调p53有关.辛开、苦降配伍后(辛苦)有显著的协同增效趋势,提示辛开苦降法可能是中医药防治胃癌的主要治则治法之一.     

半夏泻心汤含药血清对胃癌细胞外泌体诱导的腹膜间皮细胞FN1、LAMC1表达及胃癌细胞与腹膜间皮细胞黏附、侵袭的影响

目的 观察半夏泻心汤含药血清对胃癌细胞来源外泌体诱导的腹膜间皮细胞纤维连接蛋白1(FN1)和层粘连蛋白γ1(LAMC1)表达及胃癌细胞与腹膜间皮细胞黏附、侵袭的影响，探讨其抑制胃癌腹膜转移的作用机制。方法 制备半夏泻心汤含药血清，提取人胃癌细胞NCI-N87外泌体，采用透射电镜观察及Western blot进行鉴定。将人腹膜间皮细胞HMrSV5分为正常对照组、模型组、5-氟尿嘧啶（5-FU）组和半夏泻心汤低、中、高剂量组，每组3个复孔，以NCI-N87细胞外泌体诱导HMrSV5细胞，并分别用10%含药血清培养，ELISA检测HMrSV5细胞上清液FN1和LAMC1含量，PCR检测HMrSV5细胞FN1和LAMC1mRNA表达，荧光酶标仪检测NCI-N87细胞与HMrSV5细胞黏附情况，Transwell小室检测NCI-N87细胞向HMrSV5细胞侵袭情况。结果 透射电镜观察NCI-N87细胞外泌体呈椭圆或碟状囊泡结构，粒径介于40～80 nm，外泌体标志蛋白CD9、CD63高表达，钙网蛋白低表达。与正常对照组比较，模型组HMrSV5细胞上清液FN1和LAMC1含量明显增加，HMrSV5...     

半夏泻心汤对过氧化氢叔丁醇诱导的MIN6细胞凋亡及PI3K/AKT/FOXO1信号通路的影响

目的探讨半夏泻心汤治疗2型糖尿病的可能作用机制。方法 MIN6细胞分为空白组、模型组、利拉鲁肽组及半夏泻心汤低、中、高剂量组,半夏泻心汤低、中、高剂量组分别加入0.25、0.5、1.0mg/ml浓度的半夏泻心汤10μl预预处理12h,利拉鲁肽组加入0.18μg/ml利拉鲁肽注射液10μl处理12h。半夏泻心汤各剂量组、利拉鲁肽组和模型组用过氧化氢叔丁醇(TBHP)孵育4h建立细胞凋亡模型,MTT法检测各组细胞的凋亡抑制率,Western blot法检测各组细胞中蛋白激酶B(AKT)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、叉头转录因子1(FOXO1)、磷酸化叉头转录因子1(p-FOXO1)及P27蛋白的表达。结果与空白组比较,模型组对MIN6细胞凋亡的抑制率明显升高(P0.05);与模型组比较,利拉鲁肽组及半夏泻心汤中、高剂量组凋亡抑制率均降低(P0.05);各干预组间比较差异无统计学意义(P0.05)。与空白组比较,模型组p-AKT/AKT、p-FOXO1/FOXO1表达明显下调,P27表达明显上调(P0.05);与模型组比较,除半夏泻心汤低剂量组p-FOXO1/FOXO1外,利拉鲁肽组及半夏泻心汤各剂量组p-AKT/AKT、p-FOXO1/FOXO1表达均明显上调,P27表达均明显下调(P0.05);与半夏泻心汤高剂量组比较,利拉鲁肽组、半夏泻心汤中剂量组p-FOXO1/FOXO1表达明显上调(P0.05);与半夏泻心汤低剂量组比较,半夏泻心汤中、高剂量组及利拉鲁肽组P27表达均明显下调(P0.05)。结论半夏泻心汤可显著抑制MIN6胰岛β细胞的凋亡而发挥防治2型糖尿病的治疗作用,以高剂量效果更佳,其机制可能是通过激活PI3K/AKT/FOXO1信号通路,从而调节相关蛋白表达。     

半夏泻心方及其配伍药组含药血清对人胃癌BGC-823细胞增殖及bcl-2表达的影响

目的研究半夏泻心方不同配伍药组含药血清对BGC-823细胞凋亡的影响及其机制。方法采用MTT法观察半夏泻心方配伍药组含药血清对BGC-823细胞增殖的影响,S-P免疫组化法检测凋亡相关基因bcl-2的表达。结果半夏泻心方配伍中辛开组、苦降组和由其组成的辛苦组可明显抑制BGC-823细胞的生长,显著高于辛甘组、苦甘组、甘补组和全方组(P<0.05),呈剂量-效应关系,同时可下调bcl-2的表达。结论半夏泻心方中辛开、苦降的配伍形式可抑制BGC-823细胞增殖,其诱导细胞凋亡作用与下调bcl-2有关。辛开、苦降配伍后(辛苦)有显著的协同增效趋势,而其它配伍药组可能存在拮抗作用。提示辛开苦降法可能是中医药防治胃癌的主要治则治法之一。     

半夏泻心汤联合IL-12转染骨髓间充质干细胞对胃癌荷瘤裸鼠抑瘤作用研究

目的观察半夏泻心汤联合IL-12转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)对胃癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用。方法取培养第3代的BMSCs,采用LV5空载慢病毒及LV5 IL-12过表达慢病毒转染BMSCs细胞,分别于转染48、72 h后,倒置荧光显微镜观察,经嘌呤霉素筛选稳定转染BMSCs,RT-qPCR检测BMSCs中IL-12的表达。Balb/C裸鼠腋窝皮下接种人胃癌BCG-823细胞建立胃癌荷瘤裸鼠模型,实验分为成瘤组、空载组、转染组、药物组、联合组。空载组、转染组和联合组经尾静脉注射0.2 mL含1×10^7/mL转染慢病毒的BMSCs悬液,药物组和联合组给予半夏泻心汤27.43 g/kg灌胃,每次0.5 mL,成瘤组给予等量生理盐水灌胃,隔日测量并计算瘤体体积,连续干预13 d,取瘤体组织,计算抑瘤率。结果倒置荧光显微镜下稳定转染病毒的BMSCs呈不规则形、星形,蜂窝状绿色荧光分布,经RT-qPCR验证,转染BMSCs的IL-12 mRNA表达升高,与正常BMSCs、空载BMSCs比较差异有统计学意义(P<0.05);与成瘤组、空载组比较,转染组、药物组及联合组瘤体积及瘤质量增加较小(P<0.05);与转染组、药物组比较,联合组瘤体积及瘤质量增加最小(P<0.05);与空载组比较,转染组、药物组及联合组抑瘤率明显升高(P<0.05);与转染组、药物组比较,联合组抑瘤率明显升高(P<0.05)。结论半夏泻心汤及IL-12转染的BMSCs对胃癌荷瘤裸鼠均有一定的抑瘤作用,二者联合具有协同增效作用。     

半夏泻心汤含药血清对胃癌微环境诱导人腹膜间皮细胞氧化应激反应的影响

目的观察半夏泻心汤含药血清对胃癌微环境诱导腹膜间皮HMr SV5细胞氧化应激反应的影响。方法将胃癌BGC-823细胞上清与人腹膜间皮HMr SV5细胞共培养,建立胃癌微环境对腹膜间皮细胞损伤模型,以100μl/ml、200μl/ml、400μl/ml浓度的半夏泻心汤含药血清进行干预,采用流式细胞术检测腹膜间皮HMr SV5细胞活性氧(ROS)水平、比色法检测腹膜间皮细胞HMr SV5超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的量。结果经胃癌微环境诱导后腹膜间皮细胞中的ROS及MDA显著升高,SOD及GSH水平下降(P0.05),经100μl/ml、200μl/ml、400μl/ml浓度的半夏泻心汤含药血清进行干预后,ROS及MDA水平显著降低,SOD及GSH水平显著升高(P0.05),且呈浓度依赖关系。结论胃癌微环境可诱导人腹膜间皮HMr SV5细胞发生氧化应激反应,半夏泻心汤含药血清可抑制胃癌微环境诱导的腹膜间皮细氧化应激反应。     

人参皂苷Rg_5对胃癌BGC-823细胞增殖、凋亡及凋亡相关因子的影响

目的观察人参皂苷Rg_5对胃癌BGC-823细胞增殖、凋亡及凋亡相关因子Bcl-2相关X蛋白(BAX)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)表达的影响,探讨人参皂苷Rg_5抑制胃癌生长转移的可能作用机制。方法采用CCK-8法检测人参皂苷Rg_5对BGC-823细胞24、48 h的细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测高、低浓度人参皂苷Rg_5对BGC-823细胞凋亡的影响,Western blot法检测凋亡相关因子Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果与空白组比较,人参皂苷Rg_550、100、200μmol/L 24 h存活率降低(P0.05),人参皂苷Rg_512.5、25、50、100、200μmol/L 48 h存活率降低(P0.05);与空白组比较,低浓度人参皂苷Rg_5凋亡率升高(P0.05),高浓度人参皂苷Rg_5凋亡率升高(P0.05);与空白组比较,高低浓度人参皂苷Rg_5组Bax蛋白表达均升高(P0.05),高浓度人参皂苷Rg_5组Bcl-2蛋白表达降低(P0.05)。结论人参皂苷Rg_5可有效抑制胃癌BGC-823细胞的增殖,促进BGC-823细胞凋亡,且其促进BGC-823细胞凋亡的机制可能与其降低线粒体途径相关的细胞凋亡因子Bcl-2蛋白的表达,升高Bax蛋白的表达相关。     

半夏泻心方配伍与诱导BGC-823细胞凋亡关系的血清药理学研究

目的：研究半夏泻心方不同配伍药组含药血清对BGC-823细胞凋亡的影响及其机制。方法：采用MTT法观察半夏泻心方配伍药组含药血清对BGC-823细胞增殖的影响，采用DNA凝胶电泳检测细胞凋亡、S—P免疫组化法检测凋亡相关基因bcl-2的表达。结果：半夏泻心方配伍中辛开组、苦降组和由其组成的辛苦组可明显抑制BGC-823细胞的生长，显著优于辛甘组、苦甘组、甘补组和全方组，呈剂量一效应关系，其含药血清浓度在10％作用48小时后，DNA琼脂糖凝胶电泳可见较典型的“梯状带”，可使bcl-2基因的表达下调。结论：半夏泻心方中辛开、苦降的配伍形式具有抑制BGC-823细胞增殖，诱导细胞凋亡作用，辛开、苦降配伍后（辛苦）有显著的协同增效趋势，而其他配伍药群可能存在拮抗作用。提示辛开苦降法可能是中医药防治胃癌的主要治则治法之一。