基于16SrDNA高通量测序技术分析加味温胆汤对抑郁模型大鼠肠道菌群的影响

目的 探讨加味温胆汤对抑郁模型大鼠肠道细菌丰度及构成的影响.方法 采用孤养结合慢性不可预见性温和应激(CUMS)法复制抑郁模型大鼠,通过应用旷场实验、糖水消耗实验,检测各组大鼠情绪变化,评估抑郁模型是否成功复制及加味温胆汤抗抑郁效应;应用16s rDNA高通量测序分析技术,研究加味温胆汤对肠道细菌丰度及构成的调控作用....     

基于16S rDNA测序技术探讨参苓白术散对溃疡性结肠炎大鼠肠道菌群的影响

目的 探讨参苓白术散通过调节肠道微生物的组成改善溃疡性结肠炎（UC）的作用及其机制。方法 采用连续灌胃5%聚糖硫酸钠（DSS）制备UC大鼠模型，将造模成功的12只大鼠按随机数字表法分为模型组（n=6）、参苓白术散组（n=6），另设正常对照组（n=7）。正常对照组、模型组大鼠灌胃灭菌纯净水（2 mL/d），参苓白术散组灌胃去离子水超声溶解的参苓白术散，剂量为每千克大鼠1.89 g/d，药液浓度为0.125 g/mL，给药30天。观察大鼠的体重、疾病活动指数（DAI）变化，检测各组大鼠血清中的C反应蛋白（CRP）、血清降钙素（PCT）以及诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）水平，并通过16S rDNA技术探讨大鼠经参苓白术散干预后肠道微生物结构的变化。结果 与正常对照组比较，模型组体重逐渐下降（P<0.05）,iNOS水平亦下降（P<0.01）,CRP、PCT水平及DAI评分升高（P<0.01）；与模型组比较，参苓白术散组大鼠血清CRP、PCT水平下降（P<0.05,P<0.01）。Alpha多样性指数显示：与正常对照组比较，UC模型组Shannon、Chao指数...     

基于16S rDNA分析大承气汤对过敏性哮喘小鼠肠道菌群的影响

目的 通过16S rDNA测序探讨大承气汤对过敏性哮喘小鼠肠道菌群的影响.方法 SPF级C57BL/6雌性小鼠,随机分为对照组、模型组、大承气汤组和地塞米松组.采用卵清蛋白-氢氧化铝法制备过敏性哮喘小鼠模型,成模后进行肺组织病理切片PAS染色,取粪便提取DNA进行高通量16S rDNA测序分析及菌群选择性培养、菌落计数...     

基于16S rDNA基因测序技术分析不同身体质量指数人群的肠道菌群结构差异

目的:探究不同身体质量指数(BMI)人群肠道菌群的丰度及物种差异性.方法:将115例受试人群按BMI分为正常组、超重组和肥胖组,收集受试者粪便,运用16SrDNA基因测序技术结合生物信息分析,比较不同BMI受试者肠道菌群组成和丰度差异.结果:Alpha多样性分析可见超重组和肥胖组群落丰度和多样性较正常组低;不同分组的肠...     

基于16S rDNA测序探讨大黄䗪虫丸调控肠道菌群抑制大鼠肾纤维化的作用机制

目的 从肠道菌群角度研究大黄?虫丸（DHZCW）对腺嘌呤诱导的肾纤维化大鼠的作用及机制。方法 将36只SD大鼠随机分为6组：空白组、模型组、大黄?虫丸高、中、低剂量组（0.168、0.084、0.042 g·kg^-1）、吡非尼酮组（200 mg·kg^-1）,每组6只。除空白组外,其余各组用腺嘌呤混悬液250 mg·kg^-1灌胃造模28 d,再进行药物干预4周,在代谢笼中收集大鼠尿液,测定肾功能指标尿素氮（BUN）、尿素（Urea）、尿肌酐（Crea）、胱抑素C（Cys C）、24小时尿蛋白（24 h TP）。收集肾脏样本并对其苏木素-伊红（HE）染色、马松（Masson）染色,观察各组大鼠肾组织病理变化,采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测关键效应蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原（ColⅠ）、Ⅲ型胶原（ColⅢ）蛋白的表达量。收集大鼠粪便运用高通量测序16S rDNA技术对大鼠菌群进行物种差异性分析。结果 与空白组比较,模型组BUN、Urea、Crea、Cys C、24 h TP含量显著升高（P<0.01）,与模型组比较,DHZCW高、中、低剂量组和吡非尼酮组BUN、Urea、Crea、Cys C、24 h TP均显著降低（P<0.01）。与空白组比较,模型组肾组织中出现明显纤维化改变,α-SMA、ColⅠ、ColⅢ蛋白含量也显著升高（P<0.01）;与模型组比较,DHZCW高剂量组和吡非尼酮组组织结构基本正常,未见明显病理损伤改变,DHZCW中、低剂量组可见纤维化改变,低剂量组较为明显;DHZCW高、中、低剂量组和吡非尼酮组中的α-SMA、ColⅠ、ColⅢ蛋白含量显著降低（P<0.01）,说明DHZCW能有效减少胶原异常沉积而抑制肾纤维化。肠道菌群来看,门水平上,与空白组比较,模型组中厚壁菌门（Firmicutes）的丰度明显增加,拟杆菌门（Bacteroidetes）丰度减少,二者比例明显失调。科水平上,模型组降低了毛螺菌科（Lachnospiraceae）、前蹄菌科（Prevotellaceae）、未分类拟杆菌科（Bacteroidota_unclassified）,增加了瘤胃球菌科（Ruminococcaceae）、乳杆菌科（Lactobacillaceae）、颤螺旋菌科（Oscillospiraceae）菌群的丰度。属水平上,模型组的未分类厚壁菌（Firmicutes_unclassified）、未分类拟杆菌属（Bacteroidota_unclassified）、普雷沃氏菌属_UCG-001（Prevotellaceae_UCG-001）等菌群丰度显著降低,UCG-005、梭状芽孢杆菌（Clostridia_UCG-014_unclassified）等菌群丰度增加。与模型组比较,DHZCW能降低潜在致病菌而升高有益菌丰度,调节肠道菌群。结论 DHZCW能有效改善肾功能和抑制肾纤维化,其作用机制可能与调节肠道菌群有关。     

基于16S rDNA测序分析启脾益肺方对艰难梭菌相关性腹泻小鼠肠道菌群的影响

目的 通过16S rDNA测序探讨启脾益肺方对艰难梭菌相关性腹泻(Clostridium difficile associated diarrhea,CDAD)小鼠肠道菌群的影响.方法 用艰难梭菌菌株VPI10463感染C57BL/6小鼠,建立CDAD小鼠模型,随机分为CDAD模型组和启脾益肺中药组,另设正常对照组.正...     

温胆汤对高脂饮食诱导的糖耐量受损大鼠脂代谢的影响

目的 观察温胆汤对高脂饮食诱导的糖耐量受损(IGT)大鼠血糖和脂代谢的影响.方法 采用高脂饲料连续喂养20周建立IGT大鼠模型,将造模成功的12只大鼠随机分为模型对照组和温胆汤组各6只,另取6只血糖正常大鼠作为正常对照组.正常对照组与模型对照组给予蒸馏水10ml/ (kg·d)灌胃,温胆汤组给予温胆汤溶液10ml/ (kg·d)灌胃,各组均连续灌胃2周.检测各组大鼠体重、空腹血糖、餐后2h血糖、肾周及附睾脂肪重量、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC),计算脂肪与体重比重、Lee's指数.结果 与正常对照组比较,模型对照组体重、餐后2h血糖、肾周及附睾脂肪重量、脂肪与体重比重、Lee's指数、血清TC及TG水平均明显升高(P＜0.05或P＜0.01).与模型对照组比较,温胆汤组大鼠的餐后2h血糖、肾周及附睾脂肪重量、脂肪与体重比重、Lee's指数、血清TC及TG水平均明显降低(P＜0.05或P＜0.01).结论 温胆汤改善IGT大鼠疾病状态,可能与降低IGT大鼠餐后2h血糖浓度、减少大鼠脂肪堆积、降低血脂浓度有关.     

基于16S rDNA测序研究当归拈痛汤对风湿热痹佐剂性关节炎大鼠肠道菌群的影响

目的：从肠道菌群变化研究当归拈痛汤治疗风湿热痹佐剂性关节炎（AA）大鼠的作用机制。方法：将60只SD大鼠随机分为6组：正常组、风湿热痹模型组（FSR组）、当归拈痛汤（DGNTT）低、中、高剂量组（5.67、11.34、22.68 g·kg-1）,甲氨蝶呤组（MTX,1.35 mg·kg-1）,每组10只,除正常组外,其余各组均注射灭活结核分支杆菌（Mtb）佐剂进行免疫,置于风湿热环境的人工气候箱中进行64 h干预造模。初次免疫当天起,给予大鼠灌胃给药,连续灌胃28 d。对大鼠进行关节炎指数（AI）检测,使用足趾容积测量仪检测大鼠足趾容积变化及苏木素-伊红（HE）染色观察膝关节滑膜组织形态改变,并且采用16S rDNA高通量基因测序法分析给药治疗前后大鼠的肠道菌群变化。结果：当归拈痛汤能够减轻风湿热痹证AA大鼠滑膜组织增生和炎症程度及血管翳形成,并且16S rDNA测序结果显示,与正常组比较,FSR组厚壁菌门、乳酸杆菌属、普雷沃氏菌属9、拟普雷沃氏菌属的相对丰度明显降低（P<0.05,P<0.01）,拟杆菌门、拟杆菌属的相对丰度显著升高（P<0.01）;与FSR组比较,...     

基于16S rDNA测序研究当归拈痛汤对膝骨关节炎小鼠肠道菌群的影响

目的 本研究旨在通过16S rDNA探讨当归拈痛汤调控肠道菌群进而治疗膝骨关节炎（KOA）的潜在作用机制。方法 将36只C57BL/6J小鼠采用前交叉韧带切断（ACLT）的方法构建膝骨关节炎疾病模型,并随机分为假手术组、模型组、当归拈痛汤低剂量组（0.819 g·kg^-1）、当归拈痛汤中剂量组（1.638 g·kg^-1）、当归拈痛汤高剂量组（3.276 g·kg^-1）、美洛昔康组（0.975 mg·kg^-1）,每组6只。除给药组外,假手术组与模型组均予生理盐水灌胃,连续干预4周后,分别收取小鼠粪便和完整膝关节,苏木素-伊红（HE）和番红O-固绿染色观察膝关节组织形态的病理改变;采用16S rDNA测序分析给药前后肠道微生物丰度、多样性变化及相对应的功能预测。结果 高剂量当归拈痛汤和美洛昔康可以明显缓解KOA小鼠的疼痛症状,改善关节结构的紊乱,维持膝关节软骨的完整性,提高关节软骨Ⅱ型胶原a1（Col2a1）表达,降低关节软骨基质金属蛋白酶-13（MMP-13）表达。16S rDNA结果显示,高剂量当归拈痛汤可调整肠道菌群物种丰富度与菌群结构,与假手术组比较,模型组中变形菌门（Proteobacteria）、放线菌门（Actinobacteria）、瘤胃球菌属（Ruminococcus）、拟杆菌属（Bacteroides）丰度显著提高（P<0.05）,与模型组比较,当归拈痛汤组中这4种菌群丰富度显著降低;与假手术组比较,模型组疣微菌门（Verrucomicrobia）、颤螺菌属（Oscillospira）和阿克曼氏菌属（Akkermansia）丰度明显降低（P<0.05）,与模型组比较,当归拈痛汤组中这三类菌群丰度明显升高（P<0.05）。对差异菌属进行功能学通路预测发现,各组间差异物种涉及到丰度较高的代谢通路主要涉及到生物合成及前体代谢物和能量的产生,包括氨基酸生物合成、核苷和核苷酸生物合成、辅因子、假体基团、电子载体和维生素生物合成。结论 当归拈痛汤能够有效保护关节软骨,延缓KOA疾病进展,可能是通过调节肠道菌群结构、促进益生菌、抑制有害致病菌生长实现的。     

基于16S核糖体DNA基因测序技术探讨分消走泄法对支气管哮喘大鼠肠道菌群的影响

目的 采用16S核糖体DNA(16S ribo-somal DNA,16S rDNA)基因测序技术,研究白果温胆汤对支气管哮喘大鼠肠道菌群结构的影响。方法 将72只SPF级雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、地塞米松组及白果温胆汤高、中、低剂量组,每组12只。以卵清蛋白致敏并激发制备哮喘大鼠模型。实验过程中观察记录各组大鼠的精神状态、食量、饮水量、呼吸及毛发光泽等情况的变化;观察各组大鼠肺组织HE染色病理改变结果;采用16S rDNA Miseq高通量测序观察肠道菌群情况,通过OTU聚类分析方法、Alpha多样性分析方法、Beta多样性分析方法分析肠道菌群多样性,通过SPSS 25.0分析比较不同干预方法下大鼠肠道菌群结构的差异。结果 (1)行为学观察结果：白果温胆汤高、中、低剂量组及地塞米松组大鼠精神状态、饮食饮水量、毛发、呼吸均有不同程度的改善。(2)模型组大鼠肺气管上皮破损,肺间隔增厚,炎性细胞增多。各治疗组与模型组比较,均有一定改善。(3)造模后,与空白组比较,模型组大鼠肠道菌群丰度Chao1指数及Observed＿species指数、Faith’s PD指数、Pielou＿e...     

基于16s rDNA测序的黄芪总多糖对SD大鼠肠道微生物多样性的影响

目的:研究黄芪总多糖(Total Polysaccharides of Astraglus Membranaceus,PSA)对SD大鼠肠道微生物多样性的影响.方法:SPF级SD大鼠随机分为对照组,黄芪总多糖低剂量组(100mg/kg)和高剂量组(400mg/kg),连续灌胃30d.于第31d取粪便进行16S rDNA...     

基于16S rDNA测序技术分析不同龄期蚕沙中菌群多样性

该文对不同龄期烘干前后蚕沙中菌群多样性进行分析与评价,以期明确其菌群组成及其丰富度差异,阐明烘干处理对中药材蚕沙中菌群的影响,为其功效科学内涵的揭示提供依据和参考。应用高通量测序技术测定蚕沙细菌的16S rDNA-V4变异区序列,应用Qiime,Mothur,PICRUSt等软件整理和统计样品序列数目和操作分类单元(OTUs)数量,分析蚕沙样品中菌群的组成、丰度、分布、Alpha多样性、Beta多样性,菌群差异性及对群落的代谢功能等进行预测。该研究获得用于分析的有效序列数为259 250;稀疏曲线表明测序深度充分,OTU的数量接近于饱和。蚕沙菌群主要由变形菌门(Proteobacteria,89.3%)、放线菌门(Actinobacteria,5.0%)、厚壁菌门(Firmicutes,4.4%)、拟杆菌门(Bacteroidetes,1.1%)、蓝细菌(Cyanobacteria,0.2%)组成,其优势菌门为变形菌门。烘干后蚕沙的菌群多样性及丰富度降低,五龄蚕沙尤为明显。PICRUSt分析蚕沙菌群对应的基因功能发现膜转运、碳水化合物代谢、氨基酸代谢、脂质代谢、核苷酸代谢,细胞过程与信号传导等基因功能丰度较高。烘干处理可显著降低蚕沙中致病菌的种类和数目,有利于药材药用品质,相比于低龄期蚕沙,五龄蚕沙更适宜入药。Illumina Mi Seq高通量测序技术为蚕沙菌群的研究提供了更加准确、科学的数据资源。     

基于16S rDNA高通量测序研究电针对腹泻型肠易激综合征大鼠肠道菌群的调节作用

目的 采用16S rDNA高通量测序技术,分析电针足三里对腹泻型肠易激综合征(irritable bowel syndrome-diarrhea, IBS-D)大鼠肠道菌群物种相对丰度和多样性的影响,探讨电针对IBS-D的作用机制。方法 将SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组。采用束缚联合番泻叶煎剂灌胃法造模,电针组采用电针双侧足三里干预,空白组与模型组不做干预处理。干预结束后,检测大鼠内脏敏感性,并取大鼠粪便进行16S rDNA高通量测序技术检测大鼠肠道菌群。结果 (1)与空白组比较,模型组大鼠腹壁回撤反射评分明显升高(P<0.05);经过电针治疗后,在20 mmHg压力下的腹壁回撤反射评分明显降低(P<0.05)。(2)与空白组相比,模型组OTU数目明显降低,电针组接近于空白组。(3)与空白组相比,模型组芽孢杆菌纲、乳杆菌属、真杆菌属等丰度明显降低,拟杆菌纲、梭菌纲、δ-变形杆菌纲、毛螺菌属等丰度明显升高,而电针组上述菌纲/属丰度均有所改善。(4)三组的Beta多样性分析结果显示,模型组与空白组的样本明显被区分开,而电针组则在两组之间。结论 IBS-D与内脏高敏感性以...     

基于16SrRNA基因测序技术分析痰证糖耐量减低患者的肠道菌群特点

目的:探讨痰证糖耐量减低患者与健康人群肠道菌群的差异。方法:随机选取2018年1月～2018年12月宁波市中医院内分泌科门诊的20例痰证糖耐量异常(IGT)患者,同时选取20例体检中心的健康人为对照组,提取两组样本中细菌总DNA,通过Illumina Mi Seq平台进行测序,比较两组样本菌群组成和结构。结果:从菌群结构组成上分析:门水平上以厚壁菌门、拟杆菌门等为优势菌群;痰证组软壁菌门的相对丰度显著高于健康组。纲水平上痰证组杆状菌纲、α-变形菌纲、梭杆菌纲的相对丰度高于健康组。目水平上痰证组与健康组中梭菌目、乳杆菌目、梭杆菌目的相对丰度差异较大,痰证组中梭菌目的相对丰度明显低于健康人,乳杆菌目、梭杆菌目的相对丰度明显较健康人高。科水平上痰证组与健康组中乳杆菌科、普雷沃氏菌科、梭杆菌科的相对丰度差异较大,均高于健康组。在属分类水平上,痰证组与健康组较多菌属的相对丰度存在差异,其中乳杆菌属、普雷沃氏菌属、梭杆菌等属的相对丰度痰证组较健康组高,双歧杆菌属、瘤胃球菌属痰证组较健康组低。菌群多样性分析:两组样本的shannon指数通过秩和检验其差异具有统计学意义(P<0.05),IGT痰...     

基于16S rDNA测序的肠道菌群探讨解郁祛痰化浊方对高脂饮食大鼠肠-肝轴的影响

目的:研究解郁祛痰化浊方(JQHP)对高脂饮食大鼠肠道菌群的影响,探讨中药调控肠道微生物群进而恢复肠-肝轴的平衡.方法:将70只雄性SPF级别Wistar大鼠随机分为正常组(10只)与模型组(60只),正常组饲喂正常饲料,模型组饲喂高脂饲料.12周后将模型组随机分为6组,每组10只,即模型组,血脂康组,立普妥组,JQH...     

麸炒枳实对功能性消化不良大鼠肠道菌群的影响

目的 采用16S rDNA高通量测序技术研究麸炒枳实对功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)大鼠肠道菌群的影响.方法 以复合因素造模法建立FD大鼠模型,以一般状态、体质量变化、胃排空率及肠推进率验证模型;采用Illumina Hiseq对大鼠盲肠粪便进行16S rDNA基因V4可变区检测,以A...     

老年脾虚患者肠道菌群16S rDNA变性梯度凝胶电泳分析

目的:比较健康老年男性和脾虚证老年男性患者肠道菌群结构特征,研究脾虚证与肠道菌群的关系。方法:分别建立老年男性健康和脾虚证患者(脾肾阳虚、脾气虚、脾肾阳虚兼脾气虚)粪便肠道菌群变性梯度凝胶电泳(DGGE)指纹图谱,并进行非加权配对算术平均法聚类分析、多维尺度分析和主成分分析,确定老年脾虚证患者肠道菌群的基因指纹特征。结果:脾肾阳虚、脾气虚和脾肾阳虚兼脾气虚患者的肠道菌群结构具有明显特征,并与临床诊断结果基本一致;同一证型不同病症、临床表征和病程的患者肠道菌群结构不同。结论:粪便肠道菌群16SrDNADGGE图谱分析方法适用于脾虚证患者肠道菌群变化研究,是现代生物技术与传统中医理论相结合的实际应用。     

淫羊藿水提液对去卵巢大鼠肠道菌群的影响

目的：从肠道菌群角度探索淫羊藿水提液防治骨质疏松症的作用机制。方法：采用双侧去卵巢(OVX)法建立骨质疏松模型,将21只3月龄雌性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、去卵巢组(OVX组)、淫羊藿水提液给药组(EF组,0.81 g·kg^-1·d^-1),连续灌胃给药12周,收集大鼠股骨、新鲜粪便。双能X线骨密度分析仪检测大鼠股骨骨密度变化,Masson染色观察股骨骨微结构与胶原纤维变化,免疫组化检测股骨中RUNX2的表达;16S rDNA高通量测序检测分析粪便中V3-V4区菌群基因。结果：与Sham组比较,OVX组大鼠股骨骨密度显著降低(P<0.05),股骨骨小梁稀疏、断裂,RUNX2含量显著下降(P<0.05);肠道菌群多样性无显著变化,厚壁菌门丰度增加拟杆菌门和变形菌门丰度减少。与OVX组比较,EF组明显改善OVX大鼠股骨骨微结构及胶原纤维数量(P<0.01),显著增加RUNX2含量(P<0.01);肠道菌群中厚壁菌门丰度减少,拟杆菌门和变形菌门丰度增加,髌骨细菌门、瘤胃菌科＿UCG-014菌属和Candidatu...     

基于16S rDNA和GC-MS技术研究胡黄连治疗便秘小鼠的作用机制

研究胡黄连对便秘模型小鼠肠道菌群和代谢产物的影响。将ICR小鼠分为空白组、模型组以及胡黄连高、中、低剂量组,应用盐酸洛哌丁胺对模型组和胡黄连各组造模,造模成功后,胡黄连高、中、低剂量组给予相应剂量药物灌胃给药7 d,测量各组小鼠首次黑便时间、3 h粪便总量、粪便含水率及肠道推进率;HE染色观察肠道黏膜情况;16S rDNA检测结肠内容物菌群变化;气相色谱-质谱(GC-MS)技术检测粪便代谢物变化。结果显示,模型组小鼠首次黑便时间显著延长,3 h粪便质量、粪便含水率及肠道推进率均显著减少,结肠组织可见明显炎性细胞浸润,肠道菌群及粪便代谢物呈现显著变化。胡黄连干预可显著改善便秘症状,修复肠道黏膜,部分恢复便秘小鼠肠道菌群及代谢物的组成。肠道菌群测序显示,胡黄连可以显著降低厚壁菌门/拟杆菌门比值,降低Lactobacillus相对丰度,增加肠道Muribaculaceae、Enterorhabdus、Eggerthellaceae相对丰度,线性判别分析(linear discriminant analysis effect size, LEfSe)软件测得胡黄连组优势菌种包括Muribacu...     

辣木叶对低纤维膳食致便秘大鼠肠道菌群的调控研究

目的:探究辣木叶对低纤维膳食所致大鼠便秘的肠道菌群影响。方法:SD大鼠30只,随机分为正常对照组、模型对照组、比沙可啶1.8 mg/kg组、辣木叶0.63、2.5 g/kg组。大鼠低纤维饲料造模28 d后连续给药7 d,记录辣木叶提取物对大鼠排便、胃排空率及小肠推进率的影响;收集大鼠粪便与结肠内容物,采用Illumina Miseq测序平台进行16srDNA基因测序。结果:与正常对照组比较,模型对照组粪便粒数显著减少;与模型对照组比较,辣木叶0.63 g/kg可明显改善低纤维膳食诱导的便秘大鼠粪便粒数(P<0.05);模型对照组大鼠拟杆菌属(Bacteroidetes)水平降低,辣木叶2.5 g/kg组水平升高;模型对照组的变形菌门(Proteobacteria)和放线菌门(Actinobacteria)水平升高。LEfSe分析发现辣木叶组的优势菌群为毛螺旋菌科、瘤胃菌科Ruminococcaceae、等,预测辣木叶可通过参与氨基酸的生物合成、ABC转运蛋白、碳代谢、群体效应和双信号传导等通路,调节肠道菌群的稳定。结论:辣木叶可改善低纤维膳食诱导的大鼠便秘,增加肠道微生物多样性并...