乙型肝炎患者血清中高迁移率族蛋白的含量与临床意义

目的:检测慢性乙型肝炎患者血清中晚期炎症介质高迁移率族蛋白 -1(HMGB1)含量, 探讨HMGB1含量与疾病严重程度的关系.方法:收集慢性重型肝炎患者20例,CHB患者40例, 健康对照者10名,取外周血14 mL,4 mL自动生化仪检测患者血清TBil和PTA;10 mL用W estern blotting法检测样品中HMGB1,对患者血清HMGB1含量与TBil和PTA进行相关性分析.结果:20 例慢性重症乙型肝炎患者血清中HMGB1检出率为100%(20/20),平均含量为(80.6±12.6) μg/L ;15 例重度CHB患者血清中HMGB1检出率为93%(14/15),平均含量为(73.4±11.9) μg/L;1 2例中度CHB患者血清中HMGB1检出率为50%(6/12),平均含量为(58.3±16.4) μg/L;13例轻度CHB患者血清中HMGB1检出率为7.7%(1/13),含量为29.8 μg/L;健康对照者血清中未检出 HMGB1,重症乙型肝炎组HMGB1含量明显高于CHB组(P<0.01).血清中HMGB1的含量与TB il呈正相关,与PTA呈负相关.结论:慢性乙型肝炎患者血清中HMGB1的含量与其疾病的严重程度密切相关,在慢性乙型肝炎病理过程中可能起重要作用.     

HPV51DNA的HaeⅡ、AluI酶切片段的核苷酸顺序分析

<正> 我们将HPV51DNA用HaeⅢ、A1u I同时消化,然后在agarose上电泳,将电泳片段回收,将其与MP-18噬菌体连接。然后转染XL1 blue菌。在含I PTG及X-gel的上层agarose中,连接有HPV51片段的MP-18出现白色噬菌斑,反之,出现蓝色噬菌斑。挑取单个白色噬菌斑种入3mL YT培养基中,同时加入已培养4h的新鲜XL1blue细菌10μL,37℃振荡培养过夜,离心。上清中含带有HPV 51片段的单链MP-18。取1mL上清,加入300μL20％PEG,30μL5mol/L NaCl,6μLO。5mol/LEDTA(pH8.0),5μLRNase(10mg/mL),混匀后,置冰浴30min,离心。沉淀溶于100μL TE(pH8.0),加3μL20％SDS,3μL蛋白酶K(5mg/mL),混匀,     

改良BIGH3对角膜上皮细胞迁移的实验研究

目的研究比较改良前后重组人BIGH3对人角膜上皮细胞迁移的影响。方法培养人角膜上皮细胞,取同一代细胞进行实验;促细胞迁移实验采用改良的Boyden微孔膜双槽法进行细胞迁移实验,下槽液体用含不同浓度(10,20,30,100μg/mL)的野生或诱变BIGH3蛋白的KSFM培养液,2%BSA作为对照组,上槽加入0.4 mL密度3.5×105cells/mL的细胞悬液(细胞总数为1×105)。置于37℃二氧化碳培养箱,温育4 h后酒精固定、Toludine篮染色、压片固定。用倒置相差显微镜,计算膜上相对固定区域的9个高倍视野(×400)的细胞数,取均值。结果诱变型重组人BIGH3比野生型BIGH3拥有更高的促角膜上皮细胞迁移作用,以剂量依赖式方式促进人角膜上皮细胞的黏附。在10μg/mL时,诱变型重组人角膜上皮素即可促进人角膜上皮细胞黏附,随着浓度的增高,作用增强;浓度达到30μg/mL时,促进作用达到高峰。结论诱变型人BIGH3比野生型BIGH3拥有更高的促角膜上皮细胞迁移作用,为进一步临床应用提供了理论基础。     

重组人角膜上皮素对人角膜上皮细胞黏附的影响

目的 研究比较改良前后重组人角膜上皮素对人角膜上皮细胞黏附的影响.方法 培养人角膜上皮细胞,将野生型角膜上皮素蛋白和诱变型重组角膜上皮素蛋白浓度调整为10,20,30,100μg/mL,分别预孵化96孔酶标板,每种浓度6个孔.包被18 h,孵育2 h.加入人角膜上皮细胞的细胞悬液调整浓度为每孔3×105,每组都设2%BSA预孵化的细胞板对照组.全自动定量绘图酶标仪检测吸光度.结果 诱变型重组人角膜上皮素比野生型角膜上皮素拥有更高的促角膜上皮细胞黏附作用,以剂量依赖式方式促进人角膜上皮细胞的黏附.在诱变型重组人角膜上皮素浓度达到10μg/mL时,开始促进人角膜上皮细胞黏附,随着浓度的增高,作用增强;浓度达到30μg/mL时,促进作用达到高峰.结论 诱变型人角膜上皮素比野生型角膜上皮素拥有更高的促角膜上皮细胞黏附作用,为进一步临床应用提供了理论基础.     

甲基化特异性PCR技术的质量控制及改进

目的:改进甲基化特异性PCR(MSP)技术并控制实验质量.方法:采用改进的MSP法检测正常胃粘膜及胃癌组织中eaveolin-1基因的甲基化状况.运用饱和酚-氯仿抽提法提取DNA,其中石蜡包埋组织连续切片厚度为8μm;采用热启动PCR:反应体系为25μL、变性温度设定为95.5℃、循环数设定为30.结果:新鲜组织较石蜡包埋组织更适于MSP实验,但福尔马林固定石蜡包埋组织同样可用于MSP实验,并且8μm厚的石蜡包埋组织能获得较完整的DNA链.热启动PCR效果良好:25μL体系敏感性优于50μL体系,95.5℃可以使含CpG岛的DNA链解链更完全,30个循环足以扩增小于150 bp的目的片段.结论:采用改进的MSP技术,可获得较好的DNA模板,提高实验的灵敏度和成功率,更适于甲基化的研究.     

磁珠-流式细胞术检测肺结核患者Th1/Th2细胞因子

目的 建立磁珠-流式细胞术检测肺结核病患者血浆中的Th1/Th2细胞因子,为结核病患者免疫监测提供一种快速和客观的方法.方法 按Th1/Th2细胞因子磁珠分析试剂盒说明书进行,Th1/Th2细胞因子标准品倍比稀释,50μL等体积混合的Th1/Th2细胞因子捕获磁珠加入检测管,依次加入50μL PE标记的检测试剂,50μL标准品或50μL待检样品震荡混匀,室温避光3 h,加1 mL洗液,200 g离心5 min,加300μL洗液悬浮磁珠,上流式细胞仪前各样品振荡3～5 s.采集流式图谱并用BD CBA software(version 4.0;BDBiosciences)软件分析,并换算成细胞因子浓度.结果 涂阳肺结核患者和涂阴肺结核患者血浆中IFN-γ显著升高,而IL-5显著降低;涂阳肺结核患者循环IL-10显著升高,涂阴肺结核患者循环IL-10含量绝对值升高,但差异无显著性.结论 与常规ELISA法相比,磁珠-流式细胞术检测细胞因子需更少的时间和样品.     

ELISA在解决登革与乙脑交叉反应实验诊断中的观察

登革热是东南亚地区和我国的一个重要疾病,过去血清学诊断多采用血凝抑制试验(HI)。HI虽敏感,但与乙脑有免疫交叉反应不易判断。本文应用ELISA检测临床疑似登革患者血清,同时与HI法进行比较,对解决这个问题取得满意结果,现报告如下: 材料与方法一、血清来源:1986年9～11月采集广西北海市医院临床疑似登革热患者静脉血,分离出血清保存在-20℃待检。6份登革阳性血清(补体结合抗体>1∶64)和2份阴性对照系收集登革非疫区的人血清。另外还采集乙型肝炎(HEP);风疹(RUV),单纯疱疹(HSV)和巨细胞病毒(CMV)抗体阳性血清;单纯疱疹、巨细胞病毒和风疹抗体阴性血清、乙脑病毒(JEV)抗体阳性血清.     

小鼠子宫内膜的组织培养

目的:建立小鼠子宫内膜的体外培养方法.方法:用挤压法获得子宫内膜,在添加200 mL/L胎牛血清(FBS),17.5 nmol/L胰岛素,63.5 nmol/L孕酮(P4),7.14 nmol/L雌二醇(E2)的F12/DMEM(1:1)培养液和50 mL/L CO2 950mL/L空气界面进行培养,比较分析20μg/L表皮生长因子(EGF)和50 mL/L CO2 950 mL/L O2气体条件对子宫内膜维持的影响.HE染色,图像分析系统检测样本坏死率,并用SP法检测培养前后子宫内膜中白血病抑制因子(LIF)及类肝素结合样表皮生长因子(HB-EGF)的表达.结果:三组子宫内膜的坏死率(%)分别为19.40±3.38,16.41±3.40和13.71±2.89,其差异有显著性(P=0.000);LIF及HB-EGF在培养前后小鼠子宫内膜的阳性表达率均为100%,且同一指标在培养前后子宫内膜的阳性强弱分布无显著性差异(P分别为0.237,0.224).结论:添加200 mL/L FBS,63.5 nmol/LP4,7.14 nmol/L E2,17.5 nmol/L胰岛素和20μg/L EGF的F12/DMEM(1:1)培养液和50 mL/L CO2 950 mL/L O2的气体环境最有利于小鼠子宫内膜的体外培养;子宫内膜在上述条件下培养24 h后,对囊胚仍具有容受性.     

阿尔茨海默病病人血浆TACE活性检测方法研究

目的 探讨阿尔茨海默病病人血浆肿瘤坏死因子转化酶(TACE)活性的检测方法.方法 采集临床诊断阿尔茨海默病病人的血液1 mL,抗凝处理后离心获得血浆.分别取2.5、5.0、7.5和10.0μL血浆加入96孔板中,然后加入定量的反应液和酶底物,用荧光酶标仪测定血浆中TACE在37℃与底物的酶反应速度.结果 加入7.5μL血浆的反应体系与其他反应体系相比,TACE的酶反应速度最快.结论 检测阿尔茨海默病病人血浆中TACE活性的最佳血浆剂量是7.5μL.     

恒河猴EB病毒有关抗体的检查

我们应用间接免疫荧光技术检查50例正常恒河猴血清的EB病毒壳抗原(EB-VCA)抗体。待检血清经56℃30分灭活,置-20℃备用.阳性对照用鼻咽癌病人血清。阴性对照用献血员血清。检测时,血清样品用PBS从1:5起倍比稀释. 将检测用的B95-8细胞株(系产生EB-VCA的传代细胞株,医科院肿瘤所提供)培养于含20％牛血     

Zosteriform herpes simplex

Herpes simplex virus (HSV) infection, though most commonly seen in the oral, perioral and genital areas, can occur anywhere on the body. After primary infection, HSV then establishes latency in sensory nerve ganglia and reactivates intermittently, precipitated by various factors. These reactivations may be recurrent and appear in a dermatomal distribution, mimicking herpes zoster, often leading to misdiagnosis if no confirmatory laboratory tests are carried out. We report a 65-year-old man who presented with recurrent episodes of a "zosteriform eruption", who was initially clinically diagnosed and treated as for recurrent herpes zoster, but was subsequently found to have recurrent herpes simplex virus type 2 after laboratory investigations.     

Genital herpes simplex.

Genital herpes is a sexually transmitted disease caused by the herpes simplex virus. Following the initial infection the virus becomes latent in the sacral ganglia. Approximately 80% of patients are then subject to milder but unpredictable recurrences and may shed the virus even when they are asymptomatic. The disorder causes concern because genital herpes in the mother can result in rare but catastrophic neonatal infection and because of a possible association between genital herpes and cancer of the cervix. No effective treatment is as yet available. Weekly monitoring for virus by cervical culture from 32 weeks' gestation is recommended for women with a history of genital herpes and for those whose sexual partner has such a history.     

Topical ether and herpes simplex labialis

In a double-blind, placebo-controlled study, 51 patients with recurrent herpes simplex labialis were treated with topical ether or placebo within 24 hours of onset of a lesion. There was no noteworthy difference between groups given ether and placebo in progression of lesions, healing time, duration or intensity of pain, and duration or quantity of virus excretion. The ether also failed to reduce appreciably lesion virus titer, even when lesions were cultured immediately after topical application. Despite these results, 75% of the patients receiving ether and 77% of those receiving placebo reported effective reduction of the severity and duration of lesions. The marked placebo effect in the treatment of recurrent herpes infection helps to emphasize the need for objective measurements and placebo-controlled studies.