骨关节炎软骨细胞死亡机制研究

骨关节炎(osteoarthritis,OA)是一种慢性退行性骨关节疾病,主要病理改变为关节软骨完整性的破坏,即软骨细胞的减少和细胞外基质的降解,还可累及软骨下骨,并伴有大量骨赘形成.软骨细胞参与细胞外基质的合成和修复,软骨细胞的减少必然导致细胞外基质的合成减少,而细胞外基质的缺损又会增加细胞对死亡信号的敏感性.目前认为骨关节炎软骨细胞减少是由于细胞过度死亡所致,所以对软骨细胞死亡机制的研究将有助于骨关节炎的防治.     

骨关节炎关节软骨细胞基因表达谱的芯片研究

目的 利用基因芯片技术,研究骨关节炎关节软骨细胞基因表达谱差异性基因、差异性基因功能及通路,初步探讨骨关节炎预警基因.方法 入选行关节置换术的骨关节炎、类风湿关节炎(RA)和无关节炎的创伤患者各3例,分成骨关节炎组、RA组和创伤组.分别取关节软骨标本,体外培养关节软骨细胞.采用人类全基因组寡核苷酸微阵列芯片技术,通过微阵列差异性基因分析软件两因素不配对检验分析比较骨关节炎组分别与创伤组、RA组关节软骨细胞基因表达谱的差异在生物分子功能注释系统中分析差异性基因功能、通路.结果 骨关节炎组与创伤组比较差异基因为145个(其中70个上调,75个下调),骨关节炎组与RA组比较差异基因为281个(其中94个上调,187个下调);骨关节炎组分别与创伤组、RA组比较得到的差异性表达基因功能分属于细胞过程、生理过程、细胞成分、生物调节、信号转导等;有统计学意义的差异性基因通路主要有:凋亡通路、细胞周期通路、P53蛋白信号通路、Fas 信号通路、一氧化氮通路、凋亡级联通路、局部黏附通路、细胞外基质受体相互作用通路、紧密连接通路、黏着接合通路、肌动蛋白细胞骨架调节通路、骨重塑通路、硫酸软骨素生物合成通路、Jak-STAT信号通路、Wnt信号通路、Toll样受体信号通路、细胞间黏附信号通路、T细胞受体信号通路等(P＜0.05);骨关节炎.创伤组和骨关节炎-RA组之间差异性基因功能及通路存在差异,同时也存在交叉.结论 从差异性基因表达种数、生物学功能、通路分析三方面获得骨关节炎生物学信息,使得从基因表达人手寻找骨关节炎的早期预警指标成为可能.     

软骨细胞衰老在骨关节炎中的作用

骨关节炎是以关节软骨退化、软骨下骨硬化,骨赘形成并伴有关节疼痛、肿胀、畸形及活动障碍的慢性退行性关节病,且多发于膝、髋等负重关节[1-3]。据统计全世界OA患病率约为15%[4],其中50岁以上老年人群的发病率达到50%,最终致残率高达53%[5]。我国流行病调查研究发现我国40岁以上人群膝、手、颈、腰关节炎的总患病率则高达46.3%[6]。     

骨关节炎软骨细胞凋亡的信号传导

骨关节炎（osteoarthritis，OA）是一种严重危害老年人健康的慢性退行性骨关节疾病。在最常见的三大老年病（脑血管疾病，骨质疏松症，老年性骨关节病）中，OA患病率在世界范围内居于首位。60—70岁的老年人OA患病率约为60％，70岁以上老年人的OA患病率约为70％。联合国业已宣布2000—2010年是骨与关节的十年，以提醒人们注意骨关节疾病对世界健康的影响。而软骨细胞凋亡是骨关节炎发生的重要病理学特征，本文主要通过对骨关节炎中软骨细胞凋亡可能通过的线粒体途径、死亡受体途径、内质网应激反应性凋亡途径等信号传导通路作一综述，为今后中西医治疗骨关节炎提供一个新的思路。     

阿魏酸钠对人骨关节炎软骨细胞的影响

骨关节炎(osteoalthritis,OA)是中老年人最常见的关节疾病,病理上表现为软骨细胞和软骨基质的退行性改变,最终导致关节软骨结构破坏和功能障碍.     

一氧化氮在实验性骨关节炎软骨细胞凋亡中的作用

目的　观察一氧化氮 (NO)在实验性骨关节炎 (OA)关节滑液中的动态变化 ,并探讨NO在实验性OA软骨细胞凋亡中的作用。方法　用原位末端标记法以及镀铜镉还原法对实验性OA软骨细胞凋亡及关节滑液中的NO含量进行检测。结果　实验性OA中NO水平显著高于正常对照组 ,且随制动时间延长 ,NO水平逐渐升高 ,6周达高峰。此时也出现较多软骨细胞凋亡现象 ,应用一氧化氮合酶 (NOS)抑制剂L NAME后 ,关节液中NO含量降低 ,软骨细胞凋亡现象减轻。结论　NO是引起实验性OA中软骨细胞凋亡的重要介质之一。     

一氧化氮在实验性骨关节炎软骨细胞凋亡中的作用

目的 观察一氧化氮（ＮＯ）在实验性骨关节炎（ＯＡ）关节滑液中的动态变化,并探讨ＮＯ在实验性ＯＡ软骨细胞凋亡中的作用。方法 用原位末端标记法以及镀铜镉还原法对实验性ＯＡ软骨细胞凋亡及关节滑液中的ＮＯ含量进行检测。结果 实验性ＯＡ中ＮＯ水平显著高于正常对照组,且随制动时间延长,ＮＯ水平逐渐升高,６周达高峰,此时也出现较多软骨细胞凋亡现象,应用一氧化氮合酶（ＮＯＳ）抑制剂Ｌ－ＮＡＭＥ后,关节液中ＮＯ含量     

miR-378c靶向AKT1调控骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡的机制

目的探讨miR-378c靶向AKT1对骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western印迹法检测正常软骨组织和骨关节炎软骨组织中miR-378c和磷酸化(p)-蛋白激酶B(AKT)1蛋白的表达。构建抑制miR-378c表达的HC-OA细胞株,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测p-AKT1、细胞周期素(Cyclin)D1、P21、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平。采用双荧光素酶报告基因法和Western印迹验证miR-378c和AKT1的靶向关系。结果 miR-378c在骨关节炎软骨组织中呈高表达,而p-AKT1呈低表达。在抑制miR-378c表达的软骨细胞中,p-AKT1、CyclinD1和Bcl-2蛋白的表达明显上调,P21和Bax蛋白的表达明显下调,细胞的增殖活力增强,凋亡率降低。干扰AKT1的表达可逆转抑制miR-378c表达对HC-OA细胞增殖促进和凋亡抑制作用。结论 miR-378c可通过靶向下调AKT1表达抑制骨关节炎软骨细胞增殖,促进细胞凋亡。     

熟地黄多糖对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡及炎性因子的影响及其机制

目的 研究熟地黄多糖对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡及炎性因子的影响及其作用机制.方法 设置熟地黄多糖各浓度(0.0μg/ml、12.5μg/ml、25.0μg/ml、50.0μg/ml)实验组、RGP+anti-miR-con组(转染anti-miR-con后用50μg/ml熟地黄多糖处理)和RGP+anti-miR-1...     

低频脉冲超声对骨关节炎中软骨细胞的影响

超声被广泛应用于临床的诊断和治疗,但是临床上低频脉冲超声(LIPU)的应用却非常有限。在实验中,LIPU的应用却是很广泛。在许多的动物实验中证实,LIPU对许多结缔组织疾病有一定疗效。骨关节炎(OA)是以关节软骨细胞、细胞外基质、软骨下骨等合成与分解代谢失衡,关节软骨损坏为特征的全关节疾病。     

骨关节炎患者血清抗软骨细胞抗体测定及其意义

目的：为了探讨抗软骨细胞自身免疫反应在骨关节炎（ＯＡ）发病中的可能作用。方法：用培养的人软骨细胞制备抗原，采用酶联免疫法（ＥＬＩＳＡ）检测４１例ＯＡ患者血清抗软骨细胞抗体（ＡＣＡ）水平，并与２９例类风湿关节炎患者（ＲＡ），３３例其它关节炎或关节痛患者及２０名正常人对照。结果：ＯＡ和ＲＡ患者血清ＩｇＧＡＣＡ和ＩｇＭＡＣＡ水平均显著高于其它关节炎或关节痛患者和正常人组（Ｐ＜００１）。ＡＣＡ阳性率在ＯＡ组为４３９％，低于ＲＡ组的８２７％（Ｐ＜０００１），高于其它关节炎或关节痛患者的１８２％和正常人组的５０％（Ｐ＞００５）；有膝关节积液者在ＡＣＡ阳性ＯＡ患者占５５６％，在ＡＣＡ阴性ＯＡ患者仅为１７４％（Ｐ＜００１）。结论：针对软骨细胞的自身免疫反应可能参与ＯＡ的病理过程；ＯＡ滑膜炎的发生可能与ＡＣＡ诱发的免疫反应有关。     

虾青素对骨关节炎软骨细胞氧化损伤及炎性的影响

目的研究虾青素对骨关节炎(OA)软骨细胞氧化损伤及炎性的逆转作用。方法选择15只5月龄新西兰兔,采用内侧副韧带、前后交叉韧带切断并切除内侧半月板的OA动物模型制作方法,体外分离培养软骨细胞。以假手术组细胞为正常对照组,造模组细胞为OA软骨细胞,分别加入10、20、30μg/ml虾青素(低、中、高剂量);从第9周开始,每周处死1组动物,分离培养软骨细胞。连续8 w,DCFH-DA法检测细胞内活性氧(ROS)水平,Griess法测定培养上清中氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,RT-PCR法检测各组细胞相关炎性因子(IL)-1β、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、转录调节因子p53基因mRNA的表达。结果 DCFH-DA法检测细胞内ROS水平,对照组与模型组差异显著(P<0.01);虾青素低、中、高剂量组与模型组差异显著(P<0.01)。模型组中NaNO2、SOD、GSH-Px与对照组差异显著(P<0.01);NaNO2、SOD、GSH-Px水平虾青素低、中、高剂量组与模型组差异显著(P<0.01,P<0.05)。模型组中IL-1β、iNOS、p53基因mRNA的表达量与对照组及各剂量虾青素组差异显著(P<0.01)。结论虾青素对OA软骨细胞的氧化损伤及炎性有逆转作用,具有研发成为OA治疗药物的潜能。     

骨关节炎软骨细胞和滑膜细胞金属蛋白酶活性的影响因素

目的 探讨几种细胞因子、生长因子和药物等刺激物对骨关节炎软骨细胞及滑膜细胞金属蛋白酶活性的影响。方法 骨关节炎患者的单层软骨细胞和膜细胞均以白细胞介素-1β、转化生长因子-β1、肿瘤坏死因子-α、双氯芬酸钠、多西环素和地塞松分别处理72h。应用酶谱分析细胞培养上清液中酶活性。结果 单层软骨细胞产生金属蛋白酶-9和-2,而滑膜细胞仅产生金属蛋白酶-2。白细胞介素-1β,肿瘤坏死因子-α和双氯芬酸钠均能显著增强金属蛋白酶-9活性,其中以白细胞介素-1β作用最强,与肿瘤坏死因子-α或双氯芬酸钠有协同作用。多西环素、转化生长因子-β1和地塞米松均能抑制金属蛋白酶-9和-2活性,并与白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α和地塞米松均能抑制金属蛋白酶-9和-2活性,并与白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α和双氯芬酸钠起拮抗作用。多西环素为最强的抑制物。结论 白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α可能为破坏关节软骨的重要细胞因子,转化生长因子-β1则为保护因子,多西环素则可能成为骨关节炎的有效治疗药物。     

硫酸氨基葡萄糖抑制白介素1β诱导的人骨关节炎软骨细胞合成一氧化氮研究

目的 研究硫酸氨基葡萄糖(GS)对白介素1β(IL-1β)诱导体外培养的人骨关节炎软骨细胞(HOC)合成一氧化氮(NO)的影响及其作用机制. 方法 取10例骨关节炎患者行全膝关节置换术的软骨标本获取软骨细胞进行培养.在HOC培养液中加入IL 1β(5μg/L)和不同浓度的GS(0.2 mmol/L,2.0 mmol/L,20.0 mmol/L)作用24 h,酶联免疫吸附(ELISA)测定检测细胞上清中的NO的含量,反转录聚合酶链反应(RT PCR)法和蛋白印迹法分别检测HOC中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA和蛋白的表达. 结果 IL-1β刺激后HOC合成NO增加,iNOS mRNA和蛋白表达上调(t=-14.81,-45.38,均P＜0.01).2.0 mmol/L和20.0 mmol/L GS浓度依赖式抑制IL-1β诱导HOC合成NO(F=12.43,P＜0.05),抑制IL-1β诱导HOC中iNOS mRNA(F=142.28,P＜0.05)和蛋白的上调(F=78.08,P＜0.01).单独使用20.0 mmol/L的GS对HOC合成NO无影响(t=-0.17,P＞0.05). 结论 GS通过下调HOC细胞内iNOS mRNA和蛋白的表达从而抑制IL-1β诱导的NO合成.     

骨关节炎的疼痛机制研究进展

骨关节炎(osteoarthritis,OA)是一种最常见的风湿性疾病,其基本病理改变为多种致病因素引起的进行性关节软骨变性、破坏及丧失,关节软骨及软骨下骨边缘骨赘形成,常伴有继发性滑膜炎,由此引起关节疼痛、僵硬、肿大、畸形及功能障碍,其中关节疼痛为最突出的症状.OA疼痛为慢性痛[1],常持续3～6个月,初期疼痛昼轻夜重,随着病情的进展,疼痛呈轻度至中度间歇性疼痛,最后发展成为持续性疼痛.     

骨关节炎患者膝关节软骨细胞的离体培养及形态学特征观察

目的建立膝关节患者关节软骨细胞体外培养体系,为其相关研究奠定基础。方法取15例人工膝关节置换术患者的软骨组织,采用组织原代培养法获得膝关节软骨细胞,传代培养。倒置相差显微镜观察细胞形态,绘制生长曲线,苏木素伊红染色、甲苯胺蓝染色及Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、X型胶原、MMP-1、MMP-13、TNF-α免疫荧光染色对细胞进行鉴定。结果原代培养的人软骨细胞大量呈梭形、短梭形,少部分呈多角形,传代3次后出现树突生长细胞。形态学、免疫荧光染色显示细胞培养3代以内可保持表型稳定,多数软骨细胞维持梭形、短梭形,核为圆形或椭圆形。苏木精伊红阳性染色为细胞核呈紫蓝色,软骨细胞基质呈红色,周围胞浆呈紫红色、阿利新蓝染色后,胞质和胞膜呈深蓝色、Ⅱ型胶原免疫荧光染色可见胞质和胞膜清晰绿色荧光,细胞核区域未见明显绿色荧光。结论成功建立了的软骨细胞分离、培养体系,且3代以内细胞生长良好。     

体外培养大鼠软骨细胞老化的机制初探

目的对体外传代培养的大鼠软骨细胞进行相关因子检测，初步探讨其复制性老化（传代培养出现的老化表现）的机制。方法对连续培养的第二、三、四代软骨细胞进行实验，采用免疫细胞化学检测p16、pRb、E2F、CyclinD、CDK4等因子表达水平，TRAP—ELISA检测端粒酶活性，观察软骨细胞老化过程中各因子的变化。结果随着细胞复制性老化p16、pRb、CyelinD表达水平显著上升（P〈0．01），E2F、CDK4、端粒酶表达水平显著下降（P〈0．01）。结论体外培养软骨细胞老化过程与p16、pRb、CyclinD表达增加，E2F、CDK4、端粒酶表达下降密切相关。