一个固定活微生物细胞的新方法

一、方法本文推荐一个用角叉藻胶固定活微生物细胞的新方法。在无菌条件下,37℃,将4％角叉藻胶与预先培养好的微生物细胞混和。于20℃、温和搅拌条件下,将上述混和物滴加到2％氯化钾溶液中,形成包埋少量活细胞的角叉藻小珠。然后再将其置于适当的营养培养基中,于30℃、旋转摇床上,保温培养。这些被包埋的细胞在小珠中生长,并且将生长细胞固定。为了测定活细胞的数目,将角叉藻胶小珠溶解于无菌生理盐水中,于37℃、振荡15分钟,使成为细胞悬浮液。然后用稀释     

试制牙正畸用双圆管贴片

制作方法:1.取长5mm、宽8mm的镍铬合金片(已压薄),把两根内径0.4或0.5mm的圆管固定在合金片上,两管的行距为0.7～1.0mm。2.焊接:把贴片在汽油空气吹火上稍加热,涂上焊媒,烧至微红加银焊片烧至焊金充分熔化为止。焊金量要合适。自然冷却,不要在冷水中淬火,以免贴片太硬。3.用清扫液煮沸一分钟,去除氧化物,两管的外侧合金片上用裂钻钻成均匀的小孔。磨光备用。临床操作:1.用1.5％稀盐酸处理牙面,让患者漱口,棉球隔离口水,用95％酒精干燥牙面。2.根据牙冠的大小,用砂片切去一段贴片,     

药品微生物验证枯草芽孢杆菌实验菌液制备方法的探讨

中国药典2005年版颁布后,微生物验证成为各药检所及企业的一项重要工作。在验证过程中,菌液制备及稀释是一个重要环节。现就枯草芽孢杆菌的菌液制备及保存方法总结如下,与同行探讨。1试验菌液枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[CMCC(B)63501]由中国生物制品检定所提供,传代次数不超过5代。2实验方法2.1菌体菌悬液按中国药典2005年版附录无菌检查法,接种枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中,培养18~24h,经染色镜检为G 杆菌,4℃保存。2.2芽孢菌悬液将枯草芽孢杆菌的新鲜培养物接种至营养琼脂凯氏瓶斜面,经72~96h培养。用无菌生理盐…     

使用微孔滤膜的微生物检验技术

一、通用技术 1.概述: 在微生物分析中应用微孔滤膜,与常规方法比较有很多优点。其中最重要的有: ①存在于大容积液体中的所有微生物皆能浓缩于滤膜的表面上。②如果夹持液本身具有抑菌性时,吸附在膜中的夹持液也可用水或其他惰性液冲洗清除。在抗菌素的无菌检定中,这二点尤为重要,因为需要克服抑制作用。以往的这种检定只能将抗菌素用大量培养基稀释,并且即使经过大量稀释后,在许多场合下微生物仍会受到抗菌素的抑制,因而使试验结果发生错误。此外,采用薄膜过滤显然还可节省大量用于稀释的培养液。由于在滤膜上进行培养不需要特定的培养基或生长条件,表面有微生物的滤膜可以直接     

真菌标本制作改良法

真菌标本其目的主要在于真菌的形态结构完整性和着色清晰而又长久保持鲜艳，为了提高教学质量，我们将以往切割琼脂块先染色后加胶封片的作法改为：在载玻片上直接培养菌种染色封片同时进行，现报道如下。 1 培养基制备及菌种培养 沙氏培养基：麦芽糖4g、蛋白胨2g、琼脂粉1.8g、蒸馏水100ml，高压蒸汽8磅15min灭菌。用无菌滴管吸取培养基放入已消毒的盖玻片上一滴，等凝固后用无菌的接种针取菌种少许穿入培养基内，然后将盖玻片的标本反过来放入已消毒的载物玻片中，无菌湿盒28℃温箱培养，在72~96h后取出染色。 2 染色液配制 ①15%聚乙烯…     

用间接荧光免疫法检查脑膜炎奈瑟氏菌带菌者

我们于1979年2～12月用间接荧光免疫法(下简称荧光法)对部份健康人群脑膜炎奈瑟氏菌带菌情况作了调查,并同时用EPV 培养法作对照。一、方法:选择健康学龄儿童及成年人,用常规法以无菌棉拭子取鼻咽部分泌物,并均匀涂于载物片中央,成蚕豆大小圆形,并同时涂EPV 平板。用蜡笔在已涂标本处画圈,火焰加热固定,冷却,滴加脑膜炎奈瑟氏菌多价Ⅰ诊断血清(兰州生物制品研究所供给效价1280),盖满标本,把标本置密闭的湿盒内放37℃温箱30分钟,以0.01MpH8.0PBS 轻轻冲洗掉血清,用滤纸吸干,再滴加已稀释的羊抗兔荧光免疫     

胃癌细胞的制作对MDR-1免疫组化显示性的影响

目的:探讨胃癌细胞的制片和复染对MDR-1免疫组化显示性的影响.方法:培养胃癌SGC7901和耐药SGC7901/VCR细胞.均制作细胞滴片和爬片,抗MDR-1抗体免疫组化染色,部分标本甲基绿复染,半定量分析免疫反应性.结果:在同一制片中,无论滴片或爬片,复染标本的每种细胞MDR-1免疫反应性高于未复染者(P<0.01);对于同一种细胞不论是否复染,细胞滴片标本的MDR-1免疫反应性高于细胞爬片者(P<0.01);在同一制片和染色的情况下,SGC7901和SGC7901/VCR细胞的MDR-1表达水平不同(P<0.01),但变化趋势一致.结论:胃癌细胞的滴片比爬片有更好的MDR-1免疫组化显示性.     

葡萄球菌对血液杀菌作用的抗性

为在实验室中全面评价葡萄球菌的致病性,作者研究了金黄色葡萄球菌(金葡菌)和表皮葡萄球菌(表葡菌)对免血及兔血清杀菌作用的抗性。对血液杀菌作用抗性的测定:将24小时葡萄球菌培养物制成一定浓度的菌悬液,用内径1mm的接种环取一环菌悬液与3滴兔血、2滴2%柠檬酸钠溶液混匀。先移一环到肉膏蛋白胨琼脂平板表面并抹匀。混悬液于37℃孵育60及120分钟后,再按上法涂抹第2、第3块平板,孵育18～20小时后计算菌落总数,与原菌数(即第一块琼脂平板上菌数)比     

斑点酶免疫试验——一种简便、廉价和稳定的检测人类免疫缺陷症病毒(HIV)抗体的试验

将支持HIV连续生长的H9细胞培养上清液浓缩,用蔗糖密度梯度纯化病毒抗原;抗原以1∶250稀释后取2μl,点于硝酸纤维素膜上,室温干燥15分钟,用含0.5%Tween20和0.5%小牛血清的PBS封闭1小时,然后将膜放于24孔组织培养板的孔中,与1∶100稀释的被检血清1ml室温下培育1小时。用PBS、Tween和小牛血清液洗膜5次后,与过氧化物酶标记的羊抗人IgG反应1小时。膜经PBS洗5次后再与底物液培育5～10分钟,终止反应。在膜的反应位置上呈现棕色斑点为阳性结果。     

HE染色切片褪色后再进行免疫组化染色方法的比较

目的:探讨HE染色切片褪色后是否可以用免疫组化的方法检测蛋白的表达。方法:将封好的HE切片放入二甲苯浸泡,去除盖玻片和中性树胶;梯度酒精水化之后用蒸馏水(或自来水)水洗;放入用75%酒精配置的1%的盐酸酒精分化液中浸泡1min,晾干后,再放入1%的盐酸酒精分化液中1min,反复数次直至颜色完全褪去,然后水洗;将防脱片剂多聚-L-赖氨酸工作液滴在已褪色的切片上,烤片60min,PBS浸泡;根据抗体需求采取合适的修复液(EDTA或柠檬酸盐)和修复方法(高压修复或水浴修复);根据常规免疫组化(Envision二步法)的方法和阳性对照片一起进行免疫组化染色。结果:所有对照片和滴加多聚-L-赖氨酸工作液的实验片均为阳性,无1例脱片。结论:此方法可以用于常规HE染色切片褪色后继续用于做免疫组化检测相关标志物,具有一定的临床实用价值。     

妇科阴道分泌物涂片快速染色

快速染色对妇科阴道分泌物涂片检查可在一张涂片上同时作滴虫、霉菌、淋球菌、线索细胞、纤毛菌等五项检查。染色时间只需 5～ 8ｍｉｎ ,方法简单 ,细胞及病原体着色鲜艳 ,结构清晰易辨认 ,一片多用 ,减少了日常工作中多项样本处理的不便 ,检出率比较满意。1　材料与方法1.1　材料　 (1)标本来源 :我院妇科怀疑各种阴道炎患者 2 70例 ,用灭菌棉拭子浸湿生理盐水取阴道分泌物 ,作两张涂片和一张湿片。 (2 )快速染液购自湖南省株州千金药业股份有限公司。1.2　方法　 (1)快速染色方法 :先滴 5滴作者单位 :30 0 2 50　天津市第三医院Ｂ液于涂片…     

白细胞分类计数瑞氏染色法的改进

随着医疗仪器的飞速发展，血球自动计仪的问世，代替了手工操作，但是异常的白细胞仍然需要手工方法进一步认定。为了提高染色效率和质量，节约染色时间，故对瑞氏染色方法加以改进。 1 试剂与标本 0.85%生理盐水溶液和瑞氏染色液。标本：门诊随机采血50例，每例两张血片，分为改进组和常规组。 2 方法 将改进组的血膜片在0.85%的生理盐水溶液中浸泡1~1.5秒，然后加入瑞氏染色液3~5滴染色10~15秒后用蒸馏水冲洗，镜检分类。常规组：瑞氏染色液3~5滴於血膜片染色1~2min后加蒸馏水6~8滴，2~3min镜检分类。 3 结果 改进组染色片在镜下偶…     

抗钩端螺旋体马血清中的几种免疫球蛋白的抗体活性

鉴于抗钩端螺旋体马血清(ALHS)对钩体病有一定的疗效,本文作者对 ALHS 中的各种免疫球蛋白的抗体活性进行了定量分析。使用的菌株为有毒力的哥本哈根型芝浦株。攻击菌悬液为用 Mori 法取垂死豚鼠肝作成10%磷酸盐缓冲乳剂,1900g 离心30分钟,上清含菌10~6～10~7/ml,再以 PBS 稀释成规定浓度。     

脑脊液细胞的制片技术

要使细胞学检查满意,送检的脑脊液标本要求越新鲜越好,一般不宜超过2小时。此外,标本液量越少,细胞越易破坏。现将脑细胞的制片技术介绍如下。我们应用沉淀室法或玻片离心法收集新鲜的脑脊液细胞,一俟玻片干涸,就立即固定染色,以免细胞变形,不易分类。除了活体染色或应用相差显微镜检查外,一般常规检查不宜用湿片,因在冲洗染色液时.会丢失大量细胞。如不能及时染色时.可于干片标本上滴加无水乙醇固定,待以后染色。     

用细胞病变法快速鉴别Ⅰ型和Ⅱ型单纯疱疹病毒

作者用PBS将单纯疱疹病毒(HSV)连续稀释至10~(-1)～10~(-6),分别接种平底微孔塑料滴定板,每个稀释度种4孔,每孔0.025ml,然后加入0.2ml非洲绿猴肾细胞(BS-C-1株)悬液(含8～10×10~4个活细胞/ml),放36.5℃4%CO_2空气中培养4～5天。用光学显微镜     

儿童机构中空气改善方法

作者测定了儿童居室空气中細菌数及某些卫生措施对改善空气的作用。試驗証明,房間换气30分钟可使空气中微生物降至卫生标准之内,效力并能保持2—3小时,用50‰氯胺溶液或开水洗滌地板,不能使空气中微生物降至卫生标准范圍内。紫外綫照射20分鐘及蒸发乳酸(1立方米空气10毫克)可使微生物降至卫生阈以下,并能保持较长时间(5小时)。作     

4000例肿块的穿刺抽吸细胞学检查的体会

在诊断和鉴别诊断癌肿时细胞学诊断是最常用和较可靠的方法之一。1.资料来源及操作方法 十年来,我们共收到穿刺抽吸细胞学检查标本4000例。将穿刺抽吸到的标本满一点在载玻片上,制成薄片,快速干燥后,作瑞氏(或吉化)或H—E染色,显微镜检查。一般在30分钟内,即可给出报告。2.结果分析 本组中,取自乳腺肿块者最多,共696例,占总数的17.4％,其中乳腺癌75例,占     

中药馬齒莧治疗細菌性痢疾34例的初步报告

药物的配备及剂量将生药切碎用塘瓷盆加适量蒸溜水煮沸30分钟。煎液倾出后,加适量蒸溜水,再煮沸20分钟。前后煎液混合过滤后,用水浴蒸发浓缩至浓稠状,以后加适量淀粉,制成粘材,用20目篩制成颗粒。最后经过50℃温度干燥及同样篩孔篩过后,加入滑料,即可用压片机压成药片。药片每片合原生药0.6克,剂量每日18克,分三次服。病例分析本院内科用上述马齿苋药片治疗细菌性痢疾34例。 1.性别:34例中男性占30例(88.2％),女性占4例(11.8％),男女之比为7.5:1,男女人     

用薄层色谱光密度法进行药物的定量测定Ⅲ.分解产物存在下油注射液及水 溶液注射剂中维生素 D_2及 D_3的测定

本文提出了应用薄层层析分离和比色测定注射液中维生素D_2及D_3含量的方法。油注射液中维生素D_2的测定:吸取麦角骨化醇标准溶液[1毫克/毫升的氯仿与向日葵油(10∶1)混合液]相当于维生素D_2 3.00、5.00、7.00微克及样品溶液(1.5%注射液5毫升以氯仿稀释至50毫升)相当于3.00微克,点滴于硅胶薄层上,以氯仿为展开剂进行层析至前沿达10厘米,展开后取出薄板置于空气中干燥5分钟,用饱和(22%)三氯化锑的氯仿溶液喷雾显色,几分钟后以光密度计进行定量测定。以标准显出斑点的Δ1%/10g C绘制校正曲线,从校正曲线中求得样品的含量。     

胭脂红代替HE染色法中伊红的实验

苏木素、伊红染色法(简称HE染色法),至今仍是国内外病理组织切片的常规染色法;也是细胞学的主要染色法之一。我们工作中发现,作为食品添加剂的胭脂红对新鲜肌肉组织有很强的亲和性,从而试以之取代HE染色中的伊红。即把苏木素、伊红染色法改为苏木素、胭脂红染色法,染片1000多张,取得满意效果。一、染液: (一)哈瑞氏苏木液。 (二)胭脂红酒精液:胭脂红5g,加蒸馏水100ml,搅拌使其溶解;再加75％酒精至1000ml。加冰醋酸数滴。二、染法: 常规苏木素染色后,用氨水还原,水洗。浸入胭脂红染液3～5分钟,自来水洗2～5分钟,速浸入酒精,常规脱水封片。