对溴氰菊酯抗性和敏感淡色库蚊不同发育阶段的抗生水平

对室内选育的淡色库蚊用浸渍法测定了Ⅱ龄，Ⅲ龄和Ⅳ龄和幼虫，用接触筒法了早期，中期和晚期成虫。并观察了增效醚，磷酸三苯酯和杀虫脒与溴氰菊酯混用后的增效效果。结果表明：１．淡色库蚊各发育阶段对溴氰菊酯的抗性水平，在敏感品系由高至低依次为中期，晚期，早期成虫，Ⅳ龄，Ⅲ龄和Ⅱ龄幼龄，在抗性品系为早期，中期，晚期成虫，Ⅳ龄，Ⅲ龄和Ⅱ龄幼。２．ＰＢ和杀虫脒均有明显增效作用，提示抗性可能与氧化代谢增强和靶标部位     

淡色库蚊对溴氰菊酯抗性的遗传分析

目的：对室内选育的淡色库蚊抗溴氰菊酯品系（抗性系数５１８）进行遗传分析。方法：采用ＬＣ－Ｐ值分析法研究淡色库蚊溴氰菊酯抗性的形式遗传。采用抑制剂增效试验探讨抗性机制。结果：正交和反交Ｆ１代的抗性系数分别为１５４．８和１５９．２。Ｆ１代的ＬＣ－Ｐ线靠近抗性亲本一方，Ｄ＝０．６２５；ＢＣ代在死亡率５０％处、Ｆ２代在死亡率２５％和７５％处未出现明显平坡，ＢＣ和Ｆ２的实测曲线和理论曲线均存在较大差异，Ｐ均＜０．０１；ＰＢ、ＤＥＦ和ＴＰＰ对抗性品系的增效比分别为２７．１３、１．２２和１．０５。结论：淡色库蚊对溴氰菊酯的抗性为多基因遗传，其主要基因为不完全显性，多功能氧化酶是抗性的主要因子。     

用RAPD-PCR鉴定抗溴氰菊酯淡色库蚊

用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ法对淡色库蚊抗溴氰菊酯品系和敏感品系的基因组ＤＮＡ进行了分析鉴别。结果表明：不同引物扩增出的产物数量不等，明显可分辨的带一般在４～１３条之间，带的大小在０．５～５．１ｋｂ之间；２２个引物在两品系中各扩增出１７０条可分辨带，绝大部分条带在两品系间是共同的；Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ７个引物的扩增产物在两者间共显示差异带２１条（２，３，７，４，１，１和３条），其中抗性品系特异带１２条（１，２，５，２，１，０和１条）；敏感品系特异带９条（１，１，２，２，０，１和２条）。这些特异片段可望作为抗性的分子标志用于抗性品系的鉴定以及进一步研究     

用RAPD—PCR鉴定抗溴氰菊酯淡色库蚊

用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ法对淡色库蚊抗溴氰菊酯品系和敏感品系的基因组ＤＮＡ进行了分析鉴别。结果表明：不同引物扩增出的产物数量不等，明显可分辨的带一般在４￣１３条之间，带的大小在０．５￣５．１ｋｂ之间；２２个引物在两品系中各扩增出１７０条可分辨带，绝大部分条带在两品系间是共同的；Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ７个引物的扩增产物在两者间共显示差异带２１条（２，３，７，４，１，１和３条），其中抗性品系特异带１２条     

沃尔巴克氏体与淡色库蚊溴氰菊酯抗性关系初步研究

目的 目的 探讨沃尔巴克氏体与淡色库蚊溴氰菊酯抗性间的相关性。 方法 方法 以PCR鉴定本实验室饲养的淡色库 蚊体内的沃尔巴克氏体, 采用实时定量PCR技术 （qRT?PCR） 测定并比较淡色库蚊溴氰菊酯抗性和敏感品系中沃尔巴克 氏体表达差异。 结果 结果 本实验室饲养的淡色库蚊体内含有沃尔巴克氏体。淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系卵、 一龄蚊、 二 龄蚊、 三龄蚊、 四龄蚊、 雌蚊、 雄蚊体内沃尔巴克氏体表达水平分别是敏感品系的18.42、 3.69、 4.43、 3.96、 6.31、 1.55、 3.76 倍, 差异均有统计学意义 （P均< 0.05）, 而抗性品系和敏感品系蛹中沃尔巴克氏体表达水平差异无统计学意义 （P > 0.05）。南京江心洲溴氰菊酯抗性雌蚊体内沃尔巴克氏体表达水平是敏感雌蚊的2.64倍。 结论 结论 沃尔巴克氏体可能与 淡色库蚊对溴氰菊酯产生抗性有关。     

淡色库蚊对常用杀虫剂长期选育的抗性水平及交互抗性

目的了解淡色库蚊对3种常用化学杀虫剂长期选育的抗性状况及5种杀虫剂的交互抗性,为合理有效地进行蚊虫化学防治提供依据。方法采用WHO生物测定方法,测定淡色库蚊对3种杀虫剂长期选育的抗性水平。结果经过42代选育,淡色库蚊对敌敌畏（DDVP）、残杀威和氯氰菊酯的抗性指数分别最高达12．17、11．78和534．31倍。结论经过长期选育,发现淡色库蚊对3种常用化学杀虫剂均产生不同程度的抗药性及交互抗性,提示应采取适当措施克服或延缓蚊虫抗药性的产生和发展。     

淡色库蚊抗性品系生态习性的探讨

实验观察淡色库蚊敏感品系的化蛹率显著高于抗DDVP品系及抗氯氰菊酯系 (χ2值为25.98和20.64,P＜0.05),而抗性品系幼虫历期略短于敏感品系;亚致死剂量氯氰菊酯对抗氯氰菊酯品系及敏感品系的Ⅲ～Ⅳ龄淡色库蚊幼虫化蛹有显著影响,抗性品系蚊虫寿命略有延长.表明长期使用单一的杀虫剂蚊虫易产生抗性.     

淡色库蚊抗DDVP品系抗性发展及交互抗性

目的探讨淡色库蚊DDVP抗性品系对4种化学杀虫剂的抗性发展及交互抗性，为合理使用杀虫剂提供依据。方法采用WHO标准生物测试法。结果经过43代的选育，抗DDVP品系的抗性达12．17倍，在21代时，对DDVP、残杀威、氯氰菊酯、溴氰菊酯的抗性倍数分别是6．55、4．16、43．27、0．70倍；到第30代时，分别是8．17、4．74、52．48、0．75倍；到39代时，对DDVP的抗性为10．37倍，对残杀威、氯氰菊酯的抗性分别为6．96倍、160．43倍。结论长期使用一种杀虫剂易产生抗性，亦对其他杀虫剂产生交互抗性，用药时应注意种类的选择。     

溴氰菊酯和倍硫磷混用、轮用对淡色库蚊抗性发展的影响

目的　观察杀虫剂不同用药方式对淡色库蚊抗性发展的影响。方法　以淡色库蚊（Culex pipiens pallens）为试虫,用溴氰菊酯和倍硫磷混剂和单剂隔代轮用进行抗性选育,以溴氰菊酯和倍硫磷单剂作为对照。结果　淡色库蚊经16代处理,其抗性系数在溴氰菊酯和倍硫磷混用为14.65;两者轮用为17.74（溴氰菊酯）和2.77（倍硫磷）;单剂连用则分别为729.08和24.73。结论　两种作用机制不同的杀虫剂混用或轮用均能延缓害虫对杀虫剂抗性的发展。     

淡色库蚊DDVP抗性与酯酶活性的相关性

目的检测抗DDVP品系各世代的抗性指数及蚊体内酯酶(esterase)的活性,探讨蚊虫抗性与酯酶的关系。方法生物测定法,微滴定板法。结果淡色库蚊经过43代选育,抗性指数达12.17倍,蚊体内非特异性酯酶(nonpecificesterase,NSE)的活力随世代增加抗性增高而增强。OD≥0.9的个体频率逐渐增高,与生物测试法基本一致。乙酰胆碱酯酶(AChE)的平均抑制率随世代的增加、抗性增高而变低,而抑制率<30％的个体频率随世代增加而增加,呈相关关系。结论DDVP抗性与酯酶NSE和AChE的活性呈一定的相关关系。     

抗DDVP和敏感淡色库蚊不同发育期非特异性酯酶活力变化的研究

目的 研讨非特异性酯酶（Non-specific esterase,NSE）活力在抗DDVP和敏感品系淡色库蚊不同发育期的变化,为应用生物化学方法检测蚊虫抗药性及科学合理地进行蚊虫化学防治提供依据。方法 以β－乙酸萘酯为底物,坚固蓝B盐为显色剂,用微量滴定板法测定蚊虫NSE活力。结果 敏感品系和抗DDVP品系淡色库蚊NSE活力水平在不同发育 变化,Ⅰ-Ⅲ龄幼虫较低,Ⅳ龄幼虫最高,蛹期略下降,成虫期较高,各发育期抗DDVP品系NSE活力均高于敏感品系,Ⅳ龄幼虫期二者差别明显。结论 测定NSE检测蚊虫抗药性可选择Ⅳ龄幼虫或3日龄未吸血雌成蚊;蚊虫化学防治中应选择低龄幼虫期施药。     

非特异性酯酶在淡色库蚊对不同杀虫剂抗性中的作用研究

目的　探讨非特异性酯酶（Non-specific esterase,NSE）在淡色库蚊对不同杀虫剂抗性中的作用。方法　以β-乙酸萘酯为底物,坚固蓝B盐为显色剂,测定室内5个品系淡色库蚊的NSE活力。结果　5个品系淡色库蚊中以抗DDVP品系NSE活力水平最高,其次为抗DDVP降解品系和抗残杀威品系。抗氯氰菊酯品系较低,与敏感品系相近。结论　NSE在淡色库蚊对有机磷类杀虫剂的抗性中起重要作用,也是对氨基甲酸酯类杀虫剂产生抗性的机制之一,与对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性关系不大。     

山东省淡色库蚊对杀虫剂的抗药性

目的 检测山东省各地淡色库蚊对常用化学杀虫剂的抗性状况,探讨抗性治理对策。方法 采用世界卫生组织生物测定方法,测定蚊幼虫的LC_(50)确定抗性水平,计算抗性系数。结果 对山东省10个地区近10年的淡色库蚊抗性测定表明,各地淡色库蚊对常用杀虫剂均产生了一定的抗性,对DDVP的抗性最高达21.18倍,对马拉硫磷的抗性高达5.39倍,对溴氰菊酯的抗性高达42倍。各地抗性水平有逐年增高的趋势。结论 山东各地淡色库蚊对常用杀虫剂均产生了一定的抗性,急需研究实施抗性治理对策。     

淡色库蚊细胞色素P450抗性相关基因克隆与初步鉴定

[目的 ]探讨淡色库蚊细胞色素P45 0与溴氰菊酯抗药性的关系。 [方法 ]采用一对昆虫细胞色素P45 0简并引物 ,以反转录 聚合酶链反应从淡色库蚊扩增特异片段 ,T/A直接克隆法筛选阳性克隆 ,对新序列进行cDNA芯片和逆Northern分析。 [结果 ]从淡色库蚊对溴氰菊酯敏感品系和抗性品系获得 112个阳性克隆 ,其中 2 4个阳性克隆测序后显示为细胞色素P45 0新序列 ,由GenBank登录上网 ;经国际细胞色素P45 0命名委员会鉴定分别属CYP4家族CYP4C、CYP4D、CYP4H和CYP4J等 4个亚家族 ;2 4个CYP4cDNA片段中 ,来自敏感品系的 2个片段(NYDS3和NYDS5 )和来自抗性品系的 4个片段 (NYDR6、NYDR9、NYDR15和NYDR17)在两品系间存在差别 ,cDNA芯片信号亮度值均是抗性品系大于敏感品系 ,倍数在 3 .1～ 9.7范围内 ;NYDR17仅与抗性探针杂交 ;逆Northern再鉴定 ,获得了与cDNA芯片一致的结果。 [结论 ]淡色库蚊CYP4与溴氰菊酯抗性相关 ;在淡色库蚊溴氰菊酯抗性机理中 ,可能存在P45 0基因点突变而导致的特异表达。     

淡色库蚊酯酶活性频率与有机磷酯剂抗性关系

本文报告了采用生物测定法（ＬＣ５０）和改进的Ｐａｓｔｅｕｒ＆Ｇｅｏｒｇｈｉｏｕ（１９８１）滤纸片法测定的淡色库蚊对有机磷酯剂的抗药性．结果证实：１．我国淡色库蚊对有机磷醋剂的抗药性，酯酶Ａ和酯酶Ｂ都在其中起了重要作用．２．α－醋酸萘酯为酯酶Ａ和Ｂ的共同底物．因此，用α－醋酸萘酯为底物的方法检测单个蚊虫对有机磷酯的抗药性是成功的．３．从全国１１个城市检测结果分析，淡色库蚊对有机磷酯的抗药性同酯酶的聚集频率是一致的，而与生物测定法检出的ＬＣ５０与酯酶活性频率的聚集度不完全平行，特别是在中低度抗性时如此。因此，淡色库蚊对有机磷酯的抗性在高抗性区可用测定酯酶的频率来代替毒效生物测定法，而在低抗性区则不能。     

淡色库蚊抗药性相关基因NYD-Ch和NYD-Tr的表达与初步鉴定

目的　淡色库蚊抗药性相关基因NYD Ch(糜蛋白酶 )和NYD Tr(胰蛋白酶 )表达与鉴定。　方法　以淡色库蚊抗性品系全长cDNA文库为模板 ,采用PCR方法扩增出抗性品系中高表达的NYD Ch和NYD Tr基因 ,经T/A克隆测序鉴定 ,将扩增产物用NotI、EcoRI双酶切后作为插入片段 ,与具有相同粘性末端的融合表达质粒 pET 2 8a(+ )连接 ,转化入表达菌株E .coliBL2 1中 ,取含重组表达质粒的重组菌株以IPTG进行诱导表达 ,表达产物以SDS PAGE电泳和小鼠抗NYD Ch和NYD Tr抗血清进行Westernblot分析鉴定。　结果　NYD Ch和NYD Tr基因开读框大小分别为816bp和 786bp ,预计可分别编码 2 72个和 2 62个氨基酸。对应分子质量大小分别为 2 9.4ku和 2 8ku ,加上pET 2 8a(+ )载体融合部分氨基酸 ,表达产物条带应在 3 3ku附近 ,与SDS PAGE蛋白电泳胶上蛋白条带一致。Westernblot分析确认诱导后的 pET 2 8a(+ ) /NYD Ch和 pET 2 8a(+ ) /NYD Tr在分子质量约 3 3ku处出现 1条与小鼠抗NYD Ch和NYD Tr抗血清特异反应的条带。　结论　NYD Ch和NYD Tr基因在大肠杆菌中获得表达 ,Westernblot分析表明该蛋白为目的蛋白。     

尖音库蚊淡色亚种细胞系的建立和特征

用尖音库蚊淡色亚种(Culer pipiens pallens)新孵Ⅰ龄幼虫建成蚊细胞系Cpp512.取蚊卵消毒,孵出幼虫,剪成碎片,接种于含15％FBS的改良TC199培养基中,2周左右由幼虫组织长出的细胞形成单层。现已传至53代。细胞形态以梭形为主。细胞对数期群体倍增时间(PDT)为21h。BrdU掺入法测得细胞周期时间为18h。透射电镜检查未见病毒或支原体污染。染色体检查以二倍体核型为主,多倍体亦存在。     

淡色库蚊对溴氰菊酸抗药性品系cDNA表达文库的构建和初步鉴定

目的构建淡色库蚊对溴氰菊酯抗药性品系cDNA表达文库.方法应用定向克隆技术将相应cDNA片段插入λExCell/NotⅠ/EcoRⅠ/CIP载体的NotⅠ和EcoRⅠ双酶切位点;并用PCR对插入片段大小进行分析.结果获得含4.72×105个重组子的cDNA表达文库,重组率为100%,插入片段大小平均约1.1kb.结论所建文库容量及插入片段大小适合进一步研究.