马兜铃酸I诱导人肾小管上皮细胞转分化的作用及机制

目的：探讨马兜铃酸Ｉ（Ａｒｉｓｔｏｌｏｃｈｉｓ ａｃｉｄ Ｉ,ＡＡＩ）在人类肾小管上皮细胞（ＨＫＣ）转分化中的可能作用,了解ＡＡＩ引起肾小管间质损害的机制。方法：将体外培养ＨＫＣ细胞分为无血清对照组（Ｃ组）和ＡＡＩ实验组两组,波形蛋白和α－平滑肌肌动蛋白（α－ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ａｃｔｉｎ,α－ＳＭＡ）表达的变化;应用流式细胞技术检测表达α－ＳＭＡ阳性（＋）的ＨＫＣ细胞百分率;采用免疫酶标     

马兜铃酸作用下肾小管上皮细胞尾加压素Ⅱ、转化生长因子-β1的表达及相互关系

目的观察马兜铃酸(AA)作用下尾加压素(U)Ⅱ和转化生长因子(TGF)-β1在肾小管上皮细胞(NRK-52E)中的表达及相互关系。方法常规培养的NRK-52E细胞分别加入DMEM培养基、AA、AA+UⅡ、AA+UⅡ+抗UⅡ抗体,培养24、36、48 h,用RT-PCR技术检测UⅡ、TGF-β1mRNA表达水平。结果与DMEM组比较,AA组NPK-52E细胞UⅡ和TGF-β1基因表达均明显增强(P0.05);与AA组比较,AA+UⅡ组TGF-β1表达明显增强(P0.01);与AA+UⅡ组比较,AA+UⅡ+抗UⅡ抗体组TGF-β1基因表达显著降低(P0.05,P0.01)。结论 AA作用下,NRK-52E细胞UⅡ和TGF-β1表达水平均升高,且UⅡ可诱导TGF-β1的表达,提示二者在AA肾病发生发展中可能有一定作用,且二者相互关联。     

马兜铃酸I对肾小管上皮细胞超微结构的影响

目的观察马兜铃酸I(Aristolochic     

马兜铃酸对肾小管上皮细胞氧化应激效应的作用

目的探讨马兜铃酸（AA）对人肾小管上皮细胞（HK-2）氧化应激的作用。方法体外培养HK-2细胞,AA组在培养体系中加入AA 20 mg/m l刺激培养48 h;另设对照组。采用MTT法观察HK-2细胞活性,透射电镜观察细胞的超微结构,流式细胞术检测细胞凋亡率,比色法检测丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活力,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶（SOD）活力。结果与对照组比较,AA组HK-2细胞活性显著抑制,细胞凋亡比例明显增加,SOD、GSH-PX活力明显下降,MDA含量明显增加（P均〈0.05）。结论 AA诱导HK-2细胞凋亡的机制与其导致的氧化应激损伤有关,氧化应激作用可能为马兜铃酸肾病的发病机制之一。     

低密度脂蛋白诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化的作用机制研究

目的探讨低密度脂蛋白(LDL)对大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E)转分化的影响及其作用机制。方法将体外培养的NRK-52E细胞分为4组:正常对照组、洛伐他汀(Lov,1μmol/L)组、LDL(250 mg/L)刺激组、LDL(250mg/L)+Lov(1μmol/L)组。应用倒置显微镜观察细胞形态学改变;RT-PCR检测NRK-52E细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad2、Smad3和整合素链接酶(ILK)mRNA表达;West-ern blot检测α-SMA、E-cadherin及磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)蛋白表达;ELISA检测上清液TGF-β1。结果加入LDL培养24 h后,NRK-52E细胞由立方形或多角形变为长梭形,α-SMA、TGF-β1、Smad2、Smad3和ILK mRNA的表达上调,E-cadherin mRNA的表达下调,与对照组比较差异均有统计学意义(P0.01);α-SMA和p-Smad2/3蛋白表达量显著高于对照组(P0.01),E-cadherin蛋白表达量显著低于对照组(P0.01);细胞上清液TGF-β1浓度显著高于对照组(P0.01)。LDL+Lov组与LDL组比较,NRK-52E细胞α-SMA、TGF-β1、Smad2、Smad3、ILK mRNA的表达及α-SMA、p-Smad2/3的蛋白表达均明显降低,E-cadherin mRNA和蛋白表达明显增强。结论LDL可诱导肾小管上皮细胞转分化,其机制可能是激活TGF-β1/Smads/ILK信号通路,而Lov能部分阻断LDL诱导的小管上皮细胞转分化。     

转化生长因子-β1对人近端肾小管上皮细胞结缔组织生长因子表达的影响

目的:探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对人肾小管上皮细胞结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响,同时观察TGF-β1对肾小管上皮细胞合成细胞外基质(ECM)、组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的影响.方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,观察TGF-β1诱导人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)合成CTGF、ECM、TIMP-1及α-SMA的情况.结果:在无TGF-β1刺激的情况下,HK-2细胞中有基础量的CTGF mRNA表达,TGF-β1以剂量和时间依赖的方式诱导HK-2细胞合成CTGF mRNA,其表达在24h时达高峰,同时TGF-β1可使HK-2细胞合成ECM、α-SMA增多,但在时相上均晚于CTGF.随着TGF-β1浓度的增加,HK-2细胞合成TIMP-1也随之增加,但较大剂量的TGF-β1(15ng/ml)方可使TIMP-1 mRNA的表达明显增加(P＜0.05).结论:TGF-β1可直接诱导体外培养的人近端肾小管上皮细胞表达CTGF,其表达转录水平要早于ECM、α-SMA的表达,提示CTGF可能介导了TGF-β1的促肾小管上皮细胞ECM合成和转分化的作用.     

瘦素对人肾小管上皮细胞转分化和转化生长因子-β1表达的影响

目的观察瘦素(LP)对人近端肾小管上皮细胞(HK-2)转分化及与转化生长因子-β1(TGF-βl)表达的影响,探讨其诱导转分化的机制。方法不同浓度LP(10、50、100ng/ml)刺激体外培养的HK-2细胞,以及LP作用不同时间(24、48、72h)进行分组,倒置显微镜下观察细胞形态学变化;RTPCR法和Western blot法检测细胞α-SMA、E-cadherin、TGF-βl、FN的表达水平;ELISA法检测上清中TGF-βl蛋白表达量。抗TGF-βl抗体中和实验分析LP对HK-2细胞转分化及与TGF-βl的关系。结果 (1)LP可使HK-2细胞逐渐由椭圆形变成长梭形,类似肌成纤维细胞的形态;(2)LP可下调E-cadherin的表达,同时上调α-SMA、TGF-βl的表达,其作用呈一定的剂量及时间依赖性;(3)抗TGF-βl抗体能够逆转LP诱导的转分化作用。结论 LP通过诱导HK-2细胞发生转分化,参与肾间质纤维化的发生发展,其作用机制与上调TGF-βl的表达有关。     

高糖通过转化生长因子依赖途径介导肾小管上皮细胞-肌纤维母细胞转分化及Ⅰ型胶原合成的机制

目的探讨高糖介导肾小管上皮细胞转分化及Ⅰ型胶原（Collagen Ⅰ）合成的分子机制。方法含35mmol／L葡萄糖培养液培养大鼠肾小管上皮细胞（NRK52E细胞）,免疫化学方法检测p-Smad2／3核转位,ELISA检测细胞培养上清中TGF-β1浓度,RT-PCR和Western blot方法分别检测α-SMA、E-eadherin、Collagen Ⅰ mRNA和蛋白的表达。观察TGF-β1中和抗体对高糖上述效应的影响。结果高糖促进NRK52E细胞合成和分泌TGF-β1。TGF-β1中和抗体能抑制高糖介导的p-Smad2／3核转位,下调高糖介导的α-SMA和Collagen Ⅰ蛋白表达,上调E-Cadherin蛋白表达（P均〈0．01）。结论高糖介导的肾小管上皮细胞转分化和细胞外基质Collagen Ⅰ的合成依赖于TGF-β1效应。     

BMP-7对油酸诱导肾小管上皮细胞转分化的影响

目的观察骨形态发生蛋白（BMP）-7对油酸（OA）诱导的人肾小管上皮细胞转分化的拮抗作用。方法应用体外细胞培养技术培养人肾小管上皮细胞株HK-2。分别用不同浓度BMP-7（0、1、5、10、50ng／ml）和一定浓度的OA（400μmol／L）共刺激体外培养的HK-2 48h,收集细胞,采用ELISA法和RT-PCR法检测转化生长因子（TGF）-β1蛋白、mRNA的水平和表达变化,采用RT-PCR法检测α-平滑肌动蛋白（SMA）mRNA的表达变化。结果BMP-7可以显著减少OA诱导的HK-2中TGF-β1和α—SMA mRNA的表达（P〈0．01）。结论BMP-7可以拮抗OA诱导的肾小管上皮细胞转分化。     

JAK/STAT信号途径在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的观察JAK/STAT信号途径对高糖诱导肾小管上皮细胞转分化的影响。方法体外培养人肾近曲小管上皮细胞株(HKC),分别给予高糖和JAK抑制剂AG490干预,Western印迹检测α-SMA、E-Cadherin及STAT1、STAT3、p-STAT1和p-STAT3的表达;ELISA法测定上清液中TGF-β1、I型胶原的分泌,RT-PCR检测TGF-β1mRNA表达。结果与低糖组比较,高糖培养的HKC中α-SMA、p-JAK2、p-STAT1和p-STAT3表达明显上调;E-Cadherin表达明显下调;TGF-β1mRNA表达增加;上清液中TGF-β1、Ⅰ型胶原增加。AG490明显抑制α-SMA表达升高,减轻E-Cadherin表达;降低TGF-β1mRNA表达及TGF-β1、Ⅰ型胶原的分泌。结论JAK/STAT信号途径可能参与高糖诱导HKC转分化。     

单个核细胞趋化蛋白-1和马兜铃酸Ⅰ在诱导人类肾小管上皮细胞转分化中的协同作用

目的　探讨单个核细胞趋化蛋白 1(MCP 1)和马兜铃酸Ⅰ (aristolochicacidⅠ ,AAⅠ )及其两者的协同作用 ,对人类肾小管上皮细胞 (HKC)转分化的影响。方法　应用间接免疫荧光法测定HKC细胞波形蛋白 (vimentin)、α 平滑肌肌动蛋白 (α smoothmuscleactin ,α SMA)及角蛋白 (cytocreatin)的表达 ;应用流式细胞技术测定表达α SMA( ) HKC细胞的百分数。结果　HKC细胞经MCP 1、AAⅠ或AAⅠ与MCP 1共同作用后 ,HKC细胞角蛋白表达减弱 ,波形蛋白、α SMA表达明显增强。无血清培养的HKC细胞中有少量细胞 (0 3 %～ 7 5 % )表达α SMA ,当培养液中的MCP 1浓度为 0 0 0 1、0 0 1、0 0 5、0 1、0 2、 0 4μg/L时 ,HKC细胞表达α SMA( ) 的百分率为 2 0 0 %、2 6 2 %、2 0 3%、2 3 2 %、11 2 %和 0 4% ,与无血清对照组 (平均为 3 1% )比较差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;当加入AAⅠ的浓度为 5、10 μg/L时 ,HKC细胞表达α SMA( ) 的百分率分别为 0 5 %和 1 4% ,与无血清对照组比较差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,当AAⅠ为 2 0、40和 80 μg/L时 ,HKC细胞表达α SMA( ) 的百分率分别为 8 6 %、9 6 %和 13 4% ,与无血清对照组比较差异有显著性 (P <0 0 5 )。当培养液中同时加入MCP 1(0 1μg/L)和AAⅠ (5、     

促红细胞生成素对马兜铃酸致肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的：探讨促红细胞生成素（EPO）对马兜铃酸（AA）所刺激的肾小管上皮细胞结构损伤的影响。方法：以不同浓度AA（10、20、40μg／ml）刺激LLC—PK1细胞株，同时培养体系中加入不同浓度的EPO（5、10、20U／m1），另设对照组。各组细胞培养24h后，透射电镜观察细胞的超微结构，TUNEL法原位检测细胞凋亡情况，流式细胞仪检测凋亡细胞的比例。结果：电镜显示：与AA10μg／ml组相比，AA10μg／ml＋EPO20U／ml组有少数细胞线粒体肿胀或呈早期凋亡改变（异染色质），大部分细胞结构基本正常；AA10μg／ml＋EPO10U／ml组与前者相似，有少数细胞出现凋亡。AA20μg／ml和AA40μg／ml刺激的细胞经不同浓度EPO干预后，细胞的损伤无明显变化。TUNEL结果：经AA10μg／ml、20μg／ml刺激后，核染色阳性的细胞百分比与对照组比较明显增加（P〈0．05）。与AA10μg／ml组比较，EPO10U／ml和EPO20U／ml可明显降低阳性细胞的百分比（P〈0．05）。流式细胞仪显示：经AA10μg／ml、20μg／ml刺激24h后，细胞凋亡的比例明显增加（P〈0．05），AA20μg／ml组凋亡和坏死的细胞比例高于AA10μg／ml组。与AA10μg／ml组比较，EPO10U／ml和EPO20U／ml干预后细胞凋亡比例有所下降，以EPO20U／ml作用显著（P〈0．05）。AA20μg／ml组细胞凋亡的比例与EPO干预后的各组比较无显著差异。结论：EPO通过抑制细胞的凋亡从而对AA所刺激的肾小管上皮细胞结构的损伤产生保护作用，但对细胞的坏死改变无明显影响。     

注射用血栓通对肝星状细胞基因表达的影响

目的:探讨注射用血栓通对肝星状细胞 LX02基因表达的影响及其机制.方法:将103 mg/L的注射用血栓通与人肝星状细胞 LX02 共同孵育 48 h,提取 mRNA,并逆转录成cDNA.与芯片杂交,根据杂交信号强弱筛选相关基因.结果:41 条肝星状细胞基因差异表达,其中表达上调的基因21条,下调基因20条,这些基因主要与能量代谢、细胞黏附、DNA结合、磷酸化、甲基化等相关,还有部分基因功能不详.结论:经注射用血栓通作用后,肝星状细胞基因表达发生变化,其可能通过调控这些基因的表达实现了对肝星状细胞功能的抑制作用.     

三七总皂甙诱导大鼠肝星状细胞凋亡的研究

三七及其主要有效成分三七总皂甙（PNS）具有抗肝纤维化作用。采用体外培养的传代大鼠肝星状细胞（HSC），利用有关凋亡检测技术，观察PNS对LISC增殖、调亡，胶原和层黏连蛋白（LN）合成的影响，从细胞水平探讨PNS抗肝纤维化机制。     

CD40/CD40L在肾小管上皮细胞转分化中的作用及其可能机制

目的 探讨CD40/CD40L在肾小管上皮细胞转分化中的作用及其可能机制.方法 将74例IgA肾病患者肾穿活检组织分为轻度系膜增生组27例、局灶增生组28例和增生硬化组19例,采用免疫组化及Masson方法观察各组肾小管间质内CD40、CD40L、TGF-β、α-SMA、Vimentin和胶原纤维的表达.结果 IgA肾病组织中小管上皮细胞高表达CD40和CD40L,肾小管间质中TGF-β、α-SMA、Vimentin及胶原纤维表达随分级变化而变化,三组间以上指标比较有统计学差异（P＜0.05或＜0.01）.结论 IgA肾病中,CD40和CD40L可能通过TGF-β启动并调节肾小管上皮细胞转分化,参与肾小管间质纤维化.     

三七总皂苷联合氨基胍治疗对糖尿病大鼠肾脏氧化损伤的影响

目的 研究三七总皂苷联合氨基胍治疗对糖尿病大鼠肾组织氧化损伤的影响及其机制.方法 清洁级健康雄性SD大鼠48只,腹腔注射链脲佐菌素,建立糖尿病大鼠模型,按数字表法随机分为糖尿病模型组(n=12)、三七总皂苷治疗组(n=12)、氨基胍治疗组(n=12)和三七总皂苷+氨基胍联合治疗组(n=12);另设正常对照组(n=12).第4、8周应用比色法测定血清及肾皮质超氧化物歧化酶及丙二醛含量,采用荧光光谱法测定血清和肾皮质晚期糖基化终产物含量,行肾组织PAS染色并测定肾小球平均截面积,计算肾小球平均体积.采用单因素方差分析进行组间比较.结果 三七总皂苷+氨基胍联合治疗组血清及肾皮质晚期糖基化终产物(F=36.017,P<0.01;F=8.213,P<0.01)、丙二醛(F=8.683,P<0.01;F=14.615,P<0.01)、内生肌酐清除率(F=7.233,P<0.01)、肾小球平均截面积(F=24.317,P<0.01)、肾小球平均体积(F=26.145,P<0.01)、尿蛋白量(F=17.108,P<0.05)、肾脏重量(F=5.182,P<0.05)、肾脏肥大指数(F=50.169,P<0.01)低于糖尿病模型组,血清及肾皮质超氧化物歧化酶(F值分别为6.260、7.666,均P<0.01)、体重(F=10.449,P<0.05)高于糖尿病模型组.三七总皂苷+氨基胍联合治疗组血清丙二醛低于氨基胍治疗组(F=8.683,P<0.05),肾皮质丙二醛低于氨基胍治疗组和三七总皂苷治疗组(F=14.615,P<0.05),血清晚期糖基化终产物低于氨基胍治疗组和三七总皂苷治疗组(F=36.017,P<0.01或<0.05),肾皮质晚期糖基化终产物低于氨基胍治疗组和三七总皂苷治疗组(F=8.213,P<0.05).8周末时,三七总皂苷+氨基胍联合治疗组肾小球平均截面积、肾小球平均体积均低于三七总皂苷治疗组(F值分别为24.317、26.145,均P<0.05)和氨基胍治疗组(F值分别为24.317、26.145,均P<0.05).结论 三七总皂苷+氨基胍联合治疗可通过减轻肾组织氧化应激反应、减少肾组织晚期糖基化终产物的生成与蓄积对糖尿病大鼠肾脏起到保护作?     

三七提取物对三硝基苯磺酸诱导溃疡性结肠炎大鼠结肠血管生成的研究

[目的]从血管生成角度研究三七提取物促进结肠溃疡愈合的作用机制。[方法]制备三硝基苯磺酸（TNBS）诱导溃疡性结肠炎（UC）大鼠，分为三七提取物低、中、高剂量组，柳氮磺胺吡啶（SASP）组，模型对照组，模型组和正常对照（正常）组。其中模型组于造模3d时处死，其余6组均在给药处理7d（即造模10d）时处死。取大鼠结肠病变部位标本，进行组织学评价；运用免疫组化染色法检测血管内皮生长因子（VEGF）、fms样酪氨酸激酶受体（FLT-1）和含有激酶插入区域的受体（KDR）、低氧诱导因子（HIF-1）蛋白表达；用RT-PCR法检测VEGF、FLT-1和KDR、HIF-1的mRNA表达。[结果]与模型对照组和SASP组比较，三七提取物低、中和高剂量组大鼠结肠黏膜炎症明显消除和溃疡愈合，杯状细胞数量及黏液增加，VEGF、FLT-1和KDR、HIF-1表达显著增加。[结论]血管生成在TNBS诱导大鼠UC形成和愈合过程中起重要作用。用药后VEGF、KDR、FLT-1和HIF-1表达增加。三七提取物通过上调VEGF、KDR、FLT-1和HIF-1表达促进血管生成，是其治疗UC的主要作用机制之一。     

三七皂甙对兔髂动脉再狭窄模型血管直径及c-jun基因表达的影响

目的 探讨三七皂甙对兔髂动脉再狭窄模型的预防作用及其疗效，初步探讨其机制。方法 成年健康白兔30只，随机分为二组，经球囊血管内膜剥脱法制成髂动脉再狭窄动物模型。实验组给予路路通注射液(含三七皂甙25mg／ml)5m1．对照组给予同量生理盐水。30d后重复造影，观察血管影像学改变；处死动物，取出手术段血管，采用RT—PCR法检测血管中膜c—fos、c—jun基因的表达水平。结果 造影可见兔髂动脉经球囊过度扩张后，30d后实验组髂动脉有30％左右的狭窄，对照组有60％-70％的狭窄，程度重于实验组(P＜0．05)。经RT—PCR法检测，实验组c—jun表达水平低于对照组(P＜0.05)．而c—fos表达未得到阳性结果。证明 c—jun表达与扩张前血管造影直径和30d后血管造影直径之差存在相关性(r＝0．7394)。结论 三七皂甙能够在一定程度上抑制平滑肌细胞的增殖和迁移，从而抑制PTCA后再狭窄的发生，其机制可能与抑制原癌基因的表达，从而直接抑制平滑肌增殖的细胞周期有关。c—jun的表达水平与再狭窄有关。