重组人干细胞因子菌种稳定性鉴定

细胞因子(stem cell factor，SCF)是一种对造血细胞有重要作用的因子，它主要作用于早期多能干细胞、祖细胞，同时对晚期成熟血细胞也有作用，在肿瘤放疗和化疗的辅助治疗、体外造血、骨髓移植等方面有着广阔的应用前景。为了满足临床和科研工作对rhSCF的需求，本所已构建了高效表达rhSCF的工程菌DH5α(pMG604）。菌种的稳定性是     

重组人干细胞因子工程菌的培养研究

目的：对工程菌DH5a(pMG604)的批次补料培养和连续补料培养工艺进行研究。方法：通过摇瓶试验筛选适合重组人干细胞因子工程菌DHSa(pMG604)生长和产物表达的基础培养基，在此基础上进行了分批补料批培养和连续补料批培养的研究。结果：30L发酵罐分批补料批培养，菌密度为11．9(D600)，rhSCF表达水平为42％。5L发酵罐连续补料批培养，最终菌密度为148(D600)，rhSCF表达水平为31％。     

重组人肝细胞生成素的理化性质研究

目的 :研究重组人肝细胞生成素 (hepatopoietin ,HPO)的理化性质。方法 :在大肠杆菌中表达的人HPO ,经凝胶过滤和离子交换柱层析进行纯化 ;通过还原型SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)、非还原型SDS PAGE及基质辅助激光解析飞行时间质谱 (MAIDI TOF MS)等方法分别测定了人HPO的相对分子质量 ;采用等电聚焦电泳测定了人HPO的等电点 ;采用内源荧光光谱和圆二色光谱法研究了人HPO的稳定性。结果与结论 :复性后的重组人HPO主要以双体形式存在 ,其相对分子质量为 30 0 0 0 ,等电点在 5.2～ 6 .0之间。在 70℃以下、pH 2 .6以上 ,人HPO分子内部构象基本不变     

重组人干细胞因子对猕猴外周血干细胞的动员作用

给正常成年猕猴每天一次皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子 10 μg·kg-1·d-1(μKD)或 (和 )重组人干细胞因子 2 0、5 0和12 5 μKD ,前者给药 5天 ,后者 8天 ,观察国产重组人干细胞因子动员外周血干细胞的效果。结果表明 ,给药后外周血白细胞数最高值rhG CSF单独给药组为 2 0 6 % ,rhSCF单独给药为 2 0 0 % ,而两者联合给药后为 2 80 %～ 310 % ;外周血CFU GM较动员前分别升高 1 1、1 3和 5 8～7 9倍 ;3个联合动员组外周血CD34+ 细胞数分别为动员前的 2 0、2 4和 35倍。说明rhSCF对外周血干 /祖细胞有明显的动员作用 ,rhSCF+rhG CSF联合动员效果更佳     

重组人干细胞因子对放射病患者造血细胞的体外作用

本文作者报道了用体外半固体培养方法测试重组人干细胞因子、重组人粒－单系集落刺激因子、重组人白细胞介素－３和重组人粒－单系集落刺激因子／白细胞介素－３的融合蛋白等４种造血生长因子对５例骨髓型急性放射病人远期造血细胞体外生长的作用．结果显示；用重组人干细胞因子对正常骨髓最佳刺激浓度为５×１０４ｎｇ／Ｌ的４例病人有不同程度的正向刺激作用，１例病人呈抑制作用，对重组人干细胞因子反应不均一性与受照剂量有关．细胞表面抗原和细胞形态，组化测定，重组人干细胞因子在本文体系中主要促进粒－单系集落生长．重组人干细胞因子与其它３种造血生长因子伍用可增加集落产率增大集落体积．作者对融合蛋白也作了比较分析，认为融合蛋白是一种非常有价值新的造血生长因子．     

重组人粒细胞集落刺激因子和重组人白介素11对3.5 Gy照射狗的治疗作用

急性放射病的主要病理变化是骨髓造血功能受到严重抑制,外周血白细胞和血小板极度缺乏,由此而引起的感染和出血是导致患者死亡的主要原因.     

负压封闭引流联合重组人表皮生长因子治疗糖尿病足疗效分析

目的 探讨负压封闭引流(VSD)联合重组人表皮生长因子(rhEGF)在糖尿病足患者局部创面治疗中的应用效果。方法 选取2018年2月至2020年2月新乡市第二人民医院收治的120例糖尿病足患者作为研究对象,并按照随机数表法将其随机分为观察组(60例)和对照组(60例),观察组患者局部创面予以VSD联合rhEGF治疗,对照组患者局部创面单纯予以VSD治疗,对比观察两组患者创面疼痛程度、经皮动脉血氧分压、肉芽组织出现时间及治疗4周时创面愈合率。结果 治疗2周时,观察组患者视觉模拟评分法(VAS)评分明显低于对照组(t=10.958,P<0.001),经皮动脉血氧分压明显高于对照组(t=6.353,P<0.001);治疗期间,观察组患者创面肉芽组织出现时间明显早于对照组(t=8.547,P<0.001);治疗4周时,观察组患者创面愈合率明显高于对照组(t=7.039,P<0.001)。结论 VSD联合rhEGF可有效减轻糖尿病足患者创面疼痛程度,改善创面局部微循环,缩短肉芽组织出现时间,提高创面愈合率。     

干细胞因子对红白血病细胞系TF-1凋亡的抑制作用

目的 :探讨干细胞因子 (stemcellfactor ,SCF)阻止红白血病细胞系TF 1进入凋亡程序的作用。方法 :进行3H TdR掺入实验、细胞存活实验、细胞基因组DNA电泳分析和流式细胞术分析。结果 :发现TF 1细胞对SCF的反应存在量 半高效关系 ,在SCF存在时细胞存活率明显提高 ,TF 1细胞系在SCF饥饿 2 4h时出现DNA梯型条带 ;流式细胞术检测显示 ,在SCF饥饿 36h后 ,在G1峰前出现凋亡特有的AP峰。结论 :SCF有阻滞或抑制红白血病细胞系TF 1凋亡的作用。     

携带胶质细胞源性神经营养因子基因的骨髓间充质干细胞移植对兔坐骨神经缺损的治疗作用

目的 探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)局部长期高表达对坐骨神经缺损的治疗作用.方法 实验组以骨髓间充质干细胞(MSCs)作为种子细胞,以慢病毒介导的GDNF转染骨髓间充质干细胞后,结合细胞外基质凝胶构建神经移植复合体共同移植入兔20 mm坐骨神经缺损处.以绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因.同时设基质凝胶对照组和基质凝胶+MSCs对照组,每组10只.结果 实验组部分兔坐骨神经连续性完全恢复,而两对照组坐骨神经连续性均未完全恢复.转染GDNF基因的MSC迁移距离可达20 mm,提示该移植细胞与宿主细胞具有较好的整合作用,且实验组绿色荧光蛋白(GFP)+胶质纤维酸性蛋白抗体(GFAP)、GFP+S100双标细胞占GFP阳性细胞的百分比分别高达70%和60%,而基质凝胶+MSCs对照组以上两种阳性细胞的百分比为40%和30%.结论 移植的基因工程MSCs能够明显促进损伤坐骨神经的再生,GDNF可能促进了MSCs向雪旺细胞样细胞分化.     

血浆中 BZ类失能剂的高效液相二极管矩阵检测分析方法的研究

目的：建立血浆中 Ｂ Ｚ类失能剂的高效液相二极管矩阵检测分析方法,为 Ｂ Ｚ类失能剂中毒病人的临床诊断提供分析手段。方法：采用 Ｓｅｐ Ｐａｋ Ｃ１８ 柱固相提取,乙酸乙酯洗脱, Ｒｅｓｏｌｖｅ Ｃ１８ 反相柱分离,０．１２％ 三氟乙酸（ Ｔ Ｆ Ａ）的 ５０％ 甲醇溶液梯度洗脱,二极管矩阵检测器（ Ｄ Ａ Ｄ） 三波长（２２０±４）ｎｍ ,（２５４±４）ｎｍ ,（３００±４）ｎｍ 检测。结果：血浆中 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ Ｄ Ａ Ｄ 法检测 ４ 种失能剂的线性范围为 ０．１～１．２ μｇ,回收率为６２．７６％ ～９２．２０％ ,标准偏差为 ３．４６％ ～１１．８４％ ,最低检出限为 １００～４００ ｎｇ。流动相中 Ｔ Ｆ Ａ 和甲醇浓度及梯度洗脱是影响分离效果和色谱峰形的主要因素。结论：本文为临床诊断提供简便、快速、灵敏的检测方法,血浆蛋白不干扰测定。４ 种失能剂在血浆中采用 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ Ｄ Ａ Ｄ 法同时分离测定目前未见报道。     

高效液相色谱法定量测定巴戟天中菊淀粉型寡糖的含量

目的研究建立菊淀粉型寡糖的高效液相色谱（HPLC）测定方法,定量测定巴戟天中菊淀粉型四、五、六、七寡糖的含量。方法提取巴戟天寡糖,直接分析。色谱柱：Click Maltose 4.6 I.D.×100 mm,流动相：乙腈-水,流速1.0 ml/min,100 ELSD9型蒸发光散射检测器（ELSD）,进样量20μl,用外标法测定巴戟天寡糖中四~七糖的含量。结果建立了测定巴戟天寡糖中四~七糖含量的方法。四~七糖的线性范围分别为四糖11~90.72μg,r=0.9996（RSD=2.2%）;五糖5.67~90.72μg,r=0.9992（RSD=1.56%）;六糖9.6~48.78μg,r=0.9998（RSD=3.2%）;七糖6.8~33.6μg,r=0.9984（RSD=2.7%）。结论本方法可以作为新药巴戟天寡糖的质量控制方法,也可用于巴戟天药材的质量控制。     

胶质瘤干细胞的生存微环境及其示踪研究进展

胶质瘤干细胞在胶质瘤的形成和生长中发挥至关重要的作用。胶质瘤干细胞的生存微环境是维持干细胞特性的关键,在体无创性示踪为研究胶质瘤干细胞的生存、繁殖、自我更新等特性以及促进胶质瘤发展的机制具有重要意义。     

表皮干细胞与创伤修复

表皮干细胞具有无限增殖和分化的潜能,对维持表皮的自我更新、保持皮肤的正常结构以及对皮肤的创伤修复具有重要意义。表皮干细胞的研究已引起越来越多研究者的关注。本文就目前表皮干细胞的生物学特征、表面标记、分布特征和在创伤修复中的变化等方面的研究进展作一综述。     

尿L-岩藻糖测定的临床意义

每只小鼠皮下注射１．８μｇ／（约相当于９０μｇ／ｋｇ）的１２５Ｉ标记基因重组人白介素－３（１２５Ｉ－ｒｈＩＬ－３）后，用反相高效液相色谱法（ＲＨＰＬＣ）测定血浆浓度，估算动力学参数和测定组织放射性分布。消除半衰期为１．７３ｈ，药物在血浆内迅速降解。组织放射性分布特点为：肾泌尿排泄系统浓度最高，胆汁、肠道系统略高于血浆，淋巴、骨髓和脾脏等浓度略低或与血浆接近，脑内含量最低。４８ｈ内经尿和粪排泄的放射性占注入量（８４．０±９．２）％，其中尿（７１．９±６．７）％，粪（１２．２±５．３）％。肾脏是降解１２５Ｉ－ｒｈＩＬ－３的重要器官之一。     

携带胶质细胞源性神经营养因子基因的骨髓间充质干细胞移植对兔坐骨神经缺损的治疗作用

目的 探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)局部长期高表达对坐骨神经缺损的治疗作用.方法 实验组以骨髓间充质干细胞(MSCs)作为种子细胞,以慢病毒介导的GDNF转染骨髓间充质干细胞后,结合细胞外基质凝胶构建神经移植复合体共同移植入兔20 mm坐骨神经缺损处.以绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因.同时设基质凝胶对照组和基质凝胶+MSCs对照组,每组10只.结果 实验组部分兔坐骨神经连续性完全恢复,而两对照组坐骨神经连续性均未完全恢复.转染GDNF基因的MSC迁移距离可达20 mm,提示该移植细胞与宿主细胞具有较好的整合作用,且实验组绿色荧光蛋白(GFP)+胶质纤维酸性蛋白抗体(GFAP)、GFP+S100双标细胞占GFP阳性细胞的百分比分别高达70%和60%,而基质凝胶+MSCs对照组以上两种阳性细胞的百分比为40%和30%.结论 移植的基因工程MSCs能够明显促进损伤坐骨神经的再生,GDNF可能促进了MSCs向雪旺细胞样细胞分化.