氟他胺建立SD大鼠尿道下裂模型的实验研究

目的采用抗雄激素类药物氟他胺诱导建立大鼠尿道下裂动物模型,为进一步研究尿道下裂发病的分子作用机制和治疗提供理论和实验依据。方法孕鼠20只,随机分成2组:生理盐水(normal saline,NS)对照组和氟他胺(Flutamide,Flu)组,每组10只。在孕12～17d时连续6d分别经皮下注射等量生理盐水或用生理盐水配制的氟他胺溶液(12.5mg.kg-1.d-1)。于孕18d解剖两只母鼠,提取雄性胎鼠生殖结节做病理切片,同时观察睾丸位置和前列腺发育情况。待孕鼠分娩完毕,即对仔鼠进行记数,并于出生后第2、13、28天测量肛门生殖器距离(anogenital distance,AGD)和称重;观察每组雄性仔鼠的尿道口和睾丸位置、乳晕数量及拍照。结果与对照组相比,氟他胺组雄性子代大鼠尿道下裂畸形发生率为100%,单侧隐睾发生率为31.25%,解剖观察无前列腺,出现乳晕数均为12个,AGD较对照组明显缩短,有显著统计学差异,但体重随着时间的推移无明显变化。结论用氟他胺可以诱导出稳定、直观的雄性大鼠尿道下裂模型,适宜推广。     

Lamin B1在邻苯二甲酸二丁酯致大鼠尿道下裂发生中的表达变化

目的:利用邻苯二甲酸二丁酯(di-n-butyl phthalate,DBP)胚胎晚期暴露导致SD胎鼠尿道下裂发生的动物模型,验证Lamin B1在尿道下裂与正常胎鼠阴茎中的差异表达,以进一步探讨尿道下裂的发生机制?方法:妊娠14~18天 SD雌鼠20只,随机分为2组,实验组和对照组分别给予DBP 800 mg/(kg·d)和大豆油2 ml/d灌胃,孕期第19天剖宫产后记录雄性胎鼠肛门和生殖器之间的距离(AGD)?出生体重(BW)及尿道下裂发生数,取雄性胎鼠阴茎,运用免疫印迹法和免疫组织化学方法分析Lamin B1的表达情况?结果:实验组AGD/BW与对照组相比有显著性差异(P < 0.05);尿道下裂发生率为40%;Lamin B1在对照组的相对表达量为0.923±0.013(n=10),实验组为0.593±0.014(n=10),差异有统计学意义(P < 0.05);Lamin B1主要定位于尿道上皮细胞,对照组染色强度明显强于实验组?结论:DBP灌胃期间改变了尿道组织中Lamin B1的表达,影响了细胞迁移和尿生殖褶的融合,这可能是尿道下裂发生的原因之一?     

邻苯二甲酸二丁酯干预Fgfs信号通路致雄性仔鼠尿道下裂发生的分子机制研究

目的:通过验证邻苯二甲酸二丁酯(DBP)孕期染毒所致尿道下裂雄性仔鼠生殖结节内成纤维细胞生长因子(Fgfs)及其受体(Fgfr)信号通路中关键基因的表达异常,探讨其在DBP生殖毒性过程中的作用机制.方法:孕鼠20只,随机分2组,在怀孕(GD)14～18天期间,每天分别灌胃给予大豆油、DBP 750 mg/kg,出生后第1天(PND1),统计仔鼠出生数、尿道下裂发生率,称量雄性仔鼠体重,肛门至生殖器距离(AGD);PND7,取尿道下裂雄性仔鼠生殖结节,用实时定量(real-time quantitative)RT-PCR方法检测生殖结节中Fgf8、Fgf10、Fgfr2的mRNA表达水平.结果:DBP染毒后导致新生仔鼠与正常组相比数量明显减少,雄性仔鼠体重明显下降、AGD明显缩短,雄性仔鼠尿道下裂的发生率为48.83%.同时,与对照组相比,DBP致尿道下裂雄性仔鼠生殖结节中Fgf8、Fgf10、Fgfr2的mRNA的表达水平明显下降.结论:DBP对母体有着明显的毒性作用,DBP干预了Fgfs信号通路中关键基因的表达,这可能是DBP导致生殖结节发育异常,引起尿道下裂的重要原因.     

雄性大鼠生殖结节中相关lncRNA和mRNA可能参与邻苯二甲酸二丁酯诱导的尿道下裂形成过程

目的：探讨雄性大鼠生殖结节中长链非编码RNA（long non?coding RNA,lncRNA）和mRNA在邻苯二甲酸二丁酯（di?n?butyl phthalate,DBP）诱导雄性大鼠尿道下裂形成中的可能作用。方法：在孕鼠孕13~18 d时每天按体重800 mg/kg DBP溶于1 mL玉米油灌胃,对照组每天给予1 mL玉米油。于孕19 d时取出胎鼠,分别取下灌药组发生尿道下裂胎鼠和对照组雄性胎鼠的生殖结节,提取RNA,构建RNA测序文库测序。对测序结果的lncRNA进行筛选、差异分析和功能预测,再随机筛选8条lncRNA用qRT?PCR验证其表达量。结果：与对照组相比,尿道下裂组生殖结节中有598个差异mRNA,427个差异lncRNA,qRT?PCR结果与测序结果一致。在生物过程、细胞组成、分子功能方面,差异表达mRNA富集程度最高的分别是红细胞生长、血红蛋白合成、结合珠蛋白结合。分布最多的的信号通路为病毒性心肌炎通路。差异lncRNA功能最多分布在生长激素释放激素受体的结合;分布最多的信号通路为金葡菌感染通路。结论：邻苯二甲酸二丁酯诱导的尿道下裂雄性大鼠与正常雄性大鼠相比,其生殖结节中lncRNA和mRNA的差异表达显著,lncRNA可能通过与mRNA相互作用参与尿道下裂的形成过程。     

Akt信号通路在邻苯二甲酸二丁酯诱导雄性胎鼠发生尿道下裂中的表达研究

目的:邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate,DBP)孕晚期暴露诱导子代Spraque-Dawley大鼠发生尿道下裂,探讨Akt信号通路及其下游关键蛋白核转录因子κB(nuclear factor-κ-gene binding,NF-κB)在胎鼠生殖结节中的差异表达,研究该通路在DBP致大鼠生殖系统发育异常过程中的作用机制?方法:孕SD大鼠20只,随机分为染毒组和对照组,在妊娠时间(gestation day,GD)14~18 d,每天通过灌胃分别给予DBP 800 mg/kg和大豆油,在 GD19时提取染毒组发生尿道下裂胎鼠与对照组胎鼠的生殖结节组织,用Western blot检测磷酸化Akt(p-Akt)?Akt和NF-κB的表达情况,同时用免疫组化分析p-Akt的表达情况?结果:尿道下裂组与对照组中p-Akt?Akt和NF-κB相对表达量的比值分别为3.057 ± 0.026?2.624 ± 0.073和3.524 ± 0.035(n = 10,P < 0.05),且尿道下裂组中p-Akt蛋白相对量在总蛋白中所占的比例较对照组高?p-Akt定位于生殖结节上皮细胞,尿道下裂组p-Akt染色明显强于对照组? 结论:DBP干预大鼠生殖结节中Akt信号通路及其下游NF-κB的正常表达,进而影响了上皮细胞增殖?凋亡及尿生殖褶的融合,这可能是尿道下裂发生的机制之一?     

小鼠邻苯二甲酸二丁酯染毒模型建立及莱菔硫烷保护作用的探索

目的：用邻苯二甲酸二丁酯（DBP）建立小鼠染毒模型并探讨莱菔硫烷（sulforaphane,SFN）的保护作用。 方法：将30只6周龄小鼠随机分为溶剂对照组（大豆油组）、SFN组［0.75 mg/（kg·d）］、DBP组［500 mg/（kg·d）］、DBP+SFN低剂量组［0.5 mg/（kg·d）］、DBP+SFN中剂量组［0.75mg/（kg·d）］、DBP+SFN高剂量组［1.00 mg/（kg·d）］,每组5只,连续喂药2周后处死,测量睾丸重量、肛殖距（AGD）、AGD/体重、睾丸脏器系数等指标,并观察小鼠睾丸的组织病理学改变。另取一侧附睾中精子进行精子计数、精子活力以及精子畸形率分析。结果：相比于对照组,DBP组AGD/体重、精子计数、活力等指标均明显降低,精子畸形率显著升高（P < 0.05）,睾丸出现明显病理改变。而DBP+SFN低剂量组各检测指标均优于DBP组,差异有统计学意义（P < 0.05）,SFN能够明显改善DBP 导致的小鼠睾丸组织病变。结论：SFN可显著缓解DBP导致的生殖毒性,为进一步探讨DBP毒性作用和SFN的保护机制提供了合适的动物实验模型。     

阿霉素诱发大鼠肾病模型的实验研究

A single intravenous injection of adriamycin (5 mg/kg) into rats caused the full expression of nephrotic syndrome characterized by heavy proteinuria, hypoalbuminemia, hypercholesterolemia, thoracic and ascitic fluid; swelling and fusion of foot processes of epithelial cells could be observed under electron microscope; histologic examination by light microscopy did not reveal any significant changes. The features of the model in clinic and pathology were very similar to those described humans with minimal change nephrotic syndrome. The observation in the various periods of the model indicated that the ultrastructure changes in epithelial cells occurred prior to the onset of proteinuria. The present study, combined with the results of quantitative analysis with image analyzer for alteration of glomerular polyanions, suggests that both morphologic changes and proteinuria may be the consequence of a common primary event that is the loss of glomerular polyanions. The model has the advantages of being rather simple and convenient; providing lasting proteinuria and pathological changes in stable condition; and having high reproducibility and a sufficient supply of the drug used.     

大鼠体外循环模型的建立

建立大鼠的体外循环(cardiopulmonary bypass，CPB)模型，使CPB的动物模型更加简单可靠、经济实用，为CPB相关实验研究提供可靠的动物模型。     

大鼠体外循环模型的建立

目的建立大鼠体外循环(extracorporeal c ircu lation,ECC)动物模型,为心血管外科ECC术后重要器官损伤,尤其是脑损伤的研究提供简单可靠、经济的实验平台。方法选用雄性SD大鼠,经右颈静脉、股静脉插管引流,股动脉插管灌注建立ECC。ECC 1 h,监测血流动力学指标及血气、电解质的变化。结果ECC中动物血流动力学稳定,血气结果满意,完全符合满意ECC标准。停机后心血管和呼吸功能恢复顺利。结论利用特制动物实验膜肺,建立经右颈静脉、股静脉插管引流,股动脉插管灌注的大鼠体外循环模型,具有安全、稳定、简单、实用的特点,是进行与体外循环有关脏器损伤,尤其是脑损伤研究可靠的实验平台。     

大鼠酒精性肝纤维化复合模型的建立

目的:采用复合因素制备大鼠酒精性肝纤维化模型。方法:Wistar雄性大鼠随机分为空白对照组、酒精性肝纤维化模型组和微量CCl4处理组。酒精性肝纤维化模型组大鼠予以喂食酒精、玉米油、吡唑,结合微量CCl4腹腔注射造模。微量CCl4处理组仅予以微量CCl4腹腔注射。观察各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、γ谷氨酰转肽酶(gamma-glutamyltransferase,γ-GT)水平和肝组织病理学的变化。结果:造模第12周,成功建立大鼠酒精性肝纤维化模型。在造模期间,肝脏组织病理学依次表现为酒精性脂肪肝、肝炎、肝纤维化。酒精性肝纤维化模型组大鼠肝/体比值,血清ALT、AST及γ-GT水平与正常对照组比较,差异均有统计学意义。结论:酒精灌胃结合微量CCl4腹腔注射制备酒精性肝纤维化动物模型,具有模型稳定、成功率高的特点,并可提供不同阶段酒精性肝病的实验模型。     

雌激素制备大鼠子宫肌瘤动物模型

目的 建立子宫肌瘤动物模型,明确相关机制.方法 性成熟雌性大鼠肌注200μg和300μg雌激素(E2),每周2次,持续8周和10周后处死,观测血清中E2和孕激素(P)水平,及肌瘤中雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)表达水平,计算肌瘤形成率和动物死亡率.HE染色对大鼠子宫肌瘤与人子宫肌瘤进行病理组织学比较,确定E2诱导大鼠子宫肌瘤形成的最佳剂量和给药周期.结果 肌注E2 200μg8周后,大鼠血清E2水平显著升高(P＜0.01),肉眼可见肌瘤形成.病理组织学检查显示与人子宫肌瘤相似,肌瘤组织中ER、PR表达明显增强.结论 大鼠肌注E2200 μg/只,2次/周,连续8周可建立与人相似的子宫肌瘤动物模型.动物子宫局部组织高浓度ER、PR与子宫肌瘤发生有关.     

大豆异黄酮诱导小鼠尿道下裂模型的建立

目的 应用大豆异黄酮孕晚期染毒诱导子代雄鼠尿道下裂的建立,为雌激素致尿道下裂的分子作用机制提供进一步研究的基础. 方法 45只孕鼠随机分成5组,在孕12-17 d连续6 d各组每晨9点分别灌胃生理盐水0.2 ml/d(A组)、己烯雌酚0.5 mg/(kg·d)(B组)、大豆异黄酮100 mg/(kg·d)(C组)、300 mg/(kg·d)(D组)、900 nag/(kg·d)(E组),出生时观察小鼠病死率,出生后4周观察小鼠有无尿道下裂. 结果 A,B,C,D,E各组平均病死率分别为2.0%,18.0%,3.8%,5.4%,10.0%.A,B,C,D,E组子代尿道下裂发生率分别为O%(0/80),28.2%(11/39),0%(0/76),O%(0/67),19.2%(10/52).E组子代尿道下裂发生率与A,C,D组比较有统计学差异(P<0.05).E组子代尿道下裂发生率与B组比较无统计学差异. 结论 应用昆明种小鼠从孕12 d开始给予大豆异黄酮900 mg/(kg·d)灌胃,连续给药6 d,成功建立小鼠先天性尿道下裂模型.     

卡马西平致大鼠消化系统损伤模型的建立

目的：建立卡马西平（CBZ）长期应用致大鼠消化系统损伤的动物模型.方法：SD大鼠72只,随机分为正常对照组（n=12）和模型组（n=60）.正常对照组每d灌胃蒸馏水,其余不做任何处理.模型组大鼠以CBZ灌胃,剂量由600 mg/kg始,每5 d增加200 mg/kg,至1 200 mg/kg维持,共计灌胃120 d,然后停用CBZ,继续观察30d.模型组于给药第30 d、60 d、90 d、120 d及停药30 d后各取大鼠12只测肝功能指标,然后处死大鼠,观察肝、胃和小肠的组织学及超微结构改变.结果：正常对照组状态良好,组织学观察未见异常.模型组大鼠一般情况差,肝细胞弥漫性水肿、点状坏死、炎性细胞浸润;胃黏膜萎缩、组织水肿,炎性细胞浸润,可见浅表溃疡;肝细胞内线粒体和内质网肿胀断裂,线粒体面积增大,密度下降,脂肪滴面积增加;血清AST、ALT、ALP活性升高,ALB含量下降（P＜0.05）.结论：CBZ长期应用致大鼠消化系统损伤模型成功建立.     

卡马西平诱导大鼠骨髓抑制模型的建立

目的：建立卡马西平（CBZ）诱导的骨髓抑制大鼠模型.方法：SD大鼠72只,随机分为正常对照组和模型组.正常对照组12只,每d灌胃蒸馏水,其余不做任何处理.模型组60只,以CBZ灌胃,剂量由600 mg/kg始,每5 d增加200 mg/kg,至1 200 mg/kg维持,共计灌胃120 d,然后停用CBZ,继续观察30 d.于给药第30 d、60 d、90d、120 d及停药30 d后各取大鼠12只处死,观察外周血象、骨髓象的变化.结果：模型组大鼠一般情况差,给药60d后大鼠即开始表现全血抑制,其中红系造血母细胞的抑制更为明显.在CBZ撤除30 d内,造血系统功能未见明显恢复.结论：成功建立了CBZ诱导的骨髓抑制大鼠模型.     

大鼠胸部撞击致肺损伤模型的建立

目的 建立一种胸部撞击致肺挫伤的大鼠模型.方法 将84只SD大鼠随机分成7组(n=12),采用自制的胸部撞击装置,用不同撞击能量(2.7、2.0、1.8、1.5、1.2、0.9和0 J)对大鼠胸部进行撞击造成双侧肺损伤.监测撞击前后大鼠循环和呼吸功能变化.撞击120 min后处死大鼠,开胸行创伤评分,观察心肺组织形态学变化,并进行病理学评分,计算肺组织湿干比和肺泡灌洗液蛋白含量.结果 用1.2J能量撞击大鼠胸部可致理想的双侧肺损伤而无明显心脏损伤,动物死亡率较低.结论 采用自制胸部撞击装置建立的大鼠双侧肺损伤模型可以较好地模拟胸部撞击后双侧肺挫伤伤情,可用1.2J的撞击能量进行后续实验研究.     

STZ小剂量多次注射诱导大鼠胰岛素依赖性糖尿病动物模型探讨

目的 :探索一种应用于糖尿病研究中理想的动物模型。方法 :腹腔注射 30 mg/kg的链脲佐菌素 (STZ) ,每周一次连续 4周 ,诱导大鼠产生慢性自身免疫胰岛损害 ,观察血糖、尿糖及组织学损害。结果 :实验组大鼠产生明显迟发性胰岛损害 ,尿糖阳性 ,血糖与对照组有明显差别 ,组织学表现为自身免疫性胰岛炎特征。结论 :STZ小剂量多次注射诱导大鼠胰岛素依赖性糖尿病 (IDDM)动物模型适用于糖尿病发病机理的研究。     

两种剂量异丙肾上腺素制备心衰大鼠模型心功能的比较

目的比较两种剂量异丙肾上腺素（isoproterenol,ISO）制备的大鼠心衰模型心功能的特点。方法用3 mg/（kg·d）和5 mg/（kg·d）两种剂量、连续3 d腹腔注射ISO制备两组心衰大鼠模型,并用等量生理盐水同方法制备对照组。5周后,比较各组大鼠存活率,并用Doppler超声心动图比较其反映心功能的各项参数。结果大、小剂量组的存活率分别为48%及68%。左室后壁、室间隔厚度及射血分数、心输出量随ISO剂量的增加而增厚及减少。小剂量组心率维持正常,而大剂量组明显下降。结论ISO 3 mg/（kg·d）使用5周即可达心衰程度,成活率高;而5 mg/（kg·d）组心衰更为严重,尽管存活率尚可,但明显低于前者。该试验为ISO建立心衰动物模型提供了有效的用药剂量。同时也进一步证实了Doppler超声心动图是检测各种动物心功能的一种简便、无创及可靠的操作方法。     

邻苯二甲酸二丁酯孕期暴露仔鼠阴茎组织乳酸脱氢酶B差异表达

目的:探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)孕期暴露对仔鼠阴茎组织乳酸脱氢酶B(L-lactate dehydrogenase B,LDH-B)的影响,以进一步探讨LDH-B在DBP导致的尿道下裂中的作用机制。方法:将20只受孕大鼠随机分成2组,实验组10只,对照组10只。在大鼠怀孕第14～18天(GD14～18)2组分别给予灌胃,实验组给予DBP每天800mg/kg染毒孕鼠,对照组给予大豆油每天5ml,妊娠19天(GD19)分别取出仔鼠阴茎组织提取总蛋白,通过Western-blot及免疫组化检测LDH-B的表达。结果:实验组及对照组阴茎组织中均有LDH-B的表达,实验组的相对表达量为0.078±0.02(n=10),对照组的相对表达量为0.137±0.03(n=10),实验组中表达明显减少(P<0.05)。LDH-B主要定位于大鼠阴茎组织细胞的胞浆中。结论:孕期大鼠暴露邻苯二甲酸二丁酯后仔鼠阴茎组织中LDH-B表达明显减少,可能与DBP造成机体缺氧有关。