绞股蓝总皂苷对CCl_4诱导的大鼠肝纤维化TGF-β_1/Smad信号通路的影响

目的：观察绞股蓝总皂苷对大鼠肝纤维化转化生长因子-β1（TGF-β1）/Smad信号通路的影响。方法：将Wistar雄性大鼠设为正常组、模型组、绞股蓝总皂苷组、秋水仙碱组,除正常组外采用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型。造模第7周开始予相应的药物干预,每日给药剂量为股蓝总皂苷200 mg/kg、秋水仙碱0.1 mg/kg,共3周。观察大鼠一般情况变化,肝组织羟脯氨酸（Hyp）含量,肝组织病理及胶原沉积;检测肝组织肝星状细胞（HSC）活化标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达,肝组织TGF-β1/Smad信号通路指标TGF-β1、TGF-β1受体1（TβR-Ⅰ）、TGF-β1受体2（TβR-Ⅱ）、Smad2/p-Smad2、Smad3/p-Smad3蛋白表达。结果：模型组大鼠一般状态较差,肝组织Hyp含量较正常组显著增高,肝小叶被破坏,肝细胞脂肪变性伴炎性细胞浸润,并有大量纤维结缔组织增生;大鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、Smad2、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达均显著升高,而Smad3蛋白表达与正常组比较无差异。绞股蓝总皂苷组及秋水仙碱组大鼠肝组织Hyp含量显著降低,肝组织病理改善;绞股蓝总皂苷组大鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、Smad2、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达均较模型组显著下降,TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ及Smad3蛋白表达无显著变化;秋水仙碱组大鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、Smad2、p-Smad3蛋白表达均较模型组显著下降,TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、p-Smad2及Smad3蛋白表达无显著变化。结论：绞股蓝总皂苷对CCl4诱导的大鼠肝纤维化有显著的干预作用,其作用机制可能与抑制HSC活化、TGF-β1分泌及其信号通路中p-Smad2、p-Smad3表达有关。     

小檗碱对肝硬化大鼠肝功能的保护及炎症抑制作用

[目的]观察小檗碱对肝硬化大鼠肝功能的保护及炎症抑制作用,并探讨其相关机制.[方法]从60只SD大鼠中随机抽取10只设为正常组,其余建立肝硬化模型.将建模成功的40只大鼠随机分为肝硬化组、激活剂组、小檗碱组、激活剂+小檗碱组,每组10只.激活剂组给予SRI-01138130 mg/kg灌胃,小檗碱组给予小檗碱200 mg/kg灌胃,激活剂+小檗碱组给予SRI-011381(30 mg/kg)合小檗碱(20 mg/kg)灌胃,正常组、模型组给予等体积生理盐水灌胃,1次/d,连续2周.末次给药后次日测定血清肝功能指标、炎症因子指标、肝纤维化程度指标,采用免疫组织化学染色法测定肝脏组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,苏木素-伊红(HE)染色法观察肝组织病理变化,蛋白免疫印迹(Western Blot)法测定肝脏组织转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad4、Smad7蛋白表达.[结果]与正常组比较,肝硬化组血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、透明质酸(HA)水平,肝脏组织α-SMA免疫组织化学染色光密度(IOD)值,TGF-β1、Smad4蛋白表达量升高,白蛋白(ALB)水平、Smad7蛋白表达量降低(均P<0.05);与肝硬化组比较,激活剂组血清AST、ALT、IL-6、TNF-α、Ⅳ-C、PCⅢ、HA水平及α-SMA IOD值,TGF-β1、Smad4蛋白表达量升高,ALB水平、Smad7蛋白表达量降低(均P<0.05);与激活剂组比较,小檗碱组血清AST、ALT、IL-6、TNF-α、Ⅳ-C、PCⅢ、HA水平及α-SMA IOD值,TGF-β1、Smad4蛋白表达量降低,ALB水平、Smad7蛋白表达量升高(均P<0.05);与小檗碱组比较,激活剂+小檗碱组血清AST、ALT、IL-6、TNF-α、Ⅳ-C、PCⅢ、HA水平及α-SMA IOD值,TGF-β1、Smad4蛋白表达量升高,ALB水平、Smad7蛋白表达量降低(P<0.05).HE染色结果显示,肝硬化组与激活剂组可见明显肝纤维化表现,小檗碱组肝组织病理变化及纤维化程度较肝硬化组、激活剂组明显改善,激活剂+小檗碱组肝组织病理变化及纤维化程度较肝硬化组、激活剂组有所改善,但不及小檗碱组.[结论]小檗碱可抑制肝硬化大鼠炎性反应,促进肝脏胶原降解,降低肝纤维化程度,保护肝功能,其机制可能与抑制TGF-β1/Smads信号通路有关.     

姜黄素对肝纤维化大鼠肝组织中α-SMA、PDGF-BB和TGF-β1表达的影响

目的 观察姜黄素对肝纤维化大鼠肝组织中α-SMA、PDGF-BB和TGF-β1表达的影响，探讨姜黄素抗大鼠肝纤维化的作用机制。方法 用四氯化碳制作大鼠肝纤维化模型，同时分别予低（100mg/kg）、中（200mg/kg）、高（300mg/kg）剂量姜黄素灌胃，设立溶质对照组；分别于实验第4、7、21、42天，各组随机处死5只大鼠，取同部位肝组织行HE, V-G染色，并用免疫组化方法检测各组α-SMA、PDGF-BB和TGF-β1 的表达。结果 溶质对照组不表达或微量表达α-SMA、PDGF-BB和TGF-β1；模型组α-SMA、PDGF-BB和TGF-β1的表达随造模时间延长明显增强，姜黄素可显著减少α-SMA、PDGF-BB和TGF-β1的表达，其作用强度与剂量和时间有关。结论 姜黄素可抑制大鼠肝纤维化模型中PDGF-BB和TGF-β1的表达，这可能是其抗肝纤维化的作用机制之一。     

荔枝核总黄酮对肝纤维化大鼠TGF-β1及Smad3、7表达的影响

目的探讨荔枝核总黄酮(TFL)对胆汁性肝纤维化大鼠肝组织转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3、7表达的影响及其抗肝纤维化可能的作用机制。方法将雄性SD大鼠70只随机分为假手术组、模型组、TFL大剂量组[200mg/(kg.d)]和TFL小剂量组[100mg/(kg.d)]。采用胆总管结扎制备肝纤维化大鼠模型。分别于术后第2、3、4周处死大鼠,留取肝脏组织。HE染色观察大鼠肝组织病理改变;免疫组织化学法检测TGF-β1、Smad3、7在肝组织内的动态表达。结果假手术组肝组织内TGF-β1、Smad3有少量表达,Smad7呈高表达。与模型组比较,TFL大剂量治疗后大鼠肝组织内纤维化程度降低。随着肝纤维化的形成和发展,第2、3、4周TFL大剂量组大鼠肝组织TGF-β1(3.000±1.309、2.000±1.309、1.800±1.649)、Smad3(2.875±1.458、2.000±1.309、1.833±0.753)与模型组TGF-β1(3.750±1.488、4.333±1.211、5.000±0.817)、Smad3(3.375±0.916、4.000±0.894、4.250±0.500)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TFL能有效地减轻胆总管结扎所致肝纤维化大鼠肝损伤及肝纤维化程度,其机制可能与抑制TGF-β1、Smad3高表达,上调Smad7表达有关。     

抵当陷胸汤对糖尿病大鼠肝脏TGF-β1/Smad3信号通路的影响

目的 观察抵当陷胸汤通过调节TGF-β1/Smad3信号通路干预糖尿病大鼠肝纤维化病变的部分机制。方法 根据数字随机表法将34只SD大鼠分为空白组（10只）、模型组（8只）、抵当陷胸汤组（8只）和ALT-711组（8只）,按55 mg/kg剂量腹腔单次注射链脲佐菌素溶液制备糖尿病模型,予以相应的药物每天按相应剂量经胃灌药,于第8周末,麻醉后取材。采用Western blot法和实时荧光定量PCR法分别检测大鼠肝脏转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）及其信号蛋白Smad3蛋白及其mRNA表达水平。结果 与空白组比较,模型组大鼠肝组织TGF-β1、Smad3蛋白及mRNA表达水平均明显上调（P<0.05）,p-Smad3蛋白表达水平明显上调（P<0.05）;与模型组比较,抵当陷胸汤组和ALT-711组大鼠肝脏组织TGF-β1、Smad3蛋白及mRNA表达水平均明显下调（P<0.05）,p-Smad3蛋白表达水平明显下调（P<0.05）;抵当陷胸汤组和ALT-711组大鼠肝脏组织TGF-β1、Smad3、p-Smad3蛋白及TGF-β1、Smad3 mRNA表达水平比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 抵当陷胸汤通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路激活干预糖尿病肝纤维化病变。     

小柴胡汤通过TGF-β1/Smad通路改善大鼠肝纤维化

目的研究小柴胡汤通过转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad通路改善大鼠肝纤维化的作用及机制。方法雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、中药组、中药+SRI组,采用四氯化碳皮下注射的方式建立大鼠肝纤维化模型,给与小柴胡汤灌胃及Smad2/3激活剂SRI-011381腹腔注射干预。比较各组大鼠肝脏病理改变、血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、白蛋白(ALB)、透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)含量,以及肝脏中TGF-β1、Smad2、Smad3表达的差异。结果与对照组比较,模型组大鼠出现了典型的肝纤维化病理改变,血清中ALB的含量降低,血清中ALT、AST、HA、LN、PCⅢ的含量及肝脏中TGF-β1、Smad2、Smad3的表达水平增加;与模型组比较,中药组大鼠肝纤维化的病理改变减轻,血清中ALB的含量增加,血清中ALT、AST、HA、LN、PCⅢ的含量及肝脏中TGF-β1、Smad2、Smad3的表达水平降低;与中药组比较,中药+SRI组大鼠肝纤维化的病理改变加重,血清中ALB的含量降低,血清中ALT、AST、HA、LN、PCⅢ的含量及肝脏中TGF-β1、Smad2、Smad3的表达水平增加。结论小柴胡汤能够改善大鼠的肝纤维化,抑制TGF-β1/Smad通路是介导这一改善作用可能的分子机制。     

五味子乙素抗肾纤维化作用及机制研究

目的探讨五味子乙素对肾纤维化的改善作用及其机制。方法以分别不同剂量的五味子乙素给缺血再灌注（I/R）模型小鼠灌胃。通过Masson染色对各组小鼠肾纤维化进行评价,免疫组织化学染色检测各组小鼠肾组织α- 平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和Ⅰ型胶原蛋白（CollagenⅠ）的表达;Western blot 法检测各组小鼠肾组织α-SMA、CollagenⅠ、上皮性钙粘蛋白（E-cadherin）、转化生长因子β1（TGF-β1）和p-Smad3 的表达水平。结果Masson染色结果显示,五味子乙素治疗组较I/R组小鼠肾间质纤维化及小管萎缩减轻;免疫组织化学染色结果显示,治疗组较I/R组α-SMA 和CollagenⅠ蛋白表达减少;Western blot 检测结果显示,治疗组较I/R 组E-cadherin表达增高,α-SMA、CollagenⅠ、TGF-β1和p-Smad3 表达均下降,且呈现出剂量效应。结论五味子乙素具有抗肾纤维化的作用,其机制可能与抑制TGF-β/Smad 信号通路有关,提示五味子乙素有望成为抗肾纤维化的临床治疗药物。     

水飞蓟宾对硫代乙酰胺诱导的肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad3信号通路的调节作用

目的 探讨水飞蓟宾对硫代乙酰胺(TAA)诱导的肝纤维化大鼠肝组织的保护作用及对TGF-β1/Smad3信号通路的调节作用。方法45只大鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组及水飞蓟宾组,每组15只。除对照组外,其余大鼠使用硫代乙酰胺建立肝纤维化大鼠模型,水飞蓟宾组大鼠按照756 mg/kg的剂量给予水飞蓟宾灌胃,对照组及模型组大鼠给予等量生理盐水灌胃,1次/d,给药6周。全自动生化分析仪检测大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)及Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)水平,苏木精 伊红（HE）染色法检测各组大鼠肝组织病理学变化,免疫印迹(Western blot)检测大鼠肝组织TGF-β1、Smad3水平。结果 与对照组比较,模型组肝纤维化大鼠血清ALT、AST、ALP、GGT、HA、LN、PCⅢ、ColⅣ水平及肝组织TGF-β1、Smad3水平显著升高(均P＜0.05),肝组织发生明显病理学变化;与模型组比较,水飞蓟宾组大鼠血清ALT、AST、ALP、GGT、HA、LN、PCⅢ、ColⅣ水平及肝组织TGF-β1、Smad3水平显著降低(P＜0.05),肝组织病理学明显改善。结论 水飞蓟宾能够明显改善硫代乙酰胺诱导的肝纤维化大鼠肝功能,抑制肝纤维化因子水平,改善大鼠肝组织病理学进展,其机制可能与调节TGF-β1/Smad3信号通路有关。     

益智提取物对大鼠肝纤维化的防治作用

目的探讨益智乙酸乙酯提取物对大鼠肝纤维化防治作用及其作用机制。方法采用高脂饲料喂养12周诱导SD大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型,实验分为对照组、模型组、益智乙酸乙酯提取物组(实验组)。实验组给予高脂饲料喂养+四氯化碳(CCL4)腹腔内注射,每天给予益智提取物500 mg/kg灌胃;模型组给予高脂饲料喂养+CCL4腹腔内注射,每天给予相同体积的白开水灌胃;对照组,正常饲料喂养,每天给予相同体积的白开水灌胃,持续4周。外周血检测甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT);ELISA检测肝组织透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)含量。肝组织检测丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、超氧物歧化酶(SOD)活性。RT-PCR检测转化生长因子-β1(TGF-β1)m-RNA、Smad2、Smad3、Smad7表达。Masson染色观察肝纤维化情况。结果与对照组比较,模型组的TG、TC、AST、ALT、HA、LN、MDA、Smad2、Smad3、TGF-β1 m-RNA水平明显升高,差异有统计学意义(P0.05);GSH、SOD、Smad7明显下降,差异有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,实验组的TG、TC、AST、ALT、HA、LN、MDA、Smad2、Smad3、TGF-β1 m-RNA水平明显下降,差异有统计学意义(P0.05),GSH、SOD、Smad7明显上升,差异有统计学意义(P0.05)。Masson染色下,与对照组比较,模型组及实验组肝脏组织均出现纤维化。与模型组比较,实验组肝组织脂肪变性情况改善,但肝纤维化情况改善不明显。结论益智乙酸乙酯提取物能抗氧化应激、下调TGF-β1/Smad信号通路,有缓解肝纤维化的作用。     

延龄草皂苷通过抑制TGF-β/Smad3与Wnt/β-catenin信号通路改善大鼠肺纤维化

目的 探讨延龄草皂苷对肺间质纤维化大鼠的治疗作用及其可能机制。 方法 雄性SD大鼠50只,随机分为对照组,模型组,延龄草皂苷低、中、高剂量组［25 mg/(kg·d)、50 mg/(kg·d)和100 mg/(kg·d)］,每组10只。除对照组外,其余各组采用气管插管注入伯莱霉素法(5 mg/kg)建立大鼠肺纤维化模型;次日开始连续给药28 d。处死大鼠后,取肺组织称重并计算肺系数;进行HE和Masson染色观察小鼠肺组织形态病理学变化;ELISA法检测大鼠白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)的表达以及超氧化物歧化酶(SOD)的活性;Western blotting法检测大鼠肺组织中纤连蛋白(fibronectin)、胶原蛋白Ⅰ型(Collagen Ⅰ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β(TGF-β)、SMAD同源物3(Smad3)、Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)和糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)的蛋白表达水平。 结果 与模型组比较,延龄草皂苷低、中、高剂量组的肺系数降低;大鼠肺组织炎性细胞浸润、胶原沉积和纤维化程度改善;大鼠IL-1β、TNF-α、IL-6、MDA和ROS的表达水平降低, SOD的活性升高,发挥抗炎、抗氧化作用;肺纤维化标志蛋白fibronectin,Collagen Ⅰ和α-SMA表达被抑制;大鼠肺组织TGF-β1、Smad3、Wnt3a、β-catenin和GSK-3β蛋白的表达水平降低,且治疗效果呈现剂量依赖性。 结论 延龄草皂苷可通过抗炎、抗氧化,抑制TGF-β/Smad3与Wnt/β-catenin信号通路激活,从而对肺纤维化产生保护作用。     

异佛莱心苷抑制四氯化碳致小鼠肝纤维化的初步研究

目的探讨异佛莱心苷对四氯化碳(carbon tetrachloride, CCl4)所致小鼠肝纤维化的抑制作用。 方法将24只C57BL6J小鼠随机分为空白对照组、肝纤维化模型组、异佛莱心苷治疗组和水飞蓟素治疗组,每组6只。肝纤维化模型组、异佛莱心苷治疗组和水飞蓟素治疗组通过腹腔注射CCl4建立肝纤维化模型,每周3次,共12周。从第6周起,异佛莱心苷治疗组小鼠每日灌胃异佛莱心苷（10 mmol/L）,水飞蓟素治疗组小鼠每日灌胃水飞蓟素100 mg/kg,连续给药6周。采集各组小鼠静脉血,血清检测丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase, ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase, AST）;肝组织做HE染色、Masson染色和天狼星红染色;组织免疫荧光检测TGF-β1的表达;ELISA法检测各组血清中TGF-β1、IL-1β、IL-6和TNF-α含量;Western印迹法检测肝脏AKT/Smad2通路变化。 结果肝纤维化模型组血清ALT和AST较空白对照组显著升高(P<0.05),异佛莱心苷治疗组和水飞蓟素治疗组小鼠血清ALT和AST均较肝纤维化模型组显著降低(P<0.05),小鼠肝重和肝重/体重也较肝纤维化模型组显著降低(P<0.05)。两组小鼠肝组织病理学形态较肝纤维化模型组有一定程度的改善。组织免疫荧光显示肝纤维化模型组TGF-β1表达较空白对照组升高;异佛莱心苷和水飞蓟素治疗后肝脏TGF-β1表达降低。异佛莱心苷治疗组和水飞蓟素治疗组炎症指标（TGF-β1、IL-1β、IL-6和TNF-α）较肝纤维化模型组显著降低(P<0.05)。Western印迹法结果显示肝纤维化后p-Smad2、Smad2和p-AKT蛋白表达显著升高(P<0.05),但异佛莱心苷治疗后肝脏组织中AKT/Smad2表达下降(P<0.05),提示该通路异常激活被抑制。 结论异佛莱心苷对小鼠肝纤维化有抑制作用,其作用机制可能与抑制炎症反应和AKT/Smad2通路有关。     

实验性肝纤维化大鼠TGF-β_1、Smad3、Smad7、CTGF的表达及其意义

目的 :研究四氯化碳 ( CCl4 )诱导肝纤维化大鼠肝脏转化生长因子β1( TGF-β1)、Smad3、Smad7和结缔组织生长因子 ( CTGF)的表达及定位。方法 :将 2 4只大鼠随机分为正常对照组与模型组 ,模型组大鼠予以 40 %四氯化碳皮下注射 8周后处死。免疫组化技术检测 TGF-β1、Smad3、Smad7和 CTGF在肝脏的表达及细胞内的定位 ,放射免疫方法检测透明质酸 ,并进行肝组织病理检查。结果 :与正常组大鼠比较 ,模型组大鼠肝内 TGF-β1、Smad3、CTGF表达增加 ,而 Smad7的表达降低。 TGF-β1、Smad3及 CTGF的免疫阳性反应信号主要位于纤维间隔中的细胞浆 ,Smad7主要在肝细胞浆表达 ;模型组大鼠血清 HA及肝组织Van Giseon染色、HE染色和电镜检查均支持肝纤维化改变。结论 :肝内 TGF- β1、Smad3和CTGF表达增强、Smad7表达减弱 ,提示 TGF- β1轴、CTGF参与了肝纤维的发生发展 ,可能作为防治肝纤维化发生发展的新途径之一     

六味地黄丸通过调控NF-κB及TGF-β/Smad双信号通路减轻糖尿病肾病炎症及纤维化

【目的】基于核因子kappa B(NF-κB)及转化生长因子β(TGF-β)/Smad双信号通路,观察六味地黄丸对糖尿病肾病炎症及纤维化的影响,探讨其对肾保护作用机制。【方法】将30只SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药组,每组10只。采用一次性腹腔注射链脲佐菌素法复制糖尿病大鼠模型。中药组给予大鼠六味地黄丸(剂量为6.75 g·kg-1·d-1)灌胃,正常组、模型组给予大鼠等体积生理盐水灌胃。给药12周后取材,检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、24h尿蛋白量(24h-Pro),采用苏木素—伊红(HE)与Masson染色观察肾组织病理变化,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测肾组织NF-κB、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、TGF-β、alpha平滑肌抗体(α-SMA)、Smad2、Smad3、Smad7的表达。【结果】生化指标结果显示:与正常组比较,模型组大鼠FBG、BUN、SCr、24h-Pro升高(P0.01);六味地黄丸治疗后上述指标均有所改善(P0.05)。HE与Masson染色结果显示,模型组肾小球官腔变窄、系膜基质增生及炎症细胞浸润,而中药组有所改善。Western blot结果显示:与正常组比较,模型组的NF-κB、MCP-1、TGF-β、α-SMA、Smad2、Smad3表达均呈明显上调,而Smad7表达降低(P0.01);中药组NF-κB、MCP-1、TGF-β、α-SMA、Smad2、Smad3表达下调,Smad7表达上调(P0.05)。【结论】六味地黄丸具有肾脏保护作用,其机制可能与通过调控NF-κB及TGF-β/Smad双信号通路,从而减轻糖尿病肾病炎症损伤和纤维化有关。     

白芍总苷对大鼠腹膜纤维化转化生长因子-β1/Smad7信号转导通路的影响

【目的】探讨白芍总苷对大鼠腹膜纤维化转化生长因子-β1(TGF-β1)及其信号转导分子7(Smad7)的干预作用及其机制。【方法】采用42.5 g/L含糖透析液+脂多糖法复制腹膜纤维化模型。将SD大鼠随机分成4组:空白组,模型组,白芍总苷高、低剂量组。第30天后,测定各组腹膜功能,取腹膜组织进行Masson染色观察腹膜病理学变化,采用实时荧光聚合酶链反应(Real-time PCR)方法检测各组腹膜TGF-β1 mRNA、Smad7 mRNA的表达。【结果】模型组腹膜厚度显著增加,腹膜超滤量显著降低(均P0.05)。白芍总苷高、低剂量组对上述病变均有显著改善作用(P0.05)。模型组腹膜TGF-β1 mRNA、Smad7 mRNA表达水平显著高于空白组(P0.05或P0.01),白芍总苷高、低剂量组TGF-β1表达较模型组均显著降低(P0.05),白芍总苷高剂量组抑制性信号蛋白Smad7则显著升高(P0.05)。【结论】白芍总苷抑制腹膜组织TGF-β1 mRNA表达、上调Smad7 mRNA表达可能是其抑制腹膜纤维化的机制之一。     

肝复健方对肝纤维化大鼠TGF-β/Smad信号通路的影响

目的 观察以"浊毒"立论的肝复健方对猪血清诱导的大鼠肝纤维化(HF)肝脏转化生长因子-β1(TGF-β1)及其Ⅱ型受体(TβRⅡ) mRNA水平和Smad2/3、Smad4、Smad7蛋白表达的影响.方法 SD大鼠腹腔注射猪血清0.5 mL,每周2次,连续8周制备HF模型,每天灌胃分别给予不同剂量的肝复健方(15.0、22.5、30、0 g/kg)和秋水仙碱(0.154 g/kg)治疗至12周末.实验结束后,RT-PCR法检测肝组织TGF-β1及其受体TβRⅡmRNA的表达,Weston-blot法检测肝组织Smad2/3、Smad4、Smad7蛋白的表达.结果 与正常对照组相比,模型组TGF-β1、TβRⅡ及Smad2/3、Smad4表达明显增强,Smad7表达明显下降;经肝复健方治疗后大鼠肝脏TGF-β1及其受体TβRⅡ表达均比模型组减弱,Smad2/3、Smad4的表达减弱而Smad7蛋白的表达增强.结论 肝复健方能抑制TGF-β1及其受体TβRⅡ mRNA的表达,下调Smad2/3、Smad4蛋白表达,上调Smad7蛋白的表达.肝复健方对大鼠HF肝脏TGF-β/Smad信号通路有明显的影响,这可能是其治疗HF的机制之一.     

构建启动大鼠肝组织中TGF-β/Smad信号传导通路的急性肝损伤动物模型

目的在传统CCl4急性肝损伤模型的基础上,构建启动大鼠肝组织中的TGF-β/Smad信号传导通路的急性肝损伤动物模型。方法将30只大鼠随机分为3组,每组各10只,分别为模型组,对照组和空白组,模型组大鼠予小动脉夹夹闭肝总动脉15min手术处理,随后分别在第6天和第10天,予25%CCl4花生油溶液6mL/kg体重腹腔注射;对照组则单用两次CCl4,空白组不做任何处理;第二次CCl448h后处死所有动物。结果模型组与对照组及空白组比较:血清指标ALT、AST、HA显著上升(P0.01);肝组织HE染色病理观测,肝组织出现明显炎症、变性、坏死,纤维组织增生等现象;PT-PCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原、TGF-β1、Smad3mRNA表达显著增强(P0.01);免疫组化检测Ⅰ、Ⅲ型胶原、TGF-β1、Smad3蛋白的表达增强(P0.01)。结论成功启动急性肝损伤大鼠肝组织中的TGF-β/Smad信号传导路,该急性肝损伤动物模型兼备肝纤维化活跃,和TGF-β/Smad信号传导通路信号增强特征,在评价早期抗肝纤维化药物及方法时具有耗时少、有效和经济的特点,值得进一步研究。     

不同剂量虫草对肝纤维化小鼠肝脏TGF-β1、Smad3的影响

目的明确不同剂量冬虫夏草对四氯化碳小鼠肝纤维化的作用及对TGF-β1mRNA、Smad3蛋白表达的影响。方法四氯化碳(CCl4)皮下注射复制BALB/c小鼠肝纤维化模型,虫草组在造模同时予以不同剂量虫草煎剂,直至造模结束。HE染色观察肝组织炎症,天狼猩红染色观察肝脏胶原沉积,生化法测定肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量,免疫组化测定Smad3在肝脏内的表达,RT-PCR测定TGF-β1mRNA在肝脏内的表达。结果与正常小鼠比较,肝纤维化小鼠肝脏肝静脉与汇管区周围肝细胞明显脂肪变性,肝脏胶原沉积,可见纤维间隔形成,肝脏Hyp含量、TGF-β1mRNA、Smad3蛋白表达量均显著增加。与模型组比较,虫草组肝脏炎症与胶原沉积减轻,TGF-β1mRNA、Smad3蛋白表达量明显降低,以虫草高剂量组为明显。结论肝纤维化BALB/c小鼠的肝脏TGF-β1mRNA、Smad3蛋白表达明显上升,虫草制剂有良好的抗肝纤维化作用,高剂量虫草有着更好的抗肝纤维化作用,其作用机制与下调Smad3蛋白及TGF-β1mRNA表达有关。     

黄芪对高糖腹透液诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT中TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的 观察黄芪对高糖腹透液诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT中TGF-pl/Smads信号蛋白的影响,探讨黄芪对腹膜纤维化的阻抑作用与机制.方法 实验分为5组,每组10只.阴性对照组:每日腹腔注射生理盐水20 mL/只,共35d;模型组:每日腹腔注射4.25％葡萄糖腹透液20 mL/只,共35 d;黄芪低、中、高剂量组:于造模第16天开始每日腹腔注射黄芪腹透液(腹透液中加入黄芪注射液,分别含黄芪生药终浓度10、20、40 mg/mL)20 mL/只,共20d.HE染色观察腹膜病理改变;快速免疫组化法检测腹膜组织TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢ、FN、E-cadherin、α-SMA的表达;Western blot检测腹膜组织TGF-β1、E-cadherin、α-SMA、Smad2/3、p-smad2/3、Smad7蛋白的表达;RT-PCR检测TGF-β1、E-cadherin、α-SMA、Smad7mRNA表达.结果 ①模型组PMCs呈圆形或柱形,有脱落,间皮下基质增生,大量成纤维样细胞及单核、巨噬细胞浸润,纤维素样物质沉积,腹膜组织TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢ、FN表达上调,黄芪各干预组上述变化有改善,以高剂量组作用较为明显;②模型组EMT标记蛋白α-SMA表达上调,E-cadherin表达下调,高、中剂量黄芪组能一定程度地逆转腹膜组织E-cadherin表达下降与α-SMA高表达;③模型组Samds信号蛋白p-smad2/3、Smad7表达上调,黄芪可不同程度地下调p-smad2/3高表达,增强Samd7的表达,高剂量组作用较为显著.结论 高糖腹透析液可促使PMCs EMT的发生,黄芪很可能通过抑制TGF-β1,并作用于Smads信号转导通路正、负反馈环路中的Smad2/3、Smad7关键信号蛋白,阻抑PMCs EMT的发生.     

胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1在硫代乙酰胺诱导的肝纤维化小鼠中的作用

目的：我们的前期研究发现胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1（IGFBPrP1）可以激活体外培养的肝星状细胞分泌细胞外基质（ECM）。为了明确IGFBPrP1在肝纤维化小鼠中的作用和机制,设计了本实验。 方法：采用经典的腹腔注射硫代乙酰胺（TAA）的方法制备小鼠肝纤维化模型,同时腹腔给予抗IGFBPrP1抗体。取肝组织,分别对肝组织石蜡切片做HE染色和Masson染色观察肝组织病理学变化及胶原纤维形成情况;通过免疫组织化学染色和Western blotting观察肝组织IGFBPrP1、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、ECM以及转化生长因子-β1（TGF-β1）、Smad3表达的变化。 结果：Masson染色结果显示：TAA5周组较正常对照组胶原纤维形成增多（P<0.01）,TAA5周+抗IGFBPrP1抗体组胶原纤维的形成少于TAA5周组（P<0.01）。与正常对照组相比,TAA5周组肝组织IGFBPrP1、α-SMA、TGF-β1和Smad3、Collagen I、纤维连接蛋白（FN）表达显著增强（P<0.01）,抗IGFBPrP1抗体的使用可以减轻上述改变（P<0.01）。 结论：IGFBPrP1在肝纤维化的发展过程中起重要作用;抗IGFBPrP1抗体通过抑制肝纤维化小鼠肝星状细胞的活化、减少ECM的主要成分Collagen I与FN的合成等途径发挥抗纤维化作用,其作用机制可能与TGF-β1/Smad3信号通路有关。     

扶正化瘀方影响转化生长因子β1/Smad信号通路的抗肝纤维化作用机制

目的：探讨扶正化瘀方影响转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）/Smad信号转导的抗肝纤维化作用机制。方法：本研究分体内实验和体外实验两部分。在体内实验中,37只雄性Wistar大鼠分为正常组（5只）、模型组（18只）和扶正化瘀方组（14只）。模型组和扶正化瘀组大鼠采用二甲基亚硝胺（dimethylnitrosamine,DMN）腹腔注射复制大鼠肝纤维化模型。灌胃治疗4周后,采用盐酸水解法检测肝组织中羟脯氨酸（hydroxyproline,Hyp）含量,蛋白质印迹法分析肝组织中TGF-β1、TGF-β1Ⅰ型受体（TGF-β1 type Ⅰ receptor,TβR-Ⅰ）、Smad2、Smad3及磷酸化Smad2/3蛋白的表达。体外实验采用培养4d的原代大鼠肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSC）,分为对照组、TGF-β1组、10%扶正化瘀方药物血清组及TβR-Ⅰ胞内激酶抑制剂（SB-431542）组。后3组用2.5ng/mLTGF-β1刺激24h后,对照组及TGF-β1组加10%正常大鼠血清,10%扶正化瘀方药物血清组加10%服用扶正化瘀方的大鼠血清,SB-431542组加10%正常大鼠血清及10μmol/LSB-431542。共孵育24h后,免疫荧光染色检测HSC中α平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）和Smad3蛋白的表达,蛋白质印迹法分析HSC中α-SMA蛋白的表达。结果：体内实验发现,扶正化瘀方可明显降低纤维化肝组织中异常升高的Hyp含量及TGF-β1、TβR-Ⅰ、磷酸化Smad2/3蛋白的表达。体外研究发现,正常HSC中α-SMA、TβR-Ⅰ表达较低,TGF-β1刺激可显著上调其表达;扶正化瘀方药物血清共孵育后,可明显抑制TGF-β1诱导的HSC中α-SMA的表达;正常HSCSmad3主要表达在细胞质中,细胞核中表达较低,TGF-β1可显著刺激Smad3向细胞核转移,扶正化瘀方药物血清可明显抑制TGF-β1诱导的Smad3核转位。结论：扶正化瘀方可下调纤维化大鼠肝脏及HSC中的TGF-β1/Smad病理信号转导通路,这可能是扶正化瘀方抗肝纤维化的部分作用机制。