脊髓损伤早期细胞凋亡的表达及意义

目的:观察大鼠急性脊髓损伤后不同时间细胞凋亡调控基因Bcl-2和Bax的表达。方法:Wistar大鼠56只随机分成7组,将6组制成急性脊髓损伤模型,另一组于伤后0h、4h、8h、24h、48h、72h对其运动功能进行评分,随后采集脊髓标本,分别进行HE染色、TENEL标记和免疫组化检测其凋亡调控基因Bcl-2和Bax的表达。结果:大鼠脊髓损伤后表现运动能力下降。TUNEL染色显示脊髓伤后4h出现凋亡阳性颗粒,伤后8h到达高峰。Bcl-2和Bax都在伤后4h可见阳性表达,Bcl-2表达在24h到达高峰,Bax的表达高峰出现在伤后8h。结论:大鼠脊髓损伤后,除存在细胞坏死外还存在神经细胞凋亡。细胞内Bcl-2与Bax的比例可能调节着凋亡的发生。     

大鼠脊髓损伤早期Survivivn表达规律与细胞凋亡的关系

目的:探讨大鼠脊髓损伤早期不同时间段内脊髓组织中生存素(Survivin)表达变化规律和细胞凋亡的关系。方法:56只Wistar大鼠随机分两组:①假损伤组(对照组,n=8)与②损伤组(实验组,48只);假损伤组仅打开T10及部分T9、T11椎板,实验组均采用改良Allens法建立大鼠T10脊髓损伤模型,分别于伤后不同时间点(12h、24h、3d、5d、7d、10d)随机处死8只取材;分别用HE染色观察组织病理变化、免疫组织化学法观察脊髓组织中Survivin表达并对其进行定性定量分析和脱氧核糖末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL法)测定细胞凋亡指数,并进行相关性分析。结果:对照组大鼠在损伤及周边脊髓灰、白质中偶有Survivin蛋白表达、实验组12h有极少表达、3d时可见较多Survivin蛋白表达,然后开始下降;10d时与对照组比较仍有统计意义(P<0.05)。在脊髓损伤后对照组有少量细胞凋亡;而试验组12h就出现大量凋亡细胞,3d达高峰,5d和7d明显减少,10d仍有少量表达;实验组24h、3d、5d、7d、10d细胞凋亡和对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:脊髓损伤后Survivin表达呈上升趋势并有一定的规律性,与细胞凋亡成正相关,脊髓损伤后Survivin的表达升高参与了抑制神经细胞的凋亡,从而起到减轻脊髓损伤的作用。     

雌激素影响急性大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的相关性实验研究

目的 在建立大鼠脊髓损伤模型基础上,观察不同时间点雌激素对脊髓胶质细胞,神经元凋亡的影响,以期为临床急性脊髓损伤的治疗提供理论依据.方法 健康成年大鼠72只,随机分为两组,其中单纯损伤组(单纯打击损伤)36只,雌激素组(手术加雌激素)36只.脊髓损伤动物模型的制备:用自制Allen打击器25gcm致伤力撞击脊髓,制成脊髓损伤动物模型.雌激素组每日肌注雌激素(100μg/kg)直至处死,单纯损伤组仍每日肌注生理盐水0.5ml直至处死.组织切片的制备:脊髓损伤后1d、3d、5d、8d、14d、21d共6个时间段分批处死动物.4%多聚甲醛心肌灌注固定24h,切取每只大鼠T5～T13节段脊髓组织,常规制成切片,给于Bcl-2检测,TUNEL原位末端标记.检测大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的情况.脊髓损伤后2周给予Gale评分及斜板维持试验.结果 Bcl-2蛋白检测:在脊髓损伤后的第1天,脊髓组织即开始较高表达Bcl-2蛋白.单纯损伤组Bcl-2高峰发生在损伤后3天,而雌激素组伤后8天达到高峰,此时Bcl-2蛋白不仅表达在神经细胞中,更多的在胶质细胞中大量表达,且此状态一直维持到伤后14天才开始下降,伤后21天仅少量表达(P＜0.05).TUNEL原位标记检测:单纯损伤组24小时已出现不少阳性细胞,以胶质细胞为主,3～8天达到高峰,此后逐渐回落,但21天时仍有阳性细胞,应用雌激素治疗后,凋亡细胞明显减少(P＜0.05).脊髓损伤后2周Gale评分及斜板维持率雌激素组优于单纯损伤组(P＜0.01).结论 雌激素在脊髓损伤中通过改善微循环,促进Bcl-2蛋白的表达,清除氧自由基,抗氧化作用能够抑制脊髓损伤早期神经细胞和胶质细胞的凋亡,从而减轻脊髓继发性损伤,促进脊髓神经功能的恢复.所以脊髓损伤后早期应用雌激素配合其它药物阻止神经细胞和胶质细胞的凋亡可能有助于减轻脊髓损伤的损害程度,促进脊髓神经功能的恢复,为SCI的治疗提供一个新的途径.     

脊髓损伤后神经细胞凋亡

脊髓损伤一直是医学界关注的重点研究方向。1996Ｍａｒｃｉａ年在权威杂志Ｓｃｉｅｎｃｅ以“脊髓损伤新概念”为题评论了发现脊髓损伤后神经细胞凋亡的意义 ,认为美国神经科学年会上四个研究组报道“脊髓损伤后继发性细胞死亡不是直接由于损伤而是由于细胞凋亡 (Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)”这一新观点已将脊髓损伤研究大大推进一步[1] 。本文仅就细胞凋亡以及与脊髓损伤相关研究文献进行综述。细胞凋亡又叫细胞程序性死亡 (ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈ ,ＰＣＤ)是正常细胞生理死亡的一个过程 ,主要清除有害或无用的自身细胞。近年来…     

马钱子抑制兔脊髓损伤的细胞凋亡作用

目的：探讨马钱子是否通过抑制细胞凋亡来治疗脊髓损伤。方法：采用改良的Allen＇s法建立兔脊髓损伤模型。设立假脊髓损伤组、对照组、炙马钱子40mg组（M40组）及炙马钱子80mg组（M80组）,分别在给药后1d、7d及用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测c-fos蛋白、Bax蛋白和Bcl-2蛋白的表达。结果：与对照组相比,M40组及M80组治疗第7天及14天,可不同程度地抑制损伤脊髓中NO、c-fos蛋白、Bax蛋白的表达,上调Bcl-2蛋白的表达。其中,M40组和M80组分别治疗第7天的NO含量与对照组有统计学差异（P〈0.05）;M80组治疗第7天时c-fos蛋白与对照组有统计学差异（P〈0.05）,治疗14d时有重要统计学差异（P〈0.01）;M80组治疗第7天时Bax蛋白、Bcl-2蛋白及两者的比值与对照组间有统计学差异（P〈0.05）,M80组治疗14d后Bax蛋白与对照组有统计学差异（P〈0.05）。结论：马钱子通过减少损伤脊髓局部NO、c-fos蛋白的表达、下调Bax/Bcl-2比值从而抑制细胞凋亡,阻止脊髓继发性损伤,促进脊髓损伤后神经功能的恢复。     

三七总皂甙对大鼠脊髓损伤后iNOS表达及细胞凋亡的影响

目的探讨大鼠脊髓损伤后应用三七总皂甙对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达及细胞凋亡的影响。方法采用Allen’s法将64,只成年SD大鼠造成脊髓中度损伤模型,再随机分为损伤组和三七总皂甙组,分别给予生理盐水及三七总皂甙注射液治疗,损伤后不同时间点(1、3、7、14d)处死大鼠,用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化,用免疫组化染色检测iNOS阳性细胞,原位末端标记法(TUNEL法)标记凋亡细胞。结果HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变三七总皂甙组明显轻于损伤组;两组均发现iNOS表达及凋亡细胞,且损伤组iNOS表达及神经细胞凋亡指数均高于三七总皂甙组(P<0．05)。结论三七总皂甙注射液能抑制脊髓损伤后iNOS表达及神经细胞凋亡。     

热休克预处理在大鼠脊髓损伤后细胞凋亡中的作用

目的探讨大鼠脊髓损伤后热休克蛋白70(HSP70)和氧化氮合酶(iNOS)在细胞凋亡中的作用。方法将96只大鼠分为对照组、损伤组和热休克预处理组。采用静压型脊髓损伤模型,分别在伤后6h,12h,1天,2天,3天,1周,2周和3周处死动物。用原位杂交技术检测HSP70mRNA在以上各时点的表达。同时用免疫组化法检测HSP70、iNOS在各时点的表达。运用TUNEL法检测凋亡细胞。另外,用CBS评分来评估神经功能。结果CBS评分显示,热休克预处理组的神经功能明显好于损伤组(P<0.05)。凋亡细胞数在损伤组显著高于热休克预处理组(P<0.05)。通过原位杂交和免疫组化发现,HSP70mRNA和蛋白水平在热休克预处理组明显高于损伤组(P<0.05)。免疫组化的结果还显示,iNOS的量在热休克预处理组明显低于损伤组(P<0.05)。结论热休克预处理能减轻脊髓损伤后的细胞凋亡,其机理可能同HSP70合成增加,并进一步抑制iNOS的表达有关。     

大鼠急性脊髓损伤后Bak基因的表达及其意义

目的探讨Bak基因在大鼠急性脊髓损伤(ASCI)中的表达及其意义。方法选取64只SD大鼠随机分为模型及对照两组,每组32只,模型组以改良Allen's法制作SD大鼠急性脊髓损伤动物模型,对照组只行椎板切开不损伤脊髓。分别于伤后3h、1、3、7d时(每个时间点8只)应用改良Tarlov评分法评价其神经功能;然后处死动物,取受损节段脊髓行HE染色及免疫组化染色,观察形态学改变和Bak基因表达的特点;并应用TUNEL方法检测神经细胞凋亡情况。其量的评定借助于麦克奥迪数码医学图像分析系统A(Motic.med6.0)软件,结果分别用累积光密度及细胞凋亡指数来表示。结果对照组大鼠下肢功能均无明显瘫痪,模型组大鼠下肢均出现不同程度功能障碍,对照组各时间点的Tarlov评分均高于实验组(P0.05)。对照组各时间点脊髓组织未见明显出血、水肿和细胞凋亡坏死,模型组各时间点脊髓组织均有不同程度出血、水肿、细胞凋亡及坏死。对照组未见明显Bak基因表达,模型组各时间点Bak基因表达均明显高于对照组(P0.05),模型组内Bak基因表达3h点出现,1d增加,3d达高峰,7d明显减少。模型组内细胞凋亡3h点少量出现,1d增加,3d达高峰,7d明显减少。结论脊髓损伤激活Bak基因表达,从而诱导神经细胞凋亡,可能为其病情进展的重要机制之一。     

细胞凋亡及增殖细胞核抗原在肝癌组织中的表达及意义

目的探讨经肝动脉化疗栓塞(TACE)后肝癌细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)广凋亡细胞比值与肝细胞肝癌分化程度的关系。方法应用原位末端标记法(TUNEL)及免疫组化双染色技术，对60例肝细胞肝癌石蜡包埋组织进行检测。结果不同分化程度癌组织中细胞凋亡和PCNA的阳性率不同。分化程度高，细胞凋亡阳性率高、PCNA阳性率偏低；分化程度低，细胞凋亡阳性率偏低、PCNA阳性率高。随分化程度的降低，PCNA广凋亡细胞的比值显著增加，两者有相关性。结论PCNA/凋亡细胞的比值可作为评估肝细胞肝癌分化程度的指标。     

BAG-1在大鼠损伤脊髓中的表达

目的观察Bcl-2结合抗凋亡基因1(BAG-1)在大鼠损伤脊髓中的表达。方法 42只SD大鼠随机分为损伤组(A组,36只)和假手术组(B组,6只)。制作脊髓损伤模型,用Westernblot、免疫组织化学和免疫荧光技术检测BAG-1在损伤脊髓中的表达、组织分布与细胞定位。结果BAG-1在脊髓损伤后8h开始表达增加,2d达到最高峰值,损伤后2周恢复到损伤之前水平。与B组相比,在脊髓损伤后2d,BAG-1的阳性信号在临近损伤中心的脊髓中明显增加。BAG-1与神经元、星形胶质细胞存在共定位,并且BAG-1在这两种细胞中表达上调。结论脊髓损伤后,脊髓中BAG-1的表达上调可能参与神经元的凋亡以及星形胶质细胞活化的病理生理过程。     

缺血后处理增加脊髓miR-125b表达减轻大鼠脊髓缺血-再灌注损伤后神经元凋亡

目的观察缺血后处理(Ischemic postconditioning,IPC)对大鼠脊髓缺血再灌注损伤(Spinal cord ischemia reperfusion injury,SCIRI)后microRNA(miRNA,miR)-125b表达及下肢运动功能的影响。方法 45只SD大鼠平均随机分为3组:假手术组(Sham组)、缺血-再灌注组(IR组)和缺血后处理组(IPC组)。Sham组仅暴露主动脉弓而不夹闭,其他各组夹闭主动脉弓14 min后再开放建立SCIRI模型。IPC组于再灌注5 min后给予5循环缺血后适应。再灌注后24 h,处死大鼠,提取脊髓组织,分别检测脊髓组织湿/干重比(Wet-dry ratio,W/D)和总含水量(Total water content,TWC),HE染色观察脊髓组织病理学变化,qRT-PCR测定脊髓组织中miR-125b表达,TUNEL法检测神经元凋亡数量(Apoptotic quantitiy,AQ)。结果术后24 h,与Sham组比较,IR组大鼠脊髓W/D、TWC、AQ升高,脊髓组织中miR-125b表达下调(P<0.05);与IR组比较,IPC组脊髓W/D、TWC、AQ降低,脊髓组织中miR-125b表达上调(P<0.05)。HE染色显示,Sham组脊髓前角结构完好,可见大量胞核完整的运动神经元,IR组脊髓前角内大量空泡形成,神经元结构缺失,胞质呈嗜酸性,而IPC组脊髓前角存在部分结构正常的神经元。结论缺血后处理可能通过上调脊髓组织中miR-125b的表达,减少脊髓组织前角运动神经元凋亡,从而改善大鼠SCIRI损伤。     

Administration of carnosine in the treatment of acute spinal cord injury

l-Carnosine is an endogenously synthesized dipeptide composed of beta-alanine and l-histidine. It acts as a free radical scavenger and possesses antioxidant properties. l-Carnosine reduces proinflammatory and profibrotic cytokines such as transforming growth factor-beta (TGF-beta), interleukin (IL)-1, and tumor necrosis factor (TNF)-alpha in different experimental settings. In the present study, we investigated the efficacy of l and d-carnosine on the animal model of spinal cord injury (SCI). The spinal cord was exposed via a four-level T5–T8 laminectomy and SCI was produced by extradural compression of the spinal cord at level T6–T7 using an aneurysm clip with a closing force of 24 g. Treatment with d-carnosine (150 mg/kg administered i.p., 1 h and 6 h, after SCI), but not l-carnosine significantly decreased (a) the degree of spinal cord inflammation and tissue injury (histological score), (b) neutrophil infiltration (myeloperoxidase activity), (c) nitrotyrosine formation, inducible NO synthase (iNOS) and Hsp70 expression, (d) proinflammatory cytokines, and (e) apoptosis (TUNEL staining, Fas ligand, Bax, and Bcl-2 expression). Furthermore, d-carnosine (150 mg/kg administered i.p., 1 h and 6 h, after SCI) significantly ameliorated the loss of limb function (evaluated by motor recovery score). Taken together, our results demonstrate the strong difference between l-carnosine and d-carnosine. The result strongly suggests that d-carnosine treatment reduces the development of inflammation and tissue injury associated with spinal cord trauma.     

钙蛋白酶在脊髓缺血再灌注损伤中的表达

要目的探讨脊髓缺血再灌注损伤后,钙蛋白酶在脊髓组织中的表达及缺血再灌注损伤对脊髓摘运动功能的影响。方法纯种雄性成年SD大鼠,夹闭右肾动脉分支下方腹主动脉30min,观察再灌注后3、24、72h和7d时脊髓损伤节段的钙蛋白酶Ⅰ的表达,钙蛋白酶特异性底物68-KDNFP的降解以及再灌注后72h的动物后肢功能评分。结果动物脊髓再灌注损伤后3h,开始出现的钙蛋白酶Ⅰ阳性细胞,并且随着时间的延长,阳性细胞数目逐渐增多,染色深度逐渐增加,再灌注后72h最明显,与对照组相比,具有显著性差异(P<0.01)。68-KDNFP的降解产物也在再灌注损伤后3h出现,并且随着时间的延长逐渐加重,并在72h后达到高峰。再灌注后72h后肢功能出现不同程度的运动功能障碍。结论大鼠脊髓缺血再灌注损伤后出现钙蛋白酶Ⅰ的大量表达,特异性分解细胞骨架蛋白68-KDNFP,并且会引起动物后肢一定程度的功能障碍。     

The role of propriospinal interneurons in recovery from spinal cord injury

Over one hundred years ago, Sir Charles Sherrington described a population of spinal cord interneurons (INs) that connect multiple spinal cord segments and participate in complex or ‘long’ motor reflexes. These neurons were subsequently termed propriospinal neurons (PNs) and are known to play a crucial role in motor control and sensory processing. Recent work has shown that PNs may also be an important substrate for recovery from spinal cord injury (SCI) as they contribute to plastic reorganisation of spinal circuits. The location, inter-segmental projection pattern and sheer number of PNs mean that after SCI, a significant number of them are capable of ‘bridging’ an incomplete spinal cord lesion. When these properties are combined with the capacity of PNs to activate and coordinate locomotor central pattern generators (CPGs), it is clear they are ideally placed to assist locomotor recovery. Here we summarise the anatomy, organisation and function of PNs in the uninjured spinal cord, briefly outline the pathophysiology of SCI, describe how PNs contribute to recovery of motor function, and finally, we discuss the mechanisms that underlie PN plasticity. We propose there are two major challenges for PN research. The first is to learn more about ways we can promote PN plasticity and manipulate the ‘hostile’ micro-environment that limits regeneration in the damaged spinal cord. The second is to study the cellular/intrinsic properties of PNs to better understand their function in both the normal and injured spinal cord.This article is part of a Special Issue entitled ‘Synaptic Plasticity & Interneurons’.     

脊髓损伤的药物治疗新进展

脊髓损伤(Spinal cord injury,SCI)是严重危害人类健康的疾病,尤其是继发性的损伤导致的神经功能障碍给人们的生活带来了严重的影响。对SCI的治疗方法虽很多,但治疗效果并不十分理想。近年来药物治疗脊髓继发性损伤成为研究的重点,如何针对脊髓损伤后的继发性损伤的复杂机制进行有效的防治成为治疗脊髓损伤的关键。本文就近年来国内外药物治疗脊髓损伤的研究的最新进展作一综述。     

胸腰椎爆裂性骨折椎管静态侵占与脊髓损伤的关系

目的 :探讨胸腰椎爆裂性骨折椎管静态侵占与脊髓损伤的关系。方法 :对56例胸腰椎爆裂性骨折病人进行CT扫描 ,测量椎管矢状径和椎管面积 ,通过计算骨折椎的椎管狭窄率和椎管侵占率来反映爆裂性骨折的椎管静态侵占程度 ,并对病人的神经功能状况进行ASIA损伤分级和运动评分 ,对不同神经功能状况的椎管静态侵占进行比较。结果 :脊髓损伤组与无脊髓损伤组的椎管狭窄及椎管侵占率的差异无显著性 (P>0 05) ;31例脊髓损伤病人低运动评分组 (<25分 )与高运动评分组 (≥5分 )的椎管狭窄率和椎管侵占率的差异有显著性 (P<0 05) ,椎管狭窄率和椎管侵占率与ASIA损伤分级和运动评分呈负相关 (rs= -0.46～ -0.52,P≤0 01)。结论 :椎管静态侵占对胸腰椎爆裂性骨折的脊髓损伤结果有影响 ,椎管狭窄率和椎管侵占率在一定程度上能够反映神经功能的损伤程度     

N-乙酰半胱氨酸对大鼠急性脊髓损伤后继发性脊髓损伤的保护作用

目的 探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对大鼠脊髓急性损伤后继发性脊髓损伤的保护机制.方法 成年SD大鼠18只随机均分成单纯椎板切除(对照组)、急性脊髓损伤(损伤组)和急性脊髓损伤后NAC治疗(治疗组)三组.用30 g力量动脉瘤夹从两侧夹闭脊髓30 s建立脊髓损伤模型.治疗组术后15 min、1、2和3d分别予NAC 150 mg/kg腹腔注射;对照组和损伤组腹腔注射等量生理盐水.所有动物于术后3d处死取材,用凝胶电泳迁移率分析和免疫组化检测脊髓组织中核因子κB(NF-κB),ELISA法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6表达.结果 损伤组脊髓组织中NF-κB、TNF-α、IL-1β和IL-6水平均比对照组升高(P＜0.05),治疗组脊髓组织中各因子水平均比损伤组显著降低(P＜0.05).结论 NAC可以通过抑制大鼠急性脊髓损伤后NF-κB的活性,进一步下调TNF-α、IL-1β和IL-6的表达,从而减轻继发性炎症反应所导致的脊髓损伤.     

夹脊电针对脊髓损伤大鼠联合行为评分分值的影响

目的 探讨夹脊电针治疗脊髓损伤的机制。方法 选用Wistar健康雄性大鼠，随机分为电针密波治疗组、地塞米松组、模型组及假手术组。采用改良的Allen’s捶击法致大鼠T11-12脊髓损伤．观察脊髓损伤早期CBS的表达。结果 伤后6h内进行治疗，能更好地促进损伤大鼠的感觉、运动功能恢复．并且脊髓损伤早期．地塞米松治疗疗效优于密波组（P〈0．05）；脊髓损伤中晚期．密波组疗效好于地塞米松组（P〈0．05）。结论 夹脊电针能改善SCI大鼠运动功能及感觉功能，密波组好于地塞米松组。