分泌抗丙型肝炎病毒NS5a蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株的建立…

制备抗丙型肝炎（丙肝）病毒（ＨＣＶ）－ＮＳ５ａ重组蛋白的单克隆抗体（单抗），并探讨基估临床论断中的应用价值。方法 通过常规细胞融合技术制备分泌单抗的杂交瘤细胞株，用含该杂交瘤细胞的腹水对石蜡包埋肝组织细胞中的ＨＣＶ－ＮＳ５ａ抗原进行免疫组化测定，同时用抑制法检测６７例丙肝血清中的ＨＣＶＮＳ５display status     

抗HCV NS3抗原单克隆抗体的研制与初步鉴

目的：为研制抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ３抗原单克隆抗体,用于检测丙肝患者血清中的ＨＣＶＮＳ３抗原。方法：用基因工程表达的ＨＣＶ非结构区ＮＳ３蛋白与鼠血清白蛋白交联后,免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,用杂交瘤技术获得能分泌单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的细胞株。结果：获得有实用价值的两株ＭｃＡｂ。两株ＭｃＡｂ与免疫抗原有较强的抗原－抗体反应,与ＨＣＶＮＳ４、ＮＳ５及核心区Ｃ３３肽、ＣＰ９、ＣＰ１０抗原无反应性,在竞争ＥＬＩＳＡ中,对ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性血清有较好的抑制作用。结论：用基因工程表达的ＨＣＶ非结构区ＮＳ３蛋白,能够制备出有实用价值的单克隆抗体。     

一种单纯疱疹病毒共有型单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的：建立能稳定分泌单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）共有型单克隆抗体（Ｍａｂ）的细胞株并进行初步鉴定。方法：本研究利用杂交瘤技术建立了 １３株能稳定分泌抗 ＨＳＶ 特异性 Ｍａｂ的杂交瘤细胞株,其中 ５株能稳定分泌抗 ＨＳＶ型共有单克隆抗体（５Ｂ４－２、５Ｂ４－６、６Ｂ３－２－３、Ｄｂ４、Ｅｂ４）,并对５Ｂ４－６株进行了初步鉴定。结果：免疫双扩散法确定Ｍａｂ５Ｂ４－６的 Ｉｇ类型为 ＩｇＧ２ｂ。经微量免疫荧光法（Ｍｉｃｒｏ－ＩＦＡ）法测定杂交瘤培养上清及腹水中单抗效价,分别为 １∶１６及１∶２０４８０。杂交瘤细胞核型分析显示其染色体数目为９１．８±６．２。杂交瘤细胞经４次克隆,传代６个月仍能稳定地分泌抗体。用免疫印渍法进一步鉴定Ｍａｂ５Ｂ４－６所结合抗原的分子量约为７７ＫＤ。结论：细胞株５Ｂ４－６能稳定分泌一种新奇的针对具有ＨＳＶ型共有抗原表位的７７ＫＤ 蛋白的特异性单抗。     

肝病患者中丙型肝炎病毒感染的免疫组化检测

以ＨＣＶＮＳ３区单克隆抗体，ＬＳＡＢ法检测了１１６例各类肝病肝组织（其中肝细胞癌５２例，肝炎后肝硬化１６例，慢性肝炎４０例，体质性黄疸８例）及６份正常肝组织（作为对照）中ＨＣＶ抗原的表达状况，结果表明，ＨＣＶ抗原在肝细胞癌，肝炎后肝硬化及慢性肝炎中检出率分别为１３．５％（７／５２），１２．５％（２／１６），１０％（４／４０），而在体质性黄疸及正常肝组织中未检出ＨＣＶ抗原，ＨＣＶ抗原可见于癌细胞或癌     

分泌抗丙型肝炎病毒NS5蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

目的建立能稳定分泌抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ５重组蛋白单克隆抗体（ＭｃＡｂ）,并对其生物学活性进行实验室鉴定。方法用重组ＨＣＶＮＳ５区蛋白为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞ＳＰ２／０进行融合,经有限稀释克隆３次后制备分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株,并用酶免疫（ＥＩＡ）法对其分泌抗体进行初步鉴定。结果融合后的阳性克隆中筛选出６株能稳定分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株,命名为２Ｃ８,２Ｄ２,１Ｄ６,２Ｇ２,１Ｆ５和１Ｆ１０。这６株ＭｃＡｂ与ＮＳ５重组抗原均有良好的反应性,杂交瘤培养上清的ＥＩＡ抗体滴度为１∶４００～１∶１６００,其中１株诱生的同系小鼠腹水滴度为１∶８００００。这６株ＭｃＡｂ均为ＩｇＧ１亚型。结论该ＭｃＡｂ的制备,可为ＨＣＶ感染者血清和肝组织中抗原检测方法的建立和生物工程药物的研制创造条件。     

丙型肝炎病毒非结构区3抗原的制备及其相应抗体的检测

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）非结构区３（ＨＣＶＮＳ３）是ＨＣＶ的一个多功能区,在ＨＣＶ复制中起重要作用,与丙型肝炎（简称丙肝）发病及转归关系密切。我们提取ＨＣＶＮＳ３不同末端蛋白作为抗原,并检测了干扰素（ＩＦＮ）治疗的ＨＣＶＲＮＡ阳性丙肝患者血清,寻...     

丙型肝炎病毒在肝组织的定位分布与病变的关系

为了探讨丙型肝炎（丙肝）病毒（ＨＣＶ）在肝组织中的分布特点与ＨＣＶ感染引起肝组织病理学变化的机理，作者应用免疫组化和原位核酸杂交方法，分别对２８例急、慢性丙肝患者肝穿刺活检组织标本听ＨＣＶ基因及其表达的ＮＳ３抗原进行了定位检测。ＨＣＶ基因的检出率是５５％，ＮＳ３抗原的检出率是８５．７％。虽然肝细胞中ＨＣＶＮＳ３的分布状态与染色的密度常因疾病类型和组织切片部位有所变化，但在急性和轻度慢性活动性丙肝患     

丙型肝炎患者肝组织中病毒抗原检测

目的研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）抗原在患者肝组织中的分布状况及其相互关系。方法采取免疫组织化学方法，用多克隆抗－ＨＣＶ和单克隆抗－ＨＣＶ－ＮＳ３、抗－ＨＣＶ－ＮＳ５，对１０７例ＨＣＶ感染患者肝组织中ＨＣＶ抗原进行检测。结果应用三种抗体均从ＨＣＶ患者肝组织中检出相应抗原，检出率分别为３８．３％，２８．０％和５２．３％；阳性颗粒定位于肝细胞浆；阳性细胞分布呈散在、弥漫状和簇状；ＨＣＶ－ＮＳ３的表达与炎症反应无明显解剖学关系，ＨＣＶ－ＮＳ５阳性细胞较常见位于炎症灶旁或灶中。结论ＨＣＶ各成分在肝组织中的表达水平存在差别；ＨＣＶ－ＮＳ５的表达可能与ＨＣＶ的致病机制有关。     

丙型肝炎患者HCV基因的检测,分型及临床分析

运用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测临床肝炎患者血清中ＨＣＶ ＲＮＡ对５４例ＨＣＶＲＮＡ阳性标本用限制性内切酶Ｓａｕ３ＡＩ／ＨａｅⅢ春５’ＮＣ区扩增产物进行酶切。结果显示４种酶切类型：ＨＣＶ Ⅰ型感染３．７％（２／５４），ＨＣＶⅡ型感染７７．８％（４２／５４），ＨＣＶⅢ，Ⅳ型感染１１．１％（６／５４），ＨＣＶⅡ／Ⅲ，Ⅳ型混合感染７．４％（４／５４）；     

庚型肝炎病毒抗原在急性重型肝炎患者肝组织中的表达及意义

目的：探讨急性重型肝炎患者肝组织中庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）的存在状况及其与发病的关系；方法：采用免疫组化方法以抗－ＨＧＶ ＮＳ５单克隆抗体对２７例急性重型肝炎患者尸检肝组织中的ＨＧＶ等抗原进行了检测；结果：２７例肝组织中检测出ＨＧＶ ＮＳ５阳性６例（２２．２％）。ＨＧＶ ＮＳ５Ａｇ阳性着色颗粒表达于残存的肝细胞胞浆内，阳性细胞呈片簇状分布于汇管区周围。６例中４例重叠有ＨＧＶ或／和ＨＣＶ感染，肝组织中     

分泌抗丙型肝炎病毒NS5蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建？…

目的 建立能稳定分泌抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ５重组蛋白单克隆抗体（ＭｃＡｂ）,并对其生物学活性进行实验室鉴定。方法 用重组ＨＣＶ ＮＳ５区蛋白为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞ＳＰ２／０进行融合,经有限稀释克隆３次后制备分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株,并用酶免疫（ＥＩＡ）法对其分泌抗体进行初步鉴定。结果 融合后的阳性克隆中筛选出６株能稳定分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株,命名为２Ｃ８,２     

丙型肝炎病毒核酸和抗体的检测及临床意义

检测了１９９５年１２月至１９９７年１２月间住院及门诊患者４２９例，体检者５０例血清的丙肝病毒核酸（ＨＣＶ－ＲＮＡ）及丙肝抗体ＩｇＧ（ＨＣＶ－ＩｇＧ），其中一项阳性者为丙肝血清标志物（ＨＣＶＭ）阳性。结果如下：１９４例肝癌患者ＨＣＶＭ阳性率为３６．０８％（７０／１９４）；９５例肝外炎症患者为４．２１％（４／９５）；６０例肝外肿瘤患者为１６．６６％（１０／６０）；３５例血液病患者为３１．４２％（１１／     

肝病患者中丙型肝炎病毒感染的免疫组化检测

以ＨＣＶＮＳ３区单克隆抗体、ＬＳＡＢ法检测了１１６例各类肝病肝组织（其中肝细胞癌５２例，肝炎后肝硬化１６例，慢性肝炎４０例，体质性黄疸８例）及６份正常肝组织（作为对照）中ＨＣＶ抗原的表达状况，结果表明，ＨＣＶ抗原在肝细胞癌、肝炎后肝硬化及慢性肝炎中检出率分别为１３．５％（７／５２）、１２．５％（２／１６）、１０％（４／４０），而在体质性黄疸及正常肝组织中未检出ＨＣＶ抗原。ＨＣＶ抗原可见于癌细胞或癌周肝细胞的胞浆或胞核中，实验结果支持ＨＣＶ与肝细胞癌的关联，ＨＣＶ感染对促使肝病的加重也具有一定影响。肝细胞癌中，胞核型ＨＣＶ抗原表达较多见。癌周组织中ＨＣＶ抗原检出率高于癌组织，提示ＨＣＶ可能主要作用于癌前病变，在肝细胞癌发生的初始阶段起作用，促使正常细胞恶性化。     

HCV核心抗原C33肽单克隆抗体的研制与初步鉴定

用ＨＣＶ核心抗原（Ｃ３３肽）与鼠血清白蛋白交联后免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，用杂交瘤技术获得有实用价值的二株ＭｃＡｂ。此二株ＭｃＡｂ除与免疫抗原有较强的抗原－抗体反应外，与ＨＣＶ核心抗原ＣＰ１０也有很好的反应；但与ＨＣＶＮＳ３、ＶＳ５及核心区ＣＰ９抗原无反应性。在竞争ＥＬＩＳＡ中对抗ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性血清有较好的抑制作用。     

杭州地区某些人群中庚型肝炎病毒抗体分布

作者采用多中心同步多肽合成技术制备ＨＧＢ多肽抗原包被的ＥＬＩＳＡ试剂，对１９９５年以来我院收治的非甲～戊肝炎患者，丙肝患者，乙肝患者，血液透析和肾移植患者，以及有偿供血员等特殊人群进行抗－ＨＧＶ抗体的检测，结果阳性检出率分别为１１．１１５，６．３８％，７．６９％，１０．００％，３．３３％表明本地区存在庚型肝炎病毒感染。     

慢性丙型肝炎患者肝内HLA-Ⅱ类抗原和丙型肝炎病毒NS_3抗原的表达

为了研究丙型肝炎的ＨＬＡ－Ⅱ类抗原相关性免疫发病机制,对４７例慢性病毒性肝炎患者的肝活检组织标本应用免疫组织化学技术研究了肝内ＨＬＡ－Ⅱ类抗原和ＨＣＶ,ＮＳ３抗原的表达。１１例慢性丙型肝炎患者中３例肝内ＨＬＡ－Ⅱ类抗原表达呈阳性,其阳性程度明显低于慢性乙型肝炎患者（１５／１９）和慢性乙型和丙型肝炎病毒重叠感染者（１５／１７）。１０例患者肝细胞内ＨＣＶ,ＮＳ３抗原阳性,其中６例为慢性丙型肝炎患者,４例为慢性乙型和丙型肝炎病毒重叠感染者。慢性乙型肝炎患者的肝细胞中无ＨＣＶ,ＮＳ３抗原阳性。尽管在ＨＣＶ,ＮＳ３抗原阳性肝细胞表面未发现ＨＬＡ－Ⅱ类抗原,但ＨＬＡ－Ⅱ类抗原阳性表达明显与肝组织损伤的严重性有关。因此肝内ＨＬＡ－Ⅱ类抗原的表达可能在慢性丙型肝炎患者的免疫发病中有一定的作用     

应用巢式多聚合酶链反应检测母婴血清及母乳中乙型肝炎病毒DNA的意义

采用巢式多聚合酶链反应（Ｎ－ＰＣＲ）结合酶联免疫检测ＡＳＣ妇女３０例母婴血清和初乳的酶联标志物和ＨＢＶ－ＤＮＡ，同时取１１例健康产妇对照。结果：３０例母血清有１９例ＨＢＶ－ＤＮＡ（＋），占６３．３％；初乳１６例感染，占５３．３％，呈ＤＮＡ（＋）７例，占２３．３％；婴儿３１例（有１例双胎）中有２０例感染，占６４．５％，呈ＤＮＡ（＋）者４例。初乳ＤＮＡ（＋）中５例和婴儿ＤＮＡ（＋）４例均在母血小三阳、ＤＮＡ（＋）组。说明ＡＳＣ妇女可以母婴宫内传播和病毒进入乳汁，Ｎ－ＰＣＲ和酶联免疫检测结合可提高诊断率，并提示新生儿期必须联合预防接种，仍可哺乳。     

丙型肝炎病毒家庭内传播的4年随访和分子流行病学调查

为研究ＨＣＶ感染的家庭内聚集现象，对某自然村ＨＣＶ感染状况进行了４年随访和分子流行病学调查。应用逆转录巢式多聚酶链反应（ＲＴ－ＮｅｓｔｅｄＰＣＲ）、ＯｋａｍｏｔｏＨＣＶ基因分型法及ＳＳＣＰ法分析ＨＣＶ核心区基因变异。结果：抗ＨＣＶ和／或ＨＣＶＲＮＡ阳性率由４年前的２１．３１％增加至４３．１８％。家庭成员有≥２人抗ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ阳性的５２户，也较４年前增加３．４６倍。经用Ｏｋａｍｏｔｏ法基因分型［１］，该村ＨＣＶ基因型主要为１ｂ／Ⅱ型，占９０．６７％，其余为２ａ／Ⅲ型，占１．３３％，两者混合感染占２．００％。进一步用ＤＮＡ单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ）技术对ＨＣＶ基因变异进行研究，发现在同一家庭内的成员间ＨＣＶｃＤＮＡ的单链构象一致，但不同家庭的成员间ＨＣＶｃＤＮＡ的单链构象呈现多态性。表明该村近４年来ＨＣＶ感染明显增高主要由家庭成员传播所致。ＳＳＣＰ分析比基因分型更适用于ＨＣＶ感染的分子流行病学调查。     

丙型肝炎特点（54例报告）

本文报告抗－ＨＣＶ、ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性确诊的丙型病毒性肝炎（丙肝）５４例。有输血及血制品史者３８例（７０．４％），平均年龄４５．１岁，男性３８例、女性１６例。临床表现复杂，慢性肝病占６５％，重叠感染５５．６％，病死率９．３％。     

丙型肝炎特点（54例报告）

本文报告抗－ＨＣＶ、ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性确诊的丙型病毒性肝炎（丙肝）５４例。有输血及血制品史者３８例（７０．４％），平均年龄４５．１岁，男性３８例、女性１６例。临床表现复杂，慢性肝病占６５％，重叠感染５５．６％，病死率９．３％。