角质细胞生长因子对口腔黏膜上皮细胞凋亡的作用研究

目的 研究不同浓度角质细胞生长因子（KGF）对口腔黏膜上皮细胞凋亡的作用,为探讨KGF在口腔黏膜病发生发展中的作用提供依据。方法 将不同浓度的KGF（对照组0 ng·mL-1,实验1组5 ng·mL-1,实验2组25 ng·mL-1,实验3组50 ng·mL-1）分别加入体外培养的口腔黏膜上皮细胞,培养12、24、48 h后,倒置显微镜下观察其对细胞形态的影响,并用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,荧光实时定量检测细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA的表达水平。结果 1）实验组较对照组细胞贴壁明显,且48 h时实验3组细胞核仁明显。2）培养48 h时,4组之间的细胞凋亡率、Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达均有统计学差异,随着KGF浓度的增加,细胞凋亡率和Bax mRNA表达逐渐降低,Bcl-2 mRNA表达逐渐升高（P<0.05）。结论 KGF可通过上调Bcl-2 mRNA和下调Bax mRNA的表达抑制上皮细胞的凋亡。     

慢病毒载体介导Golli-MBP基因过表达的体内实验初探

目的：通过过表达Golli?MBP基因尝试诱导口腔黏膜产生OLP病损,探讨Golli?MBP在OLP发病中的作用。方法：通过动物体内实验利用慢病毒载体系统包装诱导Golli?MBP过表达基因,将其注射于叙利亚金黄地鼠口腔黏膜下,肉眼观察黏膜改变,HE染色观察组织学改变,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化法检测细胞增殖情况。结果：Golli?MBP未能诱导实验动物口腔黏膜产生肉眼可见的OLP病损变化,7天实验组上皮层细胞凋亡率与对照组无明显差异（ P＞0．05）,14天实验组上皮层细胞凋亡率低于对照组（P＜0．05）。7天及14天实验组上皮层细胞增殖率低于对照组（P＜0．05）。结论：Golli?MBP 过表达能够抑制叙利亚金黄地鼠颊囊黏膜上皮细胞增殖和凋亡,但未能成功诱导其黏膜产生OLP病损。     

白细胞介素-1β与地塞米松对成纤维细胞分泌角质细胞生长因子的影响

目的 检测在体外培养的人正常口腔黏膜及口腔扁平苔藓(OLP)黏膜成纤维细胞中加入不同浓度的人白细胞介素-1β(IL-1β)和地塞米松(DEX)后,对成纤维细胞分泌和表达角质细胞生长因子(KGF)的影响.方法 将IL-1β和DEX配制成3个浓度梯度,分别加入到体外培养的人正常口腔黏膜和OLP黏膜成纤维细胞中,收集培养72 h后各组细胞上清液,应用酶联免疫吸附剂测定(ELISA)技术检测每组细胞上清液中KGF蛋白浓度的变化.提取各组细胞RNA,用聚合酶链反应(PCR)法检测KGF mRNA表达量的变化.结果 ELISA及PCR结果显示:加入IL-1β的正常口腔黏膜及OLP黏膜成纤维细胞培养上清液中,KGF蛋白浓度较自身对照组均升高,同时KGF mRNA表达量较对照组有较明显的上升趋势.正常口腔黏膜及OLP黏膜成纤维细胞加DEX的上清液中,KGF蛋白浓度较自身对照组均降低,KGFmRNA表达量较对照组则有降低的趋势.结论 IL-1β对正常口腔黏膜成纤维细胞及OLP黏膜成纤维细胞分泌及表达KGF有促进作用;而DEX对正常口腔黏膜成纤维细胞及OLP黏膜成纤维细胞分泌和表达KGF有抑制作用.     

硝苯地平对体外培养的人牙龈上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的：通过观察硝苯地平（NIF）对牙龈上皮细胞增殖和凋亡的影响，探讨硝苯地平致龈增生的机理。方法：采用MTT法检测不同浓度NIF对体外培养的人牙龈上皮细胞增殖的影响；采用流式细胞仪（R、M）检测上皮细胞受NIF诱导后凋亡小体形成百分率。结果：24h、48h、72h后各加药组与对照组之间MTT值没有明显差异；48h后高浓度药物（1200μg／1）凋亡小体形成率小于对照组（P〈0．05），且主要作用于细胞G0／C1期和S期。绪论：硝苯地平对体外培养的人牙龈上皮细胞的增殖没有直接刺激作用，但高浓度的NIF可抑制细胞凋亡。     

碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜细胞增殖与ALP活性表达的影响

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）以人牙周膜细胞的增殖与碱性磷酸酶（ALP）活性表达的影响,为bFGF应用于牙周组织的再生与修复提供实验依据。方法：采用MTT和ALP活性检测法,观察不同浓度（0．1－10ng/ml)的bFGF第24、48和72小时对5％和10％胎牛血清（FBS）体外培养的第3代人牙周膜细胞（PDLCs）的作用。结果：与对照组比较,①10％FBS,5ng／ml和10ng／ml的bFGF在第24、48、72小时,可显著促进PDLCs的增殖（P＜0．01－0．05）,5％,10ng／ml的bFGF在24、48小时,5ng／ml的bFGF在24小时对PDLCs有显著促增殖作用（P＜0．01）。②10％FBS,1ng／ml的bFGF在48、72小时,5ng／ml的bFGF在24、48、72小时,10ng／mlbFGF在48小时对PDLCs有显著增强ALP活性的作用P＜0．01－0．05）;5％FBS,10ng／ml的bFGF在24、72小时对PDLCs有显著增强ALP活性的作用（P＜0．05）。结论：以上结果提示：在一定的作用时间内一定条件下,5ng／ml和10ng／ml的bFGF可促进人PDLCs的生长和分化。     

淫羊藿苷对腺样囊性癌细胞Bcl－2、Bax表达的影响

目的：①探讨淫羊藿苷体外抑制涎腺腺样囊性癌细胞（SACC－M）的最佳浓度和时间点及作用于SACC－M后相关细胞因子Bcl－2、Bax的表达变化。方法：①以不同浓度（0μg／mL、6．25μg／mL、12．5μg／mL、25μg／mL、50μg／mL、100μg／mL、200μg／mL、400μg／mL、800μg／mL）的淫羊藿苷分别作用于SACC－M（24 h、48 h、72 h）,选择淫羊藿苷对高转移SACC－M细胞株的最佳作用浓度和作用时间,通过形态学观察淫羊藿苷对SACC－M细胞形态的改变。②正常对照组中加入同种剂量的药物溶剂,实验组中加入不同浓度的淫羊藿苷处理高转移SACC－M细胞株,免疫组化检测Bcl－2、Bax表达量的变化。结果：①与对照组（0μg／mL）相比较,淫羊藿苷在不同浓度（50、100、200、400、800μg／mL）对SACC－M细胞株的增殖具有抑制作用（P＜0．05）。在同一药物浓度下,从50μg／mL浓度开始,与同浓度24 h淫羊藿苷比较有统计学意义（P＜0．05）,但到了800μg／mL浓度时已经没有时间依赖性（P＞0．05）。当用（50、100、200、400μg／mL）作用于细胞24 h后,显微镜下观察显示ACC－M细胞具有典型的凋亡细胞形态学特征。②淫羊藿苷能呈浓度依赖性下调ACC－M中Bcl－2同时上调Bax蛋白的表达。结论：体外淫羊藿苷可以抑制ACC－M的增殖,其机制可能与下调Bcl－2和上调Bax的表达有关。     

人骨形成蛋白－2对人牙髓细胞增殖和分化的影响

目的：探讨骨形成蛋白－2（BMP－2）对体外培养的人牙髓细胞（DPCs）增殖和分化的影响。方法：体外培养人DPCs,分别与不同浓度的BMP－2（50、100、200 ng／mL）共同培养;分别检测各组细胞的增殖情况、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性、钙化结节形成量以及牙本质涎磷蛋白（DSPP）、牙本质基质蛋白－1（DMP－1）各成牙本质相关基因的表达水平。结果：50～200 ng／mL 的BMP－2对DPCs的增殖均无明显促进作用;但是,能呈剂量依赖性地提高细胞的ALP活性、促进钙化结节的形成、上调DSPP和DMP－1 mRNA的表达水平,各浓度BMP－2组均高于对照组（P ＜0．05）。结论：BMP－2对体外培养的人DPCs增殖无明显影响,但可明显促进DPCs的成牙本质细胞方向分化。     

口腔黏膜癌前病变和口腔鳞癌组织Fas/FasL的表达及其意义

目的：研究调亡相关基因Fas／FasL在正常口腔黏膜、上皮异常增生和口腔鳞癌组织中的表达及意义。方法：应用免疫组织化学方法检测10例正常口腔黏膜、26例上皮异常增生、38例口腔鳞癌组织及肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）中Fas／FasL的表达。结果：Fas在正常口腔黏膜中广泛表达;上皮异常增生和鳞癌组织表达明显下调（P〈0．05）;Fas表达与口腔鳞癌分化程度有关;FasL在正常口腔黏膜不表达;上皮异常增生和鳞癌组织表达明显上调（P〈0．05）;FasL表达与口腔鳞癌分化程度无关（P〉0．05）;TIL细胞Fas、FasL阳性表达率为81．6％和84．2％。结论：Fas表达与口腔黏膜上皮细胞的自然分化成熟、衰老及口腔鳞癌的形成和肿瘤的恶性度有关;FasL的表达上调可能是口腔鳞癌组织免疫反攻击的体现;Fas、FasL可作为监测口腔上皮癌变的标记物。     

甘草甜素对人颊黏膜成纤维细胞炎症反应的初步研究

目的：观察甘草甜素对经脂多糖刺激后体外培养的人颊黏膜成纤维细胞炎症反应的作用。方法：取正常人颊黏膜,组织块法体外培养颊黏膜成纤维细胞,加入不同浓度的甘草甜素,培养24h、48h、72h后,经MTT法检测每孔的光密度值（OD）。用脂多糖（LPS）对细胞进行干预,用来模拟口腔扁平苔藓（0LP）的炎症状态。以第4代成纤维细胞为对照组、加入脂多糖为炎症组、同时加入脂多糖和甘草甜素为实验组,用ELISA法分别检测三组白细胞介素-6（IL-6）的浓度。结果：MTT法测出甘草甜素在一定范围内浓度越高、时间越长,抑制细胞的增殖作用就越强;ELISA法检测出炎症组较对照组上清液中IL-6浓度明显升高,实验组较炎症组上清液中IL-6浓度明显降低。结论：甘草甜素可明显抑制由脂多糖刺激的人颊黏膜成纤维细胞分泌IL-6。甘草甜素在治疗OLP的炎症反应中有重要作用。     

淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖和骨保护素mRNA表达的影响

目的：研究淫羊藿苷对人牙周膜细胞（periodontal ligament cells，PDLCs）增殖和骨保护素（osteoprotegerin，OPG）mRNA表达的影响。方法：体外培养人PDLCs，用MTT法检测不同浓度的淫羊藿苷（0．001、0．01、0、1μg／mL）、不同时间（24、48、72、96h）作用下人PDLCs的增殖水平；RT-PCR检测OPG mRNA的表达。结果：淫羊藿苷（0、001-0．1μg／mL）对人PDLCs增殖和OPG mRNA表达具有促进作用（P〈0．01），0．01μg／mL浓度作用最明显。结论：淫羊藿苷能够促进人PDLCs增殖和OPG mRNA表达。     

低氧对人牙周膜细胞骨向分化能力的影响

目的 研究低氧对人牙周膜细胞（PDLC）的碱性磷酸酶（ALP）活性及成骨相关基因表达的影响.方法 采用组织块法体外分离培养人PDLC;取第3 ～ 5 代细胞分别在常氧和低氧条件下培养后检测其ALP 活性;并通过荧光定量聚合酶链反应（PCR）观察低氧处理后人PDLC 中成骨相关基因的表达变化.结果 低氧12、24、36、48 h 组ALP 活性均比常氧组高;其中低氧48 h 组与常氧组相比明显升高,差异有统计学意义（P ＜ 0.05）;低氧48 h 组ALP mRNA 表达比常氧组高,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）;4 个时间点低氧组骨钙蛋白（OCN）mRNA 表达均比常氧组高,且差异有统计学意义（12、36 h：P ＜ 0.05;24、48 h：P ＜ 0.01）.结论 低氧增强人PDLC 的ALP 活性,上调ALP mRNA 和OCN mRNA 的表达,促进人PDLC 向成骨细胞分化,同时促进成骨细胞的矿化,提示低氧环境对人PDLC 的骨向分化功能产生一定的影响.     

α亚族趋化因子受体3在人舌鳞癌细胞株的表达及其配体干扰素诱导蛋白-10对CAL-27细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨α亚族趋化因子受体3(CXC-chemokine receptor 3,CXCR3)在不同人舌鳞癌细胞株的表达以及其配体干扰素诱导蛋白-10(interferon induced protein 10,IP-10)对人舌鳞癌细胞株CAL-27增殖和凋亡的影响。方法采用蛋白印迹法和免疫荧光染色对3种人舌鳞癌细胞株(CAL-27、UM-1、Tca-8113)IP-10的相应受体CXCR3的表达进行检测。CAL-27细胞被分为3个实验组和1个对照组,3个实验组根据IP-10的刺激浓度,分为10 ng/mL组、20 ng/mL组、40 ng/mL组,对照组不予刺激。12 h、24 h、48 h时检测4组细胞的增殖;24 h时用流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果 CXCR3在3种人舌鳞癌细胞株均有表达,并且CXCR3在3株细胞的胞膜及胞质内均有染色。和对照组相比,12 h、24 h时,3种浓度的IP-10均能够促进CAL-27细胞增殖(P<0.05);在48 h时,只有40 ng/mL的IP-10能够促进CAL-27细胞增殖(P<0.05),10 ng/mL、20 ng/mL的IP-10对CAL-27细胞的增殖无促进作用(P>0.05)。在24 h时,对照组、10 ng/mL组、20 ng/mL组和40 ng/mL组的细胞凋亡率分别为(0.053 3±0.472 6)%、(3.236 7±0.940 0)%、(4.516 7±1.115 4)%和(3.363 3±0.571 2)%,3种浓度IP-10均能够促进CAL-27细胞的凋亡(P<0.05),但3个实验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论CXCR3在3种人舌鳞癌细胞株的胞膜及胞质内均有表达;IP-10既能促进CAL-27细胞的增殖,又能促进其凋亡。随着时间的延长,IP-10的促增殖作用减弱,而这种减弱可能是由IP-10的促凋亡作用的逐步发挥所引起的。     

B7-H3在口腔鳞癌细胞中的表达及其意义

目的：研究B7-H3在口腔鳞癌组织和正常口腔黏膜组织中的表达差异,以及B7-H3对口腔鳞癌细胞生物学的影响。方法：RT-qPCR、免疫组化检测B7-H3在口腔鳞癌组织和正常口腔黏膜组织的表达差异;构建B7-H3腺病毒表达载体,感染人舌鳞癌细胞Tca8113,CCK-8、PI染色流式细胞仪检测B7-H3高表达对Tca8113细胞增殖和细胞周期的影响。采用SPSS11.0软件包对数据进行统计学处理。结果：RT-qPCR结果显示,口腔鳞癌组织B7-H3 mRNA表达为3.021±0.2310,显著高于正常口腔黏膜组织（0.6002±0.1010）;与对照组比较,10、50、100感染复数组在作用24h呈现促进细胞增殖作用,S期细胞比例显著增加,72h时增殖作用最强（P〈0.05）;与感染复数1组比较,同时间段50、100组促细胞增殖作用和S期细胞比例显著增加（P〈0.05）,50与100组比较无显著差异（P〉0.05）。结论：口腔鳞癌组织B7-H3mRNA和蛋白表达显著高于正常口腔黏膜组织;B7-H3高表达,可促进口腔鳞癌细胞增殖。     

模拟微重力环境对人牙髓干细胞体外增殖能力的影响

目的：研究模拟微重力环境对人牙髓干细胞（human dental pulp stem cells,hDPSCs）在PLGA支架上体外增殖能力的影响。方法：将分离、鉴定后的人牙髓干细胞接种在PLGA支架上,采用MTT法检测普通环境和模拟微重力环境中培养24、48、72h的人牙髓干细胞在PLGA支架上的细胞活性。DAPI荧光染色和流式细胞术比较牙髓干细胞在两种环境培养3d的细胞数量以及细胞周期分布情况。结果：MTT显示模拟微重力组中各时间点的A值均高于普通环境培养组;DAPI荧光染色显示在模拟微重力下培养3d的人牙髓干细胞数量明显多于普通环境培养组;细胞周期分析结果表明模拟微重力组中S期细胞比例明显高于普通环境培养组（P〈0.05）。结论：接种在PLGA支架上的人牙髓干细胞在模拟微重力环境下较普通环境具有更高的体外增殖能力。     

糖基化终产物对人牙龈成纤维细胞2种基质金属蛋白酶表达的影响

目的研究糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)对人牙龈成纤维细胞(human gingivalfibroblasts,HGF)表达基质金属蛋白酶-1(matrix matelloproteinase-1,MMP-1)和基质金属蛋白酶-8(matrix matallo-proteinase-8,MMP-8)的影响,探讨糖尿病加速牙周炎发展的可能机制。方法将培养的HGF随机分成6组:空白对照组只加入培养液;阴性对照组仅加入含50μg/mL人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)的培养液;4个含AGE-HSA的实验组分别加入含0.5、5、50、100μg/mL AGE-HSA的培养液。培养24、48、72 h后,分别应用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和实时定量聚合酶链反应(real-time quantitativepolymerase chain reaction,QPCR)检测细胞MMP-1、MMP-8的蛋白和mRNA表达。结果 100μg/mL AGE-HSA组培养24、48和72 h后,MMP-1水平明显高于阴性对照组、空白对照组及0.5μg/mL AGE-HSA组,差异具有统计学意义(P<0.05)。各浓度AGE-HSA组MMP-1 mRNA水平均显著高于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。各浓度AGE-HSA组MMP-8水平与阴性对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05),MMP-8 mRNA表达均为阴性。结论 AGEs可能通过促进HGF合成MMP-1,介导胶原降解,从而加重糖尿病患者的牙周组织破坏,尚不能说AGEs影响MMP-8的表达。     

白介素10对伴放线放线杆菌内毒素诱导兔肺巨噬细胞凋亡的影响

目的：探讨白介素10（IL-10）对伴放线放线杆菌内毒素（Aa—LPS）体外诱导兔肺巨噬细胞凋亡作用的影响。方法：经兔气管肺泡灌洗获得肺泡巨噬细胞,随机分为空白对照组、Aa—LPS组、Aa—LPS＋IL-10组。按实验分组加入Aa—LPS（1汕g／mL）、IL-lo（o．1p．g／mL）,24h后裂解细胞,荧光定量PCR法检测促凋亡基因bax、p53和caspase-3的表达。结果：Aa—LPS组bax、caspase-3的表达较空白对照组明显升高（P〈0．05）,p53的表达与空白对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。Aa—LPS＋IL-10组bax、p53、caspase．3的表达较Aa—LPS组降低（P〈0．05）。结论：Aa—LPS体外对肺巨噬细胞有促凋亡作用,IL-10可抑制Aa—LPS的促凋亡作用,其机制可能与细胞凋亡的线粒体途径有关。     

IL-lβ和TNF-α对人牙周膜细胞内LIF表达的影响

目的：探讨白细胞介素-lβ（IL-lβ）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对牙周膜细胞内白血病抑制因子（LIF）表达的影响。方法：体外分离培养鉴定人牙周韧带细胞（HPDLC）,取第3代细胞用于实验,利用牙周改建中高表达因子TNF-α和IL-1β刺激HPDLC后,实时定量反转录-聚合酶链反应检测LIF mRNA的表达。结果：IL-1β在浓度为0．1 ng/mL和5 ng/mL时,均显著促进LIF的分泌（P ＜0．01）。TNF-α在浓度为10 ng/mL时,明显促进LIF的分泌（P ＜0．05）。结论：牙周改建中高表达细胞因子IL-1β和TNF-α可促进牙周膜细胞中LIF的表达。     

不同根管预备方法对老年人根管再治疗术后疼痛的影响

目的：对比ProTaper镍钛系统冠向下预备法和采用不锈钢手用锉逐步后退技术两种根管预备方法对老年人根管再治疗术后疼痛的影响。方法：选择106颗首次根管治疗失败再治疗患牙随机分为实验组与对照组,实验组使用ProTaper Universal再治疗器械（D1、 D2、 D3）去除根管内充填物后, ProTaper（F1、 F2、 F3）进行根管预备,对照组采用不锈钢手用锉去除牙胶后以逐步后退法预备根管,观察两组术后1h、6h、12h、24h、48h、7d VAS自评分值,24h与7d临床评定的疼痛发生率。结果：两组术后疼痛在6h出现,12h达到峰值,此后呈下降趋势,7d时已完全缓解;实验组在疼痛发生期间（6、12、24、48h 4个时间点）VAS自评分值均低于对照组,差异有统计学意义（P值分别为0.000、0.000、0.000、0.004, P〈0.05）;24h临床评定疼痛发生率实验组为11.1%,对照组为34.6%,差异有统计学意义（P=0.042, P〈0.05）;7d时临床评定疼痛发生率实验组为1.85%,对照组为3.85%,差异无统计学意义（P=0.807, P〈0.05）。结论：两种根管预备方法均会引起再治疗术后疼痛,使用ProTaper镍钛系统能有效降低老年人根管再治疗术后疼痛的发生。     

模拟失重后再超重对猴咬肌细胞SERCA mRNA表达的影响

目的：探讨模拟失重后再超重环境对猴咬肌细胞SERCA1a、SERCA2a mRNA表达的影响。方法：健康雄性猕猴23只,随机分为正常对照组（A组）和实验组：模拟失重（B组）,模拟超重（C组）,失重后再超重分别为＋11Gx/270s（D1组）、＋13Gx/230s（D2组）、＋15Gx/200s（D3组）和＋13Gx/230s恢复第10d（D4组）。实验期间,各组喂养条件相同,在实验结束后动物恢复第2d（A、B、C、D1、D2、D3组）和恢复第10d（D4组）处死取材,组织置于液氮中保存。采用常规方法制作冰冻切片,通过HE染色观察猴咬肌细胞组织形态学变化;使用RT-PCR方法检测猴咬肌细胞SERCA1a、SERCA2a mRNA的表达。结果：组织病理学观察可见,对照组猴咬肌细胞结构正常;实验组咬肌细胞胞膜边界模糊不清,间质增宽;模拟失重后再超重组肌细胞肿胀,偶见细胞核呈扁平状,移位胞浆中央。采用RT-PCR检测发现,各实验组与对照组相比,猴咬肌细胞SERCA1a mRNA表达均增强,SERCA2a mRNA除D4组外,其他实验组表达增强,其差异有统计学意义（P〈0.05）;D2、D3组与B组相比,SERCA1a mRNA表达升高,差异显著（P〈0.01）;D2、D3组与C组比较,SERCA1a mRNA表达增强,有显著差异（P〈0.01）;D4组与D2组比较,SERCA1a、SERCA2a mRNA表达均下降,有统计学意义（P〈0.05）。结论：模拟失重、模拟超重和模拟失重后再超重环境均可造成猴咬肌细胞组织形态学不同程度地改变,并可引起SERCA1a、SERCA2a mRNA表达增强,其中模拟失重后再超重恢复第10d咬肌细胞组织形态学趋于正常结构,SERCA1a、SERCA2a mRNA表达呈恢复下降趋势。