HIF-1α反义寡核苷酸对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α和p53表达的影响

目的：观察缺氧诱导因子HIF-1α反义寡核苷酸（antisense oligonucleotides,ASODN）在缺氧环境下对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α和p53表达的影响。方法：设计针对HIF-1α亚基的mRNA反义和正义寡核苷酸（sense oligodeoxynucleotides,SODN）,并建立骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型,观察不同时相5μmol/L的HIF-1αASODN对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α和p53表达的影响。半定量RT-PCR方法检测HIF-1α和p53 mRNA的转录水平,免疫组化SP法和免疫印迹（Western blot）检测HIF-1α和p53蛋白表达情况。结果：与常氧组比较,单纯缺氧组及SODN缺氧组的蛋白表达水平随缺氧时间延长明显升高（P〈0.05）;而p53 mRNA以及蛋白的表达水平较常氧组均显著增强（P〈0.05）。在ASODN缺氧组,HIF-1α蛋白表达水平显著降低（P〈0.05）;p53 mRNA及其蛋白的表达水平也明显减弱（P〈0.05）。结论：缺氧可以通过诱导野生型p53的突变使HIF-1α稳定表达。而ASODN明显抑制HIF-1α的表达,且使突变型p53的表达水平显著下降,这说明HIF-1α可能在缺氧诱导野生型p53突变方面有一定的作用。     

HIF-1α反义寡核苷酸对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α、P53、Bcl-2表达及凋亡的影响

背景与目的：本实验研究缺氧诱导因子HIF-1α反义寡核苷酸（antisense oligonueleotides，ASODN）在缺氧环境下对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α、P53、Bel-2表达及细胞凋亡的影响，进一步探讨HIF-1α在缺氧诱导肿瘤细胞凋亡的过程中的作用机制。方法：设计针对HIF-1α RNA亚基的反义、正义寡核苷酸（sense oligodeoxynueleotides，SODN），并建立骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型，观察缺氧培养不同时相（8、16、24h）5μmol／L的HIF-1α反义寡核苷酸对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α、P53、Bel-2表达及细胞凋亡的影响。半定量RT—PCR方法检测HIF-1α、P53和Bcl-2 mRNA的转录水平，免疫组化（SP法）和免疫印迹（Western Blot）检测HIF-1α、P53和Bcl-2蛋白表达情况。流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：HIF-1α转录水平（8～24h）单纯缺氧组（22．0％～22．6％）及SODN缺氧组（22．0％～22．8％）与常氧组（20．2％～20．9％）比较未见明显改变，而在ASODN缺氧组（16．8％～18．5％）显著降低（P〈0．01）。其蛋白表达单纯缺氧组（33．1％～88．9％）、SODN缺氧组（32．5％～88．7％）随缺氧时间延长明显升高；而P53、Bel-2 mRNA水平单纯缺氧组、SODN缺氧组较常氧组均显著增强（3．4～7．5倍不等）（P〈0．05）。其蛋白的表达这二组也较常氧组均显著增强（2～大于37倍不等）（P〈0．05）。然而在ASODN缺氧组P53、Bel-2 mRNA活性明显减弱（11．5％～13．9％）（P〈0．05），蛋白表达水平也显著降低（13．6％～35．4％）（P〈0．05）：细胞凋亡率其他三组未见明显变化，但ASODN缺氧组显著增加（P〈0．05）。结论：缺氧可以通过诱导野生型P53的突变使HIF-1α和Bcl-2的过表达，从而抑制肿瘤细胞的凋亡。而HIF-1α反义寡核苷酸抑制HIF-1α活性后，可以抑制野生型P53的突变，降低Bcl-2的表达，导致细胞凋亡的增加。     

缺氧对骨肉瘤SaOS-2细胞系HIF-1α和VEGF表达的影响

目的：观察缺氧条件下骨肉瘤SaOS-2细胞系缺氧诱导因子HIF-1α和血管生长因子VEGF表达的变化。方法：建立骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型，观察缺氧培养不同时相(8、16、24h)HIF-1α和VEGF的表达。半定量RT—PCR方法检测HIF-1α和VEGF mRNA的转录水平，免疫组化(SP法)和免疫印迹(Western blot)检测HIF-1α蛋白表达情况，免疫组化和ELISA法检测细胞和培养上清液中VEGF蛋白表达。结果：缺氧处理后，HIF-1α mRNA转录水平没有明显改变，蛋白表达随缺氧时间延长而升高。VEGF mRNA以及蛋白的表达在缺氧条件下均显著增强。结论：骨肉瘤细胞系SaOS-2在缺氧条件下．缺氧诱导因子HIF-1α和血管牛长因子VEGF蛋白表达上调。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对骨肉瘤侵袭性及HIF-1α表达的影响

目的：探讨组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase，HDAC）抑制剂体外抗骨肉瘤活性及作用机制。方法：体外去铁胺模拟低氧培养骨肉瘤MG-63细胞株，给予曲古抑霉素A（trichostatin A，TSA）处理，Transwell法检测TSA对骨肉瘤细胞侵袭性的影响，RT—PCR、Western印迹法、ELISA等方法检测TSA在不同浓度、不同作用时间点时对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α及VEGF mRNA、蛋白表达的影响。结果：骨肉瘤MG-63细胞经TSA 50、100、200、300和500 nmol／L处理后，细胞侵袭性明显降低，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；模拟低氧可以诱导HIF-1α及VEGF mRNA、蛋白的表达，TSA明显抑制HIF-1α及VEGF的表达，并呈一定的量效及时效关系。结论：HDAC抑制剂具有明显的体外抗骨肉瘤活性，抑制HIF—1α的表达及抗血管生成，可作为一种通过HIF-1α靶点发挥抗血管生成作用的新型抗瘤药物。     

缺氧诱导因子HIF-1α在胃癌细胞系中的表达和意义

目的研究缺氧诱导因子HIF-1α在人多种胃癌细胞系中的表达及意义。方法分别利用RTPCR和Western blot的方法检测多种胃癌细胞系中HIF—1α的表达水平。结果常氧条件下，在永生化的胃粘膜上皮细胞系GES及多种胃癌细胞系(包括耐药细胞)中均能检测到HIF-1α mRNA的表达，其表达水平无明显差异；对部分细胞系中HIF-1α蛋白表达进行检测，同样发现常氧时即有HIF-1α的表达，但表达水平明显不同。结论常氧时在多种胃癌细胞系及永生化的胃粘膜上皮细胞系中均有HIF-1α的表达；在胃癌细胞系中，HIF-1α的调节可能主要在翻译水平而非转录水平；HIF-1α在常氧时胃癌细胞系的异常表达，提示除缺氧刺激外，非缺氧因素可能也在胃癌的发生、发展中发挥了一定的作用。     

缺氧对骨肉瘤细胞系MG-63 HIF-1α、p53 、bcl-2 及细胞凋亡的影响

 目的 了解缺氧环境对骨肉瘤MG-63细胞缺氧诱导因子HIF-1α、p53、bcl-2的表达及细胞凋亡的影响。方法 建立骨肉瘤细胞体外缺氧模型,观察不同缺氧时间段（8、16、24h）HIF-1α、p53、bcl-2的表达和细胞凋亡的情况。半定量RT-PCR方法检测HIF-1α、p53、bcl-2的表达水平;免疫组化（SP法）和免疫印迹（WesternBlot）检测HIF-1α、p53、bcl-2蛋白表达情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 缺氧处理后,HIF-1α转录水平未见明显改变,蛋白表达水平随缺氧时间延长明显增强;而p53、bcl-2mR-NA及蛋白表达水平均显著增强,两者间存在一定的相关性;细胞凋亡率却未见明显增加。结论 在缺氧条件下,不能通过以HIF-1α为中介的p53依赖途径来诱导骨肉瘤MG-63细胞的凋亡,其机制可能与缺氧诱导野生型p53的突变或缺失使HIF-1α和bcl-2的过表达有关。     

HIF-1仪和HIF-2α在肝癌细胞中的时相差异表达

背景与目的：缺氧诱导因子2cL（hypoxia inducible factor-2 alpha，HIF-2旺）与缺氧诱导因子1仪结构功能相似却不可相互替代；两者在缺氧过程中的表达不一致本研究旨在检测缺氧状态下肝癌细胞中HIF-2a和HIF-1α的时相表达差异并探讨其可能的调节机制和意义方法：以1％低氧培养箱模拟细胞低氧环境，检测人肝癌SMMC-7721细胞中HIF-1α和HIF-2α mRNA量和蛋白量，以及反义HIF-1α（natural antisense hypoxia inducible factor-1α，aHIF）的mRNA量。同时应用氯化钻（CoCl2）和转录抑制剂5，6-二氯苯并咪唑1-beta-D-呋喃核糖苷（5，6-dichlorobenzimida-zole-1-beta-d-ribofuranoside，DRB）榆测HIF-1α和HIF-2α mRNA的半衰期，评价HIF-1α和HIF-2α mRNA的稳定性。结果：急性缺氧迅速诱导HIF-1α和HIF-2α蛋白在细胞内堆积。随着缺氧时间延长HIF-1α mRNA的稳定性下降，其蛋白表达降低，而HIF-2α和aHIF蛋白表达持续增高。结论：HIF-2d可能在肿瘤的放疗和化疗抗性以及与肿瘤侵袭和转移方面起着重要作用，αHIF参与了HIF-1α mRNA的调节。     

短发夹状RNA使骨肉瘤细胞缺氧诱导因子HIF-1α基因沉默

目的构建低氧诱导因子HIF-1α发夹状小干涉RNA真核表达载体，观察发夹状双链小干涉RNA对骨肉瘤细胞HIF-1的转录后的基因沉默效果?方法体外合成两对互补的寡核苷酸链，分别针对缺氧诱导因子HIF-1αmRNA序列的两个靶位点。退火形成双链，插入pSilencer^TM neoU62．1真核表达载体。将构建好的载体经脂质体介导转染骨肉瘤SaOS-2细胞，观察HIF-lα基因的沉默效果。半定量RT—PCR检测HIF-1αmRNA的抑制程度，免疫荧光和免疫印迹(Western Blot)检测HIF-1α蛋白表达情况。结果测序证实成功构建HIF-1α发夹状小干涉RNA真核表达载体。转录生成的发夹状小干涉能够特异抑制HIF-1α表达。RT—PCR结果显示针对HIF-1αmRNA序列的两个靶位点的沉默效果分别为69％和92％，免疫荧光显示转染后荧光强度显著降低，免疫印迹显示两个靶位点的发夹状小干涉RNA分别使HIF-1α蛋白表达下降66％和90％。结论通过体内转录生成的发夹状小干涉RNA能够使骨肉瘤细胞缺氧诱导因子HIF-1α基因沉默。     

Survivin反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞凋亡的影响

目的:采用survivin反义寡核苷酸(ASODN)封闭骨肉瘤细胞survivin的作用,观察其对骨肉瘤细胞系MG63增殖和凋亡的影响。方法:以脂质体为载体,介导survivin反义寡核苷酸转染人骨肉瘤细胞系MG63,用MTT法测定细胞增殖;流式细胞仪检测转染survivin反义寡核苷酸后细胞凋亡率;Westernblot及半定量RTPCR检测转染survivin反义寡核苷酸后的骨肉瘤细胞survivin蛋白及mRNA表达。结果:脂质体介导survivin反义寡核苷酸转染骨肉瘤细胞系MG63后,细胞增殖明显受到抑制,细胞凋亡率明显增加,骨肉瘤细胞survivin蛋白及mRNA表达均明显降低。结论:脂质体介导转染survivin反义寡核苷酸可以抑制细胞增殖,有效降低细胞内survivin基因的表达,促进细胞凋亡。     

骨肉瘤MG-63细胞中Survivin的表达及其反义寡核苷酸对细胞增殖与凋亡的作用

目的 探讨Survivin在骨肉瘤细胞中的表达及Survivin反义寡核苷酸（ASODN）对骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡的影响。方法 设计针对Survivin的ASODN和正义核苷酸（SODN）序列,制备脂质体-寡核苷酸复合物并转染MG-63细胞,分为空脂质体（Lip）组、脂质体介导的SODN（Lip-SODN）组和脂质体介导的ASODN（Lip-ASODN）组。采用免疫细胞染色法检测MG-63细胞中Survivin的表达情况,Western blotting检测各组转染48h后的Survivin蛋白水平,MTT法检测转染24、48和72h后MG-63细胞的增殖情况,流式细胞仪检测转染48h后MG-63细胞的凋亡情况。结果 Survivin主要表达于MG-63细胞的胞核。Lip-ASODN组的Survivin蛋白水平均低于Lip-SODN组和Lip组。不同浓度Survivin ASODN对MG-63细胞的增殖抑制程度不同,Lip-ASODN组的细胞增殖抑制率高于Lip组,且呈浓度依赖性;而Lip-SODN组的增殖抑制率与Lip组的差异无统计学意义（P＞0.05）。Lip-ASODN组的凋亡率为（88.47±0.79）％,高于Lip组的（10.01±0.90）％和Lip-SODN组的（4.12±0.25）％,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 靶向Survivin的ASODN可以显著抑制骨肉瘤MG-63细胞的增殖能力,并促进其凋亡。     

缺氧对肺腺癌细胞HIF-1α、GLUT-1、MMP-2表达影响的研究

目的：探讨人肺腺癌细胞株A549在缺氧条件下HIF-1α、GLUT—1、MMP-2的表达变化情况。方法：对肺腺癌细胞A549分别进行常规和氯化钴模拟缺氧培养，采用MTT法检测缺氧对A549细胞增殖的影响；Transwell侵袭小室测定法评价缺氧下A549细胞的侵袭力；分别采用RT—PCR法和western blot、免疫组化法测定缺氧不同时间HIF—1α和GLUT—1、MMP-2 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果：A549细胞在缺氧条件下增殖能力和侵袭力较正常时增强。正常氧条件下的A549细胞即有一定水平的HIF—1α、GLUT—1、MMP-2的表达，随着缺氧时间的延长，HIF—1α和、GLUT—1、MMP-2 mRNA和蛋白水平呈升高趋势，与正常对照组比较，各缺氧组差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：氯化钴诱导缺氧可以上调HIF—1α、GLUT—1、MMP-2蛋白在肺腺癌细胞中的表达水平，加速肺癌细胞的生长和转移，使之进一步耐受缺氧。     

硫代修饰脂质体包裹反义VEGF寡核苷酸对肺癌血流的影响

目的：探讨硫代修饰脂质体包裹的反义VEGF寡核苷酸对肺癌血流的抑制作用。方法：40只C57BL／6小鼠右腋皮下接种Lewis肺癌细胞后，随机分为4组：VEGF反义寡核苷酸组（ASODN）、VEGF正义寡核苷酸组（SODN）、VEGF错义寡核苷酸组（MODN）及对照组。接种24h内，4组小鼠分别皮下注射经脂质体包裹的ASODN、SODN及MODN进行治疗，对照组只注射脂质体，每周2次，连续4周。观察各组小鼠肿瘤的生长情况，超声检测肿瘤血管的收缩期峰值速度（Ps）及阻力指数（砌），原位杂交法及RT—PCR法对肿瘤内VEGFmRNA表达水平进行检测。结果：ASODN组小鼠肿瘤生长受到显著抑制，PS、RI与其它各组相比有明显差异（P〈0．01），VEGF mRNA表达水平亦有明显降低。结论：硫代反义VEGF寡核苷酸能明显抑制肺癌血流，从而抑制肿瘤生长。     

HIF-1α基因干扰对大鼠CBRH-7919肝癌细胞HIF-1α与VEGF表达影响的研究

目的:探讨沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对肝癌细胞在缺氧状态下表达HIF-1α及血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法:选用大鼠CBRH-7919肝癌细胞株作为研究对象,利用氯化钴(CoCl2)模拟缺氧状态,构建3组特异性较强的HIF-1α siRNA表达载体,采用小分子RNA干扰技术沉默细胞HIF-1α的基因表达,分别利用real time RT-PCR和蛋白质印迹法检测肝癌细胞HIF-1α和VEGF在mRNA及蛋白水平的表达变化.结果:在不同浓度CoCl2模拟缺氧条件下,随着CoCl2浓度的增高及时间的推移,肝癌细胞HIF-1α和VEGF的表达(mRNA及蛋白水平)较常氧对照组(0 μmol/L CoCl2)显著增多,差异均有统计学意义,P＜0.05.应用3组不同HIF-1α和siRNA表达载体转染缺氧条件下的肝癌细胞后,细胞的HIF-1α和VEGF的基因(mRNA)表达量与未转染HIF-1α siRNA表达载体对照组相比较明显减少,同步检测两者的蛋白表达亦明显减少,与对照组差异均有统计学意义,P＜0.05.结论:缺氧可以诱导肝癌细胞HIF-1α和VEGF的表达,siRNA沉默HIF-1α能显著抑制缺氧状态下诱导的VEGF表达.     

羟基喜树碱对缺氧诱导的SiHa细胞HIF-1α及VEGF基因表达的影响

目的:研究羟基喜树碱(hydroxycamptothecin,HCPT)对缺氧诱导的宫颈癌SiHa细胞HIF-1α和VEGF基因表达的影响。方法:在缺氧条件下(37℃,5%CO2,1%O2饱和度)体外培养宫颈癌SiHa细胞株,经不同浓度HCPT处理24 h后,用半定量RT-PCR法和Western印迹法分别检测细胞HIF-1α和VEGF mRNA及蛋白表达变化,并设立药物处理常氧组和缺氧对照组进行比较。结果:HCPT对常氧组与缺氧组细胞的细胞毒性作用无明显差异。在常氧条件下,SiHa细胞内无HIF-1α蛋白表达,VEGF有低水平表达,HCPT处理对SiHa细胞HIF-1α和VEGF基因表达无影响;但缺氧可诱导细胞HIF-1α和VEGF基因表达明显上调;HCPT对缺氧细胞HIF-1α蛋白和VEGF mRNA及蛋白表达有明显抑制作用,其效应呈剂量依赖性,而对HIF-1αmRNA表达无明显抑制作用。结论:HCPT可抑制缺氧诱导的SiHa细胞内HIF-1α蛋白及其下游VEGF基因的高表达。     

siRNA 沉默HIF-1α在缺氧状态下对食管鳞癌细胞VEGF表达的影响

 目的 观察体外乏氧培养条件下食管鳞癌细胞系EC9706中HIF-1α和VEGF的表达，探讨HIF-1α在低氧条件下对食管鳞癌血管生成的调控作用。方法 CoCl2化学缺氧法模拟肿瘤缺氧环境，RT-PCR、免疫组化法和免疫印迹法分别检测缺氧状态下HIF-1α和VEGF在mRNA和蛋白水平的表达。采用化学合成小干扰RNA（siRNA）介导的RNA干扰技术（RNAi）用siRNA转染EC9706细胞。观察转染后HIF-1α沉默效果。结果 低氧条件下，EC9706细胞HIF-1amRNA水平稳定，蛋白表达显著升高，而VEGFmRNA和蛋白的表达均显著升高。SiRNA转染EC9706后能够显著下调HIF-1α的基因表达，同时VEGF基因的表达也受到明显抑制。结论 缺氧促使EC9706细胞HIF-1α在蛋白水平表达升高，并通过转录激活VEGF的机制调控食管鳞癌血管生成。     

宫颈鳞状上皮癌变过程中HIF-1αVEGF的表达及其意义

目的：研究缺氧诱导因子1α（HIF—1α）、血管内皮生长因子（VEGF）在宫颈鳞状上皮癌变过程中的表达特点及其意义。方法：采用免疫组织化学EliVision法检测HIF—1α和VEGF在20例宫颈正常鳞状上皮、28例宫颈鳞状上皮不典型增生、12例宫颈原位鳞癌和33例宫颈浸润性鳞癌组织中的表达特点及其相关性。结果：HIF—1α和VEGF的表达随上皮病变的恶性进展逐渐增强，二者表达率分别为25．00％和25．00％（正常组），42．96％和50．00％（不典型增生组），58.33％和66．77％（原位癌组）以及57．61％和63．67％（浸润性癌组）；浸润性癌与正常组织中的HIF-1α表达存在显著性差异（P〈0．05）；原位癌、浸润性癌组织中VEGF表达均高于正常组（P〈0．05）；淋巴结转移肿瘤组织的HIF—1α、VEGF表达高于未转移组（P〈0．05）；浸润性癌组织中HIF-1α和VEGF的表达正相关（f=0．45，P〈0．05）。结论：HIF—1α及其靶基因VEGF的过表达可能在宫颈鳞状上皮恶变及肿瘤进展过程中发挥重要作用，二者可作为宫颈鳞癌浸润转移的重要指标。     

HIF-1α和HIF-2α在肝癌细胞中的时相差异表达

背景与目的:缺氧诱导因子2α(hypoxia inducible factor-2 alpha, HIF-2α)与缺氧诱导因子1α结构功能相似却不可相互替代;两者在缺氧过程中的表达不一致.本研究旨在检测缺氧状态下肝癌细胞中HIF-2α和HIF-1α的时相表达差异并探讨其可能的调节机制和意义.方法:以1%低氧培养箱模拟细胞低氧环境,检测人肝癌SMMC- 7721细胞中HIF-1α和HIF-2α mRNA量和蛋白量,以及反义HIF-1α(natural antisense hypoxia inducible factor-1α,aHIF)的mRNA量.同时应用氯化钴(CoCl2)和转录抑制剂5,6-二氯苯并咪唑1-beta-D-呋喃核糖苷(5,6-dichlorobenzimida- zole-1-beta-d- ribo furanoside,DRB)检测HIF-1α和HIF-2α mRNA的半衰期,评价HIF-1α和HIF-2α mRNA的稳定性.结果:急性缺氧迅速诱导HIF-1α和HIF-2α蛋白在细胞内堆积.随着缺氧时间延长HIF-1α mRNA的稳定性下降,其蛋白表达降低,而HIF-2α和aHIF蛋白表达持续增高.结论:HIF-2α可能在肿瘤的放疗和化疗抗性以及与肿瘤侵袭和转移方面起着重要作用.aHIF参与了HIF-1α mRNA的调节.     

NF-κBp65对人非霍奇金淋巴瘤细胞HIF-1α-VEGF途径调节及其机制的探讨

目的:研究NF-κB对人非霍奇金淋巴瘤(NHL)HIF-1α-VEGF途径的调控及其机制。方法:应用Echinomycin(EC)处理人NHL细胞,将HIF-1α反义质粒转染至肿瘤细胞中,采用蛋白质印迹法检测经两种方法处理后各细胞系中VEGF表达水平。以NF-κB特异性抑制剂quinazoline(QNZ)及Bay11-7082预处理人NHL细胞,检测各细胞系中HIF-1α蛋白的表达水平,同时采用实时定量PCR方法检测HIF-1αmRNA变化。应用QNZ处理NHL细胞后检测HIF-1α下游调控靶点VEGF的蛋白表达水平。结果:通过应用HIF-1α特异性抑制剂和转染反义质粒两种方法均能够抑制HIF-1α,明显下调了VEGF蛋白表达水平,与对照组相比差异均有统计学意义,P<0.05。NF-κB抑制剂QNZ及Bay11-7082能够降低NHL细胞HIF-1α蛋白及基因水平的表达,同时下调其下游调控靶点VEGF蛋白的表达,P<0.05。结论:抑制NF-κB可阻断人NHL细胞HIF-1α-VEGF通路,其机制可能与NF-κB调控HIF-1α的基因与蛋白表达有关。     

生存素反义寡核苷酸促进顺铂诱导骨肉瘤细胞凋亡

目的：探讨生存素（survivin）反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide，ASODN）对顺铂（diamminedichloroplatinum，DDP）诱导骨肉瘤细胞凋亡的促进作用。方法：通过合成靶向survivin的ASODN转染骨肉瘤OS-732细胞并与DDP联合作用，同时设空白对照组、正义（SODN）组及DDP组进行比较。采用RT—PCR、免疫细胞化学法检测各组细胞survivin mRNA和蛋白表达状态，流式细胞仪（flow cytometry，FCM）、吖啶橙／溴化乙锭（acridine orange／ethidium bromide，AO／EB）染色法检测各组细胞凋亡水平和形态，MTT法检测细胞生长抑制情况。结果：与空白对照组、SODN组及DDP组相比，ASODN转染组细胞survivin mRNA及蛋白表达明显减弱，细胞凋亡水平较空白对照组、SODN组相应提高，细胞萎缩、染色质浓缩呈典型凋亡改变，细胞生长相对受抑；上述指标在ASODN＋DDP组变化更为明显。其细胞凋亡指数（apoptotic index，AI）和细胞生长抑制率（inhibition ratio，IR，61．36％）明显高于各单“药”组（SODN组6．81％、ASODN组31．82％和DDP组41．35％）及SODN＋DDP组（45．45％），P〈0．05。结论：As0DN能够特异性封闭骨肉瘤OS-732细胞中survivin基因表达，使其功能相应爱抑，增加细胞对DDP敏感性，进而增进DDP诱导骨肉瘤细胞凋亡效应。     

缺氧诱导因子HIF-1α和CD105在骨肉瘤中的表达及其临床意义

目的：探讨缺氧诱导因子 -1α（HIF -1α）和CD105蛋白表达情况与骨肉瘤生物学特性的关系及临床意义。方法：采用免疫组化sP法检测36例骨肉瘤组织中HIF -1α和CD105的表达情况,并分析与临床病理参数及预后的关系。结果：HIF -1α表达水平和CD105-MVD与骨肉瘤的分化程度密切相关（P〈0．01）,与性别、年龄、肿瘤体积及临床分期无明显关系（P〉0．05）。HIF -1α阳性表达组的CD105-MVD（35．28±4．91）显著高于阴性表达组（30．01±5．26,P〈0．01）,且HIF-1仪表达水平和CD105-MVD呈正相关（r=O．6035,P〈O．05）;有转移组病例的HIF -1α表达水平和CD105-MVD均高于无转移组病例（P〈0．01）;单因素和多因素生存分析显示HIF -1α、CD105高表达与患者预后不良有关（P〈0．05）。结论：HIF -1α、CD105高表达可能在骨肉瘤的恶性进展中发挥重要作用,并与肿瘤血管形成密切相关,二者联合检测对评价骨肉瘤的预后有-定价值。