微囊藻毒素MC-LR对肝细胞毒性机理研究

目的 研究微囊藻毒类MC-LR的肝脏毒性机理。方法 采用四唑盐比色试验和流式细胞术检测微囊藻毒素MC-LR对原代培养的肝细胞和Hela细胞生长、细胞周期和凋亡的影晌。结果 微囊藻毒素在极低浓度时表现为抑制细胞生长或细胞毒作用,高浓度时可促进细胞生长。MC-LR导致肝细胞发生典型的凋亡样变化和细胞周期G₂/M期阻滞。提示微囊藻毒素可能具有影响肝细胞周期的作用,可诱导肝细胞增殖,同时又能诱导肝细胞凋亡。流式细胞术结果表明微囊藻毒素对Hela细胞周期有类似影晌趋势,但其程度远不如对肝细胞的影响明显。结论 微囊藻毒素对肝细胞的特异性作用可能是其肝脏毒性的机理之一。     

大蒜素影响子宫颈癌Hela细胞增殖的实验研究

目的探讨大蒜素对宫颈癌Hela细胞增殖的影响。方法不同浓度的大蒜素作用于体外培养的Hela细胞,倒置显微镜下观察Hela细胞的形态学变化,采用MTT法检测大蒜素对Hela细胞增殖抑制能力,流式细胞术分析大蒜素对Hela细胞凋亡的影响。结果 MTT显示大蒜素能抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,并具有时间-剂量依赖性;流式细胞术测定结果显示50μg/ml浓度大蒜素可明显诱导Hela细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G2/M期。结论大蒜素对人宫颈癌Hela细胞增殖有抑制作用,其抑制作用与诱导Hela细胞凋亡和阻抑细胞周期有关。     

大蒜素对子宫颈癌Hela细胞增殖的影响

目的:探讨大蒜素对宫颈癌Hela细胞增殖的影响。方法:不同浓度的大蒜素作用于体外培养的Hela细胞,倒置显微镜下观察Hela细胞的形态学变化;采用MTT法检测大蒜素对Hela细胞增殖抑制能力,采用流式细胞术分析大蒜素对Hela细胞凋亡的影响。结果:MTT显示大蒜素能抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,并具有时间-剂量依赖性;流式细胞术测定结果显示50μg/ml浓度的大蒜素可明显诱导Hela细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G2/M期。结论:大蒜素对人宫颈癌Hela细胞的生长有抑制作用,其抑制作用与诱导Hela细胞凋亡和阻抑细胞周期有关。     

氯化三丁基锡致巨噬细胞凋亡作用

目的 探讨氯化三丁基锡(tributyltin chloride,TBTCl)致巨噬细胞株RAW264.7细胞的凋亡作用。方法 当RAW264.7细胞处于代数生长期时,分别加入不同浓度(0.0,0.025,0.05,0.10,0.20,0.40mg/L)的TBTCl处理48h,分别用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性,观察TBTCl对RAW264.7细胞增殖影响;吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色法观察凋亡细胞的形态,流式细胞仪检测TBTCl对RAW264.7细胞的凋亡率。结果 TBTCl能抑制RAW264.7细胞的增殖,其半数抑制浓度(IC₅₀)=0.179mg/L;TBTCl也能诱导细胞的凋亡,当TBTC1达到0.40mg/L时,细胞凋亡率达到19.5%。结论 TBTC1可诱导细胞凋亡。     

ShRNA干扰G蛋白偶联受体相关分选蛋白1对肺癌细胞增殖凋亡和裸鼠成瘤影响

  目的  探讨shRNA干扰G蛋白偶联受体相关分选蛋白1（GASP-1）对肺癌细胞增殖凋亡和裸鼠成瘤影响。  方法  将GASP-1-shRNA1、2和3用Lipofectamine 2 000转染到肺癌A549细胞。选择转染GASP-1-shRNA1的细胞,建立空白对照组、空载体转染组和GASP-1-shRNA1转染组,采用菌落形成试验和流式细胞术分别检测肺癌A549细胞增殖和调亡;采用Western Blot检测ki67、cleaved caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白表达量。将转染GASP-1-shRNA1细胞注射裸鼠后腿建立原位异种移植小鼠模型。检测肿瘤的生长,并通过免疫组化检测ki67和caspase-3蛋白表达量。  结果  GASP-1-shRNA1、2和3转染A549细胞后GASP-1 mRNA和蛋白表达量均显著下调,尤其转染GASP-1-shRNA1组。GASP-1下调能抑制A549细胞增殖,并促进A549细胞凋亡;在体内试验中,下调GASP-1能抑制体内肿瘤生长,同时也能抑制细胞增殖,并促进细胞凋亡。  结论  GASP-1的下调可抑制肺癌细胞增殖、促进凋亡,并抑制肿瘤生长。     

电离辐射联合自噬诱导剂或抑制剂对人宫颈癌Hela细胞的作用

目的 探讨电离辐射联合自噬抑制剂或诱导剂对人宫颈癌细胞株增殖的影响。方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)和流式细胞术(FCM)检测经不同剂量(0、2、4、6、8和10 Gy)照射和6 Gy+自噬抑制剂三甲基腺嘌呤(3-MA)及6Gy+自噬诱导剂雷帕霉素(rapamycin)不同方法处理的人宫颈癌细胞存活和增殖情况,并分析其量效和时效关系。结果 随着照射剂量的增加(2、4、6、8和10 Gy)及时间的延长(24、48和72 h),宫颈癌细胞增殖的抑制作用组间比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。6 Gy+rapamycin处理对癌细胞增殖的抑制率低于单纯6Gy照射组(P<0.05),组间比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。6 Gy+3-MA处理对癌细胞增殖的抑制高于单纯6 Gy照射组(P<0.05),处理后24、48和72 h其抑制率组间比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论 在Hela细胞中电离辐射诱导自噬能够拮抗凋亡,电离辐射联合自噬诱导剂能够抑制Hela细胞凋亡,而电离辐射联合自噬抑制剂能够促进其凋亡。     

家蝇幼虫抗菌蛋白对子宫内膜癌细胞生长影响

目的 探讨家蝇幼虫抗菌蛋白对子宫内膜癌细胞(JEC)的影响.方法 细胞计数法、四甲基偶氨噻唑蓝(MTT)法测定家蝇幼虫抗菌蛋白对JEC细胞生长的影响;MTT法测定家蝇幼虫抗菌蛋白对正常人牙周膜细胞生长的影响;苏木素一伊红(HE)染色法观察细胞凋亡,并计算细胞凋亡指数(AI).结果 高浓度组JEC细胞数及吸光度(A)值明显降低,细胞增殖抑制率随浓度的增加而增大;各浓度组正常人牙周膜细胞的A值和细胞增殖抑制率与对照组比较差异均无统计学意义;HE染色见细胞凋亡,各浓度组AI均明显高于对照组.结论 家蝇幼虫抗菌蛋白可能是通过诱导细胞凋亡来抑制JEC细胞生长.     

人IL-21基因联合γ射线照射对子宫颈癌Hela细胞生长的影响

目的 研究含人IL-21基因的重组腺病毒(Ad-IL-21)联合γ射线照射对子宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用。方法 重组腺病毒Ad-IL-21于体外转染子宫颈癌Hela细胞,转染后6 h进行6Gy ¹³⁷Cs γ射线照射,用MTT方法和流式细胞仪测定Hela细胞的生长曲线、抑制率及细胞周期。结果 Ad-IL-21基因组、照射组和基因联合照射组对Hela细胞生长均具有抑制作用,联合照射组的抑制效应最强(44%),明显高于Ad-IL-21组和照射组。联合照射组Hela细胞出现明显的G1期阻滞,G1期细胞所占比例最高,达到88.9%,S期细胞最少(1%)。结论 IL-21基因联合γ射线照射对子宫颈癌的抑瘤作用具有协同效应,有效地抑制肿瘤细胞的生长。     

肌醇六磷酸诱导HT-29细胞凋亡及相关基因表达

目的 研究肌醇六磷酸(IP6)对人结肠癌细胞系(HT-29)的凋亡诱导作用.方法 将不同浓度IP6以不同时间作用于HT-29细胞,运用透射电镜观察IP6对HT-29细胞凋亡作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率变化;钙离子荧光探针(Fura-2/AM)法测定细胞内Ca²⁺浓度变化;RT-PCR法检测细胞内caspase-3 mRNA表达.结果 IP6诱导HT-29细胞发生凋亡的形态学变化为染色体固缩,可见凋亡小体;3.3mmol/L IP6作用6个月HT-29细胞凋亡率为4.4%,细胞内Ca²⁺浓度为38.66 mmol/L,与对照组比较明显升高(P<0.05);各IP6组Caspase-3mRNA表达均升高(P<0.05);IP6诱导HT-29细胞凋亡作用及Ca²⁺、Caspase-3mRNA的表达变化具有时间依赖关系.结论 IP6对HT-29细胞有诱导凋亡作用,其机制可能是通过调节细胞内Ca²⁺浓度及Caspase-3的表达来实现.     

二氯乙腈诱导HepG2细胞凋亡及机制研究

目的 研究二氯乙腈(DCAN)对人肝肿瘤HepG2细胞凋亡的作用及其机制。 方法 用二甲基亚砜(DMSO)溶解DCAN,以DMSO处理的HepG2细胞作为对照组, 50和800 μmol/L 的DCAN处理的HepG2细胞作为处理组,采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒检测细胞活力,流式细胞术(FCM)检测细胞周期分布情况,Annexin V-FITC/PI双标记法测定细胞凋亡率;荧光测定法检测HepG2细胞内天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性。 结果 DCAN处理浓度和处理时间存在交互效应(P<0.001),与对照组比较,DCAN可明显抑制HepG2增殖,呈现时间和剂量效应(P<0.05);与对照组比较,800 μmol/L DCAN处理组G₀/G₁期比例明显减少,G₂/M期细胞比例明显增加;DCAN诱导的HepG2细胞凋亡随着浓度的增加而增加,呈剂量-效应关系,回归方程为=0.031x+5[决定系数(R²)=0.915,F=64.782,P<0.001];DCAN诱导的HepG2细胞内caspase-3酶活性随着处理浓度的增加而增加,呈剂量-效应关系,回归方程为=0.001 6x+1(R²=1.000,F=21 266.064,P<0.001)。 结论 DCAN可抑制HepG2细胞增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与G₂/M期细胞阻滞、抑制RNA和蛋白质的合成并激活细胞内caspase-3凋亡途径有关。     

异甘草素对小儿脑胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响及相关机制研究

目的 研究异甘草素对脑胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其相关分子机制.方法 取对数生长期人脑胶质瘤U251细胞,用不同浓度(0、10、20、40、60、80μmol/L)异甘草素处理,每个浓度设5个复孔.异甘草素处理24h、48h、72h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,采用流式细胞术检测细胞凋亡的变化,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测FoxM1 mRNA的表达水平.结果 U251细胞经过浓度为0、10、20、40、60、80μmol/L的异甘草素处理24h、48h及72h后,细胞增殖均不同程度地受到抑制.在相同作用时间,不同浓度之间细胞增殖情况比较差异有统计学意义(F值分别为38.5、98.9、108.1,均P＜0.05);在相同异甘草素浓度,不同作用时间(24h、48h、72h)细胞增殖情况比较差异均有统计学意义(F值分别为11.4、20.8、43.1、53.9、30.4,均P＜0.05).不同浓度异甘草素作用于U251细胞24h后,随着异甘草素浓度的增加,细胞凋亡率增加(F=120.3,P＜0.05).不同浓度异甘草素处理U251细胞48h后,FoxM1 mRNA相对表达量分别为(71.2±5.1)％、(54.6±3.3)％、(35.4±4.1)％、(20.8±4.0)％,比较差异有统计学意义(F=83.5,P＜0.05).结论 异甘草素体外可有效抑制U251细胞的增殖并诱导其凋亡,其分子机制可能与下FoxM1基因的表达有关.     

枸杞多糖对人宫颈癌细胞生长及细胞凋亡影响

目的观察枸杞多糖对体外培养的人宫颈癌Hela细胞生长及其细胞凋亡的影响。方法不同剂量的枸杞多糖作用于体外培养的宫颈癌Hela细胞，用苔盼蓝染色、四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法及流式细胞仪检测人宫颈癌Hela细胞存活率、抑制率及细胞凋亡等指标。结果枸杞多糖可明显抑制人宫颈癌Hela细胞的生长，抑制率司达96．85％，并呈剂量效应关系，细胞凋亡率可达36．8％。结论枸杞多糖对人宫颈癌Hela细胞生长具有抑制作用，其抑制机制可能是通过影响人宫颈癌细胞的生长周期和诱导其凋亡而实现。     

小蘗碱诱导人宫颈癌Hela细胞株凋亡的作用

目的:探讨中药黄连素对子宫颈癌Hela细胞株的增殖抑制和诱导凋亡的作用。方法:以不同浓度的黄连素(10、20、40、80μmol/L),分12、24、48、72h四个时间点处理Hela细胞,光镜观察细胞形态变化;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率;用透射电子显微镜及琼脂糖凝胶电泳检测凋亡发生情况。结果:黄连素可抑制Hela细胞增殖,作用呈明显的时效和量效关系,差异有统计学意义(P<0.01);黄连素可诱导Hela细胞凋亡,透射电子显微镜下可见凋亡细胞;琼脂糖凝胶电泳出现细胞凋亡典型的DNA"梯状"条带。结论:黄连素体外对Hela细胞具有增殖抑制作用和促进凋亡作用。     

宫颈腺癌综合治疗后HRT对预后影响的研究

目的:探讨激素替代治疗(HRT)对宫颈腺癌预后的影响。方法:①体外培养人宫颈癌Hela细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测两种激素对Hela细胞增殖的影响;流式细胞仪(FCM)检测细胞生长周期和凋亡率的影响;免疫组化方法测定其雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的表达。②对24例宫颈腺癌治疗后的妇女给予HRT,通过患者主观症状的变化了解替代效果;通过阴道宫颈涂片、B超、胸片、ECT等检查了解病情变化,最终总结其疗效及对预后的影响,判断其可行性。结果:①雌二醇(E2)+孕酮(P)对Hela细胞生长有抑制作用(P<0.05);E2+P组Hela细胞S期细胞比例下降,凋亡率上升;E2和P对人宫颈腺癌细胞ER和PR的表达无显著影响。②复发情况:研究组中复发转移占29.17%(7/24),对照组中复发转移占40.00%(8/20),两组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:E2对宫颈癌Hela细胞具有促进生长,抗凋亡作用,而P抑制其生长,诱导凋亡,P能有效抵消E2对Hela细胞生长的刺激作用。宫颈腺癌患者的复发与病理类型、临床分期有密切关系,与是否采用HRT关系不大。     

甲基叔丁基醚对细胞周期及细胞凋亡的影响

目的：探讨汽油添加剂甲基叔丁基醚（ＭＴＢＥ）对细胞周期和细胞凋亡的影响。方法 采用流式细胞仪检测ＭＴＢＥ对ＮＩＨ／３Ｔ３细胞周期（染毒浓度分别为１、２、４μｌ／ｍｌ,染毒时间为２４ｈ）的影响;应用结晶紫染色法,通过检测Ｈｅｌａ细胞的存活情况,了解ＭＴＢＥ对细胞凋亡的影响。结果 流式细胞仪结果显示,ＭＴＢＥ可使ＮＩＨ／３Ｔ３细胞周期发生改变。表现为Ｓ期细胞减少,而处于Ｇ２＋Ｍ期的细胞增多,提示ＭＴＢ     

仙鹤复方水提物抗肿瘤及辐射增敏研究

目的探讨仙鹤复方水提物对子宫颈癌Hela细胞的抗肿瘤和辐射增敏性能。方法建立细胞实验模型,将药物作用于Hela细胞。采用MTT法测定不同浓度仙鹤复方提取物对Hela细胞增值的抑制;并以克隆形成率法分析研究仙鹤复方对Hela细胞的放射增敏作用。结果仙鹤复方对Hela细胞的生长有显著的抑制性,且随药物浓度和用药时间的增大逐渐增加;仙鹤复方能有效提升Hela细胞的放射增敏性。结论仙鹤复方能有效的抑制子宫颈癌Hela的增殖,并能有效提升其放射增敏性。     

白藜芦醇联合硫化氢体外诱导U251脑胶质瘤细胞凋亡作用研究

目的探讨白藜芦醇联合体外诱导U251脑胶质瘤细胞凋亡作用。方法采用四甲基偶氮唑兰（MTT）还原检测法检测白藜芦醇联合硫化氢对u251脑胶质瘤细胞生长。结果用白藜芦醇联合处理细胞24小时后,诱导了细胞凋亡和调节细胞周期,凋亡率与对照组比较明显升高（P〈O．05）。结论白藜芦醇联合硫化氢能抑U251脑胶质瘤细胞生长,其机制可能是通过诱导凋亡来发挥作用的。     

GFP共表达的重构型Caspase-3基因对人成骨肉瘤细胞的凋亡诱导作用

目的探讨GFP共表达的Caspase-3基因的表达对人成骨肉瘤细胞的凋亡诱导作用。方法应用DNA重组技术将重构型Caspase-3基因亚克隆至带有GFP报告基因的真核表选载体pEGFP-C1中，脂质体介导转染人成骨肉瘤细胞SOSP-9901，通过RT-PCR方法检测转染后Caspase-3基因的表达；荧光显微镜、电镜观察细胞形态学变化；MTT法检测转染Caspase-3基因SOSP-9901细胞生长的影响。结果RT-PGR方法证实重构型Caspase-3基因可在SOSP-9901细胞内表达，形态学观察显示转染组细胞较对照组出现明显细胞凋亡特征，MTT法结果表明Caspase-3对SSOP-9901的细胞生长有押制作用。结论重构型Caspase-3对成骨肉瘤细胞SOSP-9901的生长有抑制作用，并可诱导成骨肉瘸细胞凋亡。     

三种细胞与U251细胞内同源盒HOXB9基因的表达

目的 检测Hela细胞、Mocoy细胞、SP2／0细胞与U251细胞内HOXB9基因的表达状态。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术。结果Hela细胞和U251细胞表达HOXB9基因，而SP2／0细胞和Mocoy细胞不表达HOXB9基因。结论在不同来源的细胞中HOXB9基因的表达状态不一。