酶联免疫斑点检测和结核菌素试验在初治肺结核中的辅助诊断价值

目的比较酶联免疫斑点检测（ELISPOT）和结核菌素试验（TST）,探讨ELISPOT在初治肺结核中的辅助诊断价值。方法选取初治肺结核123例和非结核疾病病例102例作为结核组和对照组,应用6kD早期分泌靶向抗原／10kD培养滤过蛋白融合蛋白（ESAT-6／CFP－10）作为抗原对受试者外周血单个核细胞进行ELISPOT（即ESAT．6／CFP－10-ELISPOT）,检测斑点形成细胞（SFCs）的数量f同时对受试者行TST。结果结核组ESAT,6／CFP-10-ELISPOT形成的SFCs数显著高于对照组（P=0．000）。结核组中ESAT-6／CFP-10-ELISPOT的敏感度91．1％（111／123）、特异度80．4％（82／102）、阳性似然比4．60、阴性似然比0．12、阳性预测值0．85、阴性预测值0．87,TST的敏感度65．6％（59／90）、特异度45．1％（46／102）、阳性似然比1．31、阴性似然比O．76、阳性预测值0．51、阴性预测值0．60。ESAT．6／CFP-10．ELISPOT的敏感度和特异度显著高于TST（均尸=0．000）。菌阳肺结核组和菌阴肺结核组间ESAT-6／CFP-10-ELISPOT形成SFCs数量差异无显著性（P=0．166）,两组ESAT-6／CFP-10-ELISPOT的敏感度分别为91．8％（67／73）和88．0％（44／50）,二者比较差异无显著性（P=0．448）。结论ESAT-6／CFP-10-ELISPOT有可能作为辅助诊断初治肺结核的较为准确方法,并为菌阴肺结核提供一定的诊断依据,但诊断的特异度可能受结核潜伏感染影响。TST对初治肺结核的诊断价值较小。     

结核病不同抗原酶联免疫斑点检测的影响因素分析

目的比较不同MTB抗原的酶联免疫斑点检测技术(ELISPOT)与各种影响因素的关系。方法对象对结核组132例和对照组44例观察对象应用PPD、克隆表达的早期分泌抗原靶6000(ESAT-6)和ESAT-6/培养滤液蛋白10000(CFP-10)融合蛋白(E/C)进行酶联免疫斑点检测(ELISPOT),检测外周血单个核细胞(PBMC)中经3种抗原刺激后斑点形成细胞(SFC)的数量。计量资料用中位数(四分位间距)表示,计量资料的比较采用Mann-Whitney u检验,计数资料的比较采用2χ检验。结果 E/C-ELISPOT在治疗时间15 d病例形成的SFC数量少于治疗时间≤15 d形成的SFC数量。E/C-ELISPOT形成SFC数量与其他因素包括年龄、性别、病史等因素影响。PPD-ELISPOT和ESAT-6-ELISPOT形成SFC数量不受年龄、性别、病史、抗结核治疗时间等因素影响。3种抗原ELISPOT的敏感性不受年龄、性别、病史、抗结核治疗时间等因素影响。结论 ESAT6/CFP-10融合蛋白-ELISPOT形成的斑点数受治疗时间影响,可能成为监测抗结核治疗疗效的一项指标。     

不同抗原的酶联免疫斑点检测技术对结核病的辅助诊断价值比较

目的比较不同MTB抗原的酶联免疫斑点检测技术（ELISPOT）,探索其对活动性结核病的辅助诊断价值。方法对结核组132例和对照组90例观察对象应用PPD、克隆表达的早期分泌抗原靶6000（ESAT-6）和ESAT-6／培养滤液蛋白10000（CFP-10）融合蛋白（简称E／C）进行酶联免疫斑点检测（ELISPOT）,检测外周血单个核细胞（PBMC）中经3种抗原刺激后斑点形成细胞（SFC）的数量;对照组同时进行PPD试验。计量资料用中位数（四分位间距）表示,计量资料的比较采用Mann-Whitney u检验,计数资料的比较采用X^2检验。结果结核组PPD—ELISPOT、E／C—ELISPOT、ESAT-6-ELISPOT形成的SFC数分别为255（93～526）、148（40～354）和28（10～116）,均明显高于对照组的10（5～41）、10（0～20）和5（0～15）,差异均有统计学意义（U值为1390．5～2510．5,均（P〈0．01）;E／C—ELISPOT和PPD-ELISPOT的敏感度分别为90．3％和84．8％,均明显高于ESAT-6-ELISPOT（62．1％）,差异均有统计学意义（X^2值分别为17．496和28．541,均P〈0．01）;E／C—ELISPOT和ESAT-6-ELISPOT的特异度分别为8414％和88．9％,均明显高于PPD—ELISPOT（68．9％）,差异均有统计学意义（膏值分别为6087和10．808,P〈0．05和P〈0．01）。结论E／C-ELISPOT有可能作为辅助诊断结核病的方法,但其特异度易受MTB潜伏感染的影响。     

不同抗原的酶联免疫斑点检测技术对结核病的辅助诊断价值比较

目的 比较不同MTB抗原的酶联免疫斑点检测技术(ELISPOT),探索其对活动性结核病的辅助诊断价值.方法 对结核组132例和对照组90例观察对象应用PPD、克隆表达的早期分泌抗原靶6000(ESAT-6)和ESAT-6/培养滤液蛋白10 000(CFP-10)融合蛋白(简称E/C)进行酶联免疫斑点检测(ELISPOT),检测外周血单个核细胞(PBMC)中经3种抗原刺激后斑点形成细胞(SFC)的数量;对照组同时进行PPD试验.计量资料用中位数(四分位间距)表示,计量资料的比较采用Mann-Whitney μ检验,计数资料的比较采用χ~2检验.结果 结核组PPD-ELISPOT、E/C-ELISPOT、ESAT-6-ELISPOT形成的SFC数分别为255(93～526)、148(40～354)和28(10～116),均明显高于对照组的10(5～41)、10(0～20)和5(0～15),差异均有统计学意义(μ值为1390.5～2510.5,均P＜0.01);E/C-ELISPOT和PPD-ELISPOT的敏感度分别为90.3%和84.8%,均明显高于ESAT-6-ELISPOT(62.1%),差异均有统计学意义(χ~2值分别为17.496和28.541,均P＜0.01);E/C-ELISPOT和ESAT-6-ELISPOT的特异度分别为84.4%和88.9%,均明显高于PPD-ELISPOT(68.9%),差异均有统计学意义(χ~2值分别为6.087和10.808,P＜0.05和P＜0.01).结论 E/C-ELISPOT有可能作为辅助诊断结核病的方法,但其特异度易受MTB潜伏感染的影响.     

ESAT-6／CFP-10融合蛋白诊断结核性感染和结核病的研究

目的：探讨ESAT-6／CFP-10融合蛋白刺激外周血单个核细胞（PBMC）释放IFN-γ反应及其对结核性感染和结核病的诊断价值。方法：选取健康对照组（34例）,密切接触组（19例）和结核病组（39例）3组对象,按其有无卡介苗（BCG）接种各分成两个2组共6小组：健康对照组BCG未接种者（15例）、健康对照组BCG接种者（19例）、密切接触组BCG未接种者（6例）、密切接触组BCG接种者（13例）、结核病组BCG未接种者（7例）和结核病组BCG接种者（32例）。分离PBMC并分别与PPD和ESAT-6／CFP-10融合蛋白共同培养5d,以酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测培养上清液中IFN-γ,观察6组对象IFN-γ释放反应。结果：PPD刺激后,健康对照组BCG未接种者与密切接触组BCG未接种者结果之间差异有统计学意义（P〈0．01）,而3组BCG接种者之间结果差异无统计学意义（P〉0．05）。ESAT-6／CFP-10融合蛋白刺激后,健康对照组、密切接触组、和结核病组3组总阳性率分别为0％,21．1％,87．2％,阳性率明显增加。健康对照组BCG未接种者与密切接触组BCG未接种者结果之间差异有统计学意义（P〈0．05）;健康对照组BCG接种者与密切接触组BCG接种者结果之间差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：ESAT-6／CFP10融合蛋白为结核杆菌特异性抗原,能够区分BCG接种和结核病,在结核性感染和结核病的诊断中有应用价值。     

以ESAT-6、CFP-10为基础的ELISPOT 试验、血清TB-SA抗体检测、PPD试验在肺结核诊断中应用价值研究

免疫学技术是结核分枝杆菌感染的重要诊断方法。血清结核抗体的检测已作为结核病诊断辅助指标之一^[1],TB-SA（tuberculosis-specific antigen）抗体检测在肺结核诊断中具有较高的敏感性和特异性^[2];PPD皮肤试验已被卫生部生物制品标化委员会规定可临床诊断的参考指标^[3];近年来以结核菌特异蛋白ESAT-6（6KD early secretory antigenictarget）、CFP-10（culture filtrate protein10）为基础的酶联免疫斑点试验（ELISPOT TEST）在结核感染诊断中的应用价值已被许多相关研究所证实^[4-6]。     

应用PPD或特异性抗原ESAT-6和CFP-10诊断结核病的全血IFN-γ试验

目的:为了评价QuantiFERON-TB试验在已接种BCG疫苗、未接种BCG疫苗及结核病患者人群中的作用,并且应用结核分支杆菌特异性抗原ESAT-6和CFP-10的全血试验,比较它的诊断性能。 设计:用PPD,ESAT-6或CFP-10刺激已接种BCG疫苗、未接种BCG疫苗及结核病患者的全血,分析其IFN-τ应答水平,评价该试验的敏感性及特异性。 结果:没有一个未接种BCG疫苗者对M.tb-PPD,ESAT-6或CFP-10产生阳性应答。在已接种BCG疫苗的19人中,有9人(9/19,47％)对M.tb-PPD产生应答,而只有2人(2/19,10.5％)对ESAT-6或CFP-10产生应答。在QuantiFERON-TB试验中,利用不同抗原,所得到的敏感性水平相似,其中对M.tb-PPD的敏感性为79％,对ESAT-6或CFP-10的敏感性为72％。 结论:结果表明,利用M.tb-PPD的全血试验不能有效的区分BCG疫苗接种者和结核病患者。M.tb特异性的新的重组抗原ESAT-6或CFP-10.能够提高全血试验的特异性,并且能够区分TB感染,非典型分支杆菌反应性及BCG疫苗接种。这个试验,将为控制和消灭结核病提供一个优于目前所采用的结核菌素皮肤试验的量化的方法。     

高危医务人员结核病潜在感染的状况和实验室监测指标分析

目的通过对高危医务人员,以了解分析结核病潜伏性感染的状况。方法对活动性结核组、高危医务人员组和普通人群组分别进行结核菌素试验、血液结核抗体测定和进行ESAT-6和CFP-10蛋白刺激T淋巴细胞分泌IFN-γ试验,并结合病原学和影像学检查,分析高危医务人员潜在感染结核病的状况。结果高危医务人员与活动性结核患者结核菌素试验阳性率无显著差异;而高危医务人员组结核抗体阳性率显著低于活动性结核组和高于普通人群组,ELISPOT法能区别BCG接种出现的阳性反应,可代替TST对结核进行早期诊断,并有助于发现高危医务人员中潜在的活动性结核。结论 ELISPOT为诊断潜伏性活动性结核的最佳试验方法。     

外周血结核感染T细胞斑点试验及其不同界值水平在结核性胸膜炎中的诊断价值

目的探讨外周血结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)及其不同界值水平在结核性胸膜炎及非结核胸腔积液患者的意义和诊断价值。方法观察40例结核性胸膜炎患者(包括16例病理确诊患者和24例临床诊断患者)及13例非结核胸腔积液患者,进行外周血T-SPOT.TB测定,应用SPSS19.0对TSPOT.TB斑点形成细胞(SFC)(个/106)进行统计学分析。结果结核性胸膜炎组的外周血T-SPOT.TB阳性率为85.0%,显著高于非结核性胸腔积液组的23.1%(P0.01);结核性胸膜炎组的外周血抗原A(ESAT-6抗原)和抗原B(CFP-10抗原)的SFC分别为[15.2(0~110)/106]和[52.0(0~200)/106],明显高于非结核胸腔积液组[分别为0.5(0~40)/106和1.0(0~52)/106](P均0.05)。应用受试者工作特征(ROC)曲线对结核性胸膜炎组分析结果显示,ESAT-6抗原和CFP-10抗原的SFC数值在ROC曲线下面积(AUC)分别为0.842和0.880,AUC的95%可信区间分别为(0.782~0.967)和(0.771~0.977)(P均0.05)。根据约登指数确定ESAT-6抗原和CFP-10抗原的诊断界值水平,将ESAT-6抗原为6/106SFC48.5/106时定义为弱阳性,其特异度为92.3%;将ESAT-6抗原的SFC≥48.5/106时定义为强阳性,其特异度可达100.0%;将CFP-10抗原为6/106SFC57/106时定义为弱阳性,其特异度为84.6%;当CFP-10抗原的SFC≥57/106时定义为强阳性,其特异度为100.0%。将临床诊断组与病理确诊组患者T-SPOT.TB的ESAT-6抗原和CFP-10抗原弱阳性率及强阳性率比较发现,两组抗原的弱阳性率比较差异均无统计学意义(P0.05),而病理确诊组患者ESAT-6抗原和CFP-10抗原强阳性率均高于临床诊断组(P0.05)。结论外周血T-SPOT.TB在结核性胸膜炎诊断中具有较高的阳性率和较好的诊断效率,ESAT-6抗原和(或)CFP-10抗原的SFC数值在高界值水平则强烈提示为活动性结核感染。观测外周血T-SPOT.TB的ESAT-6抗原和(或)CFP-10抗原的界值水平及SFC数值高低在结核性胸膜炎诊断中具有重要的价值和意义。     

γ干扰素释放反应在结核分枝杆菌潜伏感染及结核病诊断中的临床意义

目的 探讨三种结核分枝杆菌抗原刺激外周血单个核细胞（PBMC)后γ干扰素(IFN-γ)释放反应对结核分枝杆菌潜伏感染及结核病的诊断意义。并与结核菌素皮试(TST)进行比较。方法 研究对象共分三组，活动性结核组(57例)，健康对照组(27例)，肿瘤组(29例)，分别用结核分枝杆菌纯蛋白衍生物(PPD)，早期分泌抗原靶6kDa蛋白(early secretary antigenic target 6kDa protein ESAT-6)，38kDa抗原与PBMC共同培养5天，后采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清液中IFN-γ的浓度。结果 ①健康组：TST与BCG接种史及排菌病人密切接触程度呈正相关(B=0．047和P=0．041)，ESAT-6为抗原的IFN-γ释放水平与结核病接触程度密切相关(P=0．005)，而与BCG接种史无明显相关。②当阴阳性界定值定为1000pg／ml时。38kDa抗原刺激后的IFN-γ浓度对于结核病诊断的敏感性为64．9％，特异性为89．3％.结论 ESAT-6刺激后的IFN-γ释放反应对结核分枝杆菌潜伏感染的诊断意义可能优于TST。38kDa抗原刺激后的IFN-γ释放反应可能有结核病的辅助诊断意义。     

外周血单核细胞γ干扰素分泌反应在涂阴肺结核诊断中的意义

痰结核分枝杆菌培养是诊断肺结核的金标准，但用其诊断痰菌阴性肺结核却较为困难。近年来，通过酶联免疫斑点试验的方法检测毒株结核分枝杆菌的特异抗原、早期分泌抗原-6（ESAT-6）和培养滤出液蛋白-10（CFP-10）引发的体外γ干扰素释放反应，可以敏感、特异地诊断结核分枝杆菌感染。本研究初步探讨了体外单核细胞γ干扰素分泌反应对涂阴肺结核诊断的临床意义。     

不同抗原全血ELISA检测技术对活动性肺结核的辅助诊断价值研究

目的 探讨克隆表达的抗原PPD、早期分泌抗原靶6（ESAT-6）/培养滤液蛋白10（CFP-10）融合蛋白（简写为E/C）和ESAT-6的全血干扰素释放试验对活动性肺结核的辅助诊断价值。 方法 选取活动性结核组96例和对照组91例共计187例,抽取清晨空腹肝素钠抗凝外周静脉血5 ml,分别给以抗原PPD、E/C和EAST-6刺激,通过ELISA的方法检测抗原刺激后血浆中IFN-γ的数值。 结果 在活动性肺结核组中3种抗原刺激后IFN-γ含量的中位数分别为ESAT-6［96（41～379）pg/ml］、E/C［3180（1192～7231）pg/ml］、PPD［4348（1230～9026）pg/ml］;明显高于对照组中IFN-γ含量ESAT-6［10（4～52）］、E/C［210（49～523）］、PPD［1800（70～3021）pg/ml］,U值分别为1190.5、2405和1309.5,P值均<0.01;ESAT-6、E/C和PPD的全血ELISA敏感度分别为78.1%(75/96)、87.5%(84/96) 和85.4%(82/96),特异度分别为76.9%(70/91)、83.5%(76/91)和65.9%(60/91)。 结论 融合蛋白ESAT-6/CFP-10对活动性结核病具有一定的辅助诊断价值。     

结核分枝杆菌ESAT-6系1的研究及其对免疫原性和毒力的影响

结核分枝杆菌的ESX-1专用分泌系统由RD1（extRD1）扩展区编码，确保ESAT-6蛋白及其伴侣。10-kDa的培养滤液蛋白CFP-10的输出。并在BCG疫苗株和田鼠分枝杆菌中缺少分泌。我们系统地研究与抗原分泌、特异性免疫原性和毒力有关的各个ESX-1基因。与对照相比，ESX-1-补体激活的BCG和田鼠分支杆菌均可被骨髓来源的巨噬细胞更有效地吞噬。     

肺结核患者全血γ干扰素释放试验影响因素的探讨

目的 探讨菌量负荷、疾病活动性、影像学累及范围、外周血淋巴细胞计数等因素对全血γ干扰素释放试验结果的影响。 方法 选取肺结核患者106例（包括44例菌阳肺结核患者、47例菌阴肺结核患者和15例陈旧性肺结核患者）和健康对照组35名,所有患者（健康对照者）抽取外周血并以肝素抗凝分别与结核分枝杆菌特异抗原分泌抗原靶-6(ESAT-6)、ESAT-6/培养滤过蛋白-10(CFP-10)融合抗原、PPD共同孵育,并用ELISA的方法检测血浆中IFN-γ的含量,各组间差异的比较应用Mann-Whitney U检验,P<0.05为差异有统计学意义。 结果 抗原刺激后分泌IFN-γ量的中位数在菌阳组和菌阴组之间差异无统计学意义［ESAT-6（114.7 pg/ml vs 82 pg/ml, Z=－0.500, P>0.05）, ESAT-6/CFP-10（3488 pg/ml vs 2350 pg/ml, Z=－0.949, P>0.05）,PPD（4514 pg/ml vs 4326 pg/ml, Z=－0.822, P>0.05）］;ESAT-6和ESAT-6/CFP-10抗原刺激后分泌IFN-γ量的中位数在菌阴组和陈旧性肺结核组之间差异无统计学意义［ESAT-6（82 pg/ml vs 137 pg/ml, Z=－0.781, P>0.05）, ESAT-6/CFP-10（2350 pg/ml vs 1784 pg/ml, Z=－1.685, P>0.05）］,ESAT-6抗原刺激后分泌IFN-γ量的中位数在菌阳组和陈旧性肺结核组之间差异无统计学意义（114.7 pg/ml vs 137 pg/ml, Z=－0.757, P>0.05）,但ESAT-6/CFP-10融合抗原刺激后分泌IFN-γ量的中位数在菌阳组和陈旧性肺结核组之间差异有统计学意义（3488 pg/ml vs 1784 pg/ml, Z=－0.242, P<0.05）;ESAT-6、ESAT-6/CFP-10融合抗原刺激后分泌IFN-γ量的中位数在肺部病变累及少和肺部病变累及多之间差异有统计学意义［ESAT-6（117 pg/ml vs 42 pg/ml, Z=－2.341, P<0.05）, ESAT-6/CFP-10（3055 pg/ml vs 1562.5 pg/ml, Z=－2.850, P<0.05）］;ESAT-6、ESAT-6/CFP-10融合抗原、PPD抗原刺激后分泌IFN-γ量的中位数在外周血淋巴细胞≥1.0×10⁹/L和＜1.0×10⁹/L之间差异有统计学意义［ESAT-6（97.5 pg/ml vs 48 pg/ml, Z=－2.745, P<0.05）, ESAT-6/CFP-10（3082 pg/ml vs 1190 pg/ml, Z=－2.911, P<0.05）,PPD（4322 pg/ml vs 3200 pg/ml,Z=－2.216, P<0.05）］。 结论 基于RD1区的抗原刺激后外周血分泌IFN-γ的量不受菌量负荷的影响,但可能受到外周血淋巴细胞绝对值和病变累及范围的影响。     

应用QuantiFERON—TB GOLD in—tube法检测HIV感染病人的潜伏性结核菌感染

地点：市中心人类免疫缺陷病毒（HIV）门诊部 目标：在存在潜伏性结核感染（LTBI）危险因素的HIV感染人群中评估结核菌素皮肤试验（TST）和QuantiFERON—TB GOLD（QFT—G）试验。 实验设计：对已知的LTBI危险因素与早期分泌性靶抗原6（ESAT-6）和培养分泌蛋白10（CFP-10）刺激的全血γ-干扰素释放试验及TST试验进行统计学横断面分析。结果：纳入的207例病例中，4例由于信息丢失或者3次标本检测结果不一致而被排除。10例由于对促细胞分裂素反应不良结果不能确定。所有的不确定结果发生在CD4细胞数目低于200个／mm^3。的患者。11例QFT—G和13例TST结果阳性。QFT-G和TST结果之间的一致性较低（κ0．38）。QFT—G结果同TST相比与LTBI危险因素相关的可能性更大。 结论：QFT-G试验而非TST表现出在LTBI危险因素数目与阳性结果之间具有显著性差异（OR1．6）。QFT—G试验在HIV感染人群中可能较TST试验更有价值。     

CFP10/ESAT6融合蛋白-ELISPOT方法的建立及其在结核分枝杆菌感染诊断中的应用价值

目的建立应用酶联免疫斑点试验(Enzyme Linked-Immunospot Assay,ELISPOT)检测结核分枝杆菌感染的方法 ,评价CFP10/ESAT6融合蛋白抗原在检测结核分枝杆菌感染中的应用价值。方法通过比较不同的实验条件确定ELIS-POT检测结核分枝杆菌感染方法的最佳细胞浓度、孵育时间、蛋白抗原浓度等,建立ELISPOT方法。以PPD皮肤试验作对照。结果 ELISPOT方法的最佳实验条件为:每孔细胞浓度2×105,CFP10/ESAT6融合蛋白抗原浓度20~40μg/mL,细胞孵育时间20h。应用PPD皮试检测30例健康体检者、38例非结核疾病患者和40例结核病患者的阳性率分别为40.0%、0%、72.5%,而ELISPOT检测的阳性率分别为20.0%、10.5%、92.5%。应用ELISPOT检测40例结核病痰菌阳性组和阴性组的灵敏度分别为94.4%、90.9%。结论应用CFP10/ESAT6融合蛋白作为抗原建立的ELISPOT方法可初步应用于诊断结核分枝杆菌感染、辅助结核病诊断。     

卡介苗对结核分枝杆菌IFN-γ酶联免疫斑点检测法的影响

目的探讨卡介苗（BCG）对结核分枝杆菌IFN-γ酶联免疫斑点（简称Elispot）检测影响,评价Elispot检测在诊断结核分枝杆菌潜伏感染的价值。方法对98例某高校学生同时进行Elispot检测和PPD皮试,其中27例PPD皮试结果和Elis-pot检测均为阴性的受试者进行卡介苗接种。结果 98例受试者中,48例PPD皮试阳性,13例Elispot检测阳性,两种检测结果比较差异有统计学意义。对上述27例受试者接种BCG后PPD皮试结果全转为阳性,Elispot检测仍为阴性。在BCG接种前后,ESAT-6和PoolA作用下IFN-γ分泌水平均无差异;但在BCG作用下,BCG接种后IFN-γ分泌水平显著高于接种前。结论 Elis-pot检测体外IFN-γ应答反应不受卡介苗接种影响,在诊断结核分枝杆菌潜伏感染的价值优于PPD皮试。     

结核分枝杆菌Ag85B-ESAT-6融合蛋白重组耻垢分枝杆菌对小鼠的免疫原性研究

目的 评价表达Mtb Ag85B-ESAT-6融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌（Ag85B-ESAT-6-rM.s）在小鼠中的免疫原性。 方法 6周龄BALB/c小鼠经背部皮下注射1×10⁶ CFU（colony-forming unit,菌落形成单位）的Ag85B-ESAT-6-rM.s,同时设M.s免疫组（10只）、BCG免疫组（10只）、Ag85B-ESAT-6融合蛋白免疫组（10只）和生理盐水组（10只）。接种免疫后1～6周,尾静脉采血,检测小鼠外周血CD4⁺和CD8⁺ T细胞所占百分比;免疫后6周,MTS［3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium, inner salt］法检测小鼠脾淋巴细胞增殖和酶联免疫斑点检测（enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT）检测脾淋巴细胞分泌γ干扰素（interferon γ,IFN-γ）、白细胞介素-2（interleukin-2,IL-2）和白细胞介素-4（interleukin-4,IL-4）等细胞因子的水平。 结果 Ag85B-ESAT-6-rM.s免疫小鼠后能够明显刺激小鼠外周血CD4⁺和CD8⁺ T细胞的产生,其所占百分比［（59.6±1.5）%］明显高于BCG免疫组［(48.8±2.3)%］（t=12.252,P<0.05）和原始M.s免疫组［(45.7±1.6)%］（t=20.166,P<0.05）。Ag85B-ESAT-6-rM.s免疫小鼠的脾淋巴细胞增殖指数（3.23±0.31）与BCG免疫刺激的增殖指数（2.95±0.36）相当（t=1.864,P>0.05）,但其诱生IFN-γ的能力［斑点形成细胞(spot forming cells,SFC) ］［(167.5±36.6)SFC/10.6］明显高于BCG［(98.5±26.9)SFC/10⁶ ］（t=4.804,P<0.05）。 结论 Ag85B-ESAT-6融合蛋白在耻垢分枝杆菌中的表达能够明显提高M.s的免疫原性,并能够刺激小鼠机体产生有利于抗Mtb感染的免疫反应,作为TB新型候选疫苗具有一定的研究前景。     

γ-干扰素释放试验对活动性肺结核的辅助诊断价值

目的探讨结核分枝杆菌感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)在活动性肺结核中的诊断价值。方法应用T-SPOT.TB试剂盒对153例活动性肺结核(A组)和81例其他肺部疾病(B组)患者的外周血中MTB特异性T淋巴细胞进行检测,同时对两组患者进行LAM、16KD、38KD抗体的检测。结果 T-SPOT.TB对活动性肺结核的敏感性为78.4%(120/153),要明显高于对照组24.7%(20/81)(χ~2=80.91,P0.001)。T-SPOT.TB检测的敏感性要明显高于16KD抗体10.5%(χ~2=52.26,P0.001)、也要高于38KD抗体(54.9%)、LAM抗体(58.8%),但其差异无统计学意义(χ~2=0.62、χ~2=0.50,P值均0.05)。T-SPOT.TB检测的特异性为75.3%(61/81),要低于16KD抗体84.0%(68/81)(χ~2=5.59,P0.05);也要低于38KD抗体80.2%(65/81)和LAM抗体81.5%(65/81),但差异无统计学意义(χ~2=0.45、χ~2=0.50,P值均0.05)。菌阳患者的ESAT-6、CFP-10的SFC分别为47.10±34.53和63.02±35.92,要明显高于菌阴肺结核(P0.05、P0.01)。重症患者的ESAT-6、CFP-10的SFC分别为60.84±31.76和74.75±33.75,明显高于轻症患者(P0.001)。通过受试者工作特征曲线(ROC曲线),当EAST-6的SFC取值21.5时最具诊断价值,其灵敏度为74.8%,特异度为94.5%;CFP-10取值19.5时最具诊断价值,灵敏度为77.6%,特异度为91.8%。结论 TSPOT.TB对活动性肺结核的诊断有一定的价值,和其他血清学结核抗体检测相比有一定的优势,但并不十分突出。两种抗原的SFC值与疾病的轻重程度相关,SFC的具体数值有一定的临床价值和意义。     

抗原刺激后外周血单个核细胞γ干扰素释放反应在结核分枝杆菌感染和结核病诊断中的意义

目的 探讨3种结核分枝杆菌抗原刺激后外周血单个核细胞（PBMC）γ干扰素（IFN-γ）释放反应对结核性感染和结核病的诊断意义。方法 获取活动性结核病患者（结核组，57例）、肺癌患者（肺癌组，29例）和健康人（健康对照组，27名）外周血单个核细胞。分别将结核分枝杆菌纯蛋白衍生物（PPD）、结核分枝杆菌早期分泌抗原靶6000蛋白（ESAT6）和38000抗原与PBMC共培养5d，采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测培养上清液中IFN-γ浓度。比较3种抗原PBMC IFN-γ释放水平和PPD皮试（TST）结果。结果 （1）健康对照组：TST反应与BCG接种史及排菌患者接触密切程度经Logistic回归分析显示均呈正相关（P=0．047和P=0．041）；以ESAT6为抗原的PBMC IFN-γ释放水平与结核病患者接触密切程度相关（P=0．005），而与BCG接种史无明显相关性。（2）3组间TST结果差异无显著性。（3）以38000抗原刺激后IFN-1释放水平为观察指标，经受试者操作特性（ROC）曲线分析获得最佳域值为1000pg／ml，以此判断38000抗原刺激后IFN-γ释放水平诊断结核病敏感性为64．9％，特异性为89．3％，准确性为77．0％，阳性预测值为86．0％，阴性预测值为71．0％。结论 ESAT6抗原的IFN-γ释放反应对结核分枝杆菌感染的诊断意义优于TST，38000抗原刺激后IFN-γ释放反应对结核病的临床诊断有辅助意义。